脑心安胶囊激活CREB/PGC-1α改善慢性脑缺血致VCI大鼠线粒体及氧化损伤的作用机制

目的 以慢性脑缺血致血管性认知障碍（VCI）大鼠为模型，探究脑心安胶囊对VCI大鼠脑组织线粒体功能障碍及其导致的氧化损伤的保护作用。方法 150只大鼠采用随机数字法分为造模组（130只）和假手术组（20只），以双侧颈动脉结扎法（2-VO）造模，制成慢性脑缺血大鼠模型。经筛选，将造模组中VCI造模成功的87只大鼠，随机分为模型组、阳性药组（安理申，0.5 mg·kg^-1），脑心安胶囊低、中、高剂量组（0.18、0.36、0.72 g·kg^-1），每组17~18只大鼠。经灌胃给予脑心安胶囊8周后，采用大鼠新物体识别和Y迷宫实验测定脑心安胶囊对VCI大鼠学习记忆和工作记忆的影响。以免疫荧光染色法测定大鼠脑组织8-氧鸟嘌呤（8-OxoG）含量，分光光度法测定大鼠脑组织线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ的活性、线粒体的肿胀度、线粒体膜电位、丙酮酸脱氢酶（PDH）和α-酮戊二酸脱氢酶（KGDH）活性，电镜观察大鼠脑组织线粒体亚显微结构，蛋白免疫印迹法（Western blot）测定脑组织环磷腺苷酸反应元件结合蛋白（CREB）磷酸化水平和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α（PGC-1α）、核呼吸因子-1（NRF-1）和线粒体转录因子A（mt-TFA）蛋白表达水平，光化学法测定大鼠线粒体状态Ⅳ H₂O₂生成和脑内超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）水平。结果 与假手术组比较，模型组大鼠新物体辨别指数和Y迷宫自发交替反应率显著下降（P<0.01），脑组织ROS生成量明显增加（P<0.01），线粒体膜电位和肿胀度A值显著下降（P<0.01），线粒体明显肿胀，电镜观察显示脑组织线粒体出现显著的空泡、嵴断裂等亚显微结构结构损伤，CREB磷酸化水平和PGC-1α、NRF-1和mt-TFA蛋白表达水平均显著降低（P<0.01），脑组织中PDH、KGDH活性和线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ活性均明显下降（P<0.01），线粒体状态Ⅳ H₂O₂生成显著增加（P<0.01），MDA含量明显升高（P<0.01），SOD及GSH-Px活性均显著降低（P<0.01）。与模型组比较，脑心安胶囊各剂量均能够明显提高VCI大鼠新物体辨别指数（P<0.05，P<0.01）和自发交替反应率（P<0.05，P<0.01），减少脑组织ROS生成量（P<0.01），提高线粒体膜电位和肿胀度A值（P<0.05，P<0.01），减少线粒体肿胀程度和线粒体亚显微结构损伤，提高CREB磷酸化水平和上调PGC-1α、NRF-1和mt-TFA蛋白表达（P<0.05，P<0.01），提高PDH、KGDH和线粒体呼吸链复合物Ⅲ、Ⅳ的活性（P<0.01），降低线粒体状态Ⅳ H₂O₂生成量（P<0.01），降低MDA含量（P<0.05，P<0.01），提高SOD及GSH-Px活性（P<0.01）。结论 脑心安胶囊通过激活CREB/PGC-1α通路，保护线粒体结构、功能，提高机体抗氧化能力，抑制慢性脑缺血诱导的线粒体功能障碍及其氧化损伤，改善慢性脑缺血导致的大鼠血管性认知障碍。     

温心方对心肌缺血再灌注损伤大鼠线粒体能量代谢的作用机制

目的 揭示温心方对心肌缺血再灌注损伤大鼠线粒体能量代谢的改善作用及其对沉默信息调节因子1（SIRT1）/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α（PGC-1α）/雌激素受体相关受体α（ERRα）能量信号通路的作用。方法 SPF级Wistar雄性大鼠90只，随机分为假手术组、模型组、温心方低、中、高剂量组；温心方低、中、高剂量组分别给予0.99、1.98、3.96 g·kg^-1的颗粒剂灌胃，假手术组和模型组均予以等体积生理盐水灌胃；预给药21 d后，模型组及温心方组采用冠状动脉左前降支结扎30 min，再灌注2 h复制大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI）模型，假手术组只穿线，不结扎；TTC染色观察心肌梗死面积，苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织病理形态，试剂盒检测血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）和乳酸脱氢酶（LDH）活性、心肌组织ATP含量及线粒体复合体Ⅳ（CCO）、琥珀酸脱氢酶（SDH）活性，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测心肌组织SIRT1、PGC-1α、ERRα、TFAM mRNA及蛋白表达。结果 与假手术组比较，模型组心肌纤维断裂，排列紊乱，细胞胞质水肿，细胞核出现固缩、偏移；CK-MB、LDH活性明显升高（P<0.05，P<0.01），ATP含量及CCO、SDH活性明显降低（P<0.05，P<0.01），心肌组织心肌组织SIRT1、PGC-1α、ERRα、mtTFA mRNA及蛋白表达均明显降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，温心方预处理各组心肌梗死面积显著缩小，且以高剂量组最显著（P<0.01），心肌组织病理形态有所改善，CK-MB、LDH活性明显降低（P<0.05，P<0.01），ATP含量及CCO、SDH活性均有提高，以高剂量组最显著（P<0.01），心肌组织SIRT1、PGC-1α、ERRα、TFAM mRNA及蛋白表达均有不同程度提高（P<0.05，P<0.01）。结论 温心方可通过调控SIRT1/PGC-1α/ERRα信号通路，改善心肌线粒体能量代谢，保护心肌缺血再灌注损伤。     

糖痹康颗粒调控AMPK/PGC-1α/SIRT3信号通路抑制糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激反应

