双黄升白颗粒对荷瘤鼠化疗骨髓抑制期Wnt信号通路的调控作用

目的探讨双黄升白颗粒对荷瘤鼠化疗骨髓抑制期Wnt信号通路的调控作用。方法采用Lewis肺癌荷瘤鼠腹腔注射环磷酰(cyclophosphamide,CTX)胺造成化疗骨髓抑制模型,用双黄升白颗粒干预治疗,常规计数白细胞、红细胞、血小板数量和肿瘤质量,流式细胞法检测骨髓造血干细胞比例(Sca、CD34双阳性细胞),实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测Wnt信号通路主要基因(Wnt、β-catenin、Frizzted、DSH、GSK3)mRNA的表达。结果治疗组白细胞数量、造血干细胞比例均高于模型组(P0.05),Wnt、β-catenin、Frizzted、DSH、GSK3 mRNA在骨髓中的表达高于模型组(P0.05),Wnt、β-catenin、Frizzted、DSH mRNA在肿瘤中的表达则低于模型组(P0.05);各组红细胞、血小板、肿瘤质量、GSK3 mRNA在肿瘤中的表达差异无统计学意义(P0.05)。结论双黄升白颗粒治疗骨髓抑制的作用机制与调控Wnt信号通路有关,且该调控作用具有双重特性,即在上调骨髓Wnt信号通路主要基因表达同时抑制肿瘤中部分基因表达。     

骨痛灵方联合西药治疗恶性肿瘤骨转移疼痛34例临床观察

目的观察骨痛灵方联合唑来膦酸治疗恶性肿瘤骨转移疼痛的临床疗效。方法将67例恶性肿瘤骨转移符合疼痛评定标准Ⅱ~Ⅲ级疼痛患者随机分为治疗组34例和对照组33例。基础治疗:根据三阶梯止痛药选择方法给予两组骨转移疼痛患者止痛药治疗。对照组每4周静脉滴注唑来膦酸1次,每次4 mg加入0.9%氯化钠100 ml,静脉滴注,治疗组在对照组的基础上服用骨痛灵方,每日1剂。两组疗程均为8周,治疗前后记录患者疼痛评分(VAS评分)和生活质量评分(KPS评分),判定疗效。结果两组治疗后VAS评分均明显下降(P0.05),治疗后治疗组VAS评分低于对照组(P0.05)。治疗组治疗后KPS评分提高明显(P0.05),对照组治疗后KPS评分改善不明显(P0.05);治疗后治疗组KPS评分较对照组显著提高(P0.05)。治疗组疼痛有效率(64.71%)及生活质量有效率(64.71%)明显高于对照组(36.36%及30.30%),差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论骨痛灵方联合唑来膦酸与单纯使用唑来膦酸相比较,镇痛效果明确,能明显改善患者生存质量。     

蟾毒灵对肝细胞生长因子诱导阿法替尼耐药的逆转作用

目的：探讨蟾毒灵对肝细胞生长因子（ HGF）诱导的阿法替尼耐药肺癌细胞H1975生长的影响,并分析其可能的作用机制。方法采用外源性HGF和重组HGF腺病毒转染内源性HGF诱导的方法建立阿法替尼耐药的肺癌细胞H1975,应用四甲基偶氮唑蓝（ MTT）法检测蟾毒灵、阿法替尼及联合用药对阿法替尼耐药细胞H1975增殖的抑制作用,Transwell实验检测药物对阿法替尼耐药细胞H1975侵袭能力的影响,酶联免疫吸附试验（ ELISA）法检测转染后H1975细胞分泌的HGF水平以及药物对HGF分泌水平的影响,Western blot检测药物干预后EGFR、cMet信号通路及上皮细胞?间质转化（ EMT）相关蛋白的表达。结果 MTT结果显示,在外源性和内源性HGF刺激下,阿法替尼对H1975细胞生长无抑制作用,经蟾毒灵与阿法替尼联合处理后,可明显抑制肿瘤细胞的生长。Transwell实验结果显示,在外源性HGF作用下,阿法替尼组的穿膜细胞数为（118．92±37．29）个;蟾毒灵组的穿膜细胞数为（88．84±19．53）个;阿法替尼与蟾毒灵联合组的穿膜细胞数为（48．98±11．43）个,与阿法替尼组和蟾毒灵组比较,差异均有统计学意义（均P＜0．05）。 ELISA结果显示,H1975／HGF细胞（转染重组HGF腺病毒的H1975细胞）分泌高水平的HGF,蟾毒灵和阿法替尼干预后,H1975／HGF细胞分泌HGF水平差异无统计学意义（P＞0．05）。 Western blot结果显示,蟾毒灵联合阿法替尼能明显下调阿法替尼耐药细胞中 p?EGFR、p?cMet、p?AKT、p?ERK、vimentin 和 snail 蛋白的表达,上调E?cadherin蛋白的表达。结论蟾毒灵联合阿法替尼可显著抑制阿法替尼耐药细胞H1975的增殖,阻止H1975肺癌细胞侵袭;蟾毒灵逆转 HGF 诱导的 H1975肺癌细胞对阿法替尼耐药,可能与阻断cMet／PI3K／AKT、cMet／MAPK／ERK信号通路以及阻止EMT进程有关。     

