补肾方含药血清对谷氨酸诱导凋亡的 PC12细胞胞浆内游离钙浓度及钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ磷酸化的影响

目的:运用中药血清药理学方法,研究补肾复方含药血清(BS)对谷氨酸(Glu)诱导凋亡的PC12细胞胞浆内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)及钙信号转导通路下游的关键信号分子钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)磷酸化的影响.方法:采用谷氨酸诱导PC12细胞造成凋亡模型,以荧光探针Fluo-3/AM对活细胞染色,结合流式细胞技术观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内[Ca2 ]i的影响;采用Western-blotting技术观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞CaMKⅡ磷酸化的影响.结果:20%浓度BS含药血清能够拮抗谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内钙离子浓度的升高,抑制CaMKⅡ的磷酸化水平增高.结论:补肾中药神经保护作用的机制可能与减轻钙超载,调控钙信号通路关键信号分子的磷酸化有关.     

电针12h对颅脑损伤大鼠脑组织[Ca（2＋）]i和NE含量影响的实验研究

目的：对电针12h对颅脑损伤大鼠脑组织[Ca2＋]i和NE含量的影响进行实验研究。方法：采用激光共聚焦显微镜的动态扫描功能和荧光分子探针技术,从针灸血清学和细胞学角度,对针刺通过颅脑损伤大鼠血清影响SY5Y细胞[Ca2＋]i进行研究;采用高效液相色谱法研究电针对颅脑损伤大鼠脑组织NE含量的影响。结果：各组血清孕育12h后SY5Y细胞[Ca2＋]i相比较显示,模型对照组的荧光强度明显高于空白对照组（P﹤0.01）,针刺治疗组的荧光强度明显低于模型对照组（P﹤0.05）;各组大鼠脑组织NE含量相比较,模型对照组显著高于空白对照组（P﹤0.01）,针刺治疗组明显低于模型对照组（P﹤0.05）。结论：电针12h可减慢颅脑损伤大鼠脑组织[Ca2＋]i和NE含量的上升趋势,提示电针可能是通过抑制脑皮质内大量NE聚集,降低皮质神经元的兴奋性,从而抑制细胞内Ca2＋滞留和超载,减轻脑水肿,对脑组织起到保护作用。     

针刺对局灶性脑缺血大鼠海马神经元细胞[Ca~（2＋）]_i的影响

[目的]研究脑缺血不同时点大鼠海马神经元内游离Ca2＋浓度[Ca2＋]i及醒脑开窍针刺对其影响,探讨醒脑开窍针刺法早期干预对脑缺血的治疗作用。[方法]建立大脑中动脉所致局灶性脑缺血（MCAO）模型,采用醒脑开窍针刺法治疗,采用激光扫描共聚焦显微技术动态观察脑组织海马CA1区锥体细胞[Ca2＋]i在不同时间点的变化。[结果]与正常组大鼠相比,模型组大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞内游离[Ca2＋]i（以细胞内Ca2＋相对荧光强度表示）在局灶性脑缺血1 h时升高,持续升高至缺血24 h时（P〈0.05）。假手术组与正常组相比[,Ca2＋]i变化差异无统计学意义（P〉0.05）。相应时间点非穴位针刺组与模型组[Ca2＋]i比较,无统计学意义（P〉0.05）。在相应时间点,醒脑开窍针刺组[Ca2＋]i低于模型组（P〈0.01）。[结论]急性局灶性脑缺血后大鼠海马神经细胞[Ca2＋]i随缺血时间的延长而持续升高,提示细胞内钙超载;醒脑开窍针刺组能有效调节缺血区的[Ca2＋]i,提示在缺血后针刺治疗效果越早越好,为临床及早应用针刺治疗缺血性脑血管病提供了理论依据。     

