通心络对体外模拟脑缺血再灌注损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用

目的：观察通心络对体外模拟脑缺血再灌注损伤大鼠脑微血管内皮细胞的保护作用。方法：分离大鼠脑微血管内皮细胞培养鉴定,采用氧糖剥夺法建立模拟体外脑缺血再灌注内皮细胞损伤模型,利用制备的通心络含药血清干预,CCK-8法检测细胞活性;硝酸酶还原法测定细胞上清液NO的含量;Elisa法检测细胞上清液vWF的含量。结果：与正常组比较,模型组细胞OD值明显降低（P〈0．01）,细胞上清液NO和vWF（P〈0．05或P〈0．01）含量明显升高;与模型组比较,10％的通心络含药血清作用24h,细胞OD值明显增高（P〈0．01）,细胞上清液NO含量和vWF含量明显降低（P均〈0．01）。结论：通心络含药血清可能是通过减少NO和vWF分泌保护脑缺血再灌注损伤的脑微血管内皮细胞。     

复方通络胶囊对人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的观察复方通络胶囊对缺氧-复氧所致人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用。方法体外培养HUVECs，建立缺氧-复氧模型，倒置显微镜观察细胞形态，采用MTr法测定细胞存活力，检测细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）水平。结果复方通络胶囊能明显减轻缺氧．复氧所致细胞形态学的改变、抑制内皮细胞损伤、明显减少LDH的释放（P〈0．05，P〈O．01）。结论复方通络胶囊对HUVECs损伤有明显的保护作用。     

丹参通络解毒汤联合METTL3对缺氧/复氧大鼠心肌微血管内皮细胞血管新生的影响

目的 探讨丹参通络解毒汤联合甲基转移酶样3(METTL3)对缺氧/复氧（H/R）大鼠心肌微血管内皮细胞（CMECs）血管新生的影响及可能作用机制。方法 建立H/R损伤CMECs模型,将细胞分为空白组、模型组、沉默组、过表达组、中药+沉默组、中药+过表达组,细胞划痕实验观察CMECs迁移情况,CCK-8法检测CMECs增殖能力,RT-PCR检测CMECs血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达,Western blot检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组CMECs迁移率、细胞活力明显降低,VEGF mRNA和eNOS蛋白表达明显降低（P<0.01）;与模型组比较,沉默组CMECs迁移率、细胞活力明显降低,VEGF mRNA表达明显降低（P<0.05）,过表达组、中药+沉默组、中药+过表达组CMECs迁移率、细胞活力明显增加,VEGF mRNA和eNOS蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）;与沉默组比较,中药+沉默组CMECs迁移率、细胞活力明显增加,VEGF mRNA和eNOS蛋白表达明显升高（P<0.01）;与过...     

当归芍药散防治老年期痴呆的物质基础与作用机理研究X——精简方及其CO2超临界萃取物对星形胶质细胞缺氧损伤的保护作用

目的：观察当归芍药散精简方（FBD）及其CO2超临界萃取物（P2）对体外培养的大鼠乳鼠皮质星形胶质细胞缺氧损伤的保护作用。方法：SD大鼠po FBD 125mg／kg或P2 16．3mg／kg后，采集含药脑脊液（CSF-FBD／P2）；MTT法测定FBD、P2人工脑脊液（ACSF-FBD／P2）及其含药脑脊液（CSF-FBD／P2）对Na2S2O4诱导星形胶质细胞缺氧损伤的保护作用。结果：1mmol／LNa2S2O4作用1h复氧4h可显著降低星形胶质细胞活力（P〈0．01）；（0．1—1）mg／LACSF．FBD和5％-15％CSF-FBD可显著促进缺氧损伤星形胶质细胞活力（P〈0．01）；（0．01—1）mg／LACSF．P2和15％CSF-P2可极显著或显著促进缺氧损伤星形胶质细胞活力（P〈0．01—0．05）。结论：FBD及其CO2超临界萃取物对星形胶质细胞缺氧损伤具有保护作用。     

