大黄䗪虫丸经p38 MAPK/NF-κB/TGF-β1通路抑制小鼠硅肺纤维化的机制探讨

目的 运用中医经方大黄?虫丸干预小鼠硅肺纤维化模型，观察其对小鼠硅肺纤维化的影响并探讨其作用机制。方法 选用SPF级雄性昆明种小鼠36只，分为正常组，模型组，大黄?虫丸高、中、低剂量（1.560，0.780，0.390 g·kg^-1）组，汉防己甲素组（0.039 mg·kg^-1），每组6只。除正常组外，其余组均用静式染毒法连续40 d吸入二氧化硅（SiO₂）粉尘复制小鼠硅肺纤维化模型，并用相应药物进行干预28 d后处死小鼠，获得血清和肺组织样品，运用酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α），白细胞介素-1β（IL-1β），IL-6和羟脯氨酸（HYP）的含量，运用肺组织样本进行病理切片观察，并采用蛋白免疫印迹法（Western blot），实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）方法检测肺组织中p38 丝裂原活化蛋白激酶（MAPK），核转录因子-κB（NF-κB），转化生长因子-β₁（TGF-β₁），α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA），Smad2，Smad3，Smad7的蛋白和mRNA的表达水平。结果 与正常组比较，模型组中的TNF-α，IL-1β，IL-6和HYP的含量均明显升高，差异具有统计学意义（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，大黄?虫丸高剂量组能够明显降低小鼠血清中TNF-α，IL-6和HYP的含量（P<0.05，P<0.01），可见大黄?虫丸能够减轻硅肺小鼠肺部炎症。同时，与正常组比较，模型组中的p38 MAPK，NF-κB p65，TGF-β₁，α-SMA，Smad2和Smad3蛋白和mRNA表达水平均明显升高（P<0.05，P<0.01），Smad7蛋白和mRNA表达水平均显著降低（P<0.01）；与模型组比较，大黄?虫丸高剂量组中的p38 MAPK，NF-κB p65，TGF-β₁，α-SMA，Smad2和Smad3蛋白和mRNA表达水平均明显降低（P<0.05，P<0.01），Smad7蛋白和mRNA表达水平均明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 大黄?虫丸能改善硅肺小鼠肺泡炎症、细胞外基质沉积的情况，因而起到减轻纤维化的作用，这可能是通过调节p38 MAPK/NF-κB/TGF-β₁通路来实现的。     

清热活血散结复方对放射性肺炎及肺纤维化血清细胞因子IL-6,TNF-α,TGF-β1水平的影响

目的：观察清热活血散结复方预防放射性肺炎及肺纤维化的临床疗效和对血清细胞因子白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β1 （TGF-β1）的影响。方法：采用前瞻性随机对照设计,将符合入选标准的患者随机分为治疗组和对照组,每组各62例。对照组单纯行放疗,治疗组在进行放疗的同时口服清热活血散结中药。观察放疗前后、治疗后6个月两组患者的一般情况、临床症状、胸部CT、肺损伤（RTOG标准）,并采用身体机能状态量表（karnofsky performance status scale,KPS）进行评估,比较放射性肺炎发生率及放疗前后两组患者血清细胞因子IL-6,TNF-α,TGF-β1 水平。结果：两组均无脱落及剔除病例,基线资料无明显差异。与对照组比较,放疗后中药治疗组能够明显提高患者的KPS评分,治疗组肺损伤等级评价的改善情况明显优于对照组（P<0.05）,治疗组放射性肺炎及肺纤维化发生率低于对照组（38.71% vs 72.58%,P<0.05）;两组放疗前血清IL-6,TNF-α,TGF-β1 水平比较无统计学差异;放疗结束、放疗后6月,治疗组血清IL-6,TNF-α,TGF-β1 水平均明显低于对照组（P<0.01）,血清IL-6,TNF-α,TGF-β1 水平均在放疗结束时达到高峰。结论：清热活血散结复方安全有效,能够降低放射性肺炎及肺纤维化的发生率,并可减轻患者症状,改善患者生存质量;其作用机制可能与降低放射性肺炎及肺纤维化患者的血清IL-6,TGF-β₁水平有关。     

抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂对病毒性心肌炎小鼠血清TNF-α,IL-6的影响

目的：探讨抗柯萨奇B病毒性心肌炎胶囊复方新制剂（K-CoxB-JN）对病毒性心肌炎小鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）的影响及其机制。方法：用CVB3感染Balb/c小鼠造成病毒性心肌炎模型,随机分为5组：K-CoxB-JN复方新制剂低、中、高剂量组（0.2,0.4,0.8 g·kg^-1）,利巴韦林组（0.075 g·kg^-1）,模型组,并设正常组,鼠腹腔接种病毒2 h后开始灌胃,连续灌胃14 d。观察小鼠一般状态、记录死亡数,计算小鼠生存率;取血测定血清TNF-α,IL-6水平;取心脏,计算心脏指数,HE染色,计算病理积分。结果：与正常组比较,模型组小鼠血清TNF-α,IL-6水平、心脏指数、心脏病理积分均升高（P<0.05）,生存率降低（P<0.05）;与模型组比较,K-CoxB-JN各组小鼠心脏指数,TNF-α,IL-6水平、心脏病理积分均降低（P<0.05）,生存率升高（P<0.05）。结论：调节TNF-α,IL-6水平可能是K-CoxB-JN治疗病毒性心肌炎作用机制之一。     

