青龙衣中胡桃醌对S180肉瘤小鼠的抑瘤作用研究

 目的研究胡桃醌的体内抗肿瘤作用,探讨其可能的作用机制。方法建立S₁₈₀荷瘤小鼠肉瘤模型,考察胡桃醌的体内抑瘤活性及其对胸腺和脾脏指数的影响;HE染色,光镜观察各组小鼠肿瘤组织生长及病理变化;透射电镜观察肿瘤细胞超微结构改变;流式细胞仪检测肿瘤组织细胞的凋亡率及细胞周期的改变。结果在2,4和8μmol·kg^-1·d^-1剂量下,胡桃醌对S₁₈₀实体瘤的抑瘤率分别为29.04%,37.33%,52.66%,瘤重与空白对照组比较均显著降低(P<0.01);胡桃醌4,8μmol·kg^-1·d^-1剂量组脾脏指数降低(P<0.01),各剂量组胸腺指数无明显变化(P>0.05);光镜下胡桃醌各组肿瘤组织坏死程度明显增加;电镜下观察发现,胡桃醌各组均出现核染色质凝集、边聚,凋亡小体形成等典型的细胞凋亡形态学改变;胡桃醌2,4和8μmol·kg^-1·d^-1剂量下,流式细胞仪检测发现凋亡峰,凋亡率分别为(5.58±0.63)%、(6.66±0.85)%和(10.27±1.05)%。细胞周期观察发现,G₁期细胞百分率有所降低,而G₂/M期有所增加,推测胡桃醌可将细胞阻滞于G₂/M期,但还需进一步研究证实。结论胡桃醌能有效抑制小鼠S₁₈₀实体肿瘤的生长,诱导肿瘤细胞凋亡及引起G₂/M期阻滞可能是其主要作用途径。     

粉防己碱逆转获得性多药耐药小鼠S180肿瘤细胞P170过度表达与调控细胞凋亡相关性研究

目的:观察粉防己碱对模拟临床化疗PFC方案诱导的小鼠S180细胞多药耐药的逆转作用,明确其对多药耐药逆转的作用及其作用的分子机制,以指导粉防己碱临床逆转肿瘤患者多药耐药,提高化疗疗效。方法:模拟临床PFC方案,分别给予小鼠顺铂3 mg·kg^-1,ip,每周 1 次;环磷酰胺和 5 FU各 3 mg·kg^-1,ig,每日 1 次,连续 4周,流式细胞术荧光检测观察其对肿瘤细胞膜糖黏蛋白P₁₇₀、细胞凋亡、细胞凋亡因子Fas,Trail、细胞黏附因子CD₅₄的影响。结果:粉防己碱降低肿瘤细胞耐药基因表达产物P₁₇₀的过度表达,增加对细胞凋亡因子Fas,Trail表达率,增加耐药S180细胞的凋亡,降低细胞黏附因子CD₅₄的表达。结论:说明粉防己碱逆转肿瘤多药耐药与其对肿瘤多种相关生物分子因子的调节有关。     

金针菇多糖对环磷酰胺的增效减毒作用

目的:观察金针菇多糖(FVP₁)对化疗药环磷酰胺的增效减毒作用。方法:①NIH小鼠右腋皮下接种0.2mL的1×10⁷·mL^-1的S180肉瘤后,随机分为3组:模型对照组腹注生理盐水;环磷酰胺组在第1,3天腹注30mg·kg^-1体重的环磷酰胺,其余时间用生理盐水;FVP₁合并环磷酰胺组在第1,3天腹注30mg·kg^-1体重的环磷酰胺,同时每天腹注10mg·kg^-1的FVP₁,连续10d。剥取肿瘤称重,计算抑瘤率。②小鼠腹注100mg·kg^-1环磷酰胺,连续2d建立免疫抑制小鼠模型,随机分成4组:环磷酰胺组腹注生理盐水;FVP₁小、中、大剂量组分别腹注5,10,20mg·kg^-1的FVP₁,连续7d;另设不用环磷酰胺造模的作为空白对照组。实验结束后检测各组小鼠的外周白细胞、胸腺指数、脾指数、腹腔巨噬细胞吞噬功能、脾淋巴细胞转化和NK细胞活性。结果:①FVP₁与小剂量环磷酰胺伍用能明显提高环磷酰胺对小鼠S180的抑瘤率。②5,10,20mg·kg^-1的FVP₁均能明显对抗环磷酰胺所致的小鼠白细胞减少和免疫器官萎缩,拮抗环磷酰胺所致的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的降低,恢复免疫受抑小鼠的淋转功能以及NK细胞杀伤活性。结论:FVP₁对环磷酰胺具有一定的增效减毒作用。     

