补阳还五汤含药血清对缺氧损伤PC12细胞的保护作用

目的:探讨补阳还五汤含药血清对缺氧损伤PC12细胞的保护作用.方法:应用中药复方血清药理学研究方法,制备家兔补阳还五汤含药血清,观察其对缺氧PC12细胞损伤模型细胞形态学、存活力及上清液中PAF含量的影响.结果:PC12细胞缺氧造模后,出现急性损伤,形态变异,补阳还五汤含药血清组表现为自我修复,形态与正常细胞组相似;补阳还五汤含药血清组能提高细胞存活力,降低凋亡率及降低细胞上清PAF含量(P<0.05).结论:补阳还五汤含药血清对缺氧损伤PC12细胞有明显的保护作用,其机制与降低缺氧损伤细胞PAF含量释放、保护细胞形态和提高存活力有关.     

正交试验法研究补阳还五汤中保护OGD损伤PC12细胞的主要药味

目的:研究补阳还五汤中保护缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤PC12细胞的主要药味。方法:将补阳还五汤中7种单味药(黄芪、赤芍、当归尾、地龙、川芎、桃仁、红花)作为实验因素,每个因素选取有或无2个水平,按L8(27)正交试验表设计8种拆方。普通级新西兰兔分为9组,空白血清组和8个拆方含药血清组,分别ig蒸馏水和临床等效剂量5倍的拆方药液,24 h内连续ig 3次后,提取血清。运用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)和微量酶标法,以细胞活力和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放量为指标,观察10%补阳还五汤及其拆方含药血清对OGD损伤18h的PC12细胞的影响。结果:PC12细胞OGD损伤后,其LDH释放量增加(P<0.01),补阳还五汤能显著抑制OGD损伤PC12细胞的LDH释放量(P<0.01)。正交试验结果显示,含黄芪、当归尾、赤芍的拆方组其细胞活力显著增加(P<0.01),LDH释放量显著降低(P<0.01);而含桃仁的拆方组其细胞活力显著下降(P<0.01),含地龙的拆方组其LDH释放量显著升高(P<0.01);红花、川芎对细胞活力及LDH释放量的作用不明显。结论:补阳还五汤对OGD损伤PC12细胞具有保护作用,其中黄芪、当归尾、赤芍是保护OGD损伤PC12细胞的主要药味,桃仁、地龙可加重PC12细胞OGD损伤,红花、川芎对细胞的作用不明显。     

补阳还五汤家兔含药血清对PAF诱导的家兔血小板聚集的影响

目的:探讨补阳还五汤家兔含药血清对PAF诱导的家兔血小板聚集的影响。方法:制备补阳还五汤家兔含药血清,用血小板聚集功能测定法观察补阳还五汤含药血清对PAF诱导的家兔血小板聚集的影响。结果:补阳还五汤含药血清对PAF诱导的家兔血小板聚集有明显的抑制作用,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01)。结论:补阳还五汤家兔含药血清中的某些有效活性成份对PAF诱导的家兔血小板聚集有抑制作用。     