淡豆豉异黄酮通过PPARγ/LXRα/ABCA1信号通路改善动脉粥样硬化小鼠脂质代谢的作用

目的 通过卵巢切除结合高脂饲料喂养制备动脉粥样硬化小鼠模型，观察淡豆豉异黄酮（ISSP）对小鼠脂质代谢的影响，并从调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ/肝X受体α/腺苷三磷酸结合盒转运体A1（PPARγ/LXRα/ABCA1）信号通路的角度进一步探讨其作用机制。方法 将50只载脂蛋白E敲除（ApoE^-/-）小鼠随机分为模型组、西药组（阿托伐他汀钙，3.03 mg·kg^-1）、中药低、中、高剂量组（淡豆豉异黄酮，2.5、5、10 mg·kg^-1），每组10只，以手术切除双侧卵巢同时喂食高脂饲料的方法制备动脉粥样硬化模型小鼠，另取10只ApoE^-/-小鼠，以手术切除卵巢旁脂肪同时喂食高脂饲料的方法作为假手术组，其中部分小鼠因术后感染死亡，最终确定每组为6只小鼠，术后1周开始各组灌胃相应药物或等量生理盐水。12周后检测血清及肝脏组织中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、游离脂肪酸（NEFA）的含量；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的含量；苏木素-伊红（HE）及油红O染色观察主动脉斑块形成及肝脏脂质沉积情况；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1、ABCG1 mRNA及蛋白表达。结果 与假手术组比较，模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C、TNF-α及IL-6含量显著升高（P<0.01），HDL-C水平显著降低（P<0.01）；肝脏指数明显升高（P<0.05），肝脏脂肪空泡明显，脂质沉积显著，肝脏中TC、TG、NEFA含量显著增多（P<0.01）；肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1 mRNA表达明显降低（P<0.05，P<0.01），ABCG1 mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，服用阿托伐他汀钙和淡豆豉异黄酮中、高剂量组可使小鼠血清TC、TG、LDL-C、TNF-α和IL-6含量显著降低（P<0.01），HDL-C水平显著降低（P<0.01）；肝脏指数显著降低（P<0.01），肝脏脂肪空泡及脂质沉积显著减少，肝脏中TC、TG、NEFA含量明显增多（P<0.05，P<0.01）；肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1和ABCG1 mRNA及蛋白表达明显上调（P<0.05，P<0.01）。结论 淡豆豉异黄酮可能通过PPARγ/LXRα/ABCA1信号通路调节脂质代谢，减少血清炎症表达及肝脏脂质沉积从而改善动脉粥样斑块的形成。     

金莲花总黄酮解热作用及对TNF-α,IL-1β和PGE2含量的影响

目的：观察金莲花总黄酮（Flavonoids from Trollius ledebouri Reichb,FTLR）解热作用。方法：选取连续3天基础体温在38.5~39.0 ℃ 的家兔,随机取6只作为正常对照组,其余家兔耳缘静脉注射细菌内毒素250 ng·kg^-1发热模型,取药后1.5 h体温上升>1 ℃ 的家兔30只。按体温分层随机分为发热模型组、FTLR 200,100,50 mg·kg^-1剂量组,阿司匹林组100 mg·kg^-1组,灌胃给药,发热模型组ig等容积蒸馏水。药后1,2,3及4 h分别测体温1次。采用ELISAE法测定血清中TNF-α和IL-1β及脑脊液中PGE₂表达水平。结果：FTLR 200及100 mg·kg^-1剂量组及阿司匹林组家兔各时间点的平均体温明显均低于模型对照组（P<0.01）;50 mg·kg^-1组家兔药后2~4 h体温低于对照组（P<0.05）;各给药组血清中TNF-α和IL-1β及脑脊液中PGE₂的含量均低于模型对照组（P<0.05或P<0.01）。结论：FTLR有明显的解热作用,并有明显的剂量依赖关系。其解热作用机制与抑制细菌内毒素引起的TNF-α,IL-1β和PGE₂等致热因子的合成或释放有关。     

基于TNF-α/TNFR1/RIPKs通路探讨二陈汤加味对COPD炎症的作用机制

目的 基于肿瘤坏死因子-α（TNF-α）/肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）/受体相互作用蛋白激酶（RIPKs）信号通路,研究二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠模型炎症的影响,探讨其作用机制。方法 SD大鼠60只,随机分为正常组、模型组、二陈汤加味高、中、低剂量组、消咳喘组,每组10只。采用香烟烟雾联合脂多糖（LPS）方法制备COPD大鼠模型,二陈汤加味高、中、低剂量组分别以20、10、5 g·kg^-1·d^-1灌胃,消咳喘以3.5 mL·kg^-1·d^-1灌胃,正常组与模型组灌胃等量生理盐水,持续干预21 d。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α、TNFR1的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肺组织中受体相互作用蛋白激酶1（RIPK1）、受体相互作用蛋白激酶3（RIPK3）、混合系列激酶样结构域蛋白（MLKL） mRNA表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺组织中RIPK1、RIPK3、MLKL蛋白表达,苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织的病理变化。结果 与正常组比较,模型组大鼠BALF中TNF-α、TNFR1含量显著升高（P<0.01）,肺组织中RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,二陈汤加味高、中、低剂量组及消咳喘组大鼠BALF中TNF-α、TNFR1含量显著降低（P<0.01）,肺组织中RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA及蛋白表达水平有不同程度的降低（P<0.05,P<0.01）。结论 二陈汤加味能够有效改善COPD大鼠肺组织的炎症反应,其机制可能是通过抑制TNF-α/TNFR1/RIPKs信号通路。     