白芥子提取物抑制前列腺增生的实验研究[Ⅱ]

目的:研究白芥子提取物抑制前列腺增生的活性成分和作用机理。方法:采用丙酸睾酮诱导的去势小鼠前列腺增生;组胺诱导的小鼠皮肤毛细血管通透性增加;滤纸片埋藏诱发的大鼠皮下肉芽肿为动物模型。从白芥子提取物中分离得到的白芥子苷和白芥子β-谷甾醇为药效研究对象。结果:白芥子苷(16.0,8.0mg·kg^-1·d^-1)和β-谷甾醇(16.0,8.0 mg·kg^-1·d^-1)均能明显降低由丙酸睾酮诱发的去势小鼠前列腺增生,降低小鼠血清酸性磷酸酶活力(P<0.01或P<0.05);白芥子苷(16.0 mg·kg^-1·d^-1)能明显降低滤纸片埋藏引起的大鼠肉芽肿增殖(P<0.05);β-谷甾醇(8.0,16.0 mg·kg^-1·d^-1)能明显降低组胺诱发的小鼠毛细血管通透性增加(P<0.05)。结论:白芥子苷、β-谷甾醇具有抗雄激素和抗炎活性。     

阿诺宁乳化剂的抗瘤作用和急性毒性试验

 目的研究阿诺宁乳化剂的抗瘤作用和急性毒性反应。方法用小鼠和裸鼠移植性肿瘤模型测定体内抗瘤活性，用Blliss方法计算小鼠给药的急性毒性的LD₅₀。结果阿诺宁乳化剂在4，8和16 mg·kg^-1，灌胃(ig)qd×10 d，对小鼠肝癌HepS 3批实验的平均抑瘤率分别为39.2%，46.9%和55.7%；对小鼠肉瘤S-180的平均抑瘤率分别为34.6%，47.3%和54.4%；对小鼠L₂的平均抑瘤率分别为37.5%，45.9%和56.5%。阿诺宁乳化剂在7.5，15，30和60 μg·kg^-1腹腔注射(ip)×10d 剂量下，对小鼠肝癌(HepS)实验的平均抑瘤率分别为31.0%，42.9%，50.2%和62.4%；对小鼠肉瘤S-180的平均抑瘤率依次为23.6%，39.4%，50.9%和61.2%；在15，30和60μg·kg^-1，ip，每日1次，每周6次，共4周的剂量下，对人肝癌(Bel-7402)裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为32.0%，50.5%和60.2%；在上述3个剂量下，对人肺腺癌(GLC-82)裸鼠移植瘤的抑瘤率分别为30.3%，41.9%和56.1%。结果表明，阿诺宁乳化剂ig，ip对上述5种肿瘤均有明显的抑制作用，且其抑瘤率与阿诺宁乳剂的剂量相关。用Bliss方法统计出阿诺宁乳化剂对小鼠ig一次的半数致死量(LD₅₀)及其95%可信限为74.75 (58.67～5.26) mg·kg^-1；ip的LD₅₀)为1.12 (1.01～1.24)mg·kg^-1)，静脉注射(iv)的LD₅₀为1.81(1.61～2.03) mg·kg^-1。结论阿诺宁乳化剂对多种小鼠和裸鼠移植瘤均有明显抗瘤作用。     