目的 探讨糖痹康颗粒通过调节腺苷酸活化蛋白激酶/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α/线粒体Sirtuins3（AMPK/PGC-1α/SIRT3）信号通路对糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激的影响。方法 采用ZDF大鼠建立自发性肥胖型2型糖尿病模型。成模后随机分为糖痹康颗粒高、中、低剂量组（2.5、1.25、0.625 g·kg^-1·d^-1）及硫辛酸组（0.026 8 g·kg^-1·d^-1），并设立正常组。成模后持续给药干预12周。分别检测干预前及干预后第4、8、12周大鼠血糖。第12周检测各组大鼠运动神经传导速度（MNCV）、感觉神经传导速度（SNCV）、神经血流速度、机械痛阈及热痛阈并取材坐骨神经进行苏木素-伊红（HE）染色观察组织形态；透射电镜观察坐骨神经超微结构变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测坐骨神经中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠坐骨神经组织AMPKα、AMPKβ、PGC-1α、SIRT3 mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠各时间点空腹血糖升高（P<0.01），机械痛阈降低（P<0.05），热板潜伏时间延长（P<0.01），MNCV、SNCV、神经血流速度减慢（P<0.05），SOD表达降低（P<0.01），MDA、IL-1β、TNF-α表达升高（P<0.01），AMPKα、AMPKβ、PGC-1α、SIRT3 mRNA表达均降低（P<0.01）；模型组大鼠坐骨神经纤维结构松散、排列混乱、脱髓鞘改变明显。与模型组比较，糖痹康颗粒高剂量组大鼠在干预8、12周空腹血糖降低（P<0.01），机械痛阈升高（P<0.05），热板潜伏时间缩短（P<0.01），MNCV、SNCV、神经血流速度（Flux）增快（P<0.05），SOD表达升高（P<0.01），MDA、IL-1β、TNF-α表达降低（P<0.01），AMPKα、AMPKβ、PGC-1α、SIRT3 mRNA表达升高（P<0.01）；糖痹康颗粒高剂量组大鼠坐骨神经纤维结构更紧密、排列更整齐，仅有少部分脱髓鞘改变。糖痹康颗粒高、中、低剂量组有明显的量效趋势。结论 糖痹康颗粒可能部分通过调控AMPK/PGC-1α/SIRT3信号通路发挥抗氧化应激作用，改善糖尿病大鼠坐骨神经功能。     

黄芪桂枝五物汤加减对糖尿病大鼠坐骨神经内质网应激IRE1α/CHOP通路的影响

目的 基于肌醇需求酶1α（IRE1α）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）通路,研究黄芪桂枝五物汤加减对糖尿病大鼠坐骨神经在内质网应激方面的保护作用。方法 取60只大鼠予高糖高脂饲料喂养6周,然后按35 mg·kg^-1腹腔注射链尿佐菌素,3 d后检测大鼠随机血糖,连续检测3 d,将血糖持续≥16.7 mmol·L^-1的大鼠纳入实验,共48只。将48只大鼠随机分为模型组、α-硫辛酸组（0.026 8 g·kg^-1·d^-1）、中药高、低剂量组（2.5、1.25 g·kg^-1·d^-1）,另设置10只为正常组。连续干预16周。16周后通过卢卡斯快蓝染色（LFB）光镜下观察各组大鼠坐骨神经结构,透射电镜观察各组大鼠坐骨神经超微结构,采用化学荧光法检测大鼠血清活性氧（ROS）含量,蛋白免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链式反应分别检测大鼠坐骨神经磷酸化IRE1α（p-IRE1α）蛋白、IRE1α mRNA、CHOP蛋白和mRNA的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清中ROS含量均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组大鼠血清中ROS含量显著降低（P<0.01）。与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经出现病理改变;与模型组比较,各给药组大鼠坐骨神经病理有所改善。与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经（p-IRE1α）、CHOP蛋白表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组大鼠坐骨神经p-IRE1α、CHOP蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）。与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经IRE1α、CHOP mRNA表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组大鼠坐骨神经IRE1α和CHOP mRNA表达显著降低（P<0.01）。结论 黄芪桂枝五物汤加减可以通过抑制内质网应激IRE1α/CHOP途径相关蛋白和mRNA的表达,从而减轻内质网应激诱导的细胞凋亡,改善糖尿病大鼠坐骨神经结构和功能,从而防治糖尿病周围神经病变。     

基于HIF-1α/VEGFA信号通路探讨柴胡桂枝汤对三阴性乳腺癌细胞的影响

目的 基于缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）/血管内皮生长因子A（VEGFA）信号通路探讨柴胡桂枝汤对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞的影响。方法 建立TNBC移植瘤模型,随机分为模型组,卡培他滨组（0.2 mg·kg^-1）,柴胡桂枝汤低、中、高剂量组（10.62、21.23、42.46 g·kg^-1）,每组10只,干预21 d。给药结束后,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肿瘤组织中HIF-1α mRNA表达情况;免疫组化法（IHC）检测肿瘤组织中HIF-1α、TNF-α、VEGFA的表达水平及CD34染色检测肿瘤内血管生成情况并计算微血管密度（MVD）;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肿瘤组织中HIF-1α、VEGFA、表皮生长因子受体（EGFR）蛋白的表达。结果 与模型组比较,卡培他滨组、柴胡桂枝汤低、中、高剂量组TNF-α水平显著降低（P<0.01）,HIF-1α mRNA显著降低（P<0.01）,HIF-1α、TNF-α、VEGFA和CD34阳性细胞表达及MVD明显降低（P<0.05,P<0.01）,HIF-1α、VEGFA、EGFR蛋白水平显著降低（P<0.01）。与卡培他滨组比较,柴胡桂枝汤中、高剂量组TNF-α水平显著降低（P<0.01）,HIF-1α mRNA显著降低（P<0.01）,HIF-1α、TNF-α和VEGFA阳性细胞表达显著降低（P<0.01）,CD34表达及MVD显著降低（P<0.01）,HIF-1α、VEGFA、EGFR蛋白水平均显著降低（P<0.01）。结论 柴胡桂枝汤可能通过调控HIF-1α/ VEGFA信号通路,抑制TNBC细胞血管生成,从而发挥抗肿瘤作用。     

