慢性阻塞性肺疾病肺脾气虚证大鼠模型的建立及评价

目的 建立并评价慢性阻塞性肺疾病（COPD）肺脾气虚病证结合模型。方法 采用“香烟烟熏法+脂多糖（LPS）气管滴注联合番泻叶浸液灌胃”构建COPD肺脾气虚证大鼠模型。将40只SPF级SD雄性大鼠随机分成空白组、模型组、番泻叶低、中、高剂量病证结合模型组，共5组。除空白组外各组均每日烟熏，并于第1天、第14天气管内滴注LPS。番泻叶低、中、高剂量病证结合模型组在造模第28天予4 ℃不同剂量番泻叶浸液（5、10、20 g·kg^-1）灌胃3周，造模共49 d。采集宏观指标：一般情况（体质量、摄食量、粪便含水量、肛温）及行为学指标（抓力测试、鼠尾悬挂实验）。测定肺功能，肺组织病理，血清D-木糖、淀粉酶、胃泌素含量，肺泡灌洗液白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）水平，外周血T淋巴细胞亚群（CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺）水平，计算胸腺指数、脾指数。结果 一般情况方面，番泻叶高剂量组大鼠死亡2只。与空白组比较，番泻叶中、高剂量组体质量、摄食量均显著降低（P<0.01），粪便含水量显著升高（P<0.01），番泻叶高剂量组肛温较空白组显著降低（P<0.01）。行为学指标方面，与空白组比较，各造模组大鼠抓力均显著降低（P<0.01）；番泻叶中、高剂量组静止不动时间明显增加（P<0.05，P<0.01）。肺功能方面，与空白组比较，各造模组大鼠第0.3秒用力呼气容积（FEV_0.3）、FEV_0.3/用力肺活量（FVC）均显著降低（P<0.01）。肺组织苏木素-伊红（HE）染色可见各造模组大鼠支气管壁增厚，杯状细胞增生，部分肺泡融合呈肺气肿改变。胃肠功能指标方面，与空白组比较，番泻叶中、高剂量组D-木糖、胃泌素、α-淀粉酶水平均显著降低（P<0.01）。免疫炎症指标方面，与空白组比较，番泻叶中、高剂量组脾、胸腺指数均显著减小（P<0.01），各造模组大鼠外周血CD4⁺水平均显著降低（P<0.01），CD4⁺/CD8⁺明显下降（P<0.05，P<0.01），肺泡灌洗液IL-1β、IL-6显著升高（P<0.01）。结论 利用香烟烟熏加LPS气管滴注同时联合番泻叶灌胃能够成功建立COPD肺脾气虚病证结合模型。结合宏观及微观评价，推荐番泻叶浸液剂量10 g·kg^-1（番泻叶中剂量组）作为COPD肺脾气虚病证结合模型造模灌胃浓度。     

金匮肾气丸通过AMPK/mTOR途径抑制肺组织细胞凋亡和自噬在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用

[目的] 探究金匮肾气丸对慢性阻塞性肺疾病（COPD）的作用及其可能的作用机制。[方法] 40只SD大鼠随机分为空白对照组、COPD组、金匮肾气丸3.7 g/kg组、金匮肾气丸7.4 g/kg组和地塞米松组,每组各8只。除空白对照组外,其余组大鼠采用烟熏联合气管内滴注脂多糖（LPS）法建立COPD大鼠模型。各组给予相应药处理AniRes2005动物肺功能分析系统检测大鼠肺功能;酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒检测白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-17（IL-17）水平;苏木精-伊红（HE）染色检测肺组织病理学变化;TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡;蛋白质免疫印迹（Western blot）检测自噬及磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）途径相关蛋白的表达。[结果] 与空白对照组相比,COPD组大鼠肺功能降低,IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-17水平明显升高（P<0.05）,炎症评分、细胞凋亡率和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,p62和p-mTOR/mTOR蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与COPD组相比,金匮肾气丸3.7 g/kg组、金匮肾气丸7.4 g/kg组和地塞米松组大鼠肺功能升高,IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-17水平明显降低（P<0.05）,炎症评分、细胞凋亡率和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,p62和p-mTOR/mTOR蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。[结论] 金匮肾气丸可能通过AMPK/mTOR途径抑制肺组织细胞凋亡和自噬,延缓大鼠慢性阻塞性肺疾病进展。     