化湿利水泄浊法对培养SHR血管平滑肌细胞游离钙的影响

目的：研究化湿利水泄浊法治疗高血压血管重构的机理.方法：组织贴块法行自发性高血压大鼠（SHR）主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）的分离培养,并以倒置显微镜、α-SM actin免疫组化法鉴定;采用MTT法观察各含药血清对VSMC增殖的抑制作用,荧光染料FURA-2/AM标记法观察含药血清对VSMC游离钙浓度（[Ca2＋]i）的影响,并与平肝潜阳法、西药依那普利比较.结果：与模型组比较各含药血清对VSMC增殖（除平肝潜阳组）、[Ca2＋]i均有明显的抑制作用（P＜0.05）,其中化湿组作用更为显著（P＜0.01）.结论：化湿利水泄浊法对培养SHR的VSMC的增殖及[Ca2＋]i有明显抑制作用,可能是该药改善高血压血管重构的作用环节之一.     

细胞凋亡抑制剂防护晶状体上皮细胞氧化损伤及信号转导机制

目的：探讨细胞凋亡抑制剂阿魏酸钠（SF）、五味子乙素（Sch B）、菊花（FC）、车前子（SP）对过氧化氢（H2O2）所致氧化损伤的晶状体上皮细胞（LEC）活性以及细胞内钙（Ca2＋）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）的影响,研究四种细胞凋亡抑制剂防治白内障的细胞信号转导机制。方法：将传代培养的牛LEC与H2O2共同孵育复制氧化损伤的模型,同时加入SF和Sch B单体及FC和SP水提取液孵育后,采用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测LEC活性,采用荧光分光光度法检测LEC内钙离子的浓度（[Ca2＋]i）、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量,并探讨不同浓度和不同孵育时间（12h、24h、36h）的影响。结果：①H2O2组LEC活性下降,SF、Sch B、FC、SP均可明显增强氧化损伤的LEC活性（P〈0.01）,呈浓度依赖关系和时间依赖关系。②H2O2组LEC的[Ca2＋]i升高,SF、Sch B、FC、SP均可显著降低氧化损伤LEC的[Ca2＋]i（P〈0.01）,呈时间-效应关系。③H2O2组LEC的cAMP浓度升高、cGMP浓度下降,SF、Sch B、FC、SP均可使氧化损伤的LEC的cAMP水平显著降低（P〈0.01）、cGMP水平显著升高（P〈0.01）,也呈时间-效应关系。结论：四种细胞凋亡抑制剂SF、Sch B、FC、SP可明显抑制LEC氧化损伤及凋亡,通过[Ca2＋]i、cAMP、cGMP信号转导及相互作用调节生物学效应可能是其主要的细胞和分子生物学机制。     

补阳还五汤含药血清对缺氧损伤PC12细胞的保护作用

目的:探讨补阳还五汤含药血清对缺氧损伤PC12细胞的保护作用.方法:应用中药复方血清药理学研究方法,制备家兔补阳还五汤含药血清,观察其对缺氧PC12细胞损伤模型细胞形态学、存活力及上清液中PAF含量的影响.结果:PC12细胞缺氧造模后,出现急性损伤,形态变异,补阳还五汤含药血清组表现为自我修复,形态与正常细胞组相似;补阳还五汤含药血清组能提高细胞存活力,降低凋亡率及降低细胞上清PAF含量(P<0.05).结论:补阳还五汤含药血清对缺氧损伤PC12细胞有明显的保护作用,其机制与降低缺氧损伤细胞PAF含量释放、保护细胞形态和提高存活力有关.     

调肝导浊中药对体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞增殖调控的影响

[目的]观察调肝导浊中药对大鼠主动脉平滑肌细胞 (SMC)内Ca2 浓度、C_myc表达和SMC增殖的影响。[方法]采用体外SMC技术 ,免疫组织化学方法测量SMC的增殖核抗原(PCNA)阳性细胞率和C_myc阳性表达率 ,通过负荷钙离子荧光指示剂Fura_2/AM进行[Ca2 ]i 测定。[结果]高脂血清培养组SMC的PCNA阳性细胞率和C_myc阳性表达率明显高于正常培养(P<0.01)。调肝导浊中药通过降低胞内[Ca2 ]i,抑制C_myc表达 ,使该组的PCNA阳性率明显低于高脂血清组(P<0.01)。[结论]调肝导浊中药对SMC增殖起到良好的调控作用 ,从而有效地防止动脉粥样硬化 (AS)的发生与发展。     