异钩藤碱对血小板聚集和血栓形成的影响

 目的研究异钩藤碱(isorhynchophylline,Isorhy)对血小板聚集和血栓形成的影响,并初步探讨其机制。方法比浊法测定Isorhy体内给药对大鼠血小板聚集的影响;放免法测定血小板血栓烷B₂(TXB₂)及血浆6-keto-PGF_1α含量;利用小鼠尾静脉注射胶原-肾上腺素合剂诱导血栓形成模型,测定15min内小鼠死亡率。结果iv Isorhy 2.5,5和10mg·kg^-1呈剂量依赖性地抑制ADP、胶原、花生四烯酸(AA)和凝血酶诱导的大鼠血小板聚集;iv Isorhy 50和100mg·kg^-1明显降低实验性血栓模型小鼠死亡率。Isorhy 0.33,0.65和1·30mmol·L^-1对AA诱导的TXB₂生成及家兔血浆6-keto-PGF_1α生成无明显影响,但可抑制胶原诱导的TXB₂生成。结论Isorhy具有抗血小板聚集和抑制血栓形成的作用,其抗胶原所致血小板聚集的作用可能部分与抑制TXA的生成有关。     

药用真菌桑黄菌丝体多糖抗肿瘤作用的研究

目的：研究桑黄菌丝体多糖对小鼠S180实体瘤、腹水瘤的生长抑制作用和对荷瘤小鼠免疫调节作用。方法：将昆明种小鼠接种S180实体瘤或腹水瘤后随机分组,饲喂不同剂量(100,200,400 mg·kg^-1·d^-1)的桑黄菌丝体多糖,以饲喂生理盐水和环磷酰胺为空白对照组和阳性对照组。检测受试药物对小鼠S180实体瘤生长的抑制作用以及对荷瘤小鼠脾脏指数和胸腺指数的影响,计算腹水型荷瘤小鼠的存活时间。结果：饲喂桑黄菌丝体多糖的荷瘤小鼠的脾脏指数和胸腺指数显著增加；3个剂量的桑黄菌丝体多糖对S180实体瘤的抑瘤率分别为31.88%,46.25%,53.13%；并且可以显著延长腹水型荷瘤小鼠的存活时间。结论：桑黄菌丝体多糖具有较强的抗肿瘤作用和免疫调节活性。     

Rhizobium sp.N613胞外多糖分离纯化及抗S180肉瘤的研究

 目的研究Rhizobium sp.N613胞外多糖(REPS)的分离纯化条件和抑瘤活性。方法用酸化、加热、凝聚剂和絮凝剂进行发酵液预处理实验,经正交试验优化REPS醇沉制取条件。用凝胶柱色谱,紫外光谱扫描检测经Sevag法脱蛋白质所得REPS的纯度。采用动物移植性实体瘤的瘤重实验法研究REPS对小鼠S180肉瘤的抑瘤作用,并对荷瘤小鼠眼眶取血进行白细胞及淋巴细胞计数。结果发酵液预处理参数为:盐酸调节pH5.0,70℃加热20min,依次加入5g·L^-1Al₂(SO₄)₃.18H₂O和0.2g·L^-1海藻酸钠。优化的醇沉制取条件为:调节溶液pH7.0,乙醇浓度65%,醇沉时间8h。REPS经检测为均一多糖。抑瘤实验结果表明,REPS各剂量组对小鼠S180肉瘤均有抑制作用,其中REPS纯多糖剂量为10mg·kg^-1的抑瘤率达44.17%。与荷瘤对照组相比,REPS能够显著促进白细胞和淋巴细胞的增生。结论初步摸索到了发酵液预处理操作的技术参数与醇沉制取的条件。所得REPS对小鼠S180肉瘤有显著的抑制作用。     