参夏合剂影响Ang11诱导大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞凋亡和Caspase-3表达的研究

目的：观察参夏合剂对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡和Caspase-3表达的影响,探讨参夏合剂防治动脉粥样硬化的作用机制。方法：培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,经Angl／诱导后,随机分为模型组、参夏合剂低剂量组、高剂量组、DMSO对照组,分别给予相应药物干预后,采用原位末端标记技术检测凋亡细胞（TUNEL）,用免疫组化法检测Caspase-3的表达。结果：①血管平滑肌细胞凋亡率：空白对照组的VSMC未出现细胞凋亡,模型组细胞凋亡较空白对照组显著增高（P〈0．05）。参夏高、低剂量组亦出现细胞凋亡,但明显低于模型组（P〈0．01或P〈0．05）。②Caspase-3表达情况：模型组的Caspase-3表达与空白对照组无显著差异;参夏合剂高、低剂量组的Caspase-3蛋白表达均明显低于模型组（P〈0．05）;且随着参夏舍剂浓度的增加,Caspase-3蛋白表达呈下降趋势。结论：AngII通过促进细胞凋亡作用而诱发动脉粥样硬化过程,参夏合剂可通过调节细胞凋亡和Caspase-3表达发挥抗动脉粥样硬化作用。     

益肾通络中药复方对IR大鼠神经功能缺损及脑神经细胞凋亡的影响

目的：探讨益肾通络中药复方对脑缺血再灌注（ischemiare-perfusion,IR）模型大鼠神经功能缺损与脑神经细胞凋亡的影响。方法：成年雄性Wistar大鼠30只随机分为假手术组、治疗组、对照组3组,用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）脑缺血再灌注（IR）模型,参照Zea-Longa法进行神经病学评分、Swanson法测定脑梗死灶体积、TuNEL法检测凋亡细胞,观察益肾通络中药复方对脑缺血再灌注模型大鼠神经功能缺损与脑神经细胞凋亡的影响。结果：益肾通络中药复方治疗组的神经病学评分、脑梗死灶体积与凋亡细胞数均明显低于生理盐水对照组（P〈0．05或P〈0．01）。结论：益肾通络中药复方能明显减轻脑缺血再灌注动物的神经功能缺损与脑神经细胞凋亡。     

咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡的影响

目的：观察咳喘宁对支气管哮喘大鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡的影响。方法：40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、咳喘宁高剂量组（27g生药／kg体质量）、咳喘宁低剂量组（13．5g生药／kg体质量）、桂龙咳喘宁对照组（0．41g／kg体质量），每组8只。除正常组外以卵蛋白致敏并吸入激发法制备大鼠支气管哮喘模型，各治疗组均从第1次哮喘激发开始（造模第3周）至处死前每天灌胃给药，激发并给药4w后处死大鼠，观察各组大鼠引喘潜伏期，并采用TUNEL法检测细胞凋亡，采用HE染色观察肺和气管病理组织学变化。结果：与模型组比较，各治疗组引喘潜伏期明显延长（P〈0．05或P〈0.01）；高剂量组长于桂龙咳喘宁组（P〈0．05）；与正常组比较，模型组大鼠支气管管壁和平滑肌厚度、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞数明显增加（P〈0．01），同时凋亡率略有升高÷但无统计学意义（P〉0．05）；与模型组比较，各治疗组均可显著延长引喘潜伏期（P〈0．05或P〈0．01），明显降低支气管管壁和平滑肌厚度、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞数（P〈0．05或P〈0．01），升高嗜酸性粒细胞凋亡率（P〈0．01）。结论：咳喘宁通过促进EOS凋亡，减轻了哮喘气道炎症，从而减轻哮喘发作。     