柴胡有效成分促胰腺腺泡酶分泌的时效特征和作用机理

研究了中药柴胡有效成分柴胡总皂甙和柴胡皂甙单体（I）[SA（I）]的促胰腺腺泡酶分泌的药效动力学和诱发细胞内自由Ca2＋浓度([Ca2＋]i)的动态变化特征。结果表明：（1）柴胡总皂甙具有极强的促酶分泌作用,最大效应是胆囊收缩素（CCK－8）的3倍。药效动力学分高促分泌相和低促分泌相。（2）SA（I）药效迅速,10－5mol·L－1 SA（I）给药后1－2min酶分泌速率达基础值的16倍,10min完成促泌作用的95％。GDP显著抑制了SA（I）的作用。（3）柴胡总皂甙诱发腺泡多细胞[Ca2＋]i动态变化呈双峰过程,第一峰来源于胞内Ca2＋释放,第二峰由胞外Ca2＋内流产生。（4）SA（I）诱发的腺泡单细胞[Ca2＋]i呈大幅值单峰和随后再升高特征。GDP抑制该峰的高度。提示SA（I）增强受体偶联的G蛋白活性,进而诱发胞内Ca2＋池释放Ca2＋。     

补阳还五汤含药血清对缺氧缺糖损伤PC12细胞形态和活力的影响

目的:探讨补阳还五汤含药血清对缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤PC12细胞形态和活力的影响.方法:采用中药血清药理学方法制备补阳还五汤含药血清,以5％,10％,20％的含药血清作用于OGD损伤PC12细胞,于倒置显微镜下观察细胞形态,用四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力.结果:PC12细胞OGD损伤后形态发生改变、细胞活力降低;5％,10％补阳还五汤含药血清作用于OGD损伤PC12细胞12,18,24 h,均可减轻细胞形态损伤、提高细胞活力(P＜0.01);而20％补阳还五汤含药血清随作用时间的延长对OGD损伤PC12细胞的形态和活力具有双向调节作用.结论:一定浓度的补阳还五汤含药血清对OGD损伤PC12细胞的形态和活力具有保护作用.     

用血清药理学方法观察毛茛提取液对家兔主动脉平滑肌细胞内钙的影响

目的:观察毛茛提取液含药血清对培养家兔主动脉平滑肌细胞内游离钙浓度的影响.方法:体外培养家兔主动脉平滑肌细胞(VSMC),用荧光指示剂INDO-AM负载细胞,灌胃给予不同浓度药物,观察不同稀释浓度含药血清及不同时相药物血清对由NE诱导细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i)增加的影响.结果:毛茛提取液各含药血清组均能降低由NE诱发的细胞内[Ca2 ]i的升高.结论:毛茛提取液含药血清能减少VSMC细胞内[Ca2 ]i.     

强心复脉颗粒药物血清对模拟缺血再灌注致钙超载窦房结细胞的影响

目的探讨治疗病态窦房结综合征的强心复脉颗粒药物血清对模拟缺血再灌注致钙超载窦房结细胞的影响。方法取新生乳鼠窦房结细胞，以缺氧缺糖模拟缺血，以恢复氧和糖供应模拟再灌注造成窦房结细胞的钙超载模型。设正常对照、模型对照、阿托品药物血清、强心复脉药物血清高、低剂量组，给药组用含相应药物血清的DMEM培养基在有氧环境中预先培养30min后，再进行模拟缺血再灌注。运用倒置显微镜、荧光分光光度计观察各组窦房结细胞形态和钙离子浓度的变化。结果模型对照组大部分细胞出现肿胀变形，甚至细胞脱落；HE染色后观察，胞质内出现较多微小空泡，胞核核膜有皱褶，胞膜局部破损。强心复脉药物血清高、低剂量组细胞贴壁生长良好，胞膜、核膜基本平滑完整，细胞大小形态正常。，正常窦房结细胞[Ca2＋]i值较低；模拟缺血再灌注后显著增高；强心复脉药物血清高、低剂量组窦房结细胞[Ca2＋]i明显降低（P〈0．01），而阿托品药物血清组无明显降低：结论强心复脉药物血清可抑制模拟缺血再灌注引起的细胞损伤-强心复脉颗粒治疗病态窦房结综合征的机制可能与其能降低钙离子浓度、保护窦房结细胞损伤有关。     