基于NF-κB信号通路探讨苓桂术甘汤对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的抗炎保护作用

目的 观察苓桂术甘汤对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）模型小鼠的疗效及相关作用机制。方法 将72只7周龄SPF级C57BL/6小鼠按体质量随机分为正常组、模型组、地塞米松组（5 mg·kg^-1）、苓桂术甘汤高、中、低剂量组（9.36、4.68、2.34 g·kg^-1）,每组12只。除正常组外,其余各组采用鼻滴法予LPS（50 μg/只）构建小鼠ALI模型。给药组分别在造模前连续灌胃给药7 d。造模后12 h取小鼠肺组织,测定双肺湿/干质量比（W/D）;苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织病理形态学变化;支气管肺泡灌洗液（BALF）采用细胞计数仪计算总细胞数,瑞氏吉姆萨染色检测炎性细胞的分类（中性粒细胞、巨噬细胞）与数量;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测BALF中炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核转录因子-κB（NF-κB）炎症通路中NF-κB抑制蛋白α（IκBα）、NF-κB p65及二者磷酸化蛋白的表达,并计算磷酸化蛋白/总蛋白比值。结果 与正常组比较,模型组小鼠肺组织严重损伤,肺泡完整结构被破坏,肺泡壁增厚,大量炎性细胞与红细胞浸润,肺水肿显著加重（P<0.01）。BALF中总细胞与炎性细胞数量,IL-6、TNF-α及肺组织NF-κB p65、IκBα磷酸化蛋白表达显著上调（P<0.01）;与模型组比较,苓桂术甘汤高、中、低剂量组与地塞米松组小鼠肺损伤明显缓解,肺水肿显著减轻（P<0.01）。BALF中总细胞与中性粒细胞数量,IL-6、TNF-α及肺组织NF-κB p65、IκBα磷酸化蛋白表达显著下调（P<0.01）,巨噬细胞数量明显减少（P<0.05）。结论 苓桂术甘汤对LPS-ALI小鼠具有抗炎保护作用,能有效减轻炎症、利水消肿,其机制可能与抑制NF-κB通路活化有关。     

基于CD14, IL-1β表达及SGC-7901细胞凋亡变化探讨清热化湿方防治胃癌的机制

目的: 观察清热化湿方对人胃腺癌细胞7901增殖、凋亡及CD14基因、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素1β(IL-1β)表达的影响。方法: 采用血清药理学方法,对照组予胎牛血清,治疗组分别予不同体积分数(5%,10%,15%,20%,30%)清热化湿方含药血清干预体外培养的胃腺癌细胞SGC-7901,应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞凋亡率、细胞周期,免疫组化、Real-time PCR技术检测CD14,TNF-α,IL-1β蛋白及mRNA表达情况。结果: 与对照组比较,治疗组SGC-7901细胞存活率明显下降(P<0.05);与对照组比较,治疗组S期细胞减少、G₀/G₁期细胞增多,且与药物质量浓度有剂量依赖性(P<0.05)。治疗组可明显下调CD14,TNF-α,IL-1β蛋白及mRNA表达并促进细胞凋亡(P<0.05),以中剂量更为明显。结论: 清热化湿方可能通过调控CD14,TNF-α,IL-1β表达,介导SGC-7901细胞S期,诱导细胞凋亡,发挥防治胃癌的效应。     

矿物药青礞石对戊四氮点燃癫痫大鼠血清中IL-1β和IL-2等细胞因子水平的影响

目的 研究青礞石对戊四氮（pentylenetetrazol,PTZ）点燃癫痫大鼠血清中炎症细胞因子表达水平的影响。方法 利用PTZ腹腔注射制备慢性癫痫大鼠模型,实验分为对照组、模型组、阳性药卡马西平组、青礞石低剂量组和青礞石高剂量组。大鼠腹主动脉取血,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-2、IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、γ-干扰素（IFN-γ）、高迁移率族蛋白B-1（HMGB-1）及超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平,并对各细胞因子之间及其与PTZ点燃癫痫大鼠结肠肠道微生物的相关性进行分析,利用SPSS 18.0对结果进行统计学分析。结果 与对照组比较,模型组大鼠血清中IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α及hs-CRP水平均显著升高（P<0.01）。与模型组比较,青礞石高、低剂量给药组大鼠血清中各细胞因子水平显著下降（P<0.05,P<0.01）。细胞因子相关性分析结果表明,IL-2与IL-6呈显著正相关（P<0.05）,IL-6与TNF-α、hs-CRP呈显著正相关（P<0.05,P<0.01）,TNF-α与hs-CRP呈显著正相关（P<0.01）,IFN-γ与HMGB-1呈显著正相关（P<0.05）。细胞因子与肠道菌群相关性分析结果表明,疣微菌门、Akkermansia菌属与炎症因子IL-6、TNF-α、hs-CRP间呈显著相关性（P<0.05）。青礞石可通过影响细胞因子（IL-6、TNF-α、hs-CRP）、Akkermansia菌属对PTZ点燃癫痫大鼠起到干预作用。结论 青礞石干预PTZ点燃癫痫可能与影响IL-1β、IL-2等细胞因子,从而降低体内炎性反应有关。     