瓜蒌薤白半夏汤对缺血性心肌损伤大鼠的线粒体功能障碍和AMPK/PGC-1α信号通路的影响

目的 观察瓜蒌薤白半夏汤对缺血性心肌损伤大鼠的线粒体功能障碍及腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α（PGC-1α）信号通路的影响。方法 70只雄性SD大鼠，随机选取6只作为正常组（CON），其余给予高脂饲料结合注射异丙肾上腺素（5 mg·kg^-1·d^-1，7 d），建立以高血脂为基础的缺血性心脏病模型。将造模成功者随机分为模型组（MOD）、瓜蒌薤白半夏汤高剂量（GXBD-H）组、瓜蒌薤白半夏汤中剂量（GXBD-M）组、瓜蒌薤白半夏汤低剂量（GXBD-L）组和美托洛尔（MET）组。其中，GXBD-H组、GXBD-M组和GXBD-L组大鼠分别给予11.2、5.6、2.8 g·kg^-1·d^-1的瓜蒌薤白半夏汤水煎液，MET组给予美托洛尔2.6 mg·kg^-1·d^-1，CON组和MOD组给予等体积纯净水，连续28 d。心导管法测量大鼠血流动力学；透射电镜分析心肌组织线粒体变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清脑钠肽（BNP）和心肌肌钙蛋白T（cTnT）水平；线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1法）检测线粒体膜电位；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测线粒体DNA拷贝数的变化；分光光度计法检测心肌组织三磷酸腺苷（ATP）含量。蛋白免疫印迹法（Western blot）检测心肌组织磷酸化AMPK（p-AMPK）、AMPK、PGC-1α、核呼吸因子1（NRF1）和线粒体转录因子A（TFAM）的表达水平。结果 与CON组比较，MOD组的左室收缩末期压（LVESP）和左室舒张末期压（LVEDP）明显升高（P<0.05，P<0.01），以及心室收缩时室内压最大上升速率（+dp/dt_max）和左室舒张时室内压最大下降速率（-dp/dt_max）显著降低（P<0.01）；心指数和心肌间质纤维化面积均显著升高（P<0.01）及线粒体破坏损伤；血清BNP、cTnT和丙二醛（MDA）显著升高（P<0.01），以及血清超氧化物歧化酶（SOD）水平显著降低（P<0.01）；心肌线粒体膜电位、DNA拷贝数和ATP水平均显著降低（P<0.01）；心肌组织的p-AMPK/AMPK、PGC-1α、NRF1和TFAM蛋白水平显著减少（P<0.01）。与MOD组比较，GXBD-H和GXBD-M组的LVESP、LVEDP、+dp/dt_max和-dp/dt_max明显改善（P<0.05，P<0.01）；心指数和心肌间质纤维化面积均明显降低（P<0.05，P<0.01）及线粒体损伤减轻；血清BNP、cTnT和MDA明显降低（P<0.05，P<0.01），及血清SOD水平显著升高（P<0.01）；心肌线粒体膜电位、DNA拷贝数和ATP水平均明显增加（P<0.05，P<0.01）；心肌组织的p-AMPK/AMPK、PGC-1α、NRF1和TFAM蛋白水平明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 瓜蒌薤白半夏汤可以降低心肌损伤模型大鼠的心功能和心肌病理形态变化，抑制线粒体功能障碍，并上调心肌组织p-AMPK/ AMPK、PGC-1α、NRF1和TFAM蛋白表达变化。该研究为深入探索经典复方防治心肌损伤的效应机制，提供了新的实验室证据。     

芍药汤通过抑制HIF-1α调节Th17/Treg平衡治疗溃疡性结肠炎

目的 探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在溃疡性结肠炎辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）平衡中的作用及芍药汤的干预机制。方法 将48只SD大鼠随机分为正常组，模型组，美沙拉嗪组（0.42 g·kg^-1），芍药汤组（11.1 g·kg^-1），抑制剂组（2-甲氧基雌二醇，0.015 g·kg^-1），芍药汤+抑制剂组，采用2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导溃疡性结肠炎模型，各组分别对应给予生理盐水，美沙拉嗪，芍药汤，抑制剂及芍药汤+抑制剂治疗7 d，观察各组大鼠一般情况和疾病活动指数，采用苏木素-伊红（HE）染色观察结肠组织病理学改变，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清中白细胞介素-10（IL-10），IL-17，IL-23水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织叉头状/翼状螺旋转录因子P3（FoxP3），维甲酸相关孤儿受体（RORγt），HIF-1α蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠疾病活动指数（DAI）评分，肠黏膜病理学评分显著升高（P<0.01），血清中的IL-10水平显著降低（P<0.01），IL-17和IL-23显著升高（P<0.01），结肠RORγt及HIF-1α蛋白水平显著升高（P<0.01），FoxP3蛋白表达显著降低（P<0.01）；与模型组比较，芍药汤组DAI评分，肠黏膜病理学评分降低（P<0.05，P<0.01），血清中IL-10水平升高（P<0.01），IL-17，IL-23降低（P<0.01），结肠RORγt及HIF-1α蛋白水平降低（P<0.01），FoxP3蛋白表达升高（P<0.01）；与抑制剂组比较，芍药汤组及芍药汤+抑制剂组RORγt，FoxP3及HIF-1α蛋白表达差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。结论 芍药汤可以有效治疗溃疡性结肠炎，其作用机制可能与抑制HIF-1α来调节Treg/Th17的重新平衡相关。     