4种归肺经中药对肺热证小鼠TNF-α,IL-1β表达的影响

目的：探讨麻黄、干姜、黄芩、桑白皮4味归肺经中药对小鼠肺热证的影响,并初步揭示其作用机制。方法：将100只昆明种小鼠随机分为正常对照组,模型组,麻黄、干姜、黄芩、桑白皮组（20,10 g·kg^-1）,每组10只,灌胃给药7 d,每天1次,于实验第4,5,6天鼻腔滴入肺炎链球菌菌液建立小鼠肺热证模型,病理学观察肺组织形态变化,酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量,免疫组化法测定肺组织TNF-α,白介素-1β（IL-1β）蛋白表达。结果：与正常组比较,模型组肺组织实变（P<0.001）,血清TNF-α含量升高（P<0.01）,肺组织TNF-α,IL-1β蛋白表达升高（P<0.01）。与模型组比较,麻黄低剂量组,干姜高、低剂量组,黄芩高剂量组肺组织病理有明显改善（P<0.01,P<0.05）;血清TNF-α含量降低,除干姜高剂量组、黄芩低剂量组,其余各组差异均有统计学意义（P<0.01或P<0.05）;肺组织TNF-α,IL-1β蛋白表达降低,其中,TNF-α表达除干姜低剂量组、桑白皮高剂量组,其余各组差异均有统计学意义（P<0.01或P<0.05）,IL-1β表达除麻黄低剂量组、桑白皮低剂量组,其余各组差异均有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。结论：麻黄、干姜、黄芩、桑白皮可以干预肺热证,抑制TNF-α,IL-1β炎症因子表达可能是其减轻小鼠肺热证肺组织损伤的主要途径。     

肺肠合治法对支气管哮喘小鼠血管活性肠肽和p38 MAPK信号通路的影响

目的 观察中医治疗肺系疾病的常用治法肺肠合治法对支气管哮喘小鼠的治疗作用,进一步检测与哮喘发病机制密切相关的血管活性肠肽（VIP）和p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信号通路相关蛋白的变化,以阐明肺肠合治法治疗支气管哮喘的作用机制。方法 将60只昆明种小鼠随机选12只作为正常组。其余小鼠通过卵清蛋白致敏复制小鼠支气管哮喘模型。分为正常组、模型组、地塞米松组（0.5 mg·kg^-1·d^-1）、中药治肺组（2.73 g·kg^-1·d^-1）、肺肠合治组（6.825 g·kg^-1·d^-1）,灌胃30 d后取血清及肺组织样本。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组小鼠血清中VIP、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）法检测各组小鼠肺组织中TNF-α、IL-6、p38 MAPK mRNA的表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠肺组织中TNF-α、IL-6、p38 MAPK,磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）蛋白的表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠血清VIP含量明显降低（P<0.05）,TNF-α、IL-6含量明显升高（P<0.05）,肺组织TNF-α、IL-6、p38 MAPK mRNA和TNF-α、IL-6、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白相对表达量明显升高（P<0.05）;与模型组比较,各治疗组小鼠血清VIP含量明显升高（P<0.05）,TNF-α、IL-6含量明显升高（P<0.05）,肺组织TNF-α、IL-6、p38 MAPK mRNA和TNF-α、IL-6、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白相对表达量明显降低（P<0.05）;与肺肠合治组比较,地塞米松组小鼠血清TNF-α、IL-6明显增高（P<0.05）,肺组织TNF-α、IL-6 mRNA和TNF-α、IL-6蛋白相对表达量明显降低（P<0.05）,肺组织p38 MAPK、VIP mRNA和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白相对表达量明显升高（P<0.05）,中药治肺组小鼠血清VIP、TNF-α、IL-6明显降低（P<0.05）,肺组织TNF-α、IL-6、p38 MAPK mRNA和TNF-α、IL-6、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白相对表达量均明显升高（P<0.05）,肺组织VIP mRNA表达水平明显降低（P<0.05）。结论 肺肠合治法可以增加内源性VIP,抑制p38 MAPK信号通路的过度活化,减少炎症因子释放,抑制肺部炎症反应,治疗支气管哮喘。     

益气养阴活血方对糖尿病肾病大鼠NLRP3/Caspase-1/GSDMD细胞焦亡通路的影响

目的 基于NOD样受体蛋白3（NLRP3）/胱天蛋白酶-1（Caspase-1）/消皮素D（GSDMD）细胞焦亡通路,探讨益气养阴活血方防治糖尿病肾病（DKD）肾脏损伤的可能作用机制。方法 随机将50只雄性SD大鼠分为正常组8只、造模组42只。造模组高糖高脂饮食6周后予一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导建立DKD大鼠模型。造模成功后随机分为模型组、缬沙坦组（8.33 mg·kg^-1）、益气养阴活血方低、高剂量组（11、22 g·kg^-1）。连续灌胃6周后检测各组大鼠空腹血糖（FBG）、总胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）及24 h尿蛋白定量（24 h-UTP）;苏木素-伊红（HE）染色观察肾组织病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组大鼠肾组织NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白及其mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠FBG、CHO、TG、BUN、SCr、24 h-UTP及血清IL-1β、IL-18水平均显著升高（P<0.01）,肾组织病变程度严重,且肾组织NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白及其mRNA表达水平显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各药物组FBG、CHO、TG、BUN、SCr、24 h-UTP及血清IL-1β、IL-18水平均明显下降（P<0.05,P<0.01）,肾组织病变程度得到改善,且肾组织NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白及其mRNA表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,以益气养阴活血方高剂量组效果最佳。结论 益气养阴活血方可通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路抑制细胞焦亡,缓解DKD大鼠炎症反应,减轻肾脏病理损伤。     

