生脉胶囊对慢性心力衰竭大鼠多种细胞因子的影响

目的探讨生脉胶囊对慢性心力衰竭大鼠细胞因子IL-6、TNF-α、IL-10、TGF-β1的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、心衰模型组、生脉胶囊组、卡托普利组、生脉胶囊加卡托普利组,采用腹主动脉缩窄法造成大鼠慢性心力衰竭模型,治疗7周时采用ELISA法测定大鼠心肌IL-6、TNF-α、IL-10和血清TGF-β1的含量。结果①心衰模型组心肌IL-6、TNF-α、TGF-β1的含量均高于假手术组(P<0.05或P<0.01),生脉胶囊组、卡托普利组、生脉胶囊加卡托普利组含量均分别低于心衰模型组(P<0.01或P<0.05),但生脉胶囊加卡托普利组TGF-β1含量低于生脉胶囊组(P<0.05)。②心衰模型组心肌IL-10的含量明显低于假手术组(P<0.01),生脉胶囊组高于心衰模型组(P<0.05)。结论生脉胶囊可降低心肌炎性细胞因子IL-6、TNF-α的含量,增加抗炎细胞因子IL-10的含量,降低促纤维性细胞因子TGF-β1的含量,与抑制胶原的合成代谢、改善慢性心衰心室重构有关。     

“血瘀证”动物模型的实验研究

本实验用去甲肾上腺素与牛血清白蛋白致兔“血瘀证”动物模型,结果表明:血瘀造型组与对照组相比,低切变率和高切变率全血粘度、血浆粘度、全血还原粘度明显升高(P<0.01),血细胞压积明显降低(P<0.01),红细胞电泳时间明显延长(P<0.01),血小板1分钟聚集率与血小板最大聚集率明显增加(P<0.05);血浆TXB_2含量明显升高(P<0.01),血浆6-keto-PGF1a含量明显降低(p<0.01),红细胞C3b花环率明显降低(P<0.01),红细胞IC花环率明显升高(p<0.05);肠系膜微循环血流流速以粒线流、粒流为主(P<0.05),红细胞聚集增加(P<0.05)。上述结果提示本实验的“血瘀证”动物模型产生多环节的病理损伤,并由此导致血液的高粘、高聚和高凝的病理状态,与血瘀证的“血泣而不通”,“血凝而不流”的病理机制相似,似较全面反映血瘀证的病理基础与临床状况。     

补肾益智方含药血清保护Aβ25—35—3损伤PCI2细胞的实验研究

目的：探讨补肾益智方含药血清对由Aβ25-35-3诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤（PCI2）老年性痴呆（AD）细胞模型的保护作用。方法：建立PCI2细胞培养方法，用倒置显微镜进行形态学观察，利用WST-8法检测细胞活力以及荧光酶标仪检测细胞线粒体膜电位等方法，观察补肾益智方含药血清对AD细胞模型的影响。结果：补肾益智方5％含药血清对AD细胞模型的保护作用优于5％正常血清，差异均有显著性意义（P〈0．05）。结论：补肾益智方含药血清能在一定程度上减少Aβ25-35-3对PCI2细胞的神经毒性作用。     

当归芍药散对AD细胞模型铜离子介导的Aβ聚集的影响

目的:以β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)和铜离子(Cu~(2+))络合物作用的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞为阿尔茨海默病(AD)模型,探讨Cu~(2+)对Aβ聚集方式和神经毒性的影响及当归芍药散对Cu~(2+)介导的Aβ毒性的AD细胞模型的影响。方法:将Aβ1-42(20μmol·L~(-1))与不同浓度硫酸铜(Cu SO4,20,40μmol·L~(-1))反应后用硫黄素T(Th T)染色法检测Aβ聚集状态,再进行Aβ1-42-Cu~(2+)组(20+20μmol·L~(-1)),当归芍药散组(1. 6,3. 2,6. 4 mg·L~(-1)) Th T染色检测Aβ聚集状态。培养SH-SY5Y细胞,分别孵育不同浓度的Aβ1-42(1. 25,2. 5,5,10,20,40μmol·L~(-1))及当归芍药散(1. 6,3. 2,6. 4,12. 8 mg·L~(-1)),24 h后行噻唑蓝(MTT)比色法确定Aβ1-42损伤浓度和当归芍药散保护浓度。随后将SH-SY5Y细胞分为空白组,Aβ1-42-Cu~(2+)组(20+20μmol·L~(-1)),当归芍药散组(20μmol·L~(-1)+20μmol·L~(-1)+1. 6 mg·L~(-1)),空白组加入培养基,共作用24 h后行MTT比色法检测细胞生存率,显微镜拍摄细胞形态,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胞内胞外Aβ1-42聚集状况。结果:与Aβ1-42组比较,Cu~(2+)和Aβ1-42结合成更多更大的Aβ聚集物。与正常组比较,模型组细胞活力明显降低(P 0. 05,P 0. 01),增加细胞内外Aβ1-42聚集(P 0. 05,P 0. 01);与模型组比较,当归芍药散能提高Aβ1-42-Cu~(2+)损伤的SH-SY5Y的细胞生存率(P 0. 05,P 0. 01),减少胞外Aβ1-42蛋白(P 0. 05,P 0. 01)。结论:Cu~(2+)能够增加Aβ的聚集及毒性;当归芍药散能明显减轻Cu~(2+)介导的Aβ聚集导致的SH-SY5Y细胞损伤,使Aβ内吞,减少胞外Aβ聚集,提高细胞生存率。     