双蓣调脂汤对高胆固醇血症模型大鼠肝组织HNF1α/PCSK9/LDLR信号通路的影响

目的 观察高胆固醇血症大鼠肝组织中肝细胞核因子1α（HNF1α）,前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin 9型（PCSK9）,低密度脂蛋白胆固醇受体（LDLR）的表达水平,探讨双蓣调脂汤调节胆固醇代谢、缓解高胆固醇血症的作用机制。方法 40只雄性SD大鼠随机抽取8只为正常组予普通饲料喂养,其余32只予高脂饲料喂养,高胆固醇血症模型造模成功后,分为模型组,双蓣调脂汤低剂量组（7.8 g·kg^-1）,双蓣调脂汤高剂量组（15.6 g·kg^-1）,辛伐他汀组（4 mg·kg^-1）,每组8只,连续灌胃给药8周。生化法检测血清总胆固醇（TC）,甘油三酯（TG）,低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量;苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肝组织病理形态学变化;免疫组化检测大鼠肝组织中PCSK9和LDLR的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肝组织HNF1α,PCSK9和LDLR mRNA与蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清TC,TG,LDL-C水平显著升高（P<0.01）,肝脂肪变性明显,HNF1α,PCSK9 mRNA与蛋白表达水平明显上升（P<0.05）,LDLR mRNA与蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与模型组比较,双蓣调脂汤高剂量组大鼠血清TC,TG,LDL-C水平显著降低（P<0.01）,双蓣调脂汤低剂量组和辛伐他汀组大鼠血清TC,LDL-C水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,各给药组HDL-C水平没有明显变化,各治疗组肝脂肪变性明显改善,各治疗组大鼠肝脏HNF1α mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,双蓣调脂汤低、高剂量组大鼠肝脏PCSK9 mRNA与蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,辛伐他汀组大鼠肝脏PCSK9 mRNA水平显著升高（P<0.01）,蛋白表达水平呈降低趋势,各治疗组大鼠肝脏LDLR mRNA水平显著升高（P<0.01）,双蓣调脂汤高剂量组大鼠肝脏LDLR蛋白表达水平显著升高（P<0.01）,双蓣调脂汤低剂量组和辛伐他汀组大鼠肝脏LDLR蛋白表达量呈升高的趋势,免疫组化结果显示各治疗组PCSK9阳性表达减弱,LDLR阳性表达增强。双蓣调脂汤高剂量组的治疗效果略优于辛伐他汀组,双蓣调脂汤低剂量组的治疗效果与辛伐他汀组比较,差异无统计学意义。结论 双蓣调脂汤可能通过HNF1α/PCSK9/LDLR信号通路降低血脂水平,在调节胆固醇代谢和减轻大鼠高胆固醇血症中发挥积极作用。     

基于PPAR-α/CPT-1信号通路的桑叶总黄酮调控T2DM大鼠肝脏脂质代谢作用及其机制

目的 观察桑叶总黄酮改善2型糖尿病（T2DM）大鼠肝脏脂代谢紊乱的药效学作用,并基于肝脏过氧化物酶增殖物激活受体-α（PPAR-α）、肉毒碱棕榈酰基转移酶-1（CPT-l）蛋白探讨其作用机制。方法 采用醇提法+大孔树脂纯化法提取、纯化桑叶总黄酮,并进行鉴定。利用高脂肪饮食（HFD）+链脲佐菌素（STZ）法建立T2DM大鼠模型,选择血糖≥11.1 mmol·L^-1的大鼠,以桑叶总黄酮高、中、低剂量（300、150、75 mg·kg^-1）分别灌胃给药8周,观察大鼠体质量及血糖情况。苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肝脏病理变化,生化法检测大鼠血清脂代谢指标总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝脏组织PPAR-α及CPT-1 mRNA和蛋白的表达。结果 桑叶总黄酮干预8周后,与正常组比较,模型组大鼠摄食量、肝脏指数、空腹血糖显著升高（P<0.01）;与模型组比较,桑叶总黄酮高、中、低剂量组大鼠摄食量、空腹血糖、肝脏指数显著降低（P<0.01）。HE结果显示,正常组大鼠肝组织结构完整未见明显异常;模型组大鼠肝细胞空泡变性且有炎性浸润;桑叶总黄酮高、中、低剂量组大鼠肝脏结构未见明显异常。血脂四项结果显示,与正常组比较,模型组大鼠TC、TG、LDL-C水平显著升高（P<0.01）,HDL-C水平显著降低（P<0.01）;与模型组比较,各给药组TC、TG、LDL-C水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,HDL-C水平显著增加（P<0.01）。Real-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组大鼠PPAR-α和CPT-1 mRNA表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,桑叶总黄酮高剂量组PPAR-α和CPT-1 mRNA表达显著升高（P<0.01）。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠PPAR-α和CPT-1蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,桑叶总黄酮高剂量组PPAR-α和CPT-1蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论 桑叶总黄酮可有效降低T2DM大鼠血糖,改善肝脏脂质代谢紊乱,其发挥降糖调脂的作用机制可能是通过激活调控PPAR-α和CPT-1蛋白、促进脂肪酸氧化分解,发挥调控脂质代谢,进而发挥降糖作用。     

黄连解毒汤对Aβ1-42诱导AD大鼠学习记忆能力及胆碱能系统的影响

目的 探讨黄连解毒汤对β-淀粉样蛋白（Aβ）_1-42诱导阿尔茨海默病（AD）模型大鼠学习记忆能力和胆碱能系统的影响。方法 选用60只雄性SD大鼠，分为正常组，模型组，石杉碱甲组（2.1×10^-5 g·kg^-1），黄连解毒汤高、中、低剂量组（6，3，1.5 g·kg^-1）。运用Aβ_1-42海马注射复制AD大鼠模型，术后连续灌胃治疗4周，进行Morris水迷宫实验。苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠海马病理改变，腹主动脉取血，酶联免疫吸附测定（ELISA）检测大鼠血清、海马中乙酰胆碱（ACh），乙酰胆碱酯酶（AchE），胆碱乙酰转移酶（ChAT）含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAChR）蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）检测海马α7nAChR mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组动物脑组织皮质区神经元坏死、海马区锥体细胞或颗粒细胞坏死、排列紊乱和炎性细胞浸润等病理改变明显，大鼠逃避潜伏期延长、逃逸平台次数降低、有效区域停留时间、有效区域游泳路径均减少（P<0.05，P<0.01），血清中ACh，ChAT浓度降低（P<0.01），海马中ACh，AchE，ChAT含量，α7nAChR蛋白，α7nAChR mRNA表达降低（P<0.01）；与模型组比较，黄连解毒汤中剂量组逃避潜伏期变短（P<0.05），逃逸平台次数、有效区域游泳路径、有效区域停留时间增加（P<0.05，P<0.01），血清ACh，ChAT含量和海马AchE，ChAT，α7nAChR mRNA表达上升（P<0.05），海马α7nAChR蛋白表达升高明显（P<0.01）；高剂量组有效区域有效区域停留时间延长（P<0.01）；逃逸平台次数增加，血清ACh，ChAT含量和海马ACh，AchE，α7nAChR蛋白，α7nAChR mRNA表达上升（P<0.05）。结论 黄连解毒汤可显著改善Aβ_1-42诱导AD大鼠学习记忆能力，其作用机制可能与改善Aβ_1-42所导致的胆碱能系统损伤，增强胆碱能系统功能有关。     