桦木酸对大鼠肺纤维化模型肺组织的影响＊

目的 探讨桦木酸对大鼠肺纤维化模型肺组织中NF-κB、β-arrestin2表达的影响。方法 15只SPF级雄性SD大鼠分为对照组、模型组、桦木酸组，每组5只。对照组予以单次气管内注射1 mL·kg^-1 0.9%生理盐水，模型组和桦木酸组予单次气管内快速注射5 mg·kg^-1博来霉素建立大鼠肺纤维化模型。造模1天后，对照组及模型组给予10 mL·kg^-1 1%可溶性淀粉溶液，桦木酸组给予50 mg·kg^-1的桦木酸悬浮液，持续21天。HE、Masson染色方法观察肺组织病理改变。酶联免疫吸附法（ELISA）检测肺组织匀浆IL-6的水平。免疫组化法检测肺组织中NF-κB、β-arrestin2、IκBα的表达。结果 与对照组相比，模型组肺组织匀浆中IL-6水平升高，NF-κB、β-arrestin2、IκBα蛋白表达均上调（P<0.05）。与模型组相比，桦木酸组肺组织匀浆中IL-6水平降低，肺组织中NF-κB、β-arrestin2、IκBα蛋白表达均下调（P<0.05）。结论 桦木酸可减轻肺部炎症、减慢肺纤维化的发生发展，可能与下调肺组织中NF-κB、β-arrestin2有关。     

肺肠合治法对LPS诱导急性肺损伤大鼠NF-κB炎症通路和巨噬细胞极化的影响

目的 探究肺肠合治法（麻黄汤+大承气汤）对脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）大鼠的作用与保护机制。方法 将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、肺肠合治低、中、高剂量组、地塞米松组。通过LPS（10 mg·kg^-1）腹腔注射成功复制ALI大鼠模型。观察与记录各组大鼠一般状态;采用肛温测量法记录各组大鼠造模后0~8 h体温数值;造模后24 h取材,收集血清与肺组织。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-10（IL-10）、精氨酸酶-1（Arg-1）含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠肺组织中核转录因子-κB p65（NF-κB p65）、磷酸化核转录因子-κB p65（p-NF-κB p65）、核转录因子抑制蛋白α（IκBα）、磷酸化核转录因子抑制蛋白α（p-IκBα）蛋白的表达量;免疫荧光双标检测大鼠肺组织经典激活型（M1）巨噬细胞标记物CD80、IL-1β、巨噬细胞标记物F4/80、IL-10表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠体温和热效应指数（TRI）显著升高,血清促炎因子TNF-α、IL-1β和抗炎因子IL-10水平显著升高（P<0.01）,肺组织p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达显著升高（P<0.01）,肺组织巨噬细胞标志物F4/80、M1巨噬细胞标志物CD80和IL-1β的表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,肺肠合治各组和地塞米松组大鼠体温与TRI指数降低（P<0.01）,血清炎症因子TNF-α、IL-1β水平降低（P<0.05,P<0.01）,血清抗炎因子IL-10、Arg-1水平升高（P<0.05,P<0.01）,肺组织p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）,肺组织M1巨噬细胞标志物CD80、IL-1β表达显著降低和IL-10表达显著升高（P<0.01）,巨噬细胞标志物F4/80表达无明显变化。结论 肺肠合治方剂对ALI大鼠的发热与炎症状态有明显的改善,其机制可能与NF-κB炎症通路被抑制,肺组织巨噬细胞向抗炎表型极化有关。     