染料木黄酮对人卵巢癌裸鼠移植瘤影响的实验研究

目的:探讨植物雌激素染料木黄酮对人卵巢癌HO-8910PM细胞裸鼠移植瘤的影响。方法:体外培养人卵巢癌HO-8910PM细胞,裸鼠皮下接种HO-8910PM细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,随机分为对照组和3个染料木黄酮治疗组,治疗组分别给予5,25,50 mg.kg^-1染料木黄酮。治疗4周后,应用流式细胞术(FCM)检测各组裸鼠移植瘤细胞周期时相和凋亡率,免疫组化技术检测凋亡基因bcl-2,Fas,FasL蛋白的表达情况,并通过电镜进行形态学观察。结果:50 mg.kg^-1染料木黄酮治疗组裸鼠移植瘤明显小于对照组,肿瘤细胞G₀-G_l期比例升高明显,S期细胞比例显著降低(P<0.01),移植瘤细胞凋亡率为(15.14±2.27)%,明显高于对照组(3.12±1.12)%(P<0.01);移植瘤细胞bc1-2蛋白表达水平明显下降,而Fas蛋白表达水平升高,与对照组比较,均有显著性差异(P<0.05)。电镜观察50 mg.kg^-1染料木黄酮治疗组可见凋亡细胞明显增多。结论:染料木黄酮通过调节移植瘤细胞周期分布和凋亡基因,抑制卵巢癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

加味柴胡疏肝汤调控miR-204影响癫痫小鼠海马神经元调亡与ATG7、LC3Ⅱ的表达＊

目的 观察加味柴胡疏肝汤对癫痫小鼠海马神经元自噬和凋亡的拮抗作用，探讨其发挥神经保护作用的机制。方法 将60只小鼠随机分为6组：生理盐水组（20 mL·kg^-1·d^-1灌胃两周）、模型组（180 mg·kg^-1腹腔注射）、加味柴胡疏肝汤组（7 g·kg^-1·d^-1灌胃两周）、加味柴胡疏肝汤＋miRNA-204 mimic组（2 μL颅内注射）、加味柴胡疏肝汤＋miRNA-204 inhibitor组（2 μL颅内注射）、卡马西平组（混悬液30 mg·kg^-1·d^-1灌胃两周）；采用匹罗卡品使小鼠致痫，抑制及过表达miRNA-204后，分别予加味柴胡疏肝汤灌胃，处死小鼠，取其海马组织，观察每组的指标情况：采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）技术检测小鼠海马miRNA-204，以及自噬相关基因ATG7、LC3Ⅱ的表达情况，采用原位缺口末端标记法（TUNEL）检测小鼠海马C1区神经元凋亡情况。结果 与生理盐水组相比，模型组小鼠海马miR-204表达明显降低（P＜0.01），自噬相关基因ATG7、LC3Ⅱ的表达，神经元凋亡指数明显升高（P＜0.01）；与模型组相比，使用加味柴胡疏肝汤后，小鼠海马组织miR-204表达明显升高，自噬相关基因ATG7、LC3Ⅱ的表达，神经元凋亡指数明显降低（P＜0.05）；使miR-204过表达后，与单纯使用柴胡疏肝汤相比，上述指标变化趋势相同，变化幅度增大（P＜0.01）；抑制miR-204表达后，与单纯使用柴胡疏肝汤相比，上述指标变化趋势相同，变化幅度减少（P＜0.05）。结论 加味柴胡疏肝汤具有抗癫痫作用，可能是通过升高miRNA-204的表达，拮抗小鼠海马神经元过度自噬和凋亡。     