中药有效成分防治阿尔茨海默病的药理研究进展

从中医药防治阿尔茨海默病 (AD)的药理研究出发 ,结合目前有关AD发病机制的神经递质代谢障碍、细胞凋亡、炎症反应等假说 ,查阅文献并行分析总结 ,发现中药有效成分如人参皂苷、蛇床子素、红景天素、(- )黄皮酰胺等防治AD的作用机制涉及各种途径 ,其中人参皂苷可对AD的多个病理环节起效 ,为筛选AD有效药物提供了一定的依据。     

补肾益智方对老年性痴呆模型大鼠海马结构生长抑素神经元的影响

目的 研究自拟的补肾益智方对大鼠老年性痴呆（阿尔茨海默病,Alzheimer disease,AD）模型海马内生长抑素（somatostatin,SS）神经元的影响。方法 用15月龄老年Wistar大鼠以D－半乳糖腹腔注射4周加上鹅膏草氨酸（ibotenic acid,IBO)脑内Meynert核注射制作AD模型,然后随机分成AD模型组、双益平治疗对照组、补肾益方高剂量治疗组、补肾益智方低剂量治疗组,另设正常老年对照组和正常青年对照组。动物经治疗处理后,运用免疫组织化学和寡核苷酸探针原位杂交方法检测大鼠海马CA、CA3和齿状回生状回生长抑素免疫阳性和mRNA表达阳性神经元数目。结果 补肾益智方高、低剂量组大鼠海马CA1、CA3和齿状顺生长抑素免疫阳性和mRNA表达阳性神经元数目。结果 补肾益智高、低剂量组大鼠海马CA1、CA3和齿状回生长抑素阳性神经元数目及其积分光密度较AD模型组有增加趋,有些组间比较有显著性差异。结论 补肾益智方对D－半乳糖腹腔注射4周加上鹅膏草氨酸（IBO）脑内M synwiyt核注射制作的大鼠AD第马内生长抑素（SS）神经元有一定的作用。     

补肾益智方对由A_β片段神经毒性诱导NG108-15细胞老年性痴呆模型神经递质释放影响的研究

目的：观察补肾益智方对由Aβ片段神经毒性诱导的NG108－15细胞老年性痴呆（AD）模型神经递质释放的影响。方法：利用免疫印迹检查、免疫放射活性测定及电生理学测定方法，观察补肾益智方含药血清处理Aβ片段神经毒性诱导的NG108－15细胞后的胆碱乙酰基转移酶（ChAT)活性、突触素蛋白（synapsin)水平及功能性突触形成率。结果：补肾益智方含药血清组ChAT活性和突触素蛋白水平高于正常对照血清组；含药血清能调节递质释放能力和提高功能性突触形成。结论：补肾益智方具有减轻细胞对Aβ的神经毒性反应，表明该方能拮抗AD的病理发展，并通过提高神经递质释放能力发挥对AD的治疗作用。     