基于C1GALT1/C1GALT1C1通路探讨加味升降散对IgA肾病大鼠Gd-IgA1的影响

目的 通过观察加味升降散对免疫球蛋白（Ig）A肾病大鼠血清及肾组织中微小RNA-148b（miRNA-148b）、白细胞介素-6（IL-6）、核心1β1，3-半乳糖基转移酶（C1GALT1）、分子伴侣Cosmc（core1β3-Gal-T特异性分子伴侣，C1GALT1C1）、半乳糖缺乏IgA1（Gd-IgA1）表达的影响探讨其可能作用机制，为临床运用加味升降散治疗IgA肾病提供科学依据。方法 将42只SPF级雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组8只、造模组34只，将大鼠适应性饲养1周后采用联合牛血清白蛋白（BSA）灌胃+尾静脉注射脂多糖（LPS）+皮下注射四氯化碳（CCl₄）、蓖麻油的免疫复合的方法建立实验性IgA肾病大鼠模型。造模完成后随机选取2只大鼠取材，检测造模是否成功。造模成功后，将造模组大鼠按照随机数字表法分成模型组、中药低剂量（加味升降散，6.27 g·kg^-1）组、中药高剂量（加味升降散，12.54 g·kg^-1）组、贝那普利（10 mg·kg^-1）组各8只，进行药物灌胃，1次/d，治疗4周。于实验第1周末、第9周末、第13周末检测24 h尿蛋白定量（24 h-UTP），第14周各组大鼠麻醉后取材，股动脉取血后离心取上清检测白蛋白（ALB）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检IL-6、Gd-IgA1表达水平变化；苏木素-伊红（HE）/马松（Masson）/碘酸六胺银（PASM）法观察肾组织病理改变；透射电镜观察肾小球超微结构变化；免疫组化法观察IL-6、C1GALT1、C1GALT1C1表达情况；免疫荧光观察肾小球系膜区；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）观察miRNA-148b、IL-6、C1GALT1、C1GALT1C1 mRNA表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测IL-6、C1GALT1、C1GALT1C1蛋白水平变化。结果 与正常组比较，模型组大鼠24 h-UTP、SCr、ALT、IL-6、Gd-IgA1含量水平明显升高（P<0.05），ALB含量水平明显降低（P<0.05）；肾小球系膜细胞增生、系膜区增厚、足细胞足突融合，大量颗粒状IgA免疫复合物沉积于肾小球系膜区；IL-6在系膜区、足细胞表达增强，C1GALT1、C1GALT1C1在系膜区、足细胞表达减弱；IL-6 mRNA、miRNA-148b表达增强（P<0.01），C1GALT1 mRNA、C1GALT1C1 mRNA表达减弱（P<0.01）；IL-6蛋白表达显著增强（P<0.01），C1GALT1、C1GALT1C1蛋白表达显著减弱，差异具有统计学意义（P<0.01）。与模型组比较，加味升降散干预后，24 h-UTP、SCr、ALT、IL-6、Gd-IgA1含量水平显著降低，差异具有统计学意义（P<0.05，P<0.01），ALB含量水平升高，差异具有统计学意义（P<0.05）；病理损害减轻；基底膜IgA免疫复合物沉积明显减少；IL-6在大鼠肾小球系膜区、足细胞的表达减弱，C1GALT1、C1GALT1C1在系膜区、足细胞表达增强；IL-6 mRNA、miRNA-148b表达减少（P<0.01），C1GALT1 mRNA、C1GALT1C1 mRNA表达增加（P<0.01）；IL-6蛋白表达明显减弱（P<0.05，P<0.01），C1GALT1、C1GALT1C1蛋白表达增强，差异具有统计学意义（P<0.05，P<0.01）；中药组表现出明显的量效趋势。结论 加味升降散可能通过降低IgA肾病大鼠血清及肾组织中miRNA-148b、IL-6表达，使C1GALT1、C1GALT1C1表达恢复，减少Gd-IgA1的生成，从而减轻肾脏病理损害，减少蛋白尿，发挥保护肾脏的作用，达到延缓疾病进展的目的，并且随剂量增加效果增强。     

中药天花粉蛋白增强诱导CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数量和功能的初探＊

目的 探讨中药天花粉蛋白（Trichosanthin，Tk）增强诱导CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）数量和功能的作用。方法 研磨6-8周C57BL/6小鼠脾脏，裂解红细胞后得到单个脾脏淋巴细胞悬液，按5×10⁵/mL细胞密度均匀接种在圆底96孔板，设空白组、对照组（增殖体系：1 μg·mL^-1 anti-CD3/28 mAb）、三个不同诱导方案组，培养7天后收集细胞运用流式细胞术检测CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞比例以此确定最佳诱导方案；将低浓度Tk（0.25、0.5、1 μg·mL^-1）作用于诱导体系，7天后采用流式检测Tk对CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞比例的影响；Annexin V-PI染色法检测细胞凋亡情况；Western blotting法测定各组中Treg细胞特异性转录因子Foxp3蛋白表达情况；实时荧光定量 PCR法检测转录因子Foxp3和细胞因子TGF-β、IL-10、IL-6、IFN-γ基因水平的表达；酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组细胞培养上清中分泌IFN-γ和IL-10的浓度。结果 与对照组相比，添加TGF-β（5ng·mL^-1）诱导小鼠脾脏淋巴细胞生成Treg的数量和比例最高，此诱导方案最佳（P < 0.01）；与诱导组相比，低浓度中药天花粉蛋白可显著增强诱导CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞数量和比例，呈剂量依赖性（P < 0.01），且Tk需在诱导体系下发挥作用，单加不能诱导生成Treg细胞，此浓度Tk无细胞毒性；与对照组相比，诱导组和低浓度Tk组Treg特异性转录因子Foxp3蛋白和基因表达水平均显著上调（P < 0.01），II型辅助性T细胞（Th2）分泌的炎症抑制因子IL-10、TGF-β基因表达不同程度上调，反之，I型辅助性T细胞（Th1）分泌的促炎因子IFN-γ、IL-6基因表达呈相反趋势下调（P < 0.01）；与对照组相比，诱导组和低浓度Tk组细胞上清中分泌的IL-10浓度显著增加，IFN-γ浓度明显降低（P < 0.01）。结论 低浓度中药天花粉蛋白可显著增强诱导CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞，上调Foxp3和Th2型炎症抑制因子IL-10、TGF-β的表达，下调Th1型促炎因子IFN-γ、IL-6的表达，从而发挥免疫抑制功能。     

