艾灸对寒凝血瘀型痛经大鼠子宫香草酸受体相关蛋白的影响

目的:观察艾灸神阙穴对寒凝血瘀型痛经大鼠子宫香草酸受体相关蛋白(TRPV2)表达的影响,并部分阐释其效应机制。方法:将30只雌性Wistar大鼠随机分为3组:对照组、模型组、艾条灸脐组,每组10只。模型组与艾条灸脐组构建寒凝血瘀型痛经模型,艾条灸脐组造模后给予相应治疗。观察评估各组大鼠扭体反应情况,采用免疫荧光、Western Blot、Realtime-PCR技术,检测各组大鼠子宫TRPV2在蛋白水平及mRNA水平的表达。结果:模型组大鼠扭体潜伏期明显低于对照组(P0.01)、扭体次数明显高于对照组(P0.01),艾条灸脐组大鼠扭体潜伏期明显高于模型组(P0.01)、且与对照组无差异(P0.05),扭体次数明显低于模型组(P0.01)。模型组大鼠子宫TRPV2蛋白水平及mRNA水平表达量均明显高于对照组(P0.01),艾条灸脐组大鼠子宫TRPV2蛋白水平及mRNA水平表达量均明显低于模型组(P0.05或P0.01)。结论:艾灸通过下调子宫组织TRPV2蛋白及mRNA水平的病理性高表达而对寒凝血瘀型原发性痛经有效镇痛;通过调节肥大细胞生物功能而达到镇痛效应可能是其分子机制之一。     

脐疗对寒凝血瘀型痛经大鼠扭体反应及神阙穴区TRPV1的影响

目的观察脐疗对寒凝血瘀型痛经大鼠扭体反应及神阙穴区TRPV1表达的影响,初步探索脐疗效应与神阙穴区的关系及启动机制。方法将50只雌性大鼠随机分为正常对照组、模型组、药物贴脐组、隔药灸脐组、艾条灸脐组,每组各10只。除正常对照组外,其余各组均构建寒凝血瘀型痛经模型,并给予相应的治疗。记录各组大鼠扭体反应情况,通过免疫荧光法、实时荧光定量PCR技术检测各组大鼠神阙穴区TRPV1的表达。结果与模型组比较,脐疗组的扭体潜伏期明显延长(P 0. 01),扭体次数明显减少(P 0. 01),扭体评分降低(P 0. 05或P 0. 01),隔药灸脐组在延长扭体潜伏期、减少扭体次数及降低扭体评分方面优于药物贴脐组与艾条灸脐组(P 0. 05或P 0. 01);模型组TRPV1mRNA表达较正常对照组明显升高(P 0. 01);治疗后隔药灸脐组与艾条灸脐组TRPV1mRNA表达较模型组均明显升高(P 0. 01);对TRPV1mRNA表达的调节作用,艾条灸脐组与隔药灸脐组优于药物贴脐组(P 0. 01)。结论 3种脐疗法均能缓解寒凝血瘀型痛经大鼠的扭体反应,隔药灸脐法作用最优;脐疗通过上调寒凝血瘀型痛经大鼠神阙穴区TRPV1mRNA的表达以激活腧穴功能,诱导神阙信息启动;隔药灸脐法与艾条灸脐法对神阙的激活作用优于药物贴脐法。     

不同艾灸量对寒凝证类痛经大鼠疼痛反应及脊髓内μ受体mRNA表达的影响

目的:观察不同刺激量艾灸关元穴对寒凝证类痛经大鼠扭体反应及脊髓内μ受体表达的影响,探讨不同灸量的镇痛效应及其部分中枢机制。方法:按随机数字表法将60只雌性SD大鼠,随机分为盐水组、寒凝证类痛经模型组、A组(艾灸1壮)、B组(艾灸3壮),每组15只。除盐水组外,其它各组采用全身冷冻法结合苯甲酸雌二醇注射液加缩宫素注射法制备寒凝证类痛经大鼠模型,A组和B组以不同灸量艾灸关元穴。观察大鼠扭体反应,并以荧光定量PCR(RT-PCR)法测定脊髓内μ受体mRNA的表达水平。结果:(1)扭体反应:与盐水组比较,模型组、B组扭体潜伏期缩短、扭体次数、扭体评分明显增高(P<0.05)。与模型组比较,A组、B组扭体次数、扭体评分明显减少(P<0.05)。(2)脊髓μ受体mRNA的表达:与盐水组比较,A组与B组的表达均增强(P<0.01),与模型组相比,A组与B组的表达增强(P<0.01)结论:(1)不同艾灸量施予关元穴对寒凝证类痛经大鼠模型均有镇痛作用。(2)艾灸产生镇痛效应的部分机制可能通过增强寒凝证类痛经模型大鼠脊髓内阿片受体的表达产生镇痛效应。     