未来10余年肺癌中西医诊疗展望

通过分析肺癌流行病学情况及诊疗现状,从临床与基础研究角度探讨未来10余年肺癌中西医诊疗重点研究方向.主要应进一步开展肺癌病因研究;构建肺癌中医临床研究体系,重视中药维持治疗与中医药防治肺癌术后复发转移,加强中药与靶向药物联合治疗肺癌,研发治疗肺癌的纳米中药;开展中药对肺癌细胞信号转导网络调控系统的干预、对肺癌微环境的影...     

肺岩宁方及其拆方对Lewis小鼠肿瘤肺转移与VEGF/KDR表达关系的影响

目的:观察肺岩宁方及其拆方对C57小鼠Lewis肺癌肿瘤组织中血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)及其激酶功能区受体(kinase-domain insert containing receptor,KDR)mRNA与蛋白表达的影响。方法:建立C57小鼠Lewis肺癌模型,随机分为模型组、肺岩宁组、益气组、补肾组和抗癌组,每组10只。分别给予相应药物干预,均灌胃21 d,第22天处死。观察肺转移情况,取肿瘤组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组化SP法分别检测C57小鼠Lewis肺癌中VEGF和KDR mRNA及蛋白表达水平。结果:肺岩宁组与补肾组、抗癌组小鼠的肺转移率明显低于模型组与益气组(P<0.05)。C57小鼠Lewis肺癌组织中表达VEGF和KDR,但肺岩宁组与补肾组、抗癌组小鼠肿瘤组织中VEGF mRNA及蛋白的表达水平均明显低于模型组和益气组(P<0.05),肺岩宁方组和抗癌组小鼠肿瘤组织中KDR mR-NA及蛋白的表达水平均明显低于模型组和益气组(P<0.05)。结论:肺岩宁抑制C57小鼠Lewis肿瘤转移的机制可能与下调VEGF及其受体KDR mRNA和蛋白表达有关。     

双黄升白颗粒对A549肺癌荷瘤裸鼠化疗期间细胞周期调控的研究

目的:研究双黄升白颗粒对化疗所致骨髓抑制细胞周期的调控作用。方法:采用A549肺癌荷瘤裸鼠,腹腔注射环磷酰胺造成化疗骨髓抑制模型,使用双黄升白颗粒进行治疗。检测血常规、骨髓有核细胞计数、瘤重、骨髓及肿瘤细胞周期、计算增殖指数(PI)。结果:双黄升白颗粒组白细胞计数、骨髓有核细胞计数、肿瘤细胞中处于G0/G1期的百分比、骨髓细胞PI较模型组高,而瘤重、骨髓细胞中处于G0/G1期的百分比、肿瘤细胞PI较模型组低。结论:双黄升白颗粒对化疗所致骨髓抑制期的A549肺癌荷瘤裸鼠的细胞周期具有双重调控作用。     

整合素连接激酶在C57小鼠Lewis肺癌中的表达及肺岩宁方对其的调控作用

目的探讨肺岩宁方对整合素连接激酶（integrin-linked kinase.ILK）mRNA及蛋白表达的影响。方法建立C57小鼠Lewis肺癌模型。将C57BL-6纯系10周龄雄性小鼠随机分为正常组、模型组、顺铂（DDP）组、肺岩宁方组,每组10只。正常组正常饲养;模型组以0.9%NaCl溶液0.4ml灌胃;顺铂组在造模后第5天开始给药,在开始给药的第1、3、5天,DDP溶液1ml（含DDP0.1mg）腹腔注射,0.9%NaCl溶液0.4ml灌胃;肺岩宁方组在造模后第5天开始给予肺岩宁方药液0.4ml（生药含量36.1g/kg）灌胃。采用Real time PCR和Western blot方法分别检测ILK在移植瘤组织和转移灶发生的肺组织中mRNA、蛋白水平的表达。结果与正常组比较,模型组肿瘤肺转移率、转移灶及Ilk基因表达差异均有统计学意义（P〈0.01）,说明模型成功。与模型组比较,肺岩宁方组可以显著降低肺转移灶的发生的作用（P〈0.01）。各组移植肿瘤组织中,肺岩宁方组ILK基因表达与模型组比较显著降低（P〈0.01）;各组肺组织中,与模型组比较,肺岩宁方组ILK基因表达显著下降（P〈0.01）,而化疗组ILK基因表达反而升高（P〈0.01）。与模型组比较,肺岩宁方组ILK蛋白的表达明显降低（P〈0.01）。结论肺岩宁具有显著降低ILK基因表达的作用,调控Snail信号途径的关键信号分子ILK基因有可能是肺岩宁方抗肿瘤转移的有效作用靶点所在。     