基于IL-6/MMP-9/COL-Ⅳ信号通路探讨加味真武汤对慢性肾功能衰竭大鼠肾间质纤维化的影响

目的 观察加味真武汤对慢性肾衰竭（CRF）大鼠白细胞介素-6（IL-6）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、Ⅳ型胶原蛋白（COL-Ⅳ）的调控作用,探究其治疗CRF的潜在机制。方法 将50只雄性SD大鼠随机分为造模组40只和正常组10只,造模组大鼠连续腺嘌呤灌胃12周制备CRF模型。造模成功后将造模组按随机数字表法分为模型组、加味真武汤低剂量（7.2 g·kg^-1·d^-1）组、加味真武汤中剂量（14.4 g·kg^-1·d^-1）组、加味真武汤高剂量（28.8 g·kg^-1·d^-1）组、盐酸贝那普利（10 mg·kg^-1·d^-1）组进行灌胃,正常组、模型组予等体积蒸馏水灌胃,持续干预4周。给药期间,定期检测各组大鼠体质量;给药结束后,检测大鼠血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、24 h尿蛋白定量（24 h-UTP）水平;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清IL-6水平;分别采用苏木素-伊红（HE）、马松（Masson）染色观察肾组织病理形态学变化;免疫组化法（IHC）检测大鼠肾脏细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、IL-6、MMP-9、COL-Ⅳ蛋白表达结果;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠肾组织ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、MMP-9 mRNA、COL-Ⅳ mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肾组织ICAM-1、IL-6、MMP-9、COL-Ⅳ蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠SCr、BUN、24 h-UTP水平显著升高（P<0.01）;血清IL-6含量显著上升（P<0.01）;大鼠肾小管管腔扩张伴萎缩,小管上皮细胞坏死、肿胀、空泡变性,间质内大量炎症细胞浸润,胶原纤维沉积;肾小管间质内IL-6、ICAM-1、COL-Ⅳ呈强阳性表达,MMP-9表达减弱;模型组大鼠ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、COL-Ⅳ mRNA水平显著升高（P<0.01）,MMP-9 mRNA水平显著降低（P<0.05）;肾组织ICAM-1、IL-6、COL-Ⅳ蛋白表达显著升高（P<0.01）,MMP-9蛋白表达显著降低（P<0.01）。与模型组比较,经加味真武汤治疗后,大鼠24 h-UTP、SCr、BUN水平均有大幅降低（P<0.01）;血清IL-6含量显著下降（P<0.01）;大鼠肾脏病损明显改善,胶原纤维沉积减少;IL-6、ICAM-1、COL-Ⅳ在肾小管、间质内表达减弱,MMP-9在肾小管间质内表达增强;大鼠ICAM-1 mRNA、IL-6 mRNA、COL-Ⅳ mRNA水平显著降低（P<0.01）,MMP-9 mRNA水平明显升高（P<0.05）;肾脏内ICAM-1、IL-6、COL-Ⅳ蛋白表达显著下降（P<0.01）,MMP-9蛋白表达显著上升（P<0.01）。结论 加味真武汤可能通过调控IL-6/MMP-9/COL-Ⅳ信号通路,进而减轻蛋白尿,改善肾功能,减轻肾脏病理损害,延缓CRF肾间质纤维化进展。     

二陈汤合三子养亲汤治疗矽肺的疗效观察及其对肺功能和炎症因子的影响

目的:观察二陈汤合三子养亲汤治疗矽肺的临床疗效和对患者肺功能和炎症因子的影响。方法:将本院2016年1月—2019年6月收治的矽肺患者78例,随机分为常规治疗组39例和中药治疗组39例。中药治疗组在常规治疗组的基础上,加用二陈汤合三子养亲汤,1周为1个疗程,共计2个疗程。评价疗效,记录治疗前后症状及体征的变化,检测肺功能及炎性指标(WBC、CRP、IL-6)水平。结果:中药治疗组治疗后总有效率明显高于常规治疗组(P<0.05);治疗后咳嗽咳痰及喘促短气等症状明显改善(P<0.05),第一秒用力呼气量(FEV 1)、第一秒用力呼气量(FEV1)与用力肺活量(FVC)的比值(FEV1/FVC)均有明显改善(P<0.05);但每分钟最大通气量(MVV)改善不明显;中药治疗组症状和肺功能改善明显于常规组。两组经治疗后,白细胞计数(WBC)、CRP、IL-6均较治疗前明显下降;中药治疗组治疗后IL-6下降更为显著(P<0.05)。结论:二陈汤合三子养亲汤治疗矽肺有良好的疗效,能够减轻临床症状,改善肺功能,降低炎症因子水平,可作为常规治疗的有益补充。     