脐疗对寒凝血瘀型痛经大鼠神阙穴区肥大细胞的影响

目的观察脐疗对寒凝血瘀型痛经模型大鼠神阙穴区肥大细胞数目及脱颗粒率的影响,部分阐释其效应机制。方法将50只雌性Wistar大鼠随机分为5组:空白组、模型组、隔药灸脐组、药物敷贴组、艾条灸脐组。除空白组外均构建寒凝血瘀型痛经模型,各治疗组分别给予相应治疗。采用改良甲苯胺蓝染色法、免疫荧光技术,检测各组大鼠神阙穴区肥大细胞数目及脱颗粒率。结果寒凝血瘀型痛经模型组大鼠神阙穴区肥大细胞数目及脱颗粒率与空白组大鼠无差异(P0.05)。脐疗组(隔药灸脐组、药物敷贴组和艾条灸脐组)神阙穴区肥大细胞数目均高于模型组和空白组(P0.05),三脐疗组间无差异(P0.05);隔药灸脐组肥大细胞脱颗粒率高于艾条灸脐组(P0.01)和药物敷贴组(P0.01),艾条灸脐组高于药物敷贴组(P0.05)。结论脐疗能够通过升高寒凝血瘀型痛经模型大鼠神阙穴区肥大细胞数目并促进其脱颗粒而达到治疗目的,其中隔药灸脐法效果最明显。     

艾灸不同穴位对寒凝证类痛经大鼠疼痛反应及中枢内κ受体mRNA表达的影响

目的:观察艾灸关元、三阴交穴对寒凝证类痛经大鼠扭体反应和脊髓、中脑的κ受体的影响,旨在初步探讨艾灸不同穴位对寒凝证类痛经大鼠镇痛效应的差异及可能的中枢机制。方法:将处于动情间期3月龄的SD雌性大鼠36只,随机分为盐水组、寒凝类痛经组、艾灸三阴交组和艾灸关元组,每组9只。除盐水组外,寒凝类痛经组、三阴交组和关元组采用全身冷冻法结合苯甲酸雌二醇注射法造模。盐水组和寒凝类痛经组不予艾灸,三阴交组在造模第6天、第8天注射苯甲酸雌二醇后及在第10天注射缩宫素后,在大鼠三阴交穴(双侧)予以艾柱施灸,每次灸3壮。关元组灸治方法与之相同。观察大鼠的扭体反应,并测定大鼠脊髓、中脑的κ受体的表达水平。结果:1与盐水组比较,寒凝类痛经组扭体潜伏期明显缩短,扭体次数、扭体评分明显增高(P<0.01)。与寒凝类痛经组比较,关元组扭体次数、扭体评分明显减少(P<0.01);与三阴交组比较,关元组扭体次数、扭体评分明显减少(P<0.05)。结论:1艾灸可明显减轻大鼠的类痛经反应,缓解子宫痉挛性收缩。2初步证实了艾灸不同穴位与镇痛效应差异具有相关性。     