乌头汤通过下调HIF-1α/VEGFA/Ang信号通路抑制AIA风寒湿痹证大鼠血管翳形成

目的 探讨乌头汤对佐剂型关节炎（AIA）风寒湿痹证大鼠血管翳形成的抑制作用及其潜在作用机制。方法 将无特定病原体（SPF）雄性SD大鼠40只,按随机数字表法分为空白组、AIA风寒湿痹证组［完全弗氏佐剂（CFA）,200 μg］、乌头汤组（15 g·kg^-1·d^-1）、吲哚美辛组（10 mg·kg^-1）,除空白组外,其余各组注射CFA前给予风寒湿刺激。连续给药30 d,期间观察AIA风寒湿痹证大鼠的基本情况、发病时间、关节炎评分、足容积。最终取外周动脉血、踝关节和滑膜组织。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子A（VEGFA）蛋白含量和风湿3项,包括抗O（ASO）、C反应蛋白（CRP）和类风湿因子（RF）;苏木素-伊红（HE）染色观察关节组织形态学改变;免疫组化检测踝关节通路关键蛋白HIF-1α和VEGFA;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠滑膜组织中HIF-1α、VEGFA、血管生成素-1（Ang-1）、血管生成素-2（Ang-2）mRNA表达。结果 与空白组比较,AIA风寒湿痹证大鼠足肿容积和关节炎评分显著升高（P<0.01）;血清CRP、RF、ASO阳性表达显著（P<0.01）;HE染色可见踝关节滑膜炎性增生,血管新生、血管翳形成,骨破坏程度加重,提示模型构建成功。乌头汤干预后,发病时间显著延迟（P<0.01）;足容积和关节炎评分显著降低（P<0.01）;血清CRP、RF、ASO含量显著下降（P<0.01）;滑膜组织炎性增生明显缓解,血管新生及血管翳减少,骨破坏减轻;滑膜HIF-1α、VEGFA、Ang-1、Ang-2 mRNA明显降低（P<0.05,P<0.01）;血清与踝关节HIF-1α和VEGFA蛋白表达显著下降（P<0.01）。在吲哚美辛组中,大鼠发病时间显著延迟（P<0.01）;足容积和关节炎评分显著降低（P<0.01）;血清CRP、RF、和ASO含量显著下降（P<0.01）;HIF-1α/VEGFA/Ang信号通路激活,病理组织损伤改善。结论 乌头汤可延缓AIA风寒湿痹证大鼠发病时间,降低足容积、关节炎评分、风湿活动度,改善关节组织病理情况,对血管翳形成具有抑制作用,其作用机制可能与下调HIF-1α/VEGFA/Ang通路表达有关。     

青蒿琥酯对实验性脉络膜新生血管的干预作用及对视网膜脉络膜组织HIF-1α，VEGF表达的影响

目的 通过观察青蒿琥酯（ART）对实验性脉络膜新生血管（CNV）及相关蛋白表达的影响,探讨其对CNV的干预作用及可能机制。方法 将80只BN大鼠随机分为5组,每组16只,除正常组外,其余应用532 nm激光机建立CNV动物模型。5组分别灌胃给药14 d,ART低剂量、高剂量组10.08,20.16 mg·kg^-1·d^-1,正常组、模型组、康柏西普组等容积1%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液灌胃,同时康柏西普组予5 μL玻璃体腔注射1次。分别在7,14 d应用眼底荧光素血管造影法（FFA）评价CNV荧光素渗漏情况（灰度值）,苏木素-伊红（HE）染色观察CNV组织病理学变化,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测视网膜脉络膜中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）,血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达水平。结果 FFA结果显示,与正常组比较,模型组灰度值在7 d及14 d时升高（P<0.01）;7 d时与模型组比较,ART高剂量组、康柏西普组灰度值降低（P<0.01）;14 d时与模型组比较,ART各剂量组、康柏西普组灰度值不同程度降低（P<0.05,P<0.01）。HE结果显示,与正常组比较,模型组CNV厚度值在7 d及14 d时显著升高（P<0.01）;与模型组比较,ART各剂量组、康柏西普组CNV厚度值降低（P<0.01）。与正常组比较,模型组HIF-1α,VEGF表达量在7 d及14 d时不同程度升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,ART各剂量组、康柏西普组表达量降低（P<0.01）。结论 ART对实验性CNV具有抑制作用,其机制与下调实验性CNV形成早期HIF-1α,VEGF的表达有关。     