补阳还五汤大鼠含药血清对肺成纤维细胞TGF-β1及其基因表达的影响

目的:观察补阳还五汤大鼠含药血清对博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺成纤维细胞中TGF-β1及其基因表达的影响。方法:含药血清的制备:24只SPF级SD大鼠,雄性,随机分为3组,即补阳还五汤水煎液组(简称补阳还五汤组,1 g生药/m L),强的松水溶液组(简称阳性组,5 mg/m L)和生理盐水组(简称模型组),每组8只,补阳还五汤组以9.24 g/(kg·d)(临床等效剂量)进行灌胃,阳性组及模型组以1 m L/100 g灌服相应溶液,1次/d,连续灌服7 d,采血前禁食12 h,于末次灌胃1 h后,腹主动脉取血,离心后分离血清,将收集到的补阳还五汤含药血清配制成含药血清浓度分别为5%,10%,20%的培养液备用;体外培养的肺成纤维细胞,分别加入含5%,10%,20%浓度的补阳还五汤药物血清干预,72 h后收集细胞及上清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清中TGF-βl的表达,采用实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)检测细胞中的TGF-βl蛋白基因的表达。结果:与模型组比较,阳性组和20%含药血清组,10%含药血清组肺纤维化大鼠成纤维细胞中TGF-β1的表达均有显著减少(P0.01),5%含药血清组细胞中TGF-β1的表达有减少趋势,3组不同浓度的补阳还五汤含药血清作用效果表现出一定的量效关系;与模型组比较,阳性组和20%含药血清组肺纤维化大鼠成纤维细胞中TGF-β1蛋白基因的表达均有显著减少(P0.01);10%含药血清组TGF-β1蛋白基因的表达减少(P0.05),5%含药血清组TGF-β1蛋白基因的表达有减少趋势,三组不同浓度的补阳还五汤含药血清作用效果表现出一定的量效关系。结论:补阳还五汤含药血清能够有效抑制TGF-βl及TGF-βl蛋白基因的表达,这可能是其防治肺纤维化作用的机制之一。     

脑力智宝提取物及其含药血清对PC12细胞缺氧损伤的保护作用

目的：研究脑力智宝对神经细胞缺氧损伤的影响。方法：采用血清药理学方法,体外培养PC12细胞,研究脑力智宝对连二亚硫酸钠引起PC12细胞缺氧损伤的影响。结果;脑力智宝可明显对抗缺氧引起的PC12细胞形态改变,降低LDH的漏出,增加细胞的存活率。结论：脑力智宝提取物及其含药血清对缺氧引起的PC12细胞损伤具有保护作用。     

补阳还五汤含药血清抗同型半胱氨酸致内皮细胞损伤的作用

目的:研究补阳还五汤含药血清对同型半胱氨酸(Hcy)致内皮细胞株(Eahy926)损伤的保护作用及其机制。方法:采用体外培养的内皮细胞株(Eahy926),测定不同的补阳还五汤含药血清对Hcy致内皮细胞活力的影响,检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)含量;ELISA法检测可溶性细胞间黏附分子(sICAM-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度;荧光显微镜检测核转录因子-κB(NF-κB)的激活及Western blotting法测I-κBα蛋白表达。结果:10%,20%的补阳还五汤含药血清均能明显提高Hcy损伤的内皮细胞的存活率、SOD[分别为(15.87±0.46),(16.31±0.96)U·mL-1]活力,与损伤组(11.44±1.00)U·mL-1相比,P<0.01;降低LDH的释放和MDA[分别为(1.62±0.06),(1.47±0.18)nmol·L-1)的含量,与损伤组(1.89±0.25)nmol·L-1)相比,P<0.05;以及细胞培养液中sICAM-1[分别为(0.93±0.11),(1.00±0.14)μg·L-1]和TNF-α[分别为(63.71±2.64),(66.22±4.43)ng·L-1]浓度,与损伤组(2.32±0.23)μg·L-1,(125.67±2.69)ng·L-1)相比,P<0.05;同时抑制内皮细胞中NF-κB的激活,上调I-κBα蛋白表达量。结论:补阳还五汤含药血清对同型半胱氨酸致内皮细胞损伤具保护作用,其保护作用机制可能与抑制NF-κB的活化有关。     

软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺氧损伤的保护作用

目的:研究软脉胶囊对神经细胞PC12缺氧损伤的影响.方法:采用血清药理学方法,研究软脉胶囊含药血清对连二亚硫酸钠引起的PC12细胞缺氧损伤的影响.结果:软脉胶囊可明显对抗缺氧引起的PC12细胞形态改变,降低LDH的漏出,增加细胞的存活率.结论:软脉胶囊含药血清对缺氧损伤引起的PC12细胞损伤具有保护作用.     

