人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4的原核表达及鉴定

【目的】构建表达人细胞周期蛋白Dl及细胞周期蛋白激酶CDK4融合蛋白的重组体。【方法】用RT-PCR从HL-60细胞中扩增细胞周期蛋白D1及CDK4基因片段，克隆到pGEM-T easy载体上。测序鉴定后切下相应的片段，连接到表达载体pET-22b( )上，重组质粒转化大肠杆菌BL21(DL3)，使之高效表达融合蛋白细胞周期蛋白D1及CDK4。SDS-PAGE电泳及Western blotting鉴定表达蛋白。【结果】 用PCR扩增得到了正确的目的基因片段并构建成pET-cyclinD1和pET-CDK4两个原核表达载体。将其转化大肠杆菌，Western blot检测证实了转化的大肠杆菌能表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白。【结论】 本研究成功构建了细胞周期蛋白D1及CDK4原核表达载体，后两在细胞内能正确表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白．     

茶多酚与亚硒酸钠联合对EBV抗原表达的抑制作用

用间接免疫荧光法测定Ｒａｊｉ细胞和Ｂ９５－８细胞ＥＢ病毒抗原的表达。结果显示无细胞毒浓度的茶多酚与亚硒酸钠联合对Ｒａｊｉ细胞ＥＢＶ－ＥＡ表达有显著的抑制作用,优于单纯茶多酚或亚硒酸钠的抑制作用。两药显示相互协同增效的作用 。抑制率与药物浓度相关;单纯茶多酚对Ｂ９５－８细胞ＥＢＶ－ＶＣＡ表达无抵制作用,但茶多酚能增强亚硒酸钠对Ｂ９５－８细胞ＥＢＶ－ＶＣＡ表达的抵制作用,抑制率随药物浓度的升高而升高。     

紫草素及其衍生物的抗肿瘤作用

紫草为传统的中药，紫草的化学成份复杂，具有广泛的药理作用，抗肿瘤作用是其中之一。天然紫草素类化合物由于抗瘤作用弱，仍未用于临床。为了减少它们的毒副反应和增强抗肿瘤作用，人们半合成了许多紫草素类衍生物。实验证明，天然紫草素类化合物及其衍生物具有不同程度的细胞毒作用和抗肿瘤作用。初步的作用机制研究表明，紫草素类化合物及其衍生物能诱导肿瘤细胞凋亡，激活促细胞分裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)，抑制蛋白酪氨酸激酶和DNA拓扑异构酶Ⅰ的活性，从而影响肿瘤细胞的代谢、增殖、分化、信号传递、基因表达等过程，阻碍肿瘤细胞的生长。     

番荔枝内酯诱导白血病细胞凋亡的机理

目的　研究番荔枝内酯(squamocin)诱导白血病细胞凋亡的机理。方法　DNA凝胶电泳法、荧光染色等检测细胞凋亡。试剂盒检测caspase-3的活性。Westernblot法检测PARP和caspase-3的剪切片断和磷酸化的SAPK/JNK量的变化。结果　Squamocin处理HL-60细胞后,导致染色质浓缩、片断化,DNA梯形条带出现,完整PARP的116ku条带逐渐减少,而85ku的片断逐渐增加,caspase-3酶的活性也增加。Caspase-3的特异性抑制剂DEVD-CHO预处理HL-60细胞,可阻止squamocin诱导的DNA片断化、PARP的剪切和细胞死亡。Squamocin激活HL-60细胞中SAPK/JNK。结论　Squamocin诱导HL-60细胞凋亡依赖caspase-3途径的激活,squamocin激活caspase-3可能与SAPK/JNK的激活相关     

SYUNZ-4诱导U937细胞凋亡及机制研究

目的探讨半合成紫草萘醌化合物SYUNZ-4对U937细胞的诱导凋亡作用及机制。方法锥虫蓝拒染实验和MTT法分析SYUNZ-4对U937细胞的生长抑制作用;DNA电泳、荧光显微镜观察细胞形态及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法分析凋亡相关蛋白表达的变化。结果SYUNZ-4抑制U937细胞生长并呈时间和浓度依赖性,48 h的半数抑制浓度(IC50)为3．62μg／ml;经SYUNZ-4处理的U937细胞可见DNA梯形条带、细胞核浓缩和凋亡小体;6μg／ml SYUNZ-4处理U937细胞6,12,24 h,细胞凋亡率分别为(12．2±6．5)％、(25．3±11．4)％和(56．2±6．5)％,对照组凋亡率为(2．1±0．8)％(P<0．05);SYUNZ-4可活化U937细胞中的caspase-3、caspase-8、caspase-9和PARP,上调Bax、P21、P27、Fas和FasL的表达,下调Bcl-xL水平,对Bcl-2、BID和P53表达无影响。结论SYUNZ-4在体外可诱导U937细胞凋亡。caspase家族蛋白及其相关信号分子参与了凋亡的调节。     

THE ANTICANCER EFFECT AND ANTI－DNA TOPOISOMERASE II EFFECT OF EXTRACTS OF CAMELLIA PTILOPHYLLA CHANG AND CAMELLIA SINENSIS

ＴＨＥＡＮＴＩＣＡＮＣＥＲＥＦＦＥＣＴＡＮＤＡＮＴＩ－ＤＮＡＴＯＰＯＩＳＯＭＥＲＡＳＥＩＩＥＦＦＥＣＴＯＦＥＸＴＲＡＣＴＳＯＦＣＡＭＥＬＬＩＡＰＴＩＬＯＰＨＹＬＬＡＣＨＡＮＧＡＮＤＣＡＭＥＬＬＩＡＳＩＮＥＮＳＩＳＸｉｅＢｉｎｓｆｅｎ；谢冰芬；ＬｉｕＺ...     

