井穴放血法对急性脑缺血大鼠缺血区脑组织凋亡相关蛋白的影响

[目的]观察井穴放血法对急性缺血性脑损伤的脑保护作用。[方法]将实验大鼠分为假手术组、脑缺血组和脑缺血 井穴放血治疗组，一侧大脑中动脉阻塞致急性缺血性脑损伤模型(MCAO)，治疗组在脑缺血后即刻给予井穴放血治疗，出血量为每穴1滴。分别于缺血后的1、3、6、24h处死，进行免疫组织化学染色，检测缺血区皮层脑组织c-fos蛋白(FOS)及HSP70蛋白免疫阳性细胞，以观察井穴放血法对急性缺血性脑损伤后早期抑凋亡基因表达的影响。[结果]c-fos蛋白和HSP70蛋白在缺血区皮层脑组织表达增加，缺血后1h HSP70无表达，FDS表达增加，在随后观察的3、6、24h时程内HSP70和FOS均有随缺血时间延长表达增多的趋势。井穴放血治疗组在以上各时程c-fos及HSP70免疫阳性细胞数均高于同时段的缺血病模组，有统计学意义。[结论]急性脑缺血后应用井穴放血干预治疗可明显增强缺血区脑组织对抗神经细胞凋亡的即刻早期基因c-fos蛋白和抗应激HSP70蛋白的表达，从而提高了缺血后神经细胞对缺血、缺氧的耐受和适应能力，提高了缺血后神经元的可塑性，进而可影响晚期目的基因的表达，抵抗细胞凋亡的发展，增强脑修复能力。表明井穴放血法对中风初期有一定的脑保护作用。     

手十二井穴刺络放血法对MCAO模型大鼠大脑皮层c-fos蛋白表达的影响

目的 从脑内c-fos蛋白表达的角度观察井穴放血法对急性缺血性脑损伤的脑保护作用。方法 以凝结法阻断大鼠一侧大脑中动脉造成急性局灶性缺血性脑损伤模型(MCAO)，用免疫组织化学法观察缺血区皮层脑组织c-fos阳性细胞的表达变化及施加手十二井穴放血法后对其的干预治疗作用。结果 急性缺血性脑损伤可快速诱导c-fos蛋白在皮层缺血区脑组织的表达，其表达有随缺血时间延长逐渐增多的趋势，而缺血后即刻施加井穴放血的干预治疗．在1h、3h、6h、24h各缺血时间段均可明显上调缺血区皮层脑组织c-fos蛋白的表达水平。结论 c-fos蛋白表达既与缺血的严重程度有关．也反应神经元的应激反应能力，脑缺血能诱导c-fos蛋白的逐渐表达，提示脑的缺血性损伤可应激性地增强神经细胞对缺血、缺氧的耐受和适应能力。而早期施加井穴刺络放血疗法能进一步增强c-fos蛋白表达，提高神经细胞的应激能力，从而提高缺血区脑组织的抗损伤修复能力，减缓神经细胞凋亡，抵抗缺血性脑损害的进一步发展，产生有效的脑保护作用，表明井穴放血法对中风早期有一定的急救作用。     

十二井穴刺络放血对局灶性脑缺血模型大鼠神经细胞功能的影响

目的:探讨针刺十二井穴治疗脑梗死的机制。方法:以热凝法阻断大鼠一侧大脑中动脉(McAo)造成局灶性脑缺血为实验模型,采用免疫组化法观察十二井穴刺络放血后缺血区脑组织原癌基因蛋白(c-fos蛋白)的动态变化。结果:针刺十二井穴能增强c-fos蛋白的表达,与同时间段模型组比较有明显差异(P<0.05)。结论:针刺十二井穴可通过快速提高缺血区c-fos蛋白的含量改善神经细胞的应激能力。     

针刺对实验性脑梗塞大鼠基因转录影响的研究

本研究以热凝法阻断大鼠一侧大脑中动脉造成实验性脑梗塞模型,观察了实验性脑梗塞模型大鼠脑缺血后不同时段皮质、纹状体、海马早期快反应基因c-fos、HSP70基因表达水平及针刺的干预作用,从基因水平探讨了针刺治疗脑梗塞的作用机制,结果表明: 1用免疫组化法观察缺血区脑组织c-fos、HSP70蛋白的动态变化及针刺的干预作用,结果提示:脑缺血能诱导c-fos、HSP70蛋白的表达,并随时间的延长(1～48 h)逐渐增加.针刺能增强各时段c-fos、HSP70蛋白的表达,提高神经细胞的应激能力,促进神经细胞对脑缺血损伤产生适应性变化,增强脑组织的修复能力."醒脑开窍"针法作用优于常规针刺法.     