糖痹康颗粒调控AMPK/PGC-1α/SIRT3信号通路抑制糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激反应

目的 探讨糖痹康颗粒通过调节腺苷酸活化蛋白激酶/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α/线粒体Sirtuins3（AMPK/PGC-1α/SIRT3）信号通路对糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激的影响。方法 采用ZDF大鼠建立自发性肥胖型2型糖尿病模型。成模后随机分为糖痹康颗粒高、中、低剂量组（2.5、1.25、0.625 g·kg^-1·d^-1）及硫辛酸组（0.026 8 g·kg^-1·d^-1），并设立正常组。成模后持续给药干预12周。分别检测干预前及干预后第4、8、12周大鼠血糖。第12周检测各组大鼠运动神经传导速度（MNCV）、感觉神经传导速度（SNCV）、神经血流速度、机械痛阈及热痛阈并取材坐骨神经进行苏木素-伊红（HE）染色观察组织形态；透射电镜观察坐骨神经超微结构变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测坐骨神经中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠坐骨神经组织AMPKα、AMPKβ、PGC-1α、SIRT3 mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠各时间点空腹血糖升高（P<0.01），机械痛阈降低（P<0.05），热板潜伏时间延长（P<0.01），MNCV、SNCV、神经血流速度减慢（P<0.05），SOD表达降低（P<0.01），MDA、IL-1β、TNF-α表达升高（P<0.01），AMPKα、AMPKβ、PGC-1α、SIRT3 mRNA表达均降低（P<0.01）；模型组大鼠坐骨神经纤维结构松散、排列混乱、脱髓鞘改变明显。与模型组比较，糖痹康颗粒高剂量组大鼠在干预8、12周空腹血糖降低（P<0.01），机械痛阈升高（P<0.05），热板潜伏时间缩短（P<0.01），MNCV、SNCV、神经血流速度（Flux）增快（P<0.05），SOD表达升高（P<0.01），MDA、IL-1β、TNF-α表达降低（P<0.01），AMPKα、AMPKβ、PGC-1α、SIRT3 mRNA表达升高（P<0.01）；糖痹康颗粒高剂量组大鼠坐骨神经纤维结构更紧密、排列更整齐，仅有少部分脱髓鞘改变。糖痹康颗粒高、中、低剂量组有明显的量效趋势。结论 糖痹康颗粒可能部分通过调控AMPK/PGC-1α/SIRT3信号通路发挥抗氧化应激作用，改善糖尿病大鼠坐骨神经功能。     

肺肠合治法对LPS诱导急性肺损伤大鼠NF-κB炎症通路和巨噬细胞极化的影响

目的 探究肺肠合治法（麻黄汤+大承气汤）对脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤（ALI）大鼠的作用与保护机制。方法 将Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、肺肠合治低、中、高剂量组、地塞米松组。通过LPS（10 mg·kg^-1）腹腔注射成功复制ALI大鼠模型。观察与记录各组大鼠一般状态;采用肛温测量法记录各组大鼠造模后0~8 h体温数值;造模后24 h取材,收集血清与肺组织。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-10（IL-10）、精氨酸酶-1（Arg-1）含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠肺组织中核转录因子-κB p65（NF-κB p65）、磷酸化核转录因子-κB p65（p-NF-κB p65）、核转录因子抑制蛋白α（IκBα）、磷酸化核转录因子抑制蛋白α（p-IκBα）蛋白的表达量;免疫荧光双标检测大鼠肺组织经典激活型（M1）巨噬细胞标记物CD80、IL-1β、巨噬细胞标记物F4/80、IL-10表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠体温和热效应指数（TRI）显著升高,血清促炎因子TNF-α、IL-1β和抗炎因子IL-10水平显著升高（P<0.01）,肺组织p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达显著升高（P<0.01）,肺组织巨噬细胞标志物F4/80、M1巨噬细胞标志物CD80和IL-1β的表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,肺肠合治各组和地塞米松组大鼠体温与TRI指数降低（P<0.01）,血清炎症因子TNF-α、IL-1β水平降低（P<0.05,P<0.01）,血清抗炎因子IL-10、Arg-1水平升高（P<0.05,P<0.01）,肺组织p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）,肺组织M1巨噬细胞标志物CD80、IL-1β表达显著降低和IL-10表达显著升高（P<0.01）,巨噬细胞标志物F4/80表达无明显变化。结论 肺肠合治方剂对ALI大鼠的发热与炎症状态有明显的改善,其机制可能与NF-κB炎症通路被抑制,肺组织巨噬细胞向抗炎表型极化有关。     