化瘀祛痰方药及其拆方对H_2O_2诱导EA.hy926细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨化瘀祛痰方药及其拆方含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞EA.hy926凋亡的影响及其机制。方法 40只SD大鼠随机分为5组,即全方组、补气组、化瘀组、祛痰组、空白血清对照组。各组大鼠分别以相应中药煎剂或生理盐水连续灌胃9 d,末次灌胃给药2 h后,腹主动脉采血,离心后分离血清。体外培养EA.hy926细胞,随机分为7组,即①正常对照组、②H2O2刺激组、③全方组、④补气组、⑤化瘀组、⑥祛痰组、⑦空白血清对照组。其中②组加入终浓度为300μmol.L-1H2O2,③～⑦组用各组含药血清(浓度为10%)预处理24 h后加入终浓度为300μmol.L-1H2O2,各组细胞培养24 h后进行各项指标测定。采用流式细胞术检测EA.hy926细胞凋亡;实时定量反转录—聚合酶链反应(Real-time PCR)定量分析bcl-2、bax、caspase-3 mRNA表达;比色法检测caspase-3活性;蛋白质免疫印记技术(Western-blot)检测bcl-2、bax蛋白表达。结果与正常对照组相比,H2O2刺激后EA.hy926细胞凋亡率、bax、caspase-3表达显著增加,而bcl-2表达显著减少。全方组细胞凋亡率、bax、caspase-3水平较H2O2刺激组相比显著降低,而bcl-2水平显著升高,且全方组干预作用强于各拆方组。拆方各组中,化瘀组、祛痰组细胞凋亡率显著降低,化瘀组bax、cas-pase-3表达显著减少,而bcl-2表达显著增加。结论化瘀祛痰方药全方及化瘀拆方可显著抑制内皮细胞凋亡,影响凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3的表达,这可能是其抗AS的作用机制之一。     

益气健脾中药对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨益气健脾中药血清体外诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法：采用缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nicked labeling,TUNEL)分析、透射电镜、流式细胞仪分析、DNA电泳分析检测细胞凋亡；应用Northern印迹检测bcl-2、c-myc和p53基因表达活性。结果：经中药血清处理的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC)，可出现典型的凋亡特征，DNA电泳呈梯状图谱；流式细胞仪分析显示G0／G1期细胞阻滞现象，亚二倍体凋亡细胞增多，出现典型的凋亡峰，细胞凋亡率与中药血清浓度具有量效关系。杂交结果提示，30％中药血清可抑制抗凋亡基因bcl-2的表达，上调促凋亡基因c-myc和p3 mRNA水平。结论：益气健脾中药通过影响凋亡相关基因bcl-2、c-myc和p53的表达活性而诱导VSMC凋亡。     

反左金丸水提物对人胃癌细胞SGC-7901凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响

目的:观察反左金丸水提物(waterextractsofRetro-zuojinPill,WERZP)对人胃癌细胞(SGC-7901)生长的抑制和凋亡诱导效果,及其对bcl-2和bax表达的影响。方法:采用MTT比色法观察不同浓度的WERZP对SGC-7901的生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Hoechst33258染色观察细胞形态学变化以及Westernblot方法检测WERZP对人胃癌细胞SGC-7901中bcl-2、bax蛋白表达的影响。结果:WERZP作用SGC-7901细胞24h后,细胞存活率显著降低(P<0.05),且与时间、剂量呈依赖关系。流式细胞仪PI单染亚二倍体峰分析,0.1,0.5,1,5和10mg·mL^-1WERZP作用SGC-7901细胞24h,细胞凋亡率分别为(4.02±1.33),(36.10±0.23),(55.91±0.95),(56.50±1.55)和(60.27±3.58)%,其中(0.5～10)mg.mL^-1组与对照组(2.66±1.33)%比较差异均有统计学意义(P<0.01)。Hochest染色结果显示细胞出现核固缩状和颗粒状荧光等典型的凋亡学特征。WERZP可降低SGC-7901细胞bcl-2基因表达和增加bax基因表达。结论:WERZP对SGC-7901生长有明显的抑制作用并可诱导SGC-7901的凋亡,bcl-2基因表达降低和bax基因表达增加可能是其凋亡机制之一。     