中医药分阶段结合化疗治疗晚期肺腺癌临床研究

目的观察中医药分阶段结合化疗治疗Ⅲ、Ⅳ期肺腺癌的临床疗效。方法采用前瞻性、多中心、随机对照的临床研究方法 ,将90例患者分为治疗组（44例）和对照组（46例）。对照组只予化疗治疗;治疗组行化疗联合中医药治疗,化疗期间服用抗瘤增效方,化疗结束后服用肺岩宁方。主要观察指标为近期疗效、生存期、卡氏评分、主要临床症状、不良反应等。结果近期疗效治疗组优于对照组（P〈0.05）;中位生存期治疗组为16.63个月,高于对照组的11.60个月,差异有显著性（P〈0.05）;1年、3年、5年生存率治疗组均高于对照组（P〈0.05）;卡氏评分、临床症状改善情况治疗组优于对照组意义（P〈0.05）。结论中医药分阶段联合化疗提高近期疗效、延长晚期肺腺癌生存期及改善生存质量均有良好效果。     

肺岩宁方对肿瘤坏死因子α诱导的人肺癌细胞系核转录因子κB基因表达的影响

目的：探讨中药肺岩宁方含药血清对肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor—α,TNF—α）诱导的人肺癌细胞系A549核转录因子KB（nuclearfactor—κB,NF—κB）基因表达的影响。方法：制备肺岩宁方含药血清,以肺癌细胞系A549为靶细胞,确定肺岩宁方含药血清用药浓度。将A549细胞分为对照血清组、TNFα组、肺岩宁方含药血清组和综合治疗组。观察用药前后A549细胞大体形态变化;四唑单钠盐法测定肺岩宁方含药血清对细胞增殖的影响;蛋白印迹法检测肺岩宁方含药血清对TNF-α诱导的细胞核NF-κ及抑制性核转录因子（inhibitorxBa,IκBα）表达的影响;将人NF-κB重组质粒用脂质体转染法导入A549细胞24h后,用肺岩宁方含药血清治疗24h,采用双荧光素酶报告基因系统测定肺岩宁方含药血清对TNF—α诱导的细胞核NF-κBp65转录活性的影响。结果：与对照血清比较．15％和20％肺岩宁方含药血清对A549细胞具有明显的增殖抑制作用（P〈0．05,P〈0.01）。1μg／L TNF—α能够明显提高NF—κB基因的表达,与肺岩宁方含药血清共同作用后,能够显著抑制它的表达（P〈0．01）,而细胞内IκBα的表达差异无统计学意义（P〈0．05）;肺岩宁方含药血清能够显著降低A549细胞经NF—κB重组质粒转染后的转录活性（P〈0．01）。结论：肺岩宁方含药血清可抑制人肺癌细胞系增殖,可能是通过对TNF-α诱导的NF-κB基因活性的抑制作用实现的。。     

肺岩宁方对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移及管腔形成的影响

目的：观察中药肺岩宁方含药血清对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）增殖、迁移及管腔形成的影响。方法：采用新鲜产后脐带,分离HUVEC。SD大鼠灌胃肺岩宁方制备肺岩宁方含药血清,采用人肺腺癌细胞A549制备条件培养液。用磺酰罗丹明B（sulforhodamineB,SRB）法观察肺岩宁方含药血清对HUVEC、人肺腺癌细胞A549和A549细胞条件培养液诱导HUVEC增殖的抑制作用;采用Boyden Chamber Transwell法检测其对HUVEC细胞迁移的影响;管腔形成实验评价其对HUVEC形成管腔能力的影响。结果：与同浓度对照血清相比,肺岩宁方含药血清能够抑制HUVEC及肺癌细胞条件培养液诱导的内皮细胞的增殖（P〈0．01,P〈0．05）,高浓度肺岩宁方含药血清能够抑制肿瘤细胞A549的体外增殖,肺岩宁方含药血清（12．5％～37．5％）在体外能抑制20％胎牛血清诱导的内皮细胞的迁移（P〈0．05,P〈0．01）以及初级管腔的形成。结论：肺岩宁方具有明显的抑制新生血管生成的作用,这可能是肺岩宁方抗肺癌侵袭转移的机制之一。