右归丸通过AOPPs调控RAGE/ROS/NF-κB轴及Wnt/β-catenin信号通路对阿霉素诱导肾病综合征大鼠的保护机制

目的 探究右归丸对阿霉素诱导的肾病综合征（NS）大鼠的影响及其作用机制。方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、右归丸低、中、高剂量组和泼尼松组。模型组大鼠尾静脉注射阿霉素构建NS模型,右归丸低、中、高剂量组分别按生药2.8、5.6、11.2 g·kg^-1·d^-1灌胃,泼尼松组以醋酸泼尼松6.3 mg·kg^-1·d^-1灌胃。各用药组连续给药6周,正常组及模型组灌服等体积生理盐水。BCA法检测24 h尿蛋白（24 h UP）;全自动生化分析仪检测血清尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）、白蛋白（ALB）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）水平;苏木素-伊红（HE）染色观察肾组织病理形态变化;试剂盒检测血清晚期氧化蛋白产物（AOPPs）、活性氧（ROS）;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肾组织晚期糖基化终产物受体（RAGE）、核转录因子-κB（NF-κB）磷酸化水平、Wnt及β-连环蛋白（β-catenin）蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠24 h UP、血清BUN、SCr、TC、TG、AOPPs、ROS水平均显著升高（P<0.01）,ALB显著降低（P<0.01）,且肾组织存在典型的病理性损伤,RAGE、磷酸化（p）-NF-κB、Wnt1及β-catenin蛋白表达均显著升高（P<0.01）。与模型组比较,右归丸低、中、高剂量组大鼠24 h UP、血清BUN、SCr、TC、TG、AOPPs、ROS水平均显著降低（P<0.01）,ALB明显升高（P<0.01）,肾组织损伤减轻,RAGE、p-NF-κB、Wnt1及β-catenin蛋白表达均显著降低（P<0.01）,且呈剂量相关。结论 右归丸能够改善阿霉素诱导的NS大鼠肾损伤,其机制可能与降低AOPPs水平,抑制RAGE/ROS/NF-κB轴及Wnt/β-catenin信号活化相关。     

基于p38 MAPK/NF-κB信号通路探讨柴胡加龙骨牡蛎汤干预广泛性焦虑模型大鼠的作用机制

目的 研究柴胡加龙骨牡蛎汤是否可以通过调控抑制p38丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子-κB（p38 MAPK/NF-κB）信号通路抑制广泛性焦虑（GAD）大鼠下丘脑区炎症反应，改善GAD大鼠的焦虑样行为，缓解GAD大鼠的焦虑症状。方法 74只Wistar大鼠随机选择12只作为空白组，剩余大鼠采用慢性束缚应激法制造GAD模型大鼠，造模14 d后进行旷场实验（OFT）和高架十字迷宫实验（PMT）检测各组大鼠焦虑样行为，筛选造模成功的大鼠60只，随机分为模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组（6、12、24 g·kg^-1）和地西泮组（1 mg·kg^-1），每组12只，连续14 d灌胃相应剂量柴胡加龙骨牡蛎汤和地西泮，给药14 d后继续通过旷场和十字迷宫实验观察大鼠焦虑样行为的变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠下丘脑和血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素IL-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测p38 MAPK、NF-κB p65、NF-κB抑制因子α（IκBα）、钙结合蛋白（Iba-1）mRNA的水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠下丘脑p38 MAPK、磷酸化（p）-p38 MAPK、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IκBα蛋白的表达水平；免疫荧光法检测大鼠下丘脑小胶质细胞激活蛋白Iba-1表达情况。结果 与空白组比较，模型组大鼠体质量较轻且皮毛散乱黯黄、易躁易怒、喜在角落蛰伏，OFT边缘运动距离和边缘运动时间显著增加（P<0.01），PMT开臂运动距离、开臂运动时间及进入开臂次数显著减少（P<0.01），下丘脑室旁核小胶质细胞激活标志蛋白Iba-1荧光强度显著升高（P<0.01），血清和下丘脑中IL-1β、IL-6、TNF-α显著增多（P<0.01），下丘脑p38 MAPK、NF-κB p65、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65、Iba-1蛋白及mRNA表达明显升高（P<0.05，P<0.01），IκBα蛋白及mRNA表达显著减低（P<0.01）。与模型组比较，柴胡加龙骨牡蛎汤中、高剂量组和地西泮组大鼠体质量较重且皮毛较为光滑、活动较为正常，OFT边缘运动距离和时间明显减少（P<0.05，P<0.01），PMT开臂运动距离及开臂运动时间明显增加（P<0.05，P<0.01），下丘脑小胶质细胞激活标志蛋白Iba-1荧光强度降低（P<0.05，P<0.01），血清和下丘脑组织中IL-1β、IL-6、TNF-α明显降低（P<0.05，P<0.01），下丘脑p38 MAPK、NF-κB p65、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65、Iba-1蛋白及mRNA表达明显降低（P<0.05，P<0.01），IκBα蛋白及mRNA表达明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 柴胡加龙骨牡蛎汤可通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路，降低GAD大鼠下丘脑内小胶质细胞活化度、下调促炎因子水平，发挥改善大鼠焦虑样行为、缓解大鼠焦虑状态的作用。     

温经汤对子宫内膜异位症患者异位内膜间质细胞HIF-1α表达及线粒体功能的调控作用

目的 从调控低氧应激及线粒体功能角度探讨温经汤防治子宫内膜异位症（EMT）的作用机制。方法 采用消化法原代培养EMT患者异位子宫内膜间质细胞（ESCs），实验设正常（Control）组、5%空白血清（5% KBXQ）组、10%空白血清（10% KBXQ）组、5%温经汤血清（5% WJTXQ）组、10%温经汤血清（10% WJTXQ）组。噻唑蓝（MTT）比色法检测不同组ESCs增殖情况，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA及蛋白表达，透射电镜观察ESCs线粒体超微结构，高内涵分析（HCS）法多参数同时检测细胞线粒体功能［线粒体膜电位，线粒体膜电位（MMP）和细胞色素C（Cyt C）表达］及细胞凋亡情况（细胞膜通透性、细胞核荧光强度、细胞核大小及细胞数量），流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax），Bcl-2和剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）蛋白表达。结果 与Control组比较，5% KBXQ和10% KBXQ组细胞活力显著增加（P<0.01）；HIF-1α mRNA及蛋白表达水平无明显变化；透射电镜观察可见线粒体嵴明显，线粒体内外膜清晰；HCS多通道荧光染色显示，MMP及Cyt C表达、细胞膜通透性无显著变化，细胞核呈现均匀淡染；细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白表达及Bax/Bcl-2值均无明显变化。与Control组及相应体积分数KBXQ组比较，5% WJTXQ及10% WJTXQ组细胞活力显著下降（P<0.01）；HIF-1α mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01）；线粒体超微结构破坏，部分线粒体肿胀，嵴模糊；MMP显著降低，Cyt C释放量明显增加（P<0.05，P<0.01）；细胞膜通透性显著增加（P<0.01），并可观察到核固缩、核内DNA凝集、细胞数量下降等凋亡特征（P<0.05，P<0.01）；流式细胞术结果显示，细胞凋亡率显著升高（P<0.01），与HCS分析结果一致；且cleaved Caspase-3蛋白表达水平及Bax/Bcl-2值明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 温经汤能够下调异位ESCs中HIF-1α表达而改善低氧应激，抑制细胞增殖，降低线粒体生物活性，诱导细胞凋亡，这可能是其防治EMT的作用机制。     