十二井穴流注放血干预急性脑缺血模型大鼠HSP70及CD31表达的研究

目的探究十二井穴流注放血对急性脑缺血(ACI)模型大鼠HSP70及CD31表达的作用。方法60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、普通放血组、流注放血1组、流注放血2组、西药组,每个组10只,局灶性凝结大脑中动脉法制备ACI模型后分组治疗。神经功能缺陷评分量表(m NSS)评价治疗前后各组大鼠神经功能,HE染色观察各组大鼠脑组织病理变化。免疫组织化学观察大鼠缺血区脑组织内HSP70及CD31蛋白表达变化。结果各组大鼠治疗后m NSS评分均较治疗前显著降低,西药组改善大鼠mNSS评分效果优于普通放血组和流注放血1组并与流注放血2组治疗效果无显著性差异。HE染色结果显示流注放血2组及西药组大鼠脑组织病理结构较模型组显著恢复,神经元形态完整。免疫组化结果显示,治疗后各组大鼠脑组织中HSP70及CD31蛋白表达均高于模型组(P<0.05),西药组HSP70及CD31含量显著高于普通放血组和流注放血1组(P<0.05),并与流注放血2组无明显差异(P>0.05)。结论十二井穴流注放血可能通过促进HSP70及CD31的表达发挥对ACI大鼠的保护作用。     

井穴放血急救脑病脑保护效应机制实验研究进展

井穴放血疗法是中医学急救方法之一,临床应用疗效确切。井穴放血可以缓解急性脑病导致的脑组织缺血性损伤,缓解低氧状态、酸中毒、神经毒性,有抗自由基损伤、抑制钙超载、调节炎性反应相关细胞因子的表达和增强抑凋亡基因的表达等作用,可促进中枢神经再生,对缺血性及创伤性脑水肿、血脑屏障功能障碍都有一定的改善作用。总结近年来井穴放血疗法治疗急性脑病机制研究的相关文献,以期为井穴放血疗法在临床急性脑病中的应用提供更多科学参考依据。     

井穴干预缺血性脑损伤的实验研究进展

临床应用井穴治疗急性或慢性脑缺血引起的脑梗死和血管性痴呆等疾病收到良好疗效,表明井穴对缺血性脑损伤具有良性干预作用。近年来通过建立缺血动物模型进行的一系列实验研究初步表明,抗自由基损伤、抑制钙超载、调节炎性反应相关细胞因子的表达和增强抑凋亡基因的表达等可能是井穴干预缺血性脑损伤的相关作用机制。但由于脑缺血损伤机制的复杂性,相关研究仍需进一步深入。     

手十二井穴刺络放血对脑缺血作用机制的实验室研究概况

通过总结整理近15年来国内手十二井穴刺络放血对脑缺血实验研究的相关文章,从对缺血区电解质Ca2+、Na+、K+、H+的影响,对脑缺血相关代谢产物一氧化氮、超氧化物歧化酶、丙二醛及兴奋性氨基酸的影响,对肿瘤坏死因子-α、c-fos蛋白和HSP70蛋白的影响等方面进行论述,证明手十二井穴刺络放血可有效地保护缺血脑细胞,减少脑水肿的发生发展,增强脑的修复能力,值得临床推广应用。但目前研究尚不够完善,有待进一步深入。     