安颤灵对蛋白酶体抑制剂lactacystin诱导PC12细胞凋亡的影响

观察安颤灵含药血清对lactacystin诱导Pc12细胞凋亡的影响。方法：按照血清药理学实验方法制备安颤灵含药血清，采用lactacystin作用于PC12细胞，建立泛素-蛋白酶体系统损伤的细胞模型。将含药血清分为大、中、小剂量组，MTT方法检测各组的细胞活力；将对数生长期的PC12细胞分为正常组、lactacystin组（损伤组）、中药组，通过Tunel及免疫细胞化学方法，观察各组细胞凋亡情况。结果：与大、小剂量组相比，中剂量组细胞的存活率显著升高（P〈0．01）；与正常组相比，lactacystin组细胞凋亡指数明显增加（P〈0．01）；与lactacystin组相比，中药组细胞凋亡指数明显降低（P〈0．01）。结论：安颤灵含药血清具有抗lactacystin诱导的细胞凋亡作用。     

17β-雌二醇对巨噬细胞内Ca^2＋的影响

目的观察17β-雌二醇（E2）对巨噬细胞胞浆游离钙离子浓度（[Ca2＋]i）的影响及可能的作用途径。方法小鼠腹腔巨噬细胞用F lou-3/AM负载,用激光共聚焦显微镜检测,[Ca2＋]i以细胞内荧光强度表示。结果 100 nmol/L的17β-雌二醇能使小鼠腹腔巨噬细胞的[Ca2＋]i明显提高（提高率39.8%）。巨噬细胞在无钙的条件下,加入E2后[Ca2＋]i升高10.6%,在补充入Ca2＋后,[Ca2＋]i更有明显升高。用维拉帕米、肝素和普鲁卡因预先处理后,E2诱导的[Ca2＋]i升高分别被抑制了52.8%,16.6%和36.7%。结论 E2诱导的腹腔巨噬细胞胞浆游离钙的升高是外钙内流和内钙释放共同作用的结果,并且这种作用与L-型钙通道、IP3受体和ryanod ine受体关系密切。     

滋阴活血解毒中药对血管内皮细胞损伤的保护作用

目的观察滋阴活血解毒中药对葡萄糖（Glu）、胰岛素（Ins）、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的干预作用及其保护机制。方法以人脐静脉内皮细胞株ECV-304为受试对象，以一定浓度的Glu、Ins、OX—LDL诱导体外血管内皮细胞损伤，同时观察滋阴活血解毒中药对该细胞损伤的保护作用。各实验组细胞继续培养48h后，分别检测细胞活性及细胞培养液中组织型纤溶酶原激活物（t-PA）、纤溶酶原激活物抑制物（PAI）、细胞粘附分子（ICAM-1）的含量。结果细胞培养48h后，模型组较正常组细胞活力明显下降（P〈0．01），PAI及ICAM-1含量明显升高（P〈0．01），而不同剂量的滋阴活血解毒中药能显著改善细胞活力（P〈0．05），降低PAI及ICAM-1含量（P〈0．01），对t—PA的影响无显著性意义。结论滋阴活血解毒中药对Glu、Ins、ox—LDL诱导损伤的血管内皮细胞有保护作用，而这一作用可能是通过促进内皮细胞的纤溶功能、抑制与炎症反应相关的细胞粘附过程等途径实现的。     