喘平方对哮喘豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β1及TNF-α的影响

目的: 探讨喘平方防治支气管哮喘的作用机制。 方法: 取白化豚鼠60只,随机分为正常组、模型组、麻黄组(0.20 g·kg^-1)、洋金花组(0.07 g·kg^-1)、喘平方组(0.32 g·kg^-1)、地塞米松组(7.5×10^-4 mg·kg^-1),通过对豚鼠ip卵蛋白致敏并雾化吸入激发,建立实验性哮喘豚鼠模型;治疗组自注射第14天起每天ig给药1次,连续7 d,正常组及模型组给予生理盐水。观察豚鼠的一般情况,豚鼠肺泡灌洗液中免疫球蛋白E(IgE),转化生长因子β₁(TGF-β₁),肿瘤坏死因子α(TNF-α)的变化,肺组织病理情况。 结果: 各组豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α分别为:正常组IgE(68.25±5.92) mg·L^-1,TGF-β₁(78.72±10.92)ng·L^-1,TNF-α(388.02±55.61) ng·L^-1;模型组IgE(137.28±14.38) mg·L^-1,TGF-β₁(172.39±14.04)ng·L^-1,TNF-α(752.76±51.25)ng·L^-1;喘平方组IgE(76.35±6.22) mg·L^-1,TGF-β₁(115.76±9.17)ng·L^-1,TNF-α(569.32±39.7) ng·L^-1;哮喘组及喘平方组豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α含量均高于正常组(P<0.05);喘平方组豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α含量均低于哮喘组(P<0.05)。 结论: 喘平方能够通过下调豚鼠肺泡灌洗液中IgE,TGF-β₁,TNF-α含量,可降低气道高反应性、减轻气道炎症症状、控制或延缓气道纤维化进程。     

补肾疏肝方对老年抑郁症小鼠海马氧化应激及TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的 观察慢性轻度不可预见性应激（CUMS）后老年抑郁症小鼠海马组织氧化应激和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）/Smad信号通路变化,并探讨补肾疏肝方抗抑郁的可能机制。方法 5月龄的小鼠90只,随机分为正常组、模型组、补肾疏肝方高、中、低剂量组和氟西汀组共6组,每组15只。除正常组外,其余各组小鼠均采用CUMS建立老年抑郁症模型。补肾疏肝方高、中、低剂量组小鼠在造模第1天开始同时灌胃补肾疏肝方19.5,9.75,4.87 g·kg^-1,氟西汀组小鼠灌胃氟西汀0.033 g·kg^-1,正常组和模型组小鼠灌胃等体积生理盐水,共21 d。用矿场实验评价各组小鼠的行为反应,采集小鼠海马组织并进行相关指标检测,WST-1法测超氧化物歧化酶（SOD）含量,TBA法测丙二醛（MDA）的含量,微量酶标法测谷胱甘肽（GSH）含量,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测TGF-β₁,Smad2,Smad3,Smad7 mRNA表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠OFT水平得分和垂直得分明显降低,海马组织SOD,GSH水平均下降,MDA含量明显升高（P<0.05）;TGF-β₁,Smad2,Smad3 mRNA表达均上调,Smad7 mRNA表达下调（P<0.05）。与模型组比较,补肾疏肝方高、中、低剂量组及氟西汀组小鼠海马组织SOD,GSH含量均上升,MDA含量下降（P<0.05）,补肾疏肝方高、中、低剂量组及氟西汀组小鼠海马组织TGF-β₁,Smad2,Smad3 mRNA表达均下调,Smad7 mRNA表达上调（P<0.05）。与补肾疏肝方高剂量组比较,补肾疏肝方中、低剂量组小鼠海马组织SOD,GSH含量下降,MDA含量均上升（P<0.05）;补肾疏肝方中、低剂量组小鼠海马组织TGF-β₁,Smad2,Smad3 mRNA表达均上调,Smad7 mRNA表达下调（P<0.05）。结论 补肾疏肝方可显著改善SAPM8小鼠的老年抑郁症状,其机制可能与调节海马氧化应激及TGF-β₁/Smad信号通路有关。     