右旋柠烯对不同类型人胃癌细胞的生长抑制作用

目的：探讨右旋柠烯(D-limonene)对不同类型人胃癌细胞的生长抑制作用及其机制。方法：以D-limonene作用于SGC-7901、BGC-823及AGS三种不同类型人胃癌细胞，采用噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪及电镜检测细胞生长抑制率、凋亡率以及形态学改变，免疫细胞化学法检测p53、bax和bcl-2基因表达。结果：D-limonene处理后的细胞生长抑制率与凋亡率均增加，与药物浓度呈正相关。细胞呈现核固缩、染色质边集、凋亡小体形成等典型凋亡表现。经D-limonene处理后SGC-7901、BGC-823细胞株p53、bax蛋白表达明显增加，bcl-2蛋白表达降低。AGS细胞株bax蛋白表达明显增加，bcl-2蛋白表达降低。结论：D-limonene对人胃癌细胞的抑制作用主要是通过诱导细胞凋亡，不同类型的细胞株作用途径可能不同。升提p53与bax及降低bcl-2的蛋白表达为其诱发冒癌细胞．凋亡的机制之一。     

香加皮水提取物诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其作用机制

目的研究香加皮水提取物(CPE)诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其作用机制。方法采用G iem sa染色观察细胞凋亡形态学变化;电子显微镜观察凋亡细胞的超微结构变化;流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳方法检测BGC-823细胞凋亡率、细胞周期和细胞凋亡的DNA水平变化;RT-PCR方法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax和surv iv in mRNA表达水平变化;免疫细胞化学方法检测bcl-2、bax和surv iv in蛋白表达的变化。结果经CPE作用后,人胃癌细胞BGC-823出现明显的细胞凋亡形态学变化及超微结构改变,细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈现梯形图。经250μg/mL CPE处理48 h后,多数BGC-823细胞被阻滞在G2/M期,而且细胞发生明显的凋亡变化,BGC-823细胞凋亡率可达18.9%。CPE可抑制BGC-823细胞bcl和surv iv in mRNA及蛋白的表达,促进baxmRNA及蛋白的表达。CPE可明显延长S180荷瘤小鼠生存期,且具有剂量依赖性。结论CPE通过阻滞BGC-823细胞于G2/M期及诱导BGC-823细胞凋亡发挥抗肿瘤作用,其作用机制与抑制细胞的bcl-2和surv iv in基因mRNA及蛋白表达、促进bax基因和蛋白的表达有关。     

心脑宁诱导增生VSMC凋亡及对相关基因表达的影响

目的 :探讨活血化瘀中药血清体外诱导增生血管平滑肌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法 :采用流式细胞仪分析 ,DNA电泳分析检测细胞凋亡 ;应用Northen印迹检测bcl- 2、c-myc基因表达活性。结果 :经中药血清处理的血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmuclecell,VSMC) ,可出现典型的凋亡特征 ,DNA电泳呈梯状图谱 ;流式细胞仪分析显示G0 /G1期细胞阻滞现象 ,亚二倍体凋亡细胞增多 ,出现典型的凋亡峰 ,细胞凋亡率与中药血清浓度具有量效关系。杂交结果提示 ,2 0 %中药血清可抑制抗凋亡基因bcl- 2的表达 ,上调促凋亡基因c -myc的mR NA水平。结论 :活血化瘀中药可通过影响凋亡相关基因bcl- 2、c -myc的表达活性而诱导VSMC凋亡。     

藤黄酸诱导人胃腺癌SGC-7901细胞的凋亡作用

目的：探讨藤黄酸(gambogic acid，GA)诱导体外培养人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的作用。方法：通过MTT比色法分析藤黄酸对人胃癌SGC-7901细胞在24，48，72 h增殖的影响，并通过光镜、电镜观察细胞形态学的改变及流式细胞术检测藤黄酸对SGC-7901肿瘤细胞周期动力学和凋亡诱导率的影响，用免疫组化方法检测凋亡相关基因bax和bcl-2的蛋白表达变化。结果：藤黄酸可明显抑制SGC-7901细胞的增殖，48h半数生长抑制剂量(IC50)为1．47，1．6 μmol／L的藤黄酸可导致7901细胞形态学的改变，流式细胞术显示细胞周期亦发生变化，G2／M期细胞增加，凋亡率呈时间-剂量相关性。同剂量的藤黄酸还可增加抑癌基因bax和减少诱癌基因bcl-2的蛋白表达量。结论：藤黄酸可明显抑制SGC-7901肿瘤细胞的生长，诱导细胞凋亡，其分子机制可能与其减少Bcl-2／Bax的比值相关。     