丹龙醒脑片对大鼠局灶性脑缺血再灌注后海马区肿瘤坏死因子α表达和细胞凋亡的影响

目的探讨丹龙醒脑片对大鼠脑缺血再灌注后海马区神经细胞凋亡和肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达的影响，探讨其作用机制。方法应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，用原位末端标记法和免疫组化法分别检测假手术组、模型组、丹龙醒脑片组和尼莫地平组的凋亡细胞数和TNF—α阳性细胞数。结果与假手术组相比，模型组凋亡细胞数和TNF—α表达明显升高（P〈0．05，P〈0．01）；与模型组相比，丹龙醒脑片组凋亡细胞数和TNF—α表达明显降低（P〈0．05）。结论TNF-α表达下降可能是丹龙醒脑片减少大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的分子机制之一。     

石见穿对大鼠子宫内膜异位症模型局部组织细胞凋亡的影响

目的：通过建立大鼠子宫内膜异位症（EM）模型，从EM模型异位病灶局部组织细胞凋亡的变化探讨石见穿对EM的作用。方法：建立EM动物模型，将建模成功大鼠随机分为非治疗组、石见穿治疗组、丙氨瑞林组。将正常大鼠设为正常对照组。通过TUNEL法检测各组大鼠在位及异位内膜组织细胞凋亡率。结果：模型组异位内膜、在位内膜组织细胞凋亡率均明显低于正常对照组，差异有显著性（P〈0．05），而异位内膜细胞凋亡率低于在位内膜，差异有显著性（P〈0．05）；石见穿治疗组在位内膜、异位内膜细胞凋亡率均高于模型组，有显著性差异（P〈0．05）。结论：石见穿治疗组异位内膜凋亡敏感性明显增强，且凋亡细胞分布广，其明显抑制异位内膜生长的作用可能是通过诱导异位内膜细胞凋亡的方式来实现的。     

生脉胶囊对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察生脉胶囊对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法将75只雌性sD大鼠随机分为假手术组、心衰模型组、生脉胶囊组、卡托普利组、生脉胶囊＋卡托普利组，采用腹主动脉缩窄法造成大鼠慢性心力衰竭模型，分组治疗7周时测定大鼠心肌细胞凋亡率与抑制凋亡蛋白Bcl-2含量。结果模型组心肌细胞凋亡率高于假手术组（P〈0．01），生脉胶囊组、卡托普利组、生脉胶囊＋卡托普利组的细胞凋亡率均低于模型组（P〈0．01）。模型组心肌Bcl-2含量低于假手术组（P〈0．05），生脉胶囊组、卡托普利组Bcl-2含量均高于模型组（P〈0．05或P〈0．01）。结论生脉胶囊可提高心肌细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2含量，抑制心肌细胞凋亡，能减轻漫性心力衰竭大鼠的心室重构。     

密蒙花方对缺氧状态下人血管内皮细胞的作用及机理研究

目的探讨密蒙花方对缺氧状态下人脐静脉血管内皮细胞（Human Umbilical Vascular Endothelial Cell，HUVEC）增殖的抑制作用。方法体外培养HUVEC，采用二氯化钴（Cocl2）建立细胞化学缺氧模型，采用WST-8法观察密蒙花方对缺氧状态下HUVEC的作用。并进一步采用流式细胞仪（Flow Cytometry，FCM）检测密蒙花方对缺氧状态下HUVEC增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）蛋白表达的影响。结果①在Cocl2所诱导的化学缺氧下，HUVEC增殖明显。密蒙花方可抑制缺氧状态下HUVEC的增殖，并呈剂量一效应关系；②密蒙花方对HUVEC内PCNA蛋白表达有明显的下调作用，低、中、高不同浓度的密蒙花方作用24h后，其PCNA蛋白表达率分别为（62．377±3．200）％，（43．707±3．195）％、（27．621±3．622）％与缺氧组（90．600±3．694）％比较差异有统计学意义（P〈0．01）；随着密蒙花方浓度升高，PCNA蛋白表达率下降，呈剂量-效应关系（P〈0．01）。结论上述结果提示，密蒙花方有抑制新生血管发生的作用，有望成为防治增殖性糖尿病视网膜病变的有效药物。     