鳖甲煎丸通过HIF-1α/NF-κB信号通路调控巨噬细胞极化的机制探讨

目的 探讨鳖甲煎丸通过调控巨噬细胞极化防治肝纤维化的作用和机制。方法 运用血清药理学方法，体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7，通过氯化钴（CoCl₂）刺激RAW264.7细胞建立体外缺氧模型，将细胞随机分为空白组、CoCl₂模型组（200 mmol·L^-1）、鳖甲煎丸低（0.55 g·kg^-1）、中（1.1 g·kg^-1）、高（2.2 g·kg^-1）和扶正祛瘀胶囊组（0.56 g·kg^-1扶正祛瘀胶囊）。采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测各组细胞增殖水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测巨噬细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-6 mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测巨噬细胞极化相关蛋白与HIF-1α/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路相关蛋白表达水平；细胞免疫荧光检测NF-κB信号通路相关蛋白、HIF-1α的分布及表达。结果 与空白组比较，CoCl₂刺激24 h后，RAW264.7细胞增殖受抑制明显（P<0.05）；与模型组比较，用相应含药血清处理24 h后，各用药组能促进RAW264.7细胞增殖（P<0.05）。与空白组比较，模型组HIF-1α、IL-1β、IL-6 mRNA表达均有明显升高（P<0.05）；与模型组比较，鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊处理后能不同程度的降低巨噬细胞中HIF-1α、IL-1β、IL-6 mRNA的表达水平（P<0.05）。与空白组比较，模型组HIF-1α及M1巨噬细胞表型蛋白IL-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达明显升高（P<0.05），M2巨噬细胞表型蛋白IL-10表达明显降低（P<0.05）。与模型组比较，鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊组HIF-1α、IL-6、TNF-α蛋白表达降低（P<0.05），CD163、IL-10蛋白表达升高（P<0.05）。与空白组比较，模型组NF-κB p65、磷酸化（p）-NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶α/β（p-IKKα/β）、磷酸化NF-κB抑制蛋白α（p-IκBα）蛋白表达明显升高（P<0.05）；与模型组比较，鳖甲煎丸与扶正祛瘀胶囊组NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IKKα/β、p-IκBα蛋白表达明显降低（P<0.05）。与空白组比较，模型组促进HIF-1α和NF-κB p65的入核表达；与模型组比较，鳖甲煎丸和扶正祛瘀胶囊组能抑制HIF-1α和NF-κB p65的入核表达。结论 鳖甲煎丸可调控巨噬细胞极化，减轻缺氧环境下巨噬细胞相关炎症反应损伤，从而延缓肝纤维化进展，其机制可能与其调控HIF-1α/NF-κB信号通路有关。     

葛根芩连汤对KKAy糖尿病小鼠TLR4/IKKβ/NF-κB信号通路的影响

目的 观察经方葛根芩连汤对KKAy小鼠部分炎性因子及脂多糖介导的炎症通路中关键靶点的影响,探讨其改善2型糖尿病的作用机制。方法 选取SPF级自发性2型糖尿病动物模型KKAy小鼠65只及对照C57BL/6J小鼠13只予屏障系统、高脂饲料喂养,随机血糖≥13.9 mmoL·L^-1,为成模小鼠44只。随机分为5组,每组11只。正常组（生理盐水20 mL?kg^-1）、阿卡波糖组（3.9 mg?kg^-1）、葛根芩连汤高、低剂量组（1.82、0.45 g?kg^-1）及模型组（生理盐水20 mL?kg^-1）,连续灌胃给药8周,1次/d,系统评价血糖及体质量。末次给药12 h后,摘眼球取血,提取血清及肌肉、肝脏组织。采用半定量酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测炎性因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）及葡萄糖转运子4（GluT4）含量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肌肉组织IκB磷酸化激酶β（IKKβ）蛋白、核转录因子-κB（NF-κB）及肝组织Toll样受体4（TLR4）蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组体质量及血糖显著升高（P<0.01）;与模型组比较,阿卡波糖组及葛根芩连汤组能够明显降低体质量及血糖水平（P<0.05,P<0.01）。ELISA结果显示,与正常组比较,模型组炎性因子TNF-α、IL-6含量显著升高（P<0.01）,GluT4含量明显下降（P<0.05）;与模型组比较,各给药组炎性因子TNF-α、IL-6含量均有不同程度下降（P<0.05,P<0.01）,阿卡波糖组与葛根芩连汤高剂量组GluT4含量明显升高（P<0.05,P<0.01）。Western blot分析显示,与正常组比较,模型组IKKβ、NF-κB及TLR4蛋白表达均有升高（P<0.01）;与模型组比较,阿卡波糖组与葛根芩连汤组IKKβ、NF-κB及TLR4蛋白表达均明显下降（P<0.05,P<0.01）。结论 葛根芩连汤可能在调节肠道菌群的基础上,通过下调TLR4通路中关键炎性因子的水平,抑制其激活,提高GluT4的转位及活性水平,从而在一定程度上抑制炎性级联效应,改善2型糖尿病。     

基于HIF-1α/VEGFA信号通路探讨柴胡桂枝汤对三阴性乳腺癌细胞的影响

目的 基于缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）/血管内皮生长因子A（VEGFA）信号通路探讨柴胡桂枝汤对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞的影响。方法 建立TNBC移植瘤模型,随机分为模型组,卡培他滨组（0.2 mg·kg^-1）,柴胡桂枝汤低、中、高剂量组（10.62、21.23、42.46 g·kg^-1）,每组10只,干预21 d。给药结束后,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肿瘤组织中HIF-1α mRNA表达情况;免疫组化法（IHC）检测肿瘤组织中HIF-1α、TNF-α、VEGFA的表达水平及CD34染色检测肿瘤内血管生成情况并计算微血管密度（MVD）;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肿瘤组织中HIF-1α、VEGFA、表皮生长因子受体（EGFR）蛋白的表达。结果 与模型组比较,卡培他滨组、柴胡桂枝汤低、中、高剂量组TNF-α水平显著降低（P<0.01）,HIF-1α mRNA显著降低（P<0.01）,HIF-1α、TNF-α、VEGFA和CD34阳性细胞表达及MVD明显降低（P<0.05,P<0.01）,HIF-1α、VEGFA、EGFR蛋白水平显著降低（P<0.01）。与卡培他滨组比较,柴胡桂枝汤中、高剂量组TNF-α水平显著降低（P<0.01）,HIF-1α mRNA显著降低（P<0.01）,HIF-1α、TNF-α和VEGFA阳性细胞表达显著降低（P<0.01）,CD34表达及MVD显著降低（P<0.01）,HIF-1α、VEGFA、EGFR蛋白水平均显著降低（P<0.01）。结论 柴胡桂枝汤可能通过调控HIF-1α/ VEGFA信号通路,抑制TNBC细胞血管生成,从而发挥抗肿瘤作用。     

