阿米替林对脑缺血再灌注大鼠大脑皮质中氨基酸类神经递质的影响

 目的通过观察阿米替林对大鼠局灶性脑缺血再灌注大脑皮质氨基酸类神经递质的影响,探讨其对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的保护作用。方法SD大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注模型组,阿米替林高、中、低剂量组及尼莫地平阳性对照组。术前采用腹腔注射给药,假手术组及缺血再灌注模型组给予等量的生理盐水。采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,用Longa法进行神经功能缺损评分;高效液相色谱法测定大鼠大脑皮质中谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)、甘氨酸(Gly)、γ-氨基丁酸(GABA)、牛磺酸(Tau)的含量,并计算兴奋毒性指数(EI)的变化。结果缺血1 h再灌注2 h后,与假手术组相比,缺血再灌注模型组大鼠神经功能缺损评分分值明显升高(P<0.01),大鼠大脑皮质中Glu、Asp、GABA、Gly、Tau的含量及EI值均显著增加(P<0.01或P<0.05);与缺血再灌注模型组相比,阿米替林组及尼莫地平组大鼠神经功能缺损评分分值显著降低(P<0.01),大鼠大脑皮质中Glu、Asp、Gly含量均明显降低,GABA、Tau有所增加,EI值明显降低(P<0.01或P<0.05)。结论阿米替林对局灶性脑缺血再灌注引起损伤的神经具有保护作用。其机制可能与其抑制兴奋性氨基酸的堆积,稳定兴奋性氨基酸/抑制性氨基酸递质的平衡有关。     

葛根素对雌激素剥夺小鼠学习记忆行为的影响

 目的研究葛根素对雌激素剥夺小鼠学习记忆功能的影响。方法卵巢摘除(Ovx)或假手术(sham)后一周,雌性小鼠给予4周的葛根素(Pur,50,100 mg·kg^-1,ip)或苯甲酸雌二醇(EB,1,5 μg·d^-1,ip)治疗。分别用Y-迷宫和水迷宫检测小鼠的分辨学习记忆和空间记忆行为:高效液相色谱分析大脑前皮层和海马组织的谷氨酸(Glu)和γ-氨基丁酸(GABA)含量。结果Ovx小鼠经50或100 mg·kg^-1Pur治疗后,在Y-迷宫达到学会标准所需训练次数分别下降11.8%和17.8%(P>0.05和P<0.05),记忆保持率分别提高23.3%和28.3%(P<0.05)。因Ovx而延长的水迷宫平台搜寻潜伏期缩短15.5%和23.8% (P<0.05)。同时,100 mg·kg^-1Pur使Ovx小鼠海马组织的Glu和GABA水平恢复正常,Glu从Ovx小鼠的(24.1±4.5)mg·g (pro)^-1回升到(27.9±3.5)mg·g(pro)^-1(P<0.05),而GABA则从(5.64±1.06)mg·g(pro)^-1回调到(4.73±0.85)mg·g(pro)^-1 (P<0.05)。结论长期Pur治疗可通过影响海马谷氨酸能和GABA能递质系统改善雌激素剥夺引起的记忆损伤,该作用可能与Pur的植物雌激素样活性有关。     