通腑泻肺方对ALI/ARDS大鼠AQP1/a-ENaC表达的影响

[目的]探讨通腑泻肺方对ALI/ARDS大鼠肺水肿的可能作用机制。[方法]27只大鼠按体质量随机分为空白组、模型组、中药组,每组9只。模型组与中药组尾静脉注射内毒素8 mg/kg,空白组大鼠静脉注射生理盐水。中药组在造模完成后给予通腑泻肺中药灌胃,每次0.01 m L/g,每日1次,共7 d,空白组与模型组予等量生理盐水灌胃。通过病理切片观察各组大鼠肺组织损伤情况,免疫组化染色方法检测肺组织水通道蛋白1(AQP1)和上皮细胞钠通道(a-ENa C)表达。[结果]模型组大鼠肺组织中AQP1和a-ENa C表达水平显著下降(P0.01);与模型组相比,中药组AQP1和a-ENa C表达显著升高(P0.05)。[结论]通腑泻肺方能增强ALI/ARDS大鼠AQP1和a-ENa C表达而促进其肺部水液代谢,从而发挥其改善肺水肿的作用。     

Assessment of traditional Chinese medicine pattern in a bleomycin-induced pulmonary fibrosis mouse model: A pilot study

ObjectiveTo initially explore traditional Chinese medicine patterns in a bleomycin-induced pulmonary fibrosis mouse model.MethodsThirty-six C57BL/6 mice were divided by the random number table method (with 12 rats per group) into three groups: a blank group, a model group, and a number 2 Feibi recipe (FBR-2) group. The pulmonary fibrosis mouse model was established by intratracheal instillation of bleomycin. The FBR-2 group was treated with FBR-2 for 4 weeks. Symptoms in the mice such as mental behavior, food/water intake, body weight, body temperature, respiratory rate, and tongue image were observed. The samples were collected on the 14th day and 28th day after modeling, and lung tissues were visually assessed and microscopically evaluated by staining with hematoxylin-eosin and Masson. The expression levels of hydroxyproline, interleukin (IL)-33, IL-37, tissue plasminogen activator, and plasminogen activator inhibitor-1 were determined by enzyme-linked immunosorbent assay.ResultsMice in the model group were poor in spirit, less active, slow in response, showed reduced food/water intake, body temperature, and body weight, increased respiratory rate, and their tongue color had changed from light red to dark red. However, treatment with FBR-2 significantly improved these symptoms. Extensive inflammatory cell infiltration and collagen fiber deposition were observed in the lung tissues of the model group. Compared with the blank group, the levels of hydroxyproline, IL-33, and plasminogen activator inhibitor-1 in the model group significantly increased (all P < .05), whereas that of tissue plasminogen activator significantly decreased on the 14th day and 28th day (P = .036 and P = .005, respectively). Moreover, FBR-2 improved lung inflammation and fibrinolysis imbalance and reduced collagen fiber deposition.ConclusionTo some extent, our bleomycin-induced pulmonary fibrosis mouse model exhibited traditional Chinese medicine patterns of qi deficiency, blood stasis, and heat retention.     

骨痛灵方对肺癌骨癌痛模型小鼠的疼痛行为学以及脊髓MCP-1和NGF的影响

  目的：观察骨痛灵方对肺癌骨癌痛模型小鼠脊髓单核细胞趋化因子(MCP-1)和神经生长因子(NGF)表达的影响,探讨骨痛灵方治疗骨癌痛的潜在作用机制。  方法：在C57小鼠左后肢胫骨骨髓腔注射Lewis肺癌细胞建立骨癌痛模型。50只小鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、西药组和中西药组,每组10只。中药组小鼠以骨痛灵方煎剂灌胃,西药组予以唑来膦酸腹腔注射,中西药组则两药联合运用。用Von Frey纤维及热痛测试仪分别于造模前,造模后第6(7)天、13(14)、20(21)天观察小鼠机械性缩足反射阈值(PWMT)和热痛觉缩足潜伏期(PWTL)的变化,酶联免疫吸附反应(ELISA)检测脊髓MCP-1和NGF蛋白的表达情况。  结果：3周后,3个治疗组的PWMT和PWTL均明显高于模型组(均P<0.05),中西药组的PWMT比中药组和西药组均增高,差异有统计学意义(均P<0.05)。与模型组比较,中药组、西药组和中西药组的MCP-1蛋白表达均明显降低(均P<0.05);NGF则均显著升高(均P<0.05)。  结论：骨痛灵方可能通过减少脊髓MCP-1蛋白的表达,抑制中枢敏化,同时促进NGF蛋白的表达,修复中枢敏化中受损的神经元而发挥止痛作用。     