井穴放血对急性高原缺氧脑损伤大鼠海马线粒体自噬相关蛋白表达的影响

目的:观察井穴放血对急性高原缺氧脑损伤大鼠海马线粒体自噬相关蛋白表达的影响,探讨井穴放血治疗急性高原低氧脑损伤的生物学机制。方法:雄性SD大鼠随机分为正常对照组、低压低氧组、井穴放血干预组,后两组又按6、12、24、48、72 h分为5个亚组,每组9只。采用实验动物低压模拟舱(海拔5 000 m)制备急性高原低氧脑损伤模型。井穴放血干预组大鼠按"少商""商阳""中冲""关冲""少冲""少泽"的顺序进行放血预处理,每日1次,共7 d。采用HE染色法观察大鼠海马组织变化;ELISA法检测血清缺氧诱导因子(HIF)-1α、血管内皮生长因子(VEGF)含量;Western blot法检测大鼠海马组织Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白的表达情况。结果:与正常对照组比较,低压低氧组各时点海马组织有不同程度损伤,各时点血清HIF-1α、VEGF含量升高(P0.01),12、24 h时海马组织Beclin-1蛋白表达升高(P0.05),各时点海马组织LC3Ⅱ蛋白表达均升高(P0.05,P0.01)。与同时点低压低氧组比较,井穴放血干预组大鼠海马组织损伤程度较轻,各时点血清HIF-1α、VEGF含量升高(P0.01,P0.05),12 h时海马组织Beclin-1蛋白表达升高(P0.05), 24、48、72 h时海马组织LC3Ⅱ蛋白表达明显升高(P0.01)。结论:井穴放血干预可改善急性高原缺氧大鼠海马组织损伤,其机制可能与上调血清HIF-1α、VEGF含量及海马组织中线粒体自噬相关蛋白Beclin-1、LC3表达有关。     

电针对脑缺血再灌注大鼠缺血区P53蛋白表达影响

目的:通过观察电针对脑缺血再灌注大鼠缺血区皮质神经细胞形态学变化和P53蛋白表达的影响,研究电针对缺血性脑损伤的保护机制.方法:采用大脑中动脉线栓法制作脑缺血模型,电针大鼠的水沟、内关,运用HE染色观察各组大鼠皮质神经细胞形态学和免疫组化法观察各组大鼠缺血区皮质P53蛋白表达.结果:与模型组相比,电针各组缺血皮质P53蛋白表达均降低,同时电针可明显改善缺血大鼠缺血侧皮层形态学损伤.结论:电针通过抑制P53蛋白表达减轻神经组织损伤来对抗缺血再灌注脑组织神经损伤.     

眼针疗法治疗急性脑缺血再灌注损伤疾病的机制研究

[目的]观察眼针疗法对急性脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)表达的影响,探讨眼针疗法治疗急性脑缺血再灌注损伤性疾病的作用机制。[方法]应用线栓法复制脑缺血再灌注大鼠模型,采用眼针治疗,于再灌注后24h进行神经功能缺损评分,采用免疫组化、Western blot方法测定脑组织TNF-α蛋白表达的变化。[结果]与模型组比较,眼针组大鼠神经功能缺损评分明显下降,脑组织TNF-α蛋白表达明显下调(P<0.01)。[结论]眼针疗法具有明显的改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用,其机制与下调脑组织TNF-α表达有关。     

葛根素对大鼠急性脑缺血损伤Hsp70表达的影响

目的:探讨葛根素对大鼠急性脑缺血损伤Hsp70表达的影响。方法:采用闭夹大脑中动脉造成局部脑缺血模型,对脑组织用免疫组化SP法作Hsp70染色,观察其Hsp70表达情况。结果:葛根素干预组Hsp70表达强度显著强于单纯缺血组(P<001)。结论:葛根素有上调大鼠急性脑缺血损伤时Hsp70表达的作用。     

羟乙葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织E-selectin及P-selectin表达的影响

 目的观察E-selectin及P-selectin在羟乙葛根素保护大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用。方法线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,大鼠脑缺血2 h再灌注24 h后,采用Western blot及RT-PCR法观察大鼠脑组织E-selectin及P-selectin的蛋白及mRNA表达情况。结果羟乙葛根素可明显降低缺血区脑组织E-selectin及P-selectin的蛋白及mRNA表达。结论羟乙葛根素可能通过降低缺血区脑组织黏附分子表达发挥脑保护作用。     

羟乙葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织ICAM-1及VCAM-1表达的影响

 目的观察羟乙葛根素对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织ICAM-1及VCAM-1表达的影响,以探讨其作用机制。方法线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,大鼠脑缺血2 h再灌注24 h后,采用Western blot及RT-PCR法观察大鼠脑组织ICAM-1、VCAM-1的蛋白及mRNA表达情况。结果羟乙葛根素可明显降低缺血区脑组织ICAM-1、VCAM-1的蛋白及mRNA表达。结论羟乙葛根素可能通过降低缺血区脑组织黏附分子表达发挥其脑保护作用。     