高原植物芜菁挥发油成分降血糖作用研究

目的：观察清热解毒活血中药有效组分配伍通络清脑注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠脑微透析液中2种氨基酸类神经递质谷氨酸（Glu）和γ-氨基丁酸（gamma-aminobutyric acid,GABA）水平的影响。方法：24只SD大鼠随机分为大脑中动脉阻塞/再灌注（MCAO/RP）模型组,尼莫地平组（0.4 mg·kg^-1）,通络清脑注射液低剂量组（48 mg·kg^-1）及高剂量组（95 mg·kg^-1）,每组6只。采用微透析技术对大鼠纹状体脑组织进行连续取样,流速1 μL·min^-1,每30 min采集1个样品。收集至第3个样品时,采用线栓法制备MCAO/RP模型,90 min后拔出线栓,实现再灌注,同时经大鼠尾静脉给予各组药物,继续收集微透析液至再灌注后180 min。微透析液样品经柱前衍生化后,经高效液相色谱-电化学（HPLC-ECD）检测Glu和GABA的水平。分别以造模时间点Glu及GABA含量为基础值计算释放率百分比。结果：建立MCAO模型后,各组Glu,GABA释放量均急剧上升,造模后120 min,通络清脑注射液高剂量组Glu释放量（327.29±127.31）%与模型组（1 041.08±190.57）%相比明显下降（P<0.05）,造模后120,150 min,通络清脑注射液高剂量组GABA释放量（11 843.99±3 952.45）%,（4 785.80±3 051.98）%与模型组（35 204.61±6 919.45）%,（27 694.76±18 393.61）%相比明显下降（P<0.05）。随后各组Glu,GABA释放量均呈逐渐下降趋势。结论：抑制氨基酸的过量释放是通络清脑注射液抗脑缺血/再灌注损伤的可能机制之一。     

葛根素对脑缺血诱导神经细胞凋亡的保护作用

 目的探讨葛根素(puerarin,Pur)对脑缺血诱导神经细胞凋亡和凋亡蛋白抑制剂XIAP表达的影响。方法SD大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)的同时ip50,100mg·kg^-1Pur,MCAO50min后再灌注24h,用TTC染色法、Annexin-V和PI双荧光标记结合流式细胞检测法、半定量RT-PCR等技术分别检测大鼠脑水肿、梗死体积、细胞凋亡和坏死率、caspase-3活性、XIAP mRNA表达。结果Pur(100mg·kg^-1)明显缓解缺血引起的脑水肿和神经行为障碍(P<0.05);减少脑梗死体积,以皮层尤其显著(P<0.01)。Pur(100mg·kg^-1)还显著降低背外侧皮层的细胞凋亡和坏死率,抑制caspase-3活性,逆转缺血诱导的XIAP mRNA表达下调(P<0.05,P<0.01)。结论Pur通过调节神经细胞XIAP mRNA表达,抑制细胞凋亡而保护缺血性脑损伤。     

马来酸罗格列酮对大鼠脑缺血及再灌注后炎症的影响

 目的探讨马来酸罗格列酮对脑缺血后炎症反应影响,以评价马来酸罗格列酮对脑缺血损伤的保护作用。方法大鼠大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血模型,缺血即刻及缺血2h后经插入胃管分别灌入马来酸罗格列酮0.5,2,4mg·kg^-1,测定缺血24h后,大鼠脑肿胀情况,脑组织髓过氧化物酶(MPO)活性,以及缺血2h并再灌注22h后脑组织髓过氧化物酶(MPO)活性和IL-6mRNA表达的影响。结果马来酸罗格列酮0.5mg·kg^-1对脑肿胀改变无明显影响(P>0.05),2,4mg·kg^-1实验组脑肿胀可见明显减轻(P<0.05),但二者之间无显著差异;各种不同剂量的马来酸罗格列酮可明显抑制缺血及再灌注大鼠的MPO水平(P<0.05,P<0.01),且抑制程度呈剂量相关;马来酸罗格列酮0.5,2mg·kg^-1可一定程度降低缺血再灌注脑组织IL-6 mRNA表达的水平(P<0.05),两剂量组之间有显著差异。结论马来酸罗格列酮可有效抑制脑缺血和再灌注后脑损伤。     