补阳还五汤血清药理学的方法学研究进展

中药血清药理学是近年来建立和发展的一种适合体外研究中药药理的新方法学，它为中药学的研究开辟了新的途径。综述了近几年国内应用血清药理学方法进行补阳还五汤的研究进展，旨在建立规范化的补阳还五汤血清药理学方法，推动血清药理学的发展与应用。     

补阳还五汤大鼠含药血清对肺成纤维细胞TGF-β1/Smad/ERK信号通路的影响

目的:观察补阳还五汤大鼠含药血清对博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺成纤维细胞中Smad3、Smad4、ERK1/2、p-ERK表达的影响。方法:含药血清的制备:24只SPF级SD大鼠,雄性,随机分为3组,即补阳还五汤水煎液组(简称补阳还五汤组,1 g生药/m L),强的松水溶液组(简称阳性组,5 mg/m L)和生理盐水组(简称模型组),每组8只,补阳还五汤组以9.24 g/(kg·d)(临床等效剂量)进行灌胃,阳性组及模型组以1 m L/100 g灌服相应溶液,1次/d,连续灌服7 d,采血前禁食12 h,于末次灌胃1 h后,腹主动脉取血,离心后分离血清,将收集到的补阳还五汤含药血清配制成含药血清浓度分别为5%、10%、20%的培养液备用;体外培养的肺成纤维细胞,分别加入含5%、10%、20%浓度的补阳还五汤药物血清干预,72 h后收集细胞及上清,采用Western blot检测细胞中Smad3、Smad4、ERK1/2、p-ERK蛋白的表达。结果:与模型组比较,20%含药血清组肺成纤维细胞中Smad3蛋白的表达显著减少(P<0.05),阳性组,10%和5%含药血清组Smad3蛋白表达有减少趋势;阳性组和不同浓度含药血清组肺成纤维细胞中Smad4蛋白表达有减少趋势;20%含药血清组肺成纤维细胞中ERK1/2蛋白有显著减少(P<0.05),阳性组,10%和5%补阳还五汤含药血清组肺成纤维细胞中ERK1/2蛋白有减少趋势;阳性组和不同浓度补阳还五汤含药血清组肺成纤维细胞中p-ERK蛋白均有减少趋势。结论:20%补阳还五汤含药血清能够有效抑制TGF-β1/Smad/ERK信号通路中关键细胞因子Smad3、ERK1/2蛋白的表达,从而发挥较好的抗肺纤维化作用。     

补阳还五汤对脑缺血大鼠神经功能及细胞形态的影响

目的:探讨补阳还五汤对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用。方法:189只大鼠随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤组,每组63只,常规饲养1周后,采用线栓法制备脑缺血大鼠模型。补阳还五汤组动物于术后2 h后开始给药,给药剂量为5 g.kg-1.d-1,每日ig 1次。各组又分为三个亚组即分别于给药后7,14,21 d 3个时间点处死动物,观察各组不同时间点的脑梗死面积、神经功能评分及脑组织形态学变化。结果:各时间点补阳还五汤组脑梗死面积明显小于同时相模型组,其神经功能评分也均较模型组,差异具有统计学意义(P<0.05);且补阳还五汤组海马和皮质细胞形态明显改善,细胞排列较模型组整齐。结论:补阳还五汤促进脑缺血损伤后神经恢复和组织修复,具有脑保护作用。     

黄芪甲苷抑制缺氧缺糖复氧复糖PC12细胞凋亡的研究

目的:研究黄芪甲苷对缺氧缺糖复氧复糖PC12细胞凋亡的抑制作用。方法:取对数期PC12细胞随机分为6组:正常对照组(Normal组)、黄芪甲苷溶剂对照组(DMSO组)、模型组(缺氧缺糖复氧复糖组,Model组)、黄芪甲苷高剂量组(AST H组,100μmol/L)、黄芪甲苷中剂量组(AST M组,50μmol/L)、黄芪甲苷低剂量组(AST L组,25μmol/L)。正常对照组正常培养不进行任何处理;其余各组均进行缺氧缺糖复氧复糖造模:缺氧缺糖4 h后复氧复糖24 h;黄芪甲苷各剂量组和溶剂对照组于造模前0.5 h给药,直至培养结束。用MTT方法检测细胞存活率,倒置显微镜下观察细胞的形态,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:与正常组相比,模型组细胞折光性差,细胞肿胀簇状聚集,甚至脱落,细胞之间的突触消失,细胞本身明显肿胀,存活率明显降低,细胞凋亡率增加(P0.05)。与模型组相比,溶剂对照组和黄芪甲苷低剂量组细胞形态无明显变化,存活率和凋亡率差异没有显著性(P0.05),但黄芪甲苷高、中剂量组细胞肿胀等变化明显减轻,存活率均增加,细胞凋亡率降低(P0.05)。黄芪甲苷高剂量组比中、低剂量组细胞存活率高和凋亡率低(P0.05)。结论:黄芪甲苷可抑制PC12细胞缺氧缺糖复氧复糖后的损伤和凋亡,其最佳作用浓度是100μmol/L。     