龙胆苦苷通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻小鼠急性肝损伤的作用

目的 探究龙胆苦苷（GPS）对四氯化碳（CCl₄）诱导的急性肝损伤小鼠模型是否有保肝疗效及其对Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响。方法 将60只小鼠随机分为6组,每组10只,分别为正常组、模型组、水飞蓟素（150 mg·kg^-1）组及GPS高、中、低剂量组（200,100,50 mg·kg^-1）。给药组的小鼠按10 mL·kg^-1灌胃处理,正常组和模型组灌胃相同量的蒸馏水,每天1次,连续灌胃给药10 d后,除正常组腹腔注射花生油（10 mL·kg^-1）,其余各组腹腔注射0.12% CCl₄花生油（10 mL·kg^-1）溶液建立小鼠急性肝损伤模型。腹腔注射后禁食16 h,摘除小鼠眼球取血,收集肝脏组织。苏木素-伊红（HE）染色观察肝组织病理学改变。生化法检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）,天门冬氨酸氨基转移酶（AST）,总胆红素（TBIL）,碱性磷酸酶（ALP）,总超氧化物歧化酶（T-SOD）,γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）的水平,肝组织中丙二醛（MDA）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的水平;酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠肝脏组织中的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-6（IL-6）含量。蛋白免疫印迹法（Western blot）测定肝脏组织中TLR4,MyD88,NF-κB蛋白表达情况;免疫组化检测磷酸化NF-κB（p-NF-κB）的表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠的ALT,AST,ALP,TBIL,γ-GT及MDA水平显著升高（P<0.01）,T-SOD,GSH-Px活性显著降低（P<0.01）;与模型组比较,GPS中、高剂量组小鼠的ALT,AST,ALP,TBIL,γ-GT及MDA水平降低（P<0.05,P<0.01）,T-SOD、GSH-Px活性明显上升（P<0.05,P<0.01）;与正常组比较,模型组小鼠肝组织中TNF-α,IL-1β,IL-6含量显著升高（P<0.01）,TLR4,MyD88,p-NF-κB蛋白表达显著上升（P<0.01）;与模型组比较,GPS中、高剂量组小鼠肝组织中TNF-α,IL-1β,IL-6含量明显降低（P<0.05,P<0.01）,TLR4,MyD88,p-NF-κB蛋白表达明显下调（P<0.05,P<0.01）。结论 GPS对CCl₄引起的急性肝损伤小鼠具有一定的保肝效果,其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及减弱氧化应激反应相关。     

E2/ERβ信号通路介导引火汤改善慢性应激诱导的双侧卵巢摘除小鼠抑郁样行为

目的 观察引火汤（YHT）对慢性应激诱导的双侧卵巢摘除（OVX）小鼠抑郁样行为的影响并探索其基于雌二醇（E₂）/雌激素受体β（ERβ）信号通路的作用机制。方法 实验分两部分完成,第一部分将小鼠随机分为假手术组（Sham）,模型组（OVX）,阳性药组（E₂,0.13 mg·kg^-1）和引火汤组（YHT,23.4 g·kg^-1）。采用OVX联合慢性不可预知性温和刺激（CUMS）方法复制OVX。双侧卵巢摘除术后第8天,各组小鼠开始CUMS并开始给药,强迫游泳（FST）,悬尾（TST）,旷场（OFT）3种行为学实验观察各组小鼠不动时间、水平运动评分及垂直运动评分变化,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清、脑组织E₂水平,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测芳香化酶（Cyp19）基因转录,免疫组织化学法（IHC）检测海马齿状回ERα和ERβ表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测脑内总ERα和ERβ蛋白水平。第二部分实验分Sham,OVX,YHT和阻断剂组（Y+B,23.4 g·kg^-1+100 μg·kg^-1）,Y+B组小鼠在引火汤灌胃同时采用隔天腹腔注射方式的给予ERβ阻断剂（PHTPP）,3种行为学实验观察各组小鼠不动时间、水平运动评分及垂直运动评分变化。结果 与Sham组比较,OVX组小鼠不动时间显著增加、水平运动及垂直运动水平显著降低（P<0.01）,血清和脑内E₂显著降低（P<0.01）,脑内Cyp19 mRNA表达显著降低（P<0.01）,海马齿状回和脑内总ERα差异无统计学意义,海马齿状回和脑内总ERβ表达显著降低（P<0.01）;与OVX组比较,E₂组小鼠不动时间显著降低、水平运动及垂直运动水平显著增加（P<0.01）,血清E₂显著升高（P<0.01）,脑内Cyp19 mRNA表达差异无统计学意义,海马齿状回和脑内总ERα差异无统计学意义,海马齿状回和脑内总ERβ表达显著升高（P<0.01）,YHT组小鼠不动时间显著降低、水平运动及垂直运动水平显著增加（P<0.01）,血清E₂未见升高,脑内E₂明显升高（P<0.01）,脑内Cyp19 mRNA表达显著增加（P<0.01）,海马齿状回和脑内总ERα差异无统计学意义,海马齿状回和脑内总ERβ表达均显著升高（P<0.05,P<0.01）。PHTPP可阻断引火汤对OVX小鼠在FST,TST,OFT实验中的作用。结论 引火汤促进脑内源性雌激素合成和释放,激活E₂/ERβ信号通路可能是其改善慢性应激诱导的OVX小鼠抑郁样行为关键机制之一。     