葛根素对氧糖剥夺大鼠海马神经细胞Ca2+和NO的影响

 目的研究葛根素(puerarin,Pur)对缺氧缺糖状态下海马神经细胞内Ca²⁺和NO水平的影响。方法选用新生大鼠体外培养8 d的海马神经细胞,进行3 h的氧糖剥夺(oxygen/glucose deprivation,OGD)或30 min的L-谷氨酸(0.5mmol·L^-1)处理后再正常培养24 h,Pur处理组在OGD或谷氨酸处理的同时和以后24 h给予不同剂量(40,100μmol·L^-1)Pur,Annexin V联合流式细胞仪检测细胞的凋亡率和坏死率;以Fluo-3或DAF-2为荧光标记,用激光共聚焦显微镜观测30 min的OGD过程中海马神经细胞Ca²⁺和NO的动态变化以及Pur的影响。结果OGD诱导海马神经细胞Ca²⁺和NO水平快速升高,其最高值分别达正常对照组的2.9和1.9倍;Pur明显减缓OGD期间神经细胞Ca²⁺内流和NO合成,与OGD组相比,40和100μmol·L^-1的Pur分别使细胞Ca²⁺峰值降低29.2%和37.1%(P<0.05和P<0.01),NO峰值降低23%和33%(P<0.05和P<0.01),显著抑制细胞内Ca²⁺和NO水平的升高;同时Pur可有效抑制OGD和谷氨酸引起的神经细胞死亡。结论Pur可通过抑制神经细胞谷氨酸/Ca²⁺/NO通路的活动而有效保护缺氧缺糖对神经细胞的损伤作用。     

GABA及其受体拮抗剂对脑缺血大鼠海马CA3区诱发电位的影响

 目的 探讨γ-aminobutyric acid(GABA)及其受体拮抗剂对正常及脑缺血大鼠海马CA3区神经元突触传递功能的影响。方法在体记录正常大鼠海马CA3区诱发的群峰电(population spike,PS);结扎大鼠双侧颈总动脉,造成急性不完全性全脑缺血,观察PS幅度变化;采用局部微量给药,观察药物对PS幅度的影响。结果①GABA 100,200 mmol·L^-1局部注入后,PS的幅度显著降低.bicuculline 1 mmol·L^-1能明显拮抗GABA200 mmol·L^-1对PS幅度降低的作用。②Glu 10 mmol·L^-1注入后,PS的幅度较注药前显著增加。而Glu 50 mmol·L^-1注入后,PS的幅度则较注药前显著降低。③GABA 200 mmol·L^-1能显著降低Glu10 mmol·L^-1所导致的PS幅度增加,并能减弱Glu 50 mmol·L^-1对PS幅度的降低作用。④急性不完全性全脑缺血(结扎双侧颈总动脉)后,PS的幅度显著降低。GABA 200 mmol·L^-1能减轻脑缺血所致的PS幅度的降低。结论 GABA对正常大鼠海马神经元突触传递的兴奋性具有一定抑制作用。并能明显改善较大剂量谷氨酸和急性脑缺血对海马CA3区神经元突触传递的影响。     

天麻钩藤方对自由活动大鼠脑缺血海马细胞外液递质氨基酸的影响

目的 :观察天麻钩藤方 (天钩方 )对不完全脑缺血清醒自由活动大鼠海马细胞外液递质氨基酸的影响。方法 :用CMA微透析采样系统收集双侧颈总动脉结扎和放松引起的清醒自由活动大鼠不完全缺血前、缺血期间及再灌后大鼠海马细胞外透析液 ;用高效液相色谱 电化学法测定透析液中谷氨酸 (Glu)、牛磺酸 (Tau)、精氨酸(Arg)、γ-氨基丁酸 (GABA)和半胱氨酸 (Cys)的浓度。结果 :天钩方中剂量组可升高正常大鼠脑海马细胞外液GABA和Tau的浓度。与模型组比较 ,大鼠不完全缺血 120min时 ,天钩方中和大剂量组的Glu水平分别降低了 38.64%和31. 35% ,Tau升高了 13.99%和 12.86 % ,GABA升高了 25.89%和 33.99% ,Cys降低了 40.93%和 42.08% ,Arg升高了16.95%和 8.96% ;再灌 120min时 ,天钩方中和大剂量组的Glu的水平分别降低了 14.55%和 11.48% ,Tau升高了16.13%和 14.03% ,GABA升高了 24.41%和 2.622%。结论 :天钩方能增加正常大鼠海马细胞外液中抑制性氨基酸的浓度 ,抑制缺血再灌引起的兴奋性氨基酸的过度释放 ,增加Arg和抑制性氨基酸的浓度 ,从而发挥神经保护作用。     