肥大细胞功能对针刺大鼠"足三里"镇痛效应的影响

目的:观察穴位肥大细胞与针刺效应之间的关系。方法:SD大鼠48只,随机分为正常对照组、穴位针刺组、旁开针刺组、色甘酸钠组、生理盐水组、色甘酸钠 针刺组、生理盐水 针刺组和色甘酸钠 对侧针刺组。采用大鼠尾部痛阈作为效应指标,在体观察针刺“足三里”提插捻转30 min过程中大鼠的甩尾潜伏期;并通过穴位组织切片染色,离体对照针刺前后穴位处局部肥大细胞脱颗粒率的变化,以及色甘酸钠注射对其的影响。结果:手针大鼠“足三里”穴具有显著镇痛作用,效果明显优于针刺旁开对照点;而在色甘酸钠屏蔽穴位肥大细胞的脱颗粒功能后,这种镇痛作用被明显地削弱。针刺后穴位处局部肥大细胞脱颗粒率显著提高;而注射色甘酸钠可以明显减少该脱颗粒现象。结论:穴位组织中的肥大细胞在针刺镇痛效应的产生过程中起着重要作用,肥大细胞脱颗粒参与了针刺镇痛效应的产生过程。     

艾灸对痛经大鼠子宫组织内皮素和一氧化氮的影响

目的探讨艾灸治疗原发性痛经镇痛的作用机制。方法采用乙烯雌酚所致大鼠子宫痛经症模型,以针刺作对照,分别测定子宫内皮素(ET-1)和一氧化氮(NO)的变化。结果艾灸能明显抑制催产素诱发大鼠扭体反应次数(P<0.01),具有镇痛作用;模型组大鼠子宫NO的含量降低,与正常组比较差异显著(P<0.01);经艾灸治疗后,子宫组织ET-1含量降低,而NO含量有所升高,与模型组比较差异显著(P<0.01);艾灸组与针刺组比较差异显著(P<0.01)。结论提示艾灸能对抗催产素所致的大鼠扭体反应,其临床治疗痛经症的作用可能与调节子宫组织中ET-1、NO活性有关。     

艾灸三阴交、关元对寒凝证类痛经大鼠子宫收缩强度和OTR的影响

目的:观察艾灸三阴交、关元穴对寒凝证类痛经大鼠子宫收缩强度及子宫中缩宫素受体(OTR)的影响,旨在初步探讨艾灸不同穴位对寒凝证类痛经大鼠镇痛效应的差异及可能的分子响应机制。方法:将处于动情间期3月龄的SD雌性大鼠40只,随机分为盐水组、寒凝类痛经组、三阴交组和关元组,每组10只。除盐水组外,寒凝类痛经组、三阴交组和关元组采用全身冷冻法结合苯甲酸雌二醇注射法造模。盐水组和寒凝类痛经组不予艾灸,三阴交组在造模第6天、第8天注射苯甲酸雌二醇后及在第10天注射缩宫素后,在大鼠三阴交穴(双侧)予以艾柱施灸,每次灸3壮。关元组灸治方法与之相同。运用BL-420E+生物机能实验系统检测在体大鼠子宫收缩强度,并用RT-PCR法测定大鼠子宫中OTR的表达水平。结果:1.与盐水组比较,寒凝类痛经组子宫收缩强度明显增强(P0.01);与寒凝类痛经组比较,两艾灸组均显著减少了子宫收缩波个数(P0.01),且降低了子宫活动度(P0.05)。2.与盐水组比较,寒凝类痛经组子宫OTR的峰值增高(P0.01);与寒凝类痛经组比较,三阴交组和关元组子宫OTR的峰值、均值、泳道值均显著降低(P0.01)。结论:(1)艾灸可明显减轻大鼠的类痛经反应,缓解子宫痉挛性收缩。(2)本实验结果显示两穴镇痛效应未见明显差异。     

脐疗对寒凝血瘀型痛经大鼠子宫肥大细胞的影响

目的:观察脐疗对寒凝血瘀型痛经模型大鼠子宫肥大细胞数目及脱颗粒率的影响,部分阐释其效应机制。方法:将50只雌性Wistar大鼠随机分为5组:空白组、模型组、隔药灸脐组、药物敷贴组、艾条灸脐组。除空白组外均构建寒凝血瘀型痛经模型,各治疗组分别给予相应治疗。采用改良甲苯胺蓝染色法、免疫荧光技术,检测各组大鼠子宫肥大细胞数目及脱颗粒率。结果:寒凝血瘀型痛经模型组大鼠子宫肥大细胞数目及脱颗粒率均高于空白组大鼠(P0.01)。治疗后子宫肥大细胞数目:隔药灸脐组、艾条灸脐组均低于模型组(P0.01),隔药灸脐组、艾条灸脐组均低于药物敷贴组(P0.01),隔药灸脐组低于艾条灸脐组(P0.05)。治疗后子宫肥大细胞脱颗粒率:隔药灸脐组低于模型组(P0.01),艾条灸脐组低于模型组(P0.05),隔药灸脐组低于药物敷贴组(P0.01)。结论:隔药灸脐法、艾条灸脐法均能通过抑制寒凝血瘀型痛经大鼠子宫肥大细胞的活化而达到治疗目的,其中隔药灸脐法疗效最明显。     