丹参注射液对体外小鼠心脏成体干细胞的影响

目的：研究丹参注射液对体外小鼠成体心脏干细胞的细胞学特性影响。方法：体外分离培养小鼠Sca-1＋成体心脏干细胞,荧光显微镜及流式细胞仪鉴定细胞纯度。培养的小鼠心脏干细胞分为3组,分别为低剂量丹参注射液组（75μg/mL）,高剂量丹参注射液组（300μg/mL）及对照组。干预后,采用CCK-8检测细胞活力;EdU掺入法检测细胞DNA合成情况;5%CO2和95%N2缺氧条件培养12h诱导细胞凋亡后,Caspase-3分光光度法检测细胞内Caspase-3酶活性情况。结果：成功分离培养小鼠心脏成体干细胞。荧光显微镜及流式细胞仪鉴定细胞纯度〉95%。与对照组相比,高剂量丹参注射液组细胞活力（P〈0.05）和DNA合成（P〈0.05）显著增加;与低剂量组相比,高剂量丹参注射液组细胞活力增强（P〈0.05）,但DNA合成无显著差异。缺氧条件下,丹参注射液高剂量处理组Caspase-3酶活性较对照组显著下降（P〈0.05）。结论：丹参注射液增加小鼠心脏成体干细胞的细胞活力及DNA合成能力,减少缺氧诱导的细胞凋亡。     

三七总皂苷对β-淀粉样蛋白42损伤脑微血管内皮细胞ZO-1表达的影响

目的观察三七总皂苷对β-淀粉样蛋白(Aβ)42损伤脑微血管内皮细胞ZO-1表达的影响,为阿尔茨海默病的对因治疗提供新的依据。方法细胞分为正常对照组、模型组和三七总皂苷低、中、高剂量组,37℃、5%CO2培养箱中培养24 h后,采用MTT比色法检测细胞活力,Western blot检测ZO-1蛋白表达。结果 Aβ42刺激后微血管内皮细胞活力降低(P0.01),ZO-1蛋白表达被抑制(P0.01);与模型组比较,三七总皂苷低、中、高剂量组微血管内皮细胞活力增加,其中三七总皂苷中、高剂量组增加较为明显,差异有统计学意义(P0.05),ZO-1蛋白表达增加。结论三七总皂苷通过抑制Aβ42所致微血管内皮细胞活力降低,恢复血脑屏障的部分屏障功能。     

麦冬酒制前后对内皮细胞缺氧保护作用的比较研究

目的研究中药麦冬及其酒制炮制品对人脐静脉内皮细胞（EAHY926）缺氧损伤的保护作用。方法体外培养EAHY926,采用通入缺氧气体建立缺氧损伤模型。用麦冬提取液干预后,采用MTT比色法测定细胞活力、黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶活性、硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛含量、硝酸还原酶法测定一氧化氮含量。结果组间比较采用单因素方差分析,两两之间用SNK检验。与模型组相比,川麦冬生品提取液组、酒制川麦冬提取液组、杭麦冬生品提取液组、酒制杭麦冬提取液组均能显著提高细胞活力（P〈0.05）,并且均显著提高缺氧后细胞超氧化物歧化酶活性（P〈0.05）及降低丙二醛、一氧化氮的含量（P〈0.05）;酒制川麦冬提取液组和酒制杭麦冬提取液组效果最佳,与空白对照组比有非常显著性差异（P〈0.01）。结论麦冬酒制后更能显著拮抗缺氧对EAHY926的损伤。     