羟乙葛根素对大鼠脑缺血再灌注损伤一氧化氮和一氧化氮合酶的影响

 目的研究异黄酮类化合物羟乙葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶 (NOS)活性的影响,为羟乙葛根素用于治疗缺血性脑血管病提供实验资料。方法雄性Wistar大鼠60只,随机分为假手术组; 缺血再灌注组;尼莫地平0.4 mg·kg^-1·d^-1组;羟乙葛根素30,60,120mg·kg^-1·d^-1组。以大脑中动脉栓线阻断法(MCAO)制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,以硝酸还原酶法测定脑组织中的NO水平,以化学比色法测定总NOS活性,并测定诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活力,观察羟乙葛根素对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织NO水平和NOS活性的影响,并探讨可能的作用机制。结果大鼠脑缺血1 h,再灌注48h后,脑组织中NO水平显著升高,总NOS和iNOS活性显著增加。羟乙葛根素30,60, 120 mg·kg^-1·d^-1均可显著降低缺血再灌注损伤大鼠脑组织NO含量和总NOS,iNOS活力。结论羟乙葛根素可能通过降低 NO对脑缺血再灌注损伤后的神经毒性作用而发挥保护缺血性脑损伤的作用。     

鼠脑缺血再灌注损伤后兴奋性氨基酸的变化及黄芪对其影响

目的 :研究鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织兴奋性氨基酸 (EAA)及黄芪对其影响。方法 :采用沙土鼠双侧颈总动脉夹闭脑缺血模型 ,于缺血后 1 5min、再灌注 4 8h取脑组织测定Glu、Asp、GABA、Gly。结果 :缺血 1 5min后 ,脑组织Glu、Asp含量明显升高 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1 ) ,GABA含量升高 (P <0 .0 5 ) ,黄芪可降低脑组织Glu含量 (P <0 .0 5 )。缺血后 1 5min再灌注4 8h后 ,脑组织Glu及Asp含量显著升高 (P <0 .0 5 ) ,黄芪可使脑组织Glu含量降低 (P <0 .0 5 )。结论 :黄芪抗缺血性脑损伤的作用机理可能与其对抗脑缺血及其再灌注后EAA的升高有关     

人参皂苷Rg1对抑郁症模型大鼠行为学及海马氨基酸的影响

目的:观察人参皂苷Rg1对长期慢性应激所致抑郁模型大鼠行为学及海马氨基酸含量的影响。方法:将SD大鼠随机分为5组:正常对照组、模型组、人参皂苷Rg1低、高剂量组(20,40 mg·kg-1)和阳性药组(氟西汀10 mg·kg-1)。采用慢性不可预见性温和应激方法造成大鼠抑郁模型,治疗组灌胃连续给药21 d,正常组及模型组每日等剂量生理盐水灌胃。造模前后测定各组大鼠糖水消耗量,造模后旷场试验测定大鼠水平活动和垂直活动变化,以高效液相法测定海马氨基酸含量。结果:与正常组相比,模型组大鼠糖水消耗及偏爱率均下降;旷场试验测定水平活动和垂直活动次数均下降;海马谷氨酸、天冬氨酸含量明显增高,氨基丁酸和牛磺酸含量则明显下降。人参皂苷Rg1干预后,大鼠糖水消耗量和偏爱率增加;水平活动和垂直活动次数明显增加;海马谷氨酸、天冬氨酸含量下降,氨基丁酸和牛磺酸含量上升。结论:人参皂苷Rg1对抑郁症状有明显改善作用,其机制可能与调节长期慢性应激反应海马氨基酸水平,防止兴奋性氨基酸的神经毒性作用有关。     