清金益肺汤对痰热蕴肺型特发性肺纤维化大鼠血管重塑的干预作用

目的:探讨清金益肺汤对痰热蕴肺型特发性肺纤维化大鼠血管重塑的干预作用。方法:清洁级健康雄性SD大鼠40只,随机分为5组:正常对照组、模型组、中药治疗组、激素治疗组、中药加激素治疗组。采用气管内滴注博来霉素的方法建立肺纤维化模型,造模结束后第2天气管内滴加脂多糖建立痰热蕴肺证模型,分组给药14天。光镜下观察各组大鼠肺组织的病理改变,PCR法检测肺组织血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达水平,免疫组化法检测肺组织血小板衍生因子(PDGF)的表达水平。结果:造模大鼠在光镜下均有肺纤维化的特征性病理改变,但程度有所不同。与正常组比较,各造模组VEGFmRNA及PDGF的表达水平均明显升高,其差异具有显著统计学意义(P0.01);与模型组比较,各药物组VEGFmRNA及PDGF的表达水平显著降低(P0.01);中药加激素组低于中药、激素组(P0.01);中药组低于激素组(P0.01)。结论:清金益肺汤可能通过抑制VEGFmRNA及PDGF的表达改善痰热蕴肺型特发性肺纤维化大鼠模型的血管重塑,延缓或纠正肺纤维化进程。     

基于Blimp1/Bcl6通路探讨骨痛灵联合唑来膦酸治疗肺癌骨转移的实验研究

目的观察骨痛灵方对肺癌骨转移疼痛模型小鼠Blimp1/Bcl6通路的影响。方法 85只C57 BL/6小鼠随机选取17只小鼠,注射PBS溶液作为假手术组;其余68只小鼠左后肢胫骨骨髓腔内注射Lewis肺癌细胞建立骨转移疼痛模型,随机分为模型组、中药组、西药组、中西药组,每组17只。中药组小鼠以骨痛灵方煎剂灌胃,西药组予以唑来膦酸腹腔注射,中西药组则两药联合运用,治疗3周。采用TRAP特殊染色法检测小鼠胫骨的破骨细胞,以RT-PCR和Western blot法检测B细胞诱导成熟蛋白1(Blimp1)、B细胞淋巴瘤蛋白6(Bcl6)和组织蛋白酶K(Ctsk) mRNA和蛋白的表达。结果与模型组比较,中药组、西药组和中西药组TRAP阳性细胞数量均明显减少,Blimp1、Ctsk mRNA和蛋白表达均降低,Bcl6 mRNA和蛋白表达均升高,且差异均有统计学意义(P0.05);在3个治疗组中,中西药组阳性细胞数量最少,Blimp1、Ctsk mRNA和蛋白表达最低,Bcl6 mRNA和蛋白表达最高,差异有统计学意义(P0.05)。结论骨痛灵方通过抑制Blimp1/Bcl6通路,抑制破骨细胞的活化,从而缓解肺癌骨转移疼痛。     

甘草酸铵联合苦参素抗大鼠肝纤维化作用及初步机制探讨

目的:研究甘草酸铵联合苦参素对四氯化碳(CCl_4)导致的大鼠肝纤维化的抑制作用,并探讨其相关机制。方法:SD大鼠随机分为6组,每组10只,分别为正常组,模型组,秋水仙碱阳性药组(2 mg·kg~(-1)),甘草酸铵组(15 mg·kg~(-1)),苦参素组(30 mg·kg~(-1)),甘草酸铵联合苦参素(15 mg·kg~(-1)+30 mg·kg~(-1))组,除正常组外,其余各组均采用CCl_4诱导的大鼠肝纤维化模型,治疗组分别给予等同于临床剂量的相应药物,正常组和模型组给予生理盐水进行对照。通过检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及肝组织中羟脯氨酸(Hyp)和观察肝组织病理切片来评价肝纤维化程度,检测血清中白细胞介素6(IL-6),乙酰胆碱酯酶(Ach E),高迁移率族蛋白1(HMGB1),内毒素(LPS)变化趋势。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清ALT,AST,IL-6,Ach E,LPS,HMGB1水平及肝组织Hyp含量明显升高(P0.01),模型组肝组织病变较为明显;与正常组比较模型组胶原面积显著增加;与模型组比较,治疗组明显降低大鼠血清中ALT,AST,IL-6,Ach E,LPS,HMGB1水平及肝组织Hyp含量(P0.05),肝组织病变明显减轻,胶原面积明显降低;同时苦参素组与模型组比Ach E显著降低(P0.05),联合用药与苦参素组比Ach E显著升高(P0.05)。结论:甘草酸铵联合苦参素可抗由CCl_4诱导的大鼠肝纤维化,抗肝纤维化主要可能是通过减少大鼠体内LPS的含量和降低IL-6,HMGB1的表达来实现的,并且联合用药可改善临床上单独使用苦参素降低乙酰胆碱酯酶下降的情况。     