艾灸对炎症性肠病大鼠结肠黏膜肥大细胞和TRPV1的影响

目的:观察艾灸对炎症性肠病大鼠结肠肥大细胞和TRPV1的影响,探讨肥大细胞和TRPV1在艾灸治疗炎症性肠病中的作用机制。方法:将40只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、西药组,每组10只。采用TNBs建立炎症性肠病大鼠模型,艾灸组给予天枢穴温和灸治疗,造模10 d后,收集标本.对大鼠行结肠大体形态评分及组织学损伤评分,分别用免疫组织化学法检测大鼠结肠黏膜中TRPV1的表达,采用改良甲苯胺蓝染色和计算机图像处理技术观察各组大鼠结肠肥大细胞形态和功能变化。结果:与正常组相比,艾灸组、模型组、西药组结肠组织学损伤评分均显著增高(P<0.01);而与模型组相比,艾灸组能显著改善组织学损伤评分(P<0.05)。模型组大鼠结肠黏膜肥大细胞脱颗粒率、TRPV1表达水平明显高于正常组(P<0.01);艾灸组结肠黏膜肥大细胞脱颗粒率、TRPV1表达与模型组相比显著降低(P<0.05)。结论:艾灸能够显著改善炎症性肠病大鼠结肠损伤及炎症反应,这可能与其有效抑制结肠黏膜肥大细胞脱颗粒、下调TRPV1的表达有关。     

丁桂儿脐贴治疗寒凝血瘀型痛经的实验研究

目的：研究丁桂儿脐贴治疗寒凝血瘀型原发性痛经的药效学作用。方法：观察药物对催产素诱发大鼠痛经模型的影响；药物对大鼠离体子宫平滑肌收缩的影响及时催产素所致大鼠离体子宫剧烈收缩的影响；药物对寒凝血瘀型大鼠血液流变学指标的影响。结果：丁桂儿脐贴能明显减少痛经模型大鼠30min内扭体次数，延长扭体潜伏期；能强烈对抗大鼠离体子宫平滑肌正常收缩和催产素所致离体子宫剧烈收缩；与模型组相比，明显降低大鼠的红细胞聚集指数、红细胞电泳指数和全血黏度（P〈0．01或P〈0．05）。结论：中药丁桂儿脐贴能明显抑制大鼠子宫平滑肌收缩从而缓解动物实验性痛经，具有一定的镇痛作用，并能够有效改善湿寒所致的寒凝血瘀症状，可用于临床治疗寒凝血瘀型原发性痛经。     

艾灸“大肠俞”对大鼠内脏痛敏及骨髓细胞瞬时感受器电位香草酸受体亚型1表达的影响

目的:运用大鼠新生期结直肠扩张(CRD)形成成年内脏痛敏模型,探讨内脏痛敏及艾灸疗效与骨髓细胞瞬时感受器电位香草酸受体亚型(TRPV)1表达之间的关系。方法:新生SD雄性大鼠自出生8d后进行CRD刺激建立内脏痛敏模型。8周后对模型组和对照组进行"大肠俞"模拟热敏灸,灸前后CRD刺激,记录腹部撤回反射(AWR)评分及测定痛阈值,结束后90min内取各组大鼠骨髓细胞运用RT-PCR测TRPV 1mRNA表达。结果:①模型组AWR评分明显高于对照组(P<0.01),痛阈明显低于对照组(P<0.01)。②模型组艾灸后的AWR评分明显低于艾灸前(P<0.05,P<0.01),痛阈明显高于艾灸前(P<0.01)。对照组艾灸后40、60、80mmHg的AWR评分明显低于艾灸前(P<0.01),痛阈明显高于艾灸前(P<0.05)。③对照组TRPV 1mRNA相对表达量较低(0.655±0.400),艾灸对照组TRPV 1mRNA相对表达量降低(0.551±0.257,P>0.05),艾灸模型组TRPV 1mRNA相对表达量(2.423±2.730)较对照组、艾灸对照组略高(P>0.05),模型组TRPV 1mRNA相对表达量(6.550±2.308)明显高于对照组、艾灸对照组、艾灸模型组(P<0.01)。结论:新生期CRD可形成内脏痛敏,骨髓细胞TRPV 1mRNA表达明显增加。艾灸"大肠俞"明显减轻内脏痛敏,可减少骨髓细胞TRPV 1mRNA表达。     