土荆皮酸诱导宫颈癌细胞系HeLa凋亡的实验研究

目的研究土荆皮酸(PAB)对体外培养的HeLa细胞的生物学效应和作用机制。方法用MTT法、流式细胞术、透射电镜检测体外培养的HeLa细胞在PAB作用下的增殖抑制及凋亡程度,用RT-PCR法检测p53/bcl-2/bax的表达水平。结果(1)PAB对HeLa细胞的增殖抑制作用随浓度升高而明显增强,其IC_(50)约10μmol/L。(2)流式细胞术证实10μmol/L PAB呈时间依赖性改变细胞周期分布,一方面降低G_0/G_1期的细胞比例,另一方面增高G_2/M期细胞的比例。(3)RT-PCR法显示HeLa细胞在10μmol/L PAB作用12、24、48 h均显示bax上调和bcl-2的下调,p53则未检测到表达。结论在体外PAB能抑制HeLa细胞增殖,诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与bax的上调和bcl-2的下调相关。     

藤黄酸促进bax和p53表达诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡

目的：观察藤黄酸(gambogic acids，GA)对肝癌细胞凋亡的诱导作用并探讨其分子作用机制。方法与结果：采用MTT比色法检测藤黄酸对人肝癌和人正常肝细胞增殖作用的影响，结果表明，藤黄酸对人肝细胞性肝癌SMMC-7721细胞株和QGY-7701细胞株有明显增殖抑制作用，并呈剂量依赖性，而对正常人肝组织L-02细胞株作用相对较弱；光镜及电镜形态学观察结果显示，给予GA后，肝癌细胞发生明显的细胞凋亡形态学变化，如细胞体积变小，细胞核固缩，出现凋亡小体等；采用RT-PCR和Western blotting方法检测bax mRNA以及bax和p53蛋白表达变化，结果表明GA可诱导bax mRNA及bax和D53蛋白表达上调；琼脂糖凝胶电泳显示，给予GA后，SMMC-7721裸小鼠移植瘤组织呈现典型的DNA ladder电泳梯状条带。结论：藤黄酸可显著抑制人肝癌细胞的增殖，其分子作用机制可能通过促进bax和p53表达上调，从而诱导人肝细胞性肝癌细胞凋亡。     

Apoptosis of human cholangiocarcinoma cell lines induced by β-escin through mitochondrial caspase-dependent pathway

The study aimed to evaluate the effects of β-escin on human cholangiocarcinoma cell lines (QBC939, Sk-ChA-1 and MZ-ChA-1) and to explore its mechanisms. Cell growth, cell cycle and apoptosis were investigated, respectively, by MTT assay, single PI and FITC/PI double-staining flow cytometry, and fluorescence microscopy. The protein expression was determined by western blotting. The study revealed that β-escin inhibited cholangiocarcinoma cell growth in a dose- and time-dependent manner, and the cell cycle of QBC939 and Sk-ChA-1 cells was arrested in the G2/M phase, and MZ-ChA-1 cells in G1 phase. Apoptosis of the three cholangiocarcinoma cell lines induced by β-escin was associated with the collapse of the mitochondrial membrane potential and the activation of caspase-3. The apoptotic effect of β-escin was suppressed by pancaspase inhibitor z-VAD-fmk. Molecular dissection revealed that the antiapoptotic protein bcl-2 was down-regulated after cholangiocarcinoma cell lines were treated with β-escin, while the protein levels of bax and p53 were unchanged. Apoptosis was accompanied by an increase in reactive oxygen species (ROS). These results suggest that β-escin induces apoptosis of cholangiocarcinoma cells through an intrinsic mitochondrial caspase-dependent pathway, and the increase in the bax/bcl-2 ratio and ROS may play important roles in β-escin-induced apoptosis of cholangiocarcinoma cells.