中医复方对狼疮性肾炎患者HMGB1、IL-10和TGF-β1改变作用研究

目的:观察中医复方对狼疮性肾炎患者高迁移率族蛋白1(HMGB1)、白细胞介素-10(IL-10)和转化细胞生长因子-β1(TGF-β1)的改变作用。方法:选取本院自2011年4月~2013年4月间收治的狼疮性肾炎患者124例,分为观察组(60例)和对照组(64例);观察组给予中医复方治疗,对照组给予激素治疗。比较2组患者临床疗效和HMGB1、IL-10和TGF-β1检测指标的改变情况。结果:观察组总有效率为91.7%,对照组为81.3%,2组比较,差异有显著性意义(P0.05)。2组HMGB1、1IL-10、TGF-β1治疗前后组内比较,差异均有显著性意义(P0.05)。2组治疗后HMGB1、TGF-β1比较,差异也有显著性意义(P0.05)。结论:中医复方治疗狼疮性肾炎患者有较好的临床疗效,且能改善患者血清HMGB1、IL-10和TGF-β1水平,对病变的肾脏组织有着很好地修复作用。     

平喘宁对哮喘大鼠Bcl-2,Bax,EGF mRNA及PDGF mRNA表达的影响

目的:观察平喘宁对寒性哮喘大鼠的肺功能、气道形态学、肺组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),表皮生长因子(EGF)mRNA及血小板衍生生长因子(PDGF)mRNA表达的影响。方法:将105只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、桂龙咳喘宁组、地塞米松组、平喘宁高、中、低剂量组,每组15只。以卵蛋白致敏及寒冷刺激复制大鼠寒哮模型,造模21 d后,各给药组分别给予桂龙咳喘宁组(10 g·kg~(-1)·d~(-1)),地塞米松组(0.4 mg·kg~(-1)·d~(-1)),平喘宁高、中、低剂量组(19.6,9.8,4.9 g·kg~(-1)·d~(-1)),ig给药,正常组、模型组每天ig给予等量蒸馏水,连续给药4周,处死前测定肺功能,处死后解剖大鼠并取出肺组织。采用免疫组化法测定肺组织中Bcl-2及Bax的表达。采用苏木素和伊红(HE)染色行病理形态学改变观察,采用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量检测EGF mRNA,PDGF mRNA表达丰度。结果:与正常组比较,模型组大鼠支气管炎性细胞浸润明显,显著变窄,平滑肌增厚;肺功能下降(P0.01)。Bcl-2表达升高,Bax表达降低(P0.01);EGF mRNA,PDGF mRNA表达升高(P0.01)。与模型组比较,各给药组的肺组织病理改变减轻;肺功能有不同程度的好转(P0.01,P0.05)。各给药组肺组织中Bcl-2表达降低,Bax表达增加(P0.01,P0.05)。各给药组EGF mRNA,PDGF mRNA表达水平降低(P0.01,P0.05)。结论:平喘宁可降低哮喘大鼠Bcl-2蛋白的表达,升高Bax蛋白的表达;抑制EGF mRNA,PDGF mRNA表达,从而抑制细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)通路活化,减轻炎性反应,改善肺功能,抑制气道平滑肌增生,延缓气道重塑而治疗哮喘。     

宽胸理肺汤合三子养亲汤对COPD大鼠炎症因子、氧化应激及凋亡相关蛋白的影响

目的观察宽胸理肺汤合三子养亲汤对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠炎症因子、氧化应激指标、凋亡相关蛋白表达的影响。方法取7只健康雄性Wistar大鼠作为正常组,另取35只雄性Wistar大鼠采用熏香烟加气管注内毒素法建立COPD模型。将建模成功大鼠随机分成COPD组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、乙酰半胱氨酸组,每组7只。中药高、中、低剂量组分别按照5,2.5,1.25 g生药/kg的剂量给予宽胸理肺汤合三子养亲汤灌胃,乙酰半胱氨酸组给予0.8 g/kg乙酰半胱氨酸灌胃,正常组和COPD组分别给予等体积0.5%羧甲基纤维素钠灌胃,1次/d,持续28 d。末次灌胃后24 h,心脏取血,采用ELISA法检测血清炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]及氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)]水平,HE染色观察大鼠肺组织病理表现,Western blot法检测大鼠肺组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达情况。结果与正常组比较,COPD组大鼠血清IL-6、IL-8、TNF-α、MDA水平及肺组织中Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达量均显著升高(P均<0.05),血清SOD水平及肺组织中Bcl-2蛋白表达量均显著降低(P均<0.05);HE染色示大鼠小气道管腔明显狭窄,结缔组织增生,支气管管壁增厚,黏液细胞增多,部分可见黏液堵塞气道,肺泡结构紊乱,上皮细胞不同程度皱缩破坏,管腔及周围血管可见中性粒细胞聚集。与COPD组比较,中药各组及乙酰半胱氨酸组血清IL-6、IL-8、TNF-α、MDA水平及肺组织中Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达量均显著降低(P均<0.05),血清SOD水平及肺组织中Bcl-2蛋白表达量均显著升高(P均<0.05);HE染色示气道上皮细胞脱落、炎症细胞浸润、杯状细胞增多以及肺气肿形成等现象均有不同程度减轻。结论宽胸理肺汤合三子养亲汤可以明显改善COPD大鼠的肺组织病理变化,其机制可能与抑制炎症因子、抗氧化应激及抑制细胞凋亡有关。