补阳还五汤对缺氧-复氧损伤内皮细胞的保护作用

目的探讨补阳还五汤(BHD)对缺氧-复氧损伤内皮细胞(ECV)的保护作用.方法体外培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,缺氧-复氧造成ECV损伤,同时加入不同剂量BHD,检测细胞丙二醛(MDA)、培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、内皮素-1(ET-1)及一氧化氮(NO)的含量变化.结果ECV304缺氧-复氧后,与空白组比较,LDH、MDA及ET-1含量显著升高(P＜0.01),而NO含量显著下降(P＜0.05).当加入低、中、高剂量的BHD或尼莫地平阳性对照药后,与缺氧-复氧模型组比较,LDH、MDA及ET-1含量下降(P＜0.01或P＜0.05),而NO含量升高(P＜0.01).结论BHD能抑制缺氧-复氧对ECV的损伤,对缺氧-复氧环境下的ECV起保护作用.     

补阳还五汤对大鼠脑微血管内皮细胞氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用

目的:建立体外血脑屏障模型,研究补阳还五汤对氧糖剥夺再灌注损伤状态下血脑屏障功能及紧密连接相关蛋白表达的影响。方法:分离培养原代大鼠脑微血管内皮细胞,建立体外血脑屏障氧糖剥夺再灌注损伤模型,将细胞分为空白组、模型组、补阳还五汤提取液处理组,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活性;采用转移小室(Transwell)检测牛血清白蛋白(BSA)的透过量;蛋白质印迹(Western blot)实验检测紧密连接蛋白闭合蛋白(Occludin)和紧密连接相关蛋白-1(ZO-1)的表达;利用实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)检测紧密连接蛋白Occludin,ZO-1 mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞活力降低,BSA的透过率明显升高,Occludin,ZO-1蛋白及其mRNA的表达量明显降低(P0.05);与模型组比较,补阳还五汤预处理后细胞存活性明显升高,BSA的透过率降低,Occludin,ZO-1蛋白及其mRNA的表达量明显升高(P0.05)。结论:补阳还五汤能够降低氧糖剥夺再灌注处理对体外血脑屏障模型的损伤,上调紧密连接蛋白ZO-1,Occludin蛋白及其mRNA的表达量。     

补阳还五汤对脑卒中后抑郁的影响

目的探讨补阳还五汤对脑卒中后抑郁的影响。方法选取我院脑病科住院部收治的脑卒中后抑郁患者117例,采用随机数字表法将患者分为观察组与对照组。两组均给予基础治疗,对照组58例采用氟哌噻吨美利曲辛片,观察组59例在对照组基础上采用补阳还五汤治疗,比较两组患者临床疗效的差异。结果观察组治疗有效率100.00%明显高于对照组的70.69%,治疗后观察组患者HAMD评分明显低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论补阳还五汤治疗脑卒中后抑郁患者的临床疗效显著,值得临床推广应用。     