基于TNF-α/TNFR1/RIPKs通路探讨二陈汤加味对COPD炎症的作用机制

目的 基于肿瘤坏死因子-α（TNF-α）/肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）/受体相互作用蛋白激酶（RIPKs）信号通路,研究二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠模型炎症的影响,探讨其作用机制。方法 SD大鼠60只,随机分为正常组、模型组、二陈汤加味高、中、低剂量组、消咳喘组,每组10只。采用香烟烟雾联合脂多糖（LPS）方法制备COPD大鼠模型,二陈汤加味高、中、低剂量组分别以20、10、5 g·kg^-1·d^-1灌胃,消咳喘以3.5 mL·kg^-1·d^-1灌胃,正常组与模型组灌胃等量生理盐水,持续干预21 d。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α、TNFR1的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肺组织中受体相互作用蛋白激酶1（RIPK1）、受体相互作用蛋白激酶3（RIPK3）、混合系列激酶样结构域蛋白（MLKL） mRNA表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺组织中RIPK1、RIPK3、MLKL蛋白表达,苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织的病理变化。结果 与正常组比较,模型组大鼠BALF中TNF-α、TNFR1含量显著升高（P<0.01）,肺组织中RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,二陈汤加味高、中、低剂量组及消咳喘组大鼠BALF中TNF-α、TNFR1含量显著降低（P<0.01）,肺组织中RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA及蛋白表达水平有不同程度的降低（P<0.05,P<0.01）。结论 二陈汤加味能够有效改善COPD大鼠肺组织的炎症反应,其机制可能是通过抑制TNF-α/TNFR1/RIPKs信号通路。     

桑叶调节PI3K/Akt/PPARα/CPT-1通路改善2型糖尿病大鼠肝脏糖脂代谢紊乱机制

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/过氧化物酶体增殖物激活受体α/肉毒碱棕榈酰基转移酶-1（PI3K/Akt/PPARα/CPT-1）信号通路探讨桑叶水提物对2型糖尿病（T2DM）大鼠肝脏糖脂代谢紊乱的作用及其机制。方法 高脂喂养联合腹腔注射链脲佐菌素（STZ）方法制备T2DM模型,按血糖、体质量将造模成功大鼠随机分为模型组、二甲双胍（0.2 g·kg^-1）组和桑叶水提物（含生药4.0 g·kg^-1）组,连续给药8周,每周相同时间测定空腹血糖。苏木素-伊红（HE）染色、油红O染色观察肝脏组织形态学和脂肪变化;生化分析法测定血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨基酸氨基转移酶（AST）水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝脏磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、PI3K、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、Akt、PPAR-α、CPT-1蛋白表达。结果 给药8周后,与正常组比较,模型组大鼠血糖显著升高（P<0.01）;与模型组比较,桑叶水提物组大鼠血糖显著降低（P<0.01）。HE染色显示,正常组大鼠肝组织结构完整,肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列;模型组大鼠肝细胞损伤明显;与模型组比较,桑叶水提物组大鼠空泡变性程度显著降低,未见小胆管增生等病变。油红O染色显示,正常组大鼠肝细胞无明显脂肪变性、坏死,肝细胞几乎无脂滴;模型组大鼠肝内脂滴较正常组明显增加;桑叶给药可明显减少大鼠肝脏脂滴。模型组大鼠TC、TG、LDL-C、AST、ALT水平较正常组显著升高（P<0.01）;桑叶水提物组大鼠TC、TG、LDL-C、AST、ALT水平较模型组明显降低（P<0.05,P<0.01）。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、PPARα和CPT-1的蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,桑叶水提物能明显增加p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、PPARα和CPT-1的蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论 桑叶水提物可改善T2DM大鼠肝脏糖代谢紊乱,降糖机制可能与调控PI3K/Akt/PPAR-α/CPT-1信号通路有关。     

加味升降散调控HIF-1α/NOX4信号通路对膜性肾病大鼠氧化应激和凋亡的影响

目的 探讨加味升降散对膜性肾病（MN）大鼠血清缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4（NOX4）信号通路的干预作用,研究其减轻肾组织氧化应激和凋亡的相关机制。方法 采用阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）尾静脉注射方法复制MN模型,将成功造模的大鼠随机分为模型组,加味升降散组和贝那普利组。各组根据相应的药物剂量灌胃（ig）,每日1次。在给药的第4周末检测相关指标,检测24 h尿蛋白（UTP）,尿素氮（BUN）,肌酐（SCr）的变化情况,采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠肾脏中超氧化物歧化酶（SOD）,丙二醛（MDA）,活性氧（ROS）水平,原位末端标记法（TUNEL）检测大鼠肾组织细胞凋亡率,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠肾脏中HIF-1α,NOX4的mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肾脏HIF-1α,NOX4蛋白表达水平,免疫组化（IHC）检测大鼠肾脏相关凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,B细胞淋巴瘤-xl（Bcl-xl）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）,Bcl-2细胞死亡调节子抗体（Bim）蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠UTP明显上升（P<0.05）,SOD水平明显减少,MDA,ROS明显增多（P<0.05）,HIF-1α,NOX4的mRNA及蛋白表达水平明显上升（P<0.05）,Bax,Bim蛋白表达水平明显增高,Bcl-xl,Bcl-2蛋白表达水平下降（P<0.05）,肾组织细胞凋亡显著增多;与模型组比较,各给药组大鼠UTP水平均有不同程度下降（P<0.05）,SOD水平明显上调,MDA,ROS含量显著下降（P<0.05）,HIF-1α,NOX4的mRNA及蛋白表达量明显下降（P<0.05）,Bax,Bim蛋白表达水平下降,Bcl-xl,Bcl-2蛋白表达水平明显上升（P<0.05）,肾组织细胞凋亡显著减少。结论 加味升降散的保肾作用可能与其通过抑制HIF-1α/NOX4通路,缓解MN大鼠肾组织氧化应激状态,减少肾组织细胞凋亡有关。     