电针对脑缺血大鼠纹状体细胞外兴奋性氨基酸水平的影响

目的　观察电针对脑缺血大鼠纹状体细胞外兴奋性氨基酸类递质水平的影响。方法　利用大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,采用微透析技术及高效液相－荧光检测法测定纹状体细胞外兴奋性氨基酸含量。结果　缺血时谷氨酸及门冬氨酸含量明显升高,再灌后逐渐回降;电针组上述两种氨基酸含量明显低于单纯缺血组,再灌后亦如此。结论　电针可抑制细胞外兴奋性氨基酸的过量堆积。     

Effect of ginkgolide B on striatal extracellular amino acids in middle cerebral artery occluded rats

Ethnopharmacological relevance

Ginkgo biloba leaves are traditionally used in China for its health-promoting properties. There is substantial experimental evidence to support the view that Ginkgo biloba extracts have neuroprotective properties under conditions such as hypoxia/ischemia.Although a number of studies have investigated that ginkgolide B, a purified terpene lactone component extracted from Ginkgo biloba leaves, is available “platelet activating factor (PAF) receptors antagonist”, “antioxidant” with a variety of actions, very little has been performed to explore the effect of ginkgolide B on extracellular amino acids in experimental animal of focal cerebral ischemia/reperfusion. In this study, the effect of ginkgolide B on the striatal extracellular levels of glutamate (Glu), aspartic acid (Asp), glycine (Gly) and γ-aminobutyric acid (GABA) was evaluated in rats undergone middle cerebral artery occlusion (MCAO) for 1 h followed by 23 h reperfusion.

Materials and methods

The Sprague-Dawley (SD) rats received intraperitoneal injections of ginkgolide B dissolved at a dose of 10 mg kg⁻¹ d⁻¹, 20 mg kg⁻¹ d⁻¹, or normal saline (NS) of same volume 3 d before the middle cerebral artery occlusion model establishment. Extracellular concentrations of glutamate, aspartic acid, glycine and GABA in striatum were monitored using in vivo microdialysis and analyzed using high-performance liquid chromatography. Excitotoxic index (EI) was calculated. Twenty-four hours after MCAO, the cerebral infarct volume was detected on 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride-stained coronal sections.

Results

The result showed that administration of ginkgolide B (10 or 20 mg kg⁻¹) before ischemia reduced the ischemia-induced elevation of levels of glutamate, aspartic acid and glycine, increased the elevation of extracellular GABA, decreased the excitotoxic index and diminished the volume of cerebral infarction, although a clear concentration-response relationship was not found.

Conclusions

The present work provides the first evidence that ginkgolide B protects against cerebral ischemic injury by inhibiting excitotoxicity by modulating the imbalance of excitatory amino acids versus inhibitory amino acids, which may support the traditional use of Ginkgo biloba leaves for the treatment of stroke.     

3''-甲氧基葛根素对缺血再灌注大鼠脑内氨基酸动态变化的实验研究

目的:研究脑缺血时3’-甲氧基葛根素对谷氨酸、天门冬氨酸、牛磺酸和γ-氨基丁酸的抑制作用,探讨脑缺血损伤再灌注过程中其对神经损伤的保护机制。方法:制作大鼠大脑中动脉阻塞模型,利用脑微透析技术收集大鼠纹状体细胞外液中的氨基酸类神经递质,并3’-甲氧基葛根素灌胃治疗;HPLC荧光检测用药前后4种氨基酸的含量变化。结果:3’-甲氧基葛根素可降低缺血时脑组织中兴奋性氨基酸Asp,Glu的浓度,同时使抑制性氨基酸Tau,GABA含量明显降低。结论:3’-甲氧基葛根素能降低缺血引起的脑内兴奋性氨基酸的毒性,调节脑内兴奋性氨基酸的含量。因此,该药改善脑内氨基酸的变化状态是改善和保护急性期脑梗死大鼠脑内神经保护作用机制之一。     