基于NLRP3炎性小体和TLR4/NF-κB信号通路探讨黄连解毒汤治疗急性痛风性关节炎的作用机制

目的 观察黄连解毒汤对急性痛风性关节炎（AGA）模型小鼠炎性损伤的影响，探讨黄连解毒汤治疗AGA的作用机制。方法 40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组和黄连解毒汤组。采用踝关节注射单钠尿酸盐（MSU）晶体混悬液建立小鼠AGA模型，给药组分别给予黄连解毒汤水煎液（5 g·kg^-1）和秋水仙碱（0.83 mg·kg^-1），每天测量小鼠右踝关节肿胀程度，7 d后苏木素-伊红（HE）染色检测踝关节组织病理改变。另外40只C57BL/6J小鼠同样分组处理，造模18 h后，取右踝关节，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测关节炎症因子白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-6和NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎性小体NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）mRNA的表达；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6含量；蛋白免疫印迹法（Western bolt）检测NLRP3炎性小体和Toll样受体4/核转录因子-κB（TLR4/NF-κB）信号通路蛋白的表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠右踝关节显著肿胀（P<0.01），HE染色观察到踝关节明显异物肉芽肿，其间有炎症细胞浸润，黄连解毒汤干预后可以缓解踝关节肿胀（P<0.05，P<0.01），异物肉芽肿减小。与正常组比较，模型组踝关节组织中炎症因子IL-1β含量和IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表达显著升高（P<0.01），NLRP3炎性小体、Caspase-1 mRNA表达明显升高（P<0.05，P<0.01），NLRP3、Caspase-1、TLR4和NF-κB蛋白表达明显升高（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，黄连解毒汤干预明显降低炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6和NLRP3炎性小体、Caspase-1 mRNA表达（P<0.05，P<0.01），显著降低关节组织中炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6含量（P<0.01），下调NLRP3、Caspase-1、TLR4、NF-κB蛋白的表达（P<0.05，P<0.01）。结论 注射MSU晶体导致AGA小鼠关节局部炎性免疫损伤，黄连解毒汤干预减轻炎性免疫损伤，可能与其调控NLRP3炎性小体和TLR4/NF-κB信号通路相关。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨黑逍遥散对AD模型大鼠神经炎症的影响

目的 研究黑逍遥散是否可以通过调控激活Wnt β-连环蛋白（β-catenin）信号通路抑制阿尔茨海默病（AD）大鼠海马区炎症反应，改善AD大鼠认知和记忆功能障碍。方法 90只雄性Wistar大鼠先随机分别选择12只作为空白组和假手术组，剩余大鼠在左右两侧海马区注射β淀粉样蛋白₄₂（Aβ₄₂）制造AD模型大鼠，随机分为模型组、黑逍遥散低、中、高剂量组和多奈哌齐组，每组12只，并连续42 d给予相应剂量黑逍遥散和多奈哌齐灌胃。尼氏染色观察海马CA1区病理形态学变化；Morris水迷宫实验检测1~5 d大鼠逃避潜伏期的变化，第6天的空间探索能力。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠海马组织和血清中白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测检测海马中海马区糖原合成激酶-3β（GSK-3β）、β-catenin、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的蛋白表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠GSK-3β、β-catenin、PPARγ mRNA的水平。结果 与空白组比较，模型组大鼠海马CA1区神经元数量明显减少，排布不均，细胞体损坏比较明显，尼式小体不清；模型组大鼠第3~5天的逃避潜伏期均相比治疗组显著延长（P<0.01），跨台次数显著减少（P<0.01）；模型组大鼠血清和海马组织中IL-10水平显著降低，IL-6、TNF-α水平显著升高（P<0.01）；模型组GSK-3β蛋白和mRNA显著升高，β-catenin、PPARγ蛋白表达显著降低（P<0.01），差异较为明显；与模型组比较，黑逍遥散中、高剂量组和盐酸多奈哌齐组大鼠神经元细胞数量分布较多，排列整齐，结构完整，尼式小体清晰明确；黑逍遥散中、高剂量组和多奈哌齐组的第3~5天逃避潜伏期显著缩短（P<0.01），跨越平台次数显著增多（P<0.01）；大鼠海马组织和血清中IL-10的表达水平明显升高，IL-6和TNF-α显著降低（P<0.01）；大鼠海马中GSK-3β蛋白和GSK-3β mRNA表达明显降低，β-catenin、PPARγ蛋白和β-catenin、PPARγ mRNA表达水平显著升高（P<0.01）。盐酸多奈哌齐组与黑逍遥散高剂量组之间各指标比较，差异无统计学意义。结论 黑逍遥散可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制AD大鼠海马区炎症反应，改善AD模型大鼠认知和记忆障碍。