心脉神胶囊对模拟高原急性缺氧大鼠肺动脉压力的作用机制研究

目的：探讨心脉神胶囊对急性缺氧大鼠肺动脉压力的影响。方法：将27只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组与心脉神组,分别给予生理盐水、心脉神（0.45 g/kg·bw）连续7 d后,模型组与心脉神组置于低压氧舱内3 d,用多道生理记录仪测定肺动脉压力（PAP）。结果：与模型组比较,心脉神组肺动脉收缩压、舒张压、平均压均显著降低（P〈0.05或P〈0.01）。结论：心脉神胶囊对大鼠急性缺氧所致的肺动脉升高有抑制作用。     

肺岩宁对整合素连接激酶沉默后人肺癌A549细胞生物学活性的影响

目的在建立整合素连接激酶(ILK)基因RNAi慢病毒表达载体的基础上,研究ILK基因沉默后对人肺腺癌细胞A549细胞生物学活性的影响及中药肺岩宁方对细胞活性的影响。方法构建载体转染人肺腺癌细胞A549后,分为阴性对照病毒感染细胞组(NC组)、RNAi靶点病毒感染细胞组(KD组)、10%肺岩宁血清干预的NC组(NC+10%中药血清组)、10%肺岩宁血清干预的KD组(KD+10%中药血清组)、20%肺岩宁血清干预的NC组(NC+20%中药血清组)、20%肺岩宁血清干预的KD组(KD+20%中药血清组)及10%(10 mg/L)DDP干预的KD组(KD+10%DDP组)。MTT检测不同浓度的药物敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化,Transwell实验和克隆形成检测细胞的迁移和成瘤能力。结果①KD组与NC组相比,KD组细胞凋亡率上升(P0.05),G2/M期细胞总数的百分比明显降低(P0.01),转移率明显降低(P0.05),克隆数目明显减少(P0.05)。②KD+10%中药含药血清组与NC+10%中药血清组相比,KD+10%中药血清组细胞凋亡率明显上升(P0.05),G2/M期细胞总数的百分比明显降低(P0.01),转移率无显著性差异(P0.05),克隆数目明显减少(P0.05)。③KD+20%中药血清组与NC+20%中药血清相比,KD+20%中药血清细胞凋亡率下降(P0.01),G2/M期细胞总数的百分比降低(P0.01),转移率无显著性差异(P0.05),克隆数目明显减少(P0.05)。④KD+10%DDP组与NC+20%中药血清组相比,KD+10%DDP组细胞凋亡率上升(P0.01),G2/M期细胞总数的百分比明显降低(P0.01),转移率明显降低(P0.01),克隆数目明显减少(P0.01)。结论 ILK基因沉默后可以明显促进人肺腺癌细胞A549的凋亡,降低细胞迁移和成瘤能力,对细胞周期无调控作用;10%中药肺岩宁方含药血清有促进细胞凋亡及抑制细胞克隆形成的能力;20%中药含药血清可以抑制细胞克隆形成能力;10%DDP有促进细胞凋亡、抑制细胞迁移和克隆形成的能力。     

从钙超载角度探讨通脉养心丸心肌保护作用的机制

目的从抑制钙超载的角度探讨通脉养心丸抗细胞凋亡保护心肌的作用机制。方法采用大鼠心肌细胞原代培养方法获得正常心肌细胞并建立缺氧损伤细胞模型,采用FLIPR Calcium 4试剂盒检测药物对胞浆内钙离子浓度变化的影响;Annexin V/PI双染法检测心肌细胞总凋亡率。结果缺氧损伤组心肌细胞胞浆内钙离子浓度显著升高（P〈0.01）,通脉养心丸各剂量组变化不显著;再次加药后,通脉养心丸各剂量组胞浆内钙离子浓度均显著低于缺氧损伤组（P〈0.01）。缺氧损伤组心肌细胞凋亡率显著升高（P〈0.01）,通脉养心丸4 g/kg、8 g/kg剂量组可显著降低心肌细胞凋亡率（P〈0.01）。结论抑制心肌细胞钙超载是通脉养心丸抗心肌细胞凋亡保护心肌的作用机制之一。     