DNA引物酶抑制剂碘化-3,3′-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青诱导人白血病HL-60细胞凋亡

目的研究DNA引物酶抑制剂碘化-3,3′-二乙基-9-甲基-硫杂羰花青(DMTCCI)诱导人粒细胞性白血病HL-60细胞凋亡并探索其机制。方法分别采用不同浓度的DMTCCI处理培养于RPMI-1640培养基的HL-60细胞。采用MTT法检测DMTCCI对HL-60细胞的生长抑制作用。采用流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测细胞凋亡。采用蛋白免疫印迹(Western blotting)法观察凋亡相关蛋白survivin， Bcl-xL， Bad， Bax， Bcl-2， caspase-9， caspase-3， caspase-6， PARP， DFF45和lamin B的表达。采用ApoAlert Caspase-3分析试剂盒检测caspase-3的活性。结果DMTCCI具有抑制人白血病HL-60细胞增殖的作用，其IC₅₀值为0.24 μmol·L^-1。流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示，DMTCCI可诱导HL-60细胞凋亡。在经DMTCCI处理的HL-60细胞中，survivin和Bcl-xL蛋白的表达水平下调，Bad和Bax蛋白的表达水平上调，Bcl-2蛋白的表达水平无变化，caspase-9，caspase-3，caspase-6，PARP，DFF45和lamin B被分别裂解，产生相应裂解产物。在HL-60细胞中，caspase-3的活性在1 μmol·L^-1 DMTCCI处理3 h时明显升高，在处理12 h时达到最高峰。结论DMTCCI可抑制人白血病HL-60细胞的增殖并诱导其发生细胞凋亡。Bcl-2家族蛋白、survivin和caspases家族蛋白可能参与了上述诱导HL-60细胞凋亡的过程。     

真菌及高等植物的免疫兴奋剂

免疫兴奋是试图用药物来提高宿主的非特异性防御机制,用于预防感染和肿瘤。免疫兴奋剂必须具备下列条件:①抗原性极少或无。②不会诱发变态反应、自身免疫反应或其他副作用。③无致癌或促癌作用。④生物学降解迅速。⑤化学性质明确。免疫兴奋剂能从量上提高免疫反应。激活的巨噬细胞,不仅能增强吞噬作用,还能产生集落兴奋因子(CSF)。后者又能兴奋骨髓的干细胞,从而产生更多中性白细胞。其结果增强了抵抗力。     

抗EB病毒口服液对EB病毒转化力的抑制作用

目的 :探讨抗EB(Epstain Barr)病毒口服液对EB病毒转化人脐血B淋巴细胞能力的抑制作用。方法 :用台盼蓝拒染法检测抗EB病毒口服液对脐带血B淋巴细胞的细胞毒作用 ;用克隆形成法测定药物对EB病毒转化B淋巴细胞的抑制作用。结果 :用 0 62 5、1 2 5、2 5 0、5 0 0和 10 0 0mg/mL的生药提取物浓度分别预处理EB病毒 1h ,药物对EB病毒转化B淋巴细胞转化的抑制率分别为 2 9 3 %、49 9%、65 3 %、68 2 %和 81 2 %。药物在上述 5种浓度下与EB病毒和B淋巴细胞共同作用 ,药物对EB病毒转化B淋巴细胞转化力的平均抑制率分别为 2 7 4%、3 6 9%、46 5 %、5 6 6%和 69 9%。结论 :抗EB病毒口服液对EB病毒转化B淋巴细胞能力有抑制作用     

DNA引物酶的结构与功能及其抑制剂的研究进展

ＤＮＡ复制是以半保留的方式进行的。ＤＮＡ的 2条链都能作为模板 ,同时合成 2条新的互补链。以复制叉向前移动的方向为标准 ,1条模板链是以 3′ 5′走向 ,其对应的子链ＤＮＡ能以5′ 3′方向连续合成 ,称为前导链 (ｌｅａｄｉｎｇｓｔｒａｎｄ) ;另一条模板链是以 5′ 3′走向 ,其子链ＤＮＡ也是从 5′ 3′方向合成 ,从而在复制叉移动相反的方向形成许多不连续的ＤＮＡ片段 ,最后连接形成 1条完整的ＤＮＡ链 ,该链称为后滞链 ( 1ａｇｇｉｎｇｓｔｒａｎｄ)。业已证明 ,ＤＮＡ新链合成前需要先合成 1段与ＤＮＡ模板互补、约 7～ 10个核苷酸…