EFFECTS OF MOXIBUSTION STIMULATION ON ZUSANLI POINT ON LOCAL MAST CELL ACTIVITY AND PERIPHERAL NERVE DISCHARGE

Objective: It is demonstrated that increased mast cell degranulation is analgesic.Moxibustion may affect mast cell degranulation and has analgesic effect.Methods: Thirty-six male SD rats(n=6) were randomly divided into control group, moxibustion group, moxibustion+cromolyn sodium group(point area antagonistic mast cells), model group, model+moxibustion group, and model+moxibustion+cromolyn sodium group.Animals were anesthetized, and the left Zusanli point area sciatic nerve was separated.Duration of moxibustion stimulation of Zusanli point lasted 15 min.Signal discharging evoked by nerve stimulation was recorded.Results: Compared with the model group, sciatic nerve discharge activity in the moxibustion group was increased, while mast cell degranulation of the moxibustion group was significantly higher.Conclusion: Moxibustion stimulation on Zusanli acupoint can induce peripheral nerve bundles discharge; acupoint injection of cromolyn can inhibit mast cell degranulation.     

香砂六君子汤加味结合温针灸治疗原发性痛经寒凝血瘀型临床观察

目的:观察香砂六君子汤加味联合温针灸治疗原发性痛经寒凝血瘀型的效果。方法:86例根据抽签法分为对照组42例和观察组44例。两组均用温针灸治疗,观察组加用香砂六君子汤加味治疗。结果:治疗3个月后,总有效率观察组高于对照组(P<0.05);观察组VAS评分和CMSS评分均低于对照组(P<0.05)。结论:香砂六君子汤加味联合温针灸治疗原发性痛经寒凝血瘀型效果较好。     

痛经Ⅱ号方治疗寒凝血瘀型痛经临床研究

目的观察痛经Ⅱ号方口服结合外敷方敷脐治疗寒凝血瘀型痛经的临床疗效。方法将70例寒凝血瘀型痛经患者随机分为治疗组和对照组,各35例;治疗组采用痛经Ⅱ号方口服结合中药敷脐,对照组口服月月舒痛经宝颗粒,治疗3个月经周期。观察两组临床疗效、痛经症状评分和疼痛VAS评分变化情况。结果治疗组总有效率为94.29%,对照组为85.71%（P〈0.05）;治疗后两组痛经症状积分、VAS积分均较治疗前明显降低（P〈0.05）,且治疗组均低于对照组（P〈0.05）。结论痛经Ⅱ号方治疗寒凝血瘀型痛经疗效显著。     

艾条灸配合神灯照射治疗痛经

引起痛经原因很多,根据痛经的病理实质为气血运行不畅,胞脉受阻,经脉不通所致。笔者采用艾条灸至阴穴以温通经脉,暖宫散寒;神灯照射下腹部任脉经以消炎、消肿、活血化瘀、止痛为治疗痛经原则。本法对虚寒性痛经及寒湿凝滞型,阳虚内寒型痛经,疗效比较满意,对气滞血瘀型也有一定疗效。     