血栓通对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞HSP70表达的影响

目的观察血栓通对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞热休克蛋白70(heat shockprotein 70,HSP70)表达的影响,探讨其神经保护作用机制。方法将大鼠随机分为5组,其中川芎嗪组术前3 d腹腔注射川芎嗪注射液80 mg/kg,血栓通大、小剂量组术前3 d分别腹腔注射血栓通10 mg/kg和5 mg/kg。除假手术组外,其余4组用双侧颈总动脉结扎法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,于脑缺血30 min再灌注24 h后断头取脑,用免疫组织化学法检测脑组织中HSP70表达,并与病理组织学改变进行对照。结果血栓通能明显增强大脑皮质及海马HSP70的表达,减轻神经细胞损伤。结论血栓通能减轻脑组织的缺血再灌注损伤,改善神经功能缺失,其作用机制可能与增加HSP70表达有关。     

“调神通络”针法对脑缺血大鼠大脑皮层蛋白激酶Cγ、蛋白激酶Cδ表达的影响

目的:探讨局灶脑缺血再灌注大鼠蛋白激酶C(PKC)γ、PKCδ表达在缺血性脑损害中的动态变化规律以及针刺的干预机制。方法:Wistar大鼠随机分为针刺组、模型组和正常组。前两组再分为缺血再灌注4h、12h、24h、72h组。采用线栓法制备大鼠局灶脑缺血再灌注模型。电针针刺大鼠右侧顶中线和顶旁线,频率2Hz/15Hz,强度1mA。运用免疫组化方法观察缺血侧大脑皮层PKCγ、PKCδ吸光度值。结果:PKCγ、PKCδ在正常组呈基础水平表达,模型组与正常组相比PKCγ、PKCδ表达明显升高(P<0.01)。针刺组与模型组相比,相应时间点PKCγ、PKCδ吸光度值减弱(P<0.01,P<0.05)。结论:脑缺血再灌注损伤后PKCγ、PKCδ的异常表达与神经元坏死、凋亡有密切的联系。针刺能明显减少PKCγ、PKCδ蛋白表达及神经元凋亡,对脑缺血神经元起着保护作用。     

丹星通络汤对脑缺血再灌注损伤大鼠热休克蛋白70表达的影响

目的观察丹星通络汤对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞热休克蛋白70(heatshock protein 70,HSP70)表达的影响,探讨其神经保护作用机制。方法40只健康雄性Wistar大鼠,采用大脑中动脉线栓法建立局灶脑缺血再灌注大鼠模型,并随机将大鼠分为假手术组,缺血再灌注组(I/R),丹星通络汤大、小剂量组和尼莫地平组,每组8只。丹星通络汤组分别按15mL/kg(大剂量),7.5 mL/kg(小剂量),尼莫地平组10 mg/kg,术前连续给药7 d,每天1次。假手术组和缺血再灌组分别灌以10 mL/kg的生理盐水。大鼠局灶性脑缺血2 h,然后行再灌注。再灌注24 h断头取脑组织,采用免疫组织化学法检测脑组织中HSP70蛋白的表达,并与病理组织学改变进行对照。结果丹星通络汤能明显增强大脑皮质及海马HSP70的表达,减轻神经细胞损伤。结论丹参通络汤能减轻脑组织的缺血再灌注损伤,改善神经功能缺失,其作用机制可能与增加HSP70表达有关。     

针刺涌泉、重灸百会对局灶性脑缺血大鼠VEGF表达的影响

目的探讨针刺对缺血性脑卒中的作用机制。方法将雄性Wistar大鼠40只，随机分为模型组和针灸组，每组20只。以线栓法闭塞大脑中动脉（middle cerebral artery occlusion，MCAO）制作局灶脑缺血再灌注损伤模型。采用免疫组织化学染色SABC法检测缺血脑组织血管内皮细胞生长因子（VEGF）蛋白表达，RT—PCR法检测缺血脑组织VEGFmRNA表达，TTC染色测定脑梗死面积。结果脑组织VEGFmRNA表达与模型组相比，针灸组缺血半暗带区VEGFmRNA表达明显增强，差异有统计学意义（P〈0．05）;脑组织VEGF蛋白表达与模型组相比，针灸组VEGF蛋白表达明显增强，差异有统计学意义（P〈0．05）;模型大鼠的脑组织出现大面积梗死灶，与正常组比较，差异明显（P〈0．01）;与模型组比较，针灸组脑梗死面积明显缩小，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论针刺涌泉、重灸百会能显著增强脑组织VEGF蛋白及VEGFmRNA表达，促进缺血半暗带区血管生成，这可能是针灸治疗脑缺血的作用机制之一。