E2/ERβ信号通路介导引火汤改善慢性应激诱导的双侧卵巢摘除小鼠抑郁样行为

目的 观察引火汤（YHT）对慢性应激诱导的双侧卵巢摘除（OVX）小鼠抑郁样行为的影响并探索其基于雌二醇（E₂）/雌激素受体β（ERβ）信号通路的作用机制。方法 实验分两部分完成,第一部分将小鼠随机分为假手术组（Sham）,模型组（OVX）,阳性药组（E₂,0.13 mg·kg^-1）和引火汤组（YHT,23.4 g·kg^-1）。采用OVX联合慢性不可预知性温和刺激（CUMS）方法复制OVX。双侧卵巢摘除术后第8天,各组小鼠开始CUMS并开始给药,强迫游泳（FST）,悬尾（TST）,旷场（OFT）3种行为学实验观察各组小鼠不动时间、水平运动评分及垂直运动评分变化,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清、脑组织E₂水平,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测芳香化酶（Cyp19）基因转录,免疫组织化学法（IHC）检测海马齿状回ERα和ERβ表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测脑内总ERα和ERβ蛋白水平。第二部分实验分Sham,OVX,YHT和阻断剂组（Y+B,23.4 g·kg^-1+100 μg·kg^-1）,Y+B组小鼠在引火汤灌胃同时采用隔天腹腔注射方式的给予ERβ阻断剂（PHTPP）,3种行为学实验观察各组小鼠不动时间、水平运动评分及垂直运动评分变化。结果 与Sham组比较,OVX组小鼠不动时间显著增加、水平运动及垂直运动水平显著降低（P<0.01）,血清和脑内E₂显著降低（P<0.01）,脑内Cyp19 mRNA表达显著降低（P<0.01）,海马齿状回和脑内总ERα差异无统计学意义,海马齿状回和脑内总ERβ表达显著降低（P<0.01）;与OVX组比较,E₂组小鼠不动时间显著降低、水平运动及垂直运动水平显著增加（P<0.01）,血清E₂显著升高（P<0.01）,脑内Cyp19 mRNA表达差异无统计学意义,海马齿状回和脑内总ERα差异无统计学意义,海马齿状回和脑内总ERβ表达显著升高（P<0.01）,YHT组小鼠不动时间显著降低、水平运动及垂直运动水平显著增加（P<0.01）,血清E₂未见升高,脑内E₂明显升高（P<0.01）,脑内Cyp19 mRNA表达显著增加（P<0.01）,海马齿状回和脑内总ERα差异无统计学意义,海马齿状回和脑内总ERβ表达均显著升高（P<0.05,P<0.01）。PHTPP可阻断引火汤对OVX小鼠在FST,TST,OFT实验中的作用。结论 引火汤促进脑内源性雌激素合成和释放,激活E₂/ERβ信号通路可能是其改善慢性应激诱导的OVX小鼠抑郁样行为关键机制之一。     

基于NF-κB/NLRP3通路探究十大功劳叶提取物对抑郁症大鼠炎症的影响及机制

目的 研究十大功劳叶提取物的抗抑郁作用及其潜在机制。方法 经HPLC-MS/MS手段鉴定分离十大功劳叶提取物主要化学成分。通过小鼠行为绝望实验初步探究十大功劳叶提取物的潜在抗抑郁作用,将小鼠随机分为空白组、氟西汀组（10 mg·kg^-1）、十大功劳叶提取物组（10、2.5 g·kg^-1）,连续灌胃给药12 d,于末次给药1 h后,测定小鼠游泳不动时间和悬尾不动时间。进而采用利血平（0.5 mg·kg^-1）腹腔注射诱导大鼠抑郁模型探究其抗抑郁作用机制,分组如下,分别为正常组、模型组、氟西汀组（1.8 mg·kg^-1）、十大功劳叶提取物组（10、2.5 g·kg^-1）,每天灌胃给药1次,连续10 d,末次给药1 h后,做行为学检查;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的水平;免疫组化法测定大鼠脑组织中IL-6和IL-1β蛋白的表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马组织中核转录因子-κB（NF-κB）和NOD样受体蛋白3（NLRP3）蛋白的表达。结果 从十大功劳叶提取物中分离鉴定得到7种化学成分,主要为生物碱。小鼠行为绝望实验结果显示,与空白组比较,十大功劳叶提取物高剂量组小鼠游泳不动时间和悬尾不动时间明显缩短（P<0.05,P<0.01）。大鼠抑郁实验结果显示,与正常组比较,模型组中大鼠上睑下垂现象明显增加（P<0.05）,圈内保留时间显著延长（P<0.01）;大鼠血清中IL-6、TNF-α水平明显升高（P<0.05）;大鼠脑组织中IL-6、IL-1β免疫组织化学染色阳性表达率显著升高（P<0.01）;大鼠海马组织中NF-κB、NLRP3蛋白表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,十大功劳叶提取物高剂量明显缩短大鼠在圈内保留时间（P<0.05）,降低大鼠血清中IL-6、TNF-α水平（P<0.05,P<0.01）,降低大鼠脑组织中IL-6、IL-1β免疫组织化学染色阳性表达率（P<0.01）;降低大鼠海马组织中NF-κB、NLRP3蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论 十大功劳叶提取物具有明显的抗抑郁作用,且能改善利血平诱导的抑郁大鼠炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB/NLRP3信号通路有关。