补阳还五汤治疗糖尿病周围神经病变的Meta分析

目的 :运用Meta分析方法评价补阳还五汤治疗糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy,DPN)的临床疗效。方法:检索中国知网、万方、维普等数据库中应用补阳还五汤治疗糖尿病周围神经病变的随机对照临床试验文献,筛选合格研究,应用Meta分析方法分析统计相关数据,获得相对可靠的临床疗效证据。结果:27篇文献符合纳入标准,Meta分析显示,补阳还五汤(包括补阳还五汤联合西药)治疗DPN的疗效与西药组比较差异有统计学意义[OR=5.95,95%CI=(4.76,7.45),Z=15.59,P0.000 01];单纯补阳还五汤治疗DPN的疗效与西药组比较差异有统计学意义[OR=7.00,95%CI=(5.15,9.52),Z=12.40,P0.000 01]。结论:补阳还五汤或补阳还五汤联合西药治疗DPN的疗效优于单纯西药组,但由于原始研究质量较低,结果可能存在局限性。     

补阳还五汤对冠心病患者血液流变性的影响

目的:观察补阳还五汤对冠心病患者血液流变性的影响.方法:72例患者随机分为对照组和观察组各36例.对照组采用常规治疗,观察组在常规治疗基础上加用补阳还五汤治疗.治疗1个月后,观察两组治疗前后临床症状及血液流变学指标变化.结果:观察组加用补阳还五汤治疗1个月后临床症状有明显好转(P＜0.05),血液流变学多项指标有明显降低(P＜0.05),效果优于对照组(P＜0.05).结论:补阳还五汤可改善冠心病患者临床症状和血液流变学各项指标,有助于冠心病的治疗.     

补阳还五汤加减联合依达拉奉治疗脑梗死的临床研究

目的 观察补阳还五汤加减联合依达拉奉治疗脑梗死的临床疗效.方法 选择急性脑梗死患者130例,随机分为治疗组和对照组.对照组予依达拉奉加复方丹参静脉输注,治疗组予依达拉奉联合补阳还五汤加减治疗.结果 治疗组与对照组总有效率分别为93.85%和81.54%,两组比较有统计学意义（P〈0.05）.治疗组治疗后14 d、21 d神经功能缺损评分量表（NIHSS）评分与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 补阳还五汤加减联合依达拉奉治疗急性脑梗死,对脑组织有显著保护作用.     

星蒌承气汤和补阳还五汤对脑缺血大鼠海马神经元损伤的影响

目的:通过观察和比较星萎承气汤和补阳还五汤对脑缺血大鼠海马神经元的保护作用,明确两方治疗脑缺血的时相性特点.方法:大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、星蒌承气汤和补阳还五汤组;线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞;大鼠给药剂量为尼莫地平10.8 mg·kg-1、星蒌承气汤5.0 g·kg-1、补阳还五汤13.0 g·kg-1,造模前4d灌胃用药,脑缺血术后每天用药1次;大鼠分别于1,3,7d进行神经功能评分后取脑,测定脑组织含水量和脑梗死面积,观察海马神经元密度和病理损伤.结果:模型组大鼠神经功能明显降低(18.00±0.00 vs 7.43±1.27,8.86±1.34,10.25±1.03)、脑组织含水量增多(71.00±1.33)％ vs (79.85±1.73)％,( so.84±0.98)％,(82.86±1.15)％、脑梗死面积增大(0.00±0.00)％vs(16.73±1.13)％,(17.89±1.54)％,(19.32±1.21)％、海马神经元密度减小(153.57±15.62,118.71±9.98,79.38±6.02)、脑组织病理损伤加重;各用药组的神经功能、脑含水量、神经元密度和脑组织病理损伤均较模型组改善,尼莫地平组3d和7d、各中药组的脑梗死面积较模型组减小;与尼莫地平组比较,补阳还五汤各组的神经评分增高,7d的脑含水量减少、病理损伤减轻,两方药组的海马神经元密度增大;补阳还五汤组7d的神经功能(13.29±1.11)、脑含水量(77.94±2.00)％、海马神经元密度(124.29±11.64)、脑组织病理损伤均较星蒌承气汤改善明显.结论:星蒌承气汤和补阳还五汤对脑缺血海马神经元受损均具有保护作用,二者在缺血早期(1d和3d)的作用未见明显差异,但随着缺血时间的延长(7 d),补阳还五汤方显示出更为全面和显著的神经保护和功能修复作用.