周期素依赖激酶抑制剂对大鼠大脑中动脉缺血后海马迟发性神经元死亡的影响

 目的探讨细胞周期素依赖激酶(CdK)抑制剂--olomoucine对大鼠局灶性脑缺血再灌流后海马迟发性神经元死亡的影响。方法 给予大脑中动脉阻塞再灌流大鼠腹腔注射olomoucine,观察再灌流后3,7 d皮层损伤侧海马半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(caspase-3)和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达水平;同时,应用免疫组织化学方法测定再灌流后3,7d皮层损伤侧海马CAl区神经元细胞核特异性抗原(NeuN)的表达。结果olomoucine能明显抑制大鼠局灶性脑缺血再灌流后海马PCNA蛋白的表达(P＜0.01),降低caspase-3水平(P＜0.01);同时显著减少了海马CAl区神经元的丢失(P＜0.01)。结论研究表明,olomoucine通过抑制细胞增殖活动、减少caspase-3生成,从而降低局灶性脑缺血再灌流后海马迟发性神经元死亡的发生。     

银杏二萜内酯葡胺注射液对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

探讨银杏二萜内酯葡胺注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(MCAO)的保护作用,并探讨其可能的作用机制。雄性SD大鼠140只,随机分为假手术组、模型组、银杏提取物注射液(金纳多,1.0 m L·kg~(-1))、尼莫地平注射液(0.2 mg·kg~(-1))组、银杏二萜内酯葡胺注射液(5.2,2.6,1.3 mg·kg~(-1))组;所有动物手术前4 d尾静脉注射给药(模型组及假手术组给予生理盐水)。除假手术组,其他动物通过右侧大脑中动脉线栓塞法(MCAO)制作局灶性脑缺血再灌注模型。缺血3 h后,所用动物再次尾静脉注射给药。大鼠缺血再灌注后进行神经行为学评分并采用TTC染色法观察脑组织梗死率;测定脑组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、乳酸(LA)含量及脑脊液中Ca~(2+),谷氨酸(Glu),天冬氨酸(Asp)以及磷酸肌酸激酶(CK-BB)和乳酸脱氢酶(LDH)含量的变化。与假手术组相比,模型组大鼠脑梗死率显著增加,神经严重缺损;脑组织匀浆中MDA、LA含量升高,GSH、SOD含量降低;脑脊液中Ca~(2+)浓度降低,Glu和Asp的含量及CK-BB、LDH含量显著升高。与模型组相比,银杏二萜内酯葡胺注射液高、中剂量组能显著减少脑梗死率,改善脑神经功能缺损症状;提高SOD、GSH活性,减少血清中MDA、LA含量;升高脑脊液中Ca~(2+)浓度,减低神经递质Glu和Asp的含量及CK-BB、LDH的含量。银杏二萜内酯葡胺注射液能明显改善模型动物的神经功能缺损,其机制可能与修复血脑屏障,减少自由基,减少细胞外游离钙内流,降低脑脊液中兴奋性氨基酸含量等有关,从而保护脑缺血。     

异亚丙基莽草酸抗大鼠脑缺血再灌注损伤的炎症机制初探

 目的研究异亚丙基莽草酸(ISA)对大脑中动脉缺血再灌注大鼠的影响及初步作用机制。方法栓线法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,缺血3h,再灌注21h后以TTC染色法测定脑梗死范围,比色法测定脑组织匀浆中髓过氧化物酶(MPO)活性,ELISA法测定匀浆中IL-1β,IL-8,TNF-α含量。结果ISA 200,100 mg·kg^-1可明显减少模型大鼠的脑梗死范围,降低脑组织匀浆MPO活性以及IL-1β,IL-8,TNF-α的水平。结论ISA对局灶性脑缺血再灌注损伤具有明显的阻抑作用,其作用机制与抗炎症反应有关。