少腹逐瘀汤对寒凝血瘀型原发性痛经大鼠活血作用研究

[目的]以少腹逐瘀汤全方及其中活血化瘀、温经止痛组分为研究对象,考察少腹逐瘀汤组方配伍对寒凝血瘀型原发性痛经大鼠的活血作用。[方法]制备寒凝血瘀型原发性痛经大鼠模型,分为空白组、模型组、阿司匹林组、少腹逐瘀汤全方组(全方组)、少腹逐瘀汤活血化瘀组(活血组)、少腹逐瘀汤温经止痛组(温经组),连续给药7 d,检测各组大鼠子宫血流量、血液流变学(血浆黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数、红细胞电泳指数、红细胞变形指数)、凝血功能[凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)]、血栓素(TXA2)、前列环素(PGI2)水平,评价组方配伍的合理性。[结果]与模型组比较,全方组、活血组、温经组大鼠子宫血流量显著降低,血浆黏度、红细胞压积、红细胞聚集指数、红细胞电泳指数、红细胞变形指数均降低,PT、TT、APTT均延长,FIB降低,TXA2降低,PGI2升高。[结论]少腹逐瘀汤对寒凝血瘀型原发性痛经大鼠有显著的治疗作用,活血组分和温经组分有显著的协同作用。     

益母草治疗寒凝血瘀型痛经的网络药理学作用机制研究

目的构建益母草Leonurus japonicus化学成分-疾病靶点-代谢信号通路网络,探究益母草多成分-多靶点-多通路治疗寒凝血瘀型痛经的作用机制。方法利用TCMSP数据库与Swiss Target Prediction服务器获取益母草的化学成分与作用靶点,结合DrugBank、DisGeNET、TTD等数据库获取益母草治疗寒凝血瘀型痛经的作用靶点;通过DAVID网站对作用靶点进行GO功能富集分析和KEGG通路分析,采用Cytoscape 3.6.0构建益母草活性成分-痛经作用靶点-代谢信号通路网络图,探讨益母草治疗寒凝血瘀型痛经的作用机制;并进一步采用Westernblotting实验验证益母草对寒凝血瘀型痛经模型大鼠子宫组织中花生四烯酸代谢通路环氧化酶1(PTGS1)、PTGS2蛋白表达的影响。结果获得益母草潜在活性成分共8个,与痛经相关疾病靶点22个,关键靶点涉及PTGS1、PTGS2、ALOX5、PLAG2A、AKR1C3等。GO功能富集分析共得到GO条目71个(P0.05),其中生物过程(BP)条目46个,细胞组成(CC)条目4个,分子功能(MF)条目21个。益母草治疗痛经可能作用靶标22个,KEGG通路富集筛选得到7条信号通路(P0.05),涉及花生四烯酸代谢、亚油酸代谢、甾类激素生物合成等;益母草可显著提高模型大鼠子宫中PTGS1、PTGS2蛋白表达水平(P0.05),验证了网络药理学的部分预测结果。结论益母草可能通过作用于花生四烯酸代谢通路起到治疗寒凝血瘀型痛经的作用。     

艾条灸配合神灯照射治疗痛经

引起痛经原因很多,根据痛经的病理实质为气血运行不畅,胞脉受阻,经脉不通所致。笔者采用艾条灸至阴穴以温通经脉,暖宫散寒;神灯照射下腹部任脉经以消炎、消肿、活血化瘀、止痛为治疗痛经原则。本法对虚寒性痛经及寒湿凝滞型,阳虚内寒型痛经,疗效比较满意,对气滞血瘀型也有一定疗效。     

加味九分散对痛风性关节炎大鼠TRPV1表达的影响

目的通过观察加味九分散对痛风性关节炎大鼠瞬时电位感受器香草酸受体1(TRPV1)表达的影响,探讨加味九分散的止痛机制。方法将SD雄性大鼠随机分为4组:空白对照组、模型组、扶他林乳胶剂组、加味九分散外敷组。模型组、扶他林乳胶剂组和加味九分散外敷组造痛风性关节炎模型。扶他林乳胶剂组合加味九分散组给药48 h后取大鼠关节囊及关节周围皮肤提取蛋白,观察TRPV1通道蛋白表达。结果造模组关节局部皮肤及关节囊TRPV1表达明显增高,扶他林乳胶剂组和加味九分散外敷组关节皮肤及关节囊TRPV1表达较造模组明显减少。结论加味九分散通过减少痛风关节炎大鼠关节局部TRPV1蛋白表达起到止痛作用。