隐丹参酮对谷氨酸致大鼠神经细胞氧化应激的影响

 目的 观察隐丹参酮（CT）对谷氨酸（Glu）损伤大鼠皮层神经元的保护作用。方法 体外培养大鼠皮层神经细胞,建立Glu损伤模型,采用MTT法检测细胞活力,比色法检测超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量;荧光法检测细胞内Ca2+的变化,Western blot检测caspase 3蛋白的表达。结果 CT能显著提高Glu损伤神经细胞的存活率,提高SOD的活性,降低MDA的生成,抑制细胞内［Ca2+］i的变化以及caspase 3蛋白表达,抑制神经细胞凋亡。结论 CT对培养神经细胞谷氨酸兴奋毒性具有显著的保护作用,其机制可能与CT拮抗Glu诱导的氧化应激以及抑制细胞内［Ca2+］i作用有关。     

芪参益气滴丸对高脂血症家兔血小板胞内游离[Ca^2＋]i影响

目的：观察芪参益气滴丸对高脂血家兔血小板胞内游离钙浓度（[Ca^2＋]i）的影响,并探讨芪参益气滴丸抗血小板活化的机制。方法：16只大耳白兔随机分为正常对照组和高脂喂养组,定期监测血TC值,待正常组与高脂组血脂稳定且有显著差异时,颈总动脉取血,采用高脂血浆孵育正常血小板并用体外给药的方法,运用多功能读板机检测并计算血小板胞浆内[Ca^2＋]i浓度的变化。结果：芪参益气组[Ca^2＋]i为（253．26±153．00）mmol／L较模型组[Ca^2＋]i（401．68±126．59）mmol／L明显下降（经平方数值变换,t=-9．6917,P〈0．01）,与阿司匹林组[Ca^2＋]i（214．62±69．25）mmol／L比较,无显著性差异（P〉0．05）。结论：芪参益气滴丸对体外高脂血浆孵育的血小板活化所致[Ca^2＋]i的升高有明显抑制作用。     

六味地黄丸含药血清对KCl诱导PC12细胞内Ca2+离子浓度及钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的影响

目的:研究六味地黄丸含药血清对KCl诱导PC12细胞内Ca2+浓度及钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA水平的影响。方法:取对数生长期的PC12细胞株(大鼠肾上腺嗜铬肿瘤细胞株),经10%六味地黄丸含药血清预保护48 h后,加入150 mmol.L-1KCl刺激后,应用细胞活性检测(MTT法)观察细胞活性和应用激光共聚焦等技术方法观察六味地黄丸含药血清对PC12细胞Ca2+浓度变化的影响,RT-PCR法检测各组PC12细胞CaMKⅡmRNA表达水平。结果:10%六味地黄丸血清[细胞吸光度(A)为(1.15±0.09)]能显著提升细胞存活率,与模型组[细胞吸光度(A)为(0.47±0.11)]相比有显著性差异(P<0.01);PC12细胞经10%六味地黄丸血清预保护48 h后静息钙强度与空白对照组、模型组相比有显著性差异(P<0.05),150 mmol.L-1KCl刺激后,经10%六味地黄丸血清预保护48 h的细胞内Ca2+平均荧光强度明显低于模型组(P<0.05),同时细胞内CaMKⅡmRNA表达显著升高(P<0.05)。结论:六味地黄丸含药血清对KCl诱导PC12细胞内钙超载有抑制作用,且可提高细胞内CaMKⅡmRNA表达水平。     