密蒙花方对高糖状态下视网膜Mtiller细胞增殖的影响

目的从离体细胞研究层面,研究中药密蒙花方对高糖状态下视网膜Mfiller细胞损伤的保护作用。方法（1）采用大鼠视网膜Mfiller细胞在30mmol／L高糖下进行体外培养,模拟高糖环境,再分别给予20％含密蒙花方血清（以下均称合药血清）干预12h,24h、36h,观察密蒙花方含药血清对大鼠视网膜Mtiller细胞增殖的影响。（2）采用流式细胞仪AnnexinV—FITC／PI双色染色法观察密蒙花方对高糖状态下视网膜Mtiller细胞凋亡的影响。结果（1）高糖组较正常组吸光度（OD）值增高;含药血清组与高糖组相比,0D值明显降低,各合药血清组间比较,随着时间的延长,OD值逐渐降低,差异具有统计学意义（P〈0．05）。（2）高糖组较正常组细胞早期凋亡比例减少,活细胞比例增高,各含药血清组与高糖组相比,细胞早期凋亡比例增高,活细胞比例减少（P〈0．05）。密蒙花方通过诱导早期高糖状态下视网膜Mtiller细胞的早期凋亡,抑制细胞反应性增生,从而起到防护高糖状态下视网膜神经细胞损伤的作用。结论密蒙花方可以抑制早期高糖状态下视网膜Mfiller细胞的增殖。     

红景I号方对低氧大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化的影响

目的：观察红景I方对低氧状态下大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化的影响。方法：将120只SD大鼠随机分为常氧组、低氧模型组、前列腺E1组、红景I号方低剂量组、红景l号方中剂量纽、红景I号方高剂量组,每组20只,分别测定各组大鼠勃起情况、RT—PCR测定α—actin、OPN的相对表达量。结果：造模6周后,与常氧组比较,模型组勃起次数明显降低（P〈0．01）,低氧实验动物模型建立成功。与常氧组比较,低氧模型组的α—actin含量显著降低（P〈0．01）,OPN含量明显升高（P〈0．01）。与低氧模型组比较,高中低剂量的红景I号组Ot—actin含量上升（P〈0．05）,其中高中剂量组含量上升明显（P〈0．01）;OPN含量降低（P〈0．05）,其中高中剂量组含量下降明显（P〈0．01）。结论：红景I号方有抑制海绵体平滑肌细胞表型转化的作用。     

连豆清脉方水提液干预ANGⅡ诱导内皮细胞凋亡及Bax/Bcl-2,caspase9/XIAP mRNA表达的实验研究

目的观察连豆清脉方水提液对ANGⅡ诱导内皮细胞凋亡干预及Bax/Bcl-2、caspase9/XIAP mRNA表达的影响。方法体外培养大鼠动脉内皮细胞株(RAOEC),连豆清脉方水提液干预ANGⅡ诱导RAOEC凋亡,采用流式细胞仪检测ANGⅡ诱导凋亡及线粒体膜电位改变,RT-PCR荧光相对定量检测Bax/Bcl-2及caspase9/XIAP mRNA表达水平变化,组间差异统计性分析采用Students T-test。结果 ANGⅡ诱导模型组内皮细胞诱导10 h后线粒体膜电位为(0.580±0.137),24 h凋亡率为30.4%±5.2%,连豆清脉方(500μg)组内皮细胞线粒体膜电位(4.361±1.251),24 h凋亡率为13.5%±3.8%,连豆清脉方能够部分抑制ANGⅡ诱导内皮细胞作用,差异具有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR荧光相对定量显示ANGⅡ组Bax和caspase9 mRNA水平显著升高(P<0.05),连豆清脉方干预组下调促凋亡蛋白Bax和caspase 9表达,上调凋亡抑制蛋白Bcl-2表达(P<0.05)。结论连豆清脉方脉方能够稳定线粒体膜电位,通过干预Bax、Bcl-2和caspase 9 mRNA表达,抑制ANGⅡ诱导的内皮细胞凋亡。