补肾益智方拆方含药血清对阿尔茨海默病细胞模型的作用

背景中药补肾益智方对阿尔茨海默病大鼠模型学习记忆能力有一定的保护作用,该方含药血清也能减轻神经瘤细胞NG 108-15细胞对β淀粉样蛋白的神经毒性反应,为了进一步了解该方的作用机制及其配伍规律,需对该方进行拆方研究.目的研究补肾益智方拆方亚组的含药血清对阿尔茨海默病细胞模型生长、分化等方面的影响,从血清药理学的角度探讨该方的配伍规律.设计随机对照实验.单位广州中医药大学临床药理研究所DME中心.对象实验于2003-01/08在广州中医药大学临床药理研究所DME中心实验室进行.实验对象为3月龄SD雄性健康大鼠40只和冻存的NG 108-15细胞株.方法①制备药物血清将40只SD大鼠随机分为对照组、原方组(蛇床子、枸杞子、人参、何首乌、丹皮、冰片)、补肾组(蛇床子、枸杞等)、益气养血组(人参、制首乌等)、去冰片组(蛇床子、枸杞子、人参、何首乌、丹皮),每组8只.将各组中药浓缩液按按10 μL/g(相当于生药6 g/kg)分别进行灌胃,连续1个月,对照组灌等量生量盐水.各组大鼠最后1次灌胃2h,麻醉后心脏采血,分离血清备用.②细胞增殖、培养及分化将体外培养的NG 108-15细胞分为6组,对照组、模型组孔中的增殖培养液含正常大鼠血清,其余4组分别为原方组及3个亚组的大鼠含药血清;同时每个孔加淀粉样β蛋白25～35至终浓度5 umol/L(对照组除外),继续培养48 h.主要观察指标用MTT法测定细胞增殖数和存活率;同时检测分化突起细胞占总细胞数的比率及突起平均长度.结果①细胞增殖情况模型组A值显著低于对照组(0.520±0.022,0.665±0.037,P＜0.01),各含药血清组A值均高于模型组,但以去冰片组效果最显著(0.636±0.035,P＜0.01).②分化细胞存活率模型组显著低于对照组(58.4%,100%),各含药血清组均高于模型组,但以去冰片组效果最显著(75.8%,P＜0.01).③分化突起细胞占总细胞数的比率模型组显著低于对照组[(42.95±11.42)%,(58.75±12.84)%,P＜0.01],各含药血清组均高于模型组,但以去冰片组效果最显著[(58.20±8.40)%,P＜0.01].④突起平均长度模型组显著低于对照组[(356.0±109.0),(493.8±133.0)μm,P＜0.01],各含药血清组均高于模型组,但以去冰片组效果最显著[(486.8±79.2)μm,P＜0.01].结论补肾益智方及各亚组含药血清都能在一定程度上抑制淀粉样β蛋白25-35对NG108-15细胞的损伤作用,但各组情况有所不同.各组含药血清对细胞的保护作用由强至弱依次是去冰片组＞原方组＞补肾组＞益气养血组.故方中冰片的功效有待进一步研究.     

人参皂苷Rb1对阿尔茨海默病模型细胞大电导钙激活钾通道变化机制的影响

【目的】观察阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型细胞的大电导钙激活钾通道BKCa的变化及人参皂苷Rb1对AD模型细胞上BKCa通道的影响。【方法】实验分为Aβ25-35模型组(终浓度为5、10、20、40μmol/L)、人参皂苷Rb1预处理组(终浓度为0.5、1、2、4μmol/L)、治疗组(Aβ25-35+人参皂苷Rb1)和空白对照组。采用膜片钳技术观察各组BKCa通道的平均开放时间、平均开放概率和电流幅度,选择Aβ25-35模型组及人参皂苷Rb1预处理组的最佳浓度,并观察人参皂苷Rb1对AD细胞的作用。【结果】20μmol/L Aβ25-35可显著降低BKCa通道的平均开放时间(P0.05),抑制BKCa通道开放;4μmol/L人参皂苷Rb1组BKCa通道平均开放概率和开放时间较空白对照组均显著升高(P0.05),与模型组比较均显著升高(P0.05或P0.01)。【结论】人参皂苷Rb1治疗AD的机制可能与其能激活BKCa通道、对抗Aβ25-35的毒性作用并保护神经细胞有关。     

补肾益智方含药血清保护Aβ_(25-35)-3损伤PC12细胞的实验研究

目的:探讨补肾益智方含药血清对由Aβ25-35-3诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)老年性痴呆(AD)细胞模型的保护作用。方法:建立PC12细胞培养方法,用倒置显微镜进行形态学观察,利用WST-8法检测细胞活力以及荧光酶标仪检测细胞线粒体膜电位等方法,观察补肾益智方含药血清对AD细胞模型的影响。结果:补肾益智方5%含药血清对AD细胞模型的保护作用优于5%正常血清,差异均有显著性意义(P0.05)。结论:补肾益智方含药血清能在一定程度上减少Aβ25-35-3对PC12细胞的神经毒性作用。