三七总皂苷对缺氧再给氧血管内皮细胞钙离子浓度及肌浆网Ca2+-ATP酶活性的影响

目的:探讨人脐静脉内皮细胞株(ECV304)缺氧再给氧(H/R)损伤的发生机制及三七总皂苷(tPNS)对该病理生理过程的影响。方法:将体外培养的ECV304分为七组,正常组;模型组;tPNS高、中、低浓度组;维拉帕米组;吡咯烷二硫氨基甲酸酯(PDTC)组,对各组进行相应处理后,分别检测各组细胞内钙离子浓度[Ca2+]i、肌浆网Ca2+-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI2)含量、细胞活力的变化。结果:模型组、tPNS高、中、低浓度组、维拉帕米组及PDTC组肌浆网Ca2+-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI2)含量、细胞活力明显低于正常组,[Ca2+]i明显高于正常组,其中tPNS高、中、低浓度组、维拉帕米组及PDTC组肌浆网Ca2+-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI2)含量、细胞活力明显高于H/R组,[Ca2+]i明显低于H/R组,且呈浓度依赖性改变,tPNS高浓度组肌浆网Ca2+-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI2)含量、细胞活力明显高于维拉帕米组及PDTC组,[Ca2+]i明显低于维拉帕米组及PDTC组。结论:H/R可激活ECV304,使细胞肌浆网Ca2+-ATP酶活性、一氧化氮(NO)及前列环素(PGI2)含量、细胞活力明显降低,[Ca2+]i明显升高;tPNS能有效改善肌浆网Ca2+-ATP酶活性,减轻细胞内钙超载,减轻H/R损伤,且高浓度tPNS效果优于维拉帕米、PDTC。     

通窍活血汤含药血清对谷氨酸损伤的PC12细胞的保护作用

目的:从细胞水平研究通窍活血汤含药血清(TQHXD)对谷氨酸(Glu)损伤的PC12细胞的保护作用,为该方剂的临床应用提供依据。方法:SD大鼠灌胃给予通窍活血汤提取液,每日2次,每次4 g.kg-1,连续5 d,制备通窍活血汤含药血清。采用PC12细胞和终浓度为12.5 mmol.L-1的谷氨酸共培养,造成神经细胞损伤模型。光镜观察5%,10%,20%的TQHXD对损伤PC12细胞形态改变的影响;台盼兰染色法、AO/EB染色法及LDH法观察TQHXD对损伤的细胞膜通透性的变化影响;MTT法检测TQHXD对PC12细胞增殖及活性的影响及对培养上清液中NO浓度的影响。结果:倒置显微镜下可见,正常组细胞胞体较损伤组略大,呈强折光性,细胞数量多,突起长。模型组细胞数量显著减少,折光性明显减弱,细胞突起减少、缩短。TQHXD和PC12细胞共培养24 h后,活细胞数明显增加,细胞折光性增加,损伤细胞形态接近于正常细胞;台盼兰染色后,TQHXD组活细胞比率明显上升,AO/EB染色后被EB染色的数量较少。MTT法检测结果显示,与模型组比较,各浓度TQHXD组的吸光度A均升高且有显著性差异。各浓度的TQHXD组细胞培养上清中LDH,NO含量相对模型组明显减少,两者有显著性差异。结论:TQHXD对Glu损伤的PC12细胞有明显的保护作用。     

芦荟大黄素对大鼠巨噬细胞[Ca2+]i和释放TNF-α的影响

目的研究芦荟大黄素对正常的和细菌脂多糖(LPS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞(PMφ)释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和细胞内自由Ca2 浓度([Ca2 ]i)的影响。方法应用MTT法检测TNF-α量和细胞钙离子成像系统检测单细胞内[Ca2 ]i的动态变化。结果芦荟大黄素可剂量依赖性活化正常PMφ释放TNF-α,同时诱发正常PMφ[Ca2 ]i呈波动式变化,[Ca2 ]i升高来源于胞外钙内流和胞内钙池释放钙。芦荟大黄素对LPS刺激PMφ升高[Ca2 ]i和释放TNF-α的影响有较复杂的剂量依赖性特征,即芦荟大黄素低浓度时对[Ca2 ]i升高有明确的抑制作用;其对TNF-α释放的抑制呈随浓度增高而减弱的趋势。大黄酸可增强芦荟大黄素对LPS升高[Ca2 ]i的抑制作用。结论芦荟大黄素对PMφ[Ca2 ]i和释放TNF-α表现出双向调节作用,其对[Ca2 ]i动力学的调制与其调节PMφ释放TNF-α间有明确的对应性。