中药基于TGF-β/Smad信号通路改善糖尿病心肌病的研究进展

糖尿病心肌病（DCM）是糖尿病最常见的心血管病变之一。DCM的发生、发展与心肌纤维化密切相关,研究表明心肌纤维化是DCM重要的病理特征,因此针对心肌纤维化的治疗有助于延缓DCM的进程。在DCM进展的过程中,转化生长因子-β（TGF-β）/Smad信号通路的异常转导是高血糖诱导心肌纤维化的重要机制,TGF-β是心肌纤维化的关键因子,在DCM心肌纤维化过程中处于过度表达状态,Smad是TGF-β下游的主要效应因,TGF-β/Smad信号通过诱导心肌细胞凋亡,刺激肌成纤维细胞的过度产生,增加心肌细胞外基质（ECM）的沉积,在糖尿病心脏心肌纤维化的发病机制中发挥复杂作用。近年来中药在DCM的防治中发挥愈发重要的作用,基于TGF-β/Smad信号探寻中药干预DN进程的研究也逐渐增多。诸多药理研究表明,中药在防治DCM方面具备安全、高效等优势,具有明确的抑制心肌胶原沉积、抗心肌纤维化、改善心脏功能,保护心肌等功效,TGF-β/Smad信号通路是中药、中药单体和中药复方发挥DCM心肌保护作用的关键通路之一。鉴基于此,该篇将对近约10年以来中医药干预TGF-β/Smad信号通路治疗DCM现有的药理和实验研究成果进行综述,以期能为中药治疗DCM的进一步深入研究、开发和应用提供参考。     

糖痹康颗粒调控AMPK/NF-κB通路改善糖尿病大鼠坐骨神经炎症反应

目的 探讨糖痹康颗粒通过调控腺苷活化蛋白激酶/核转录因子-κB（AMPK/NF-κB）通路对糖尿病大鼠坐骨神经炎症的影响。方法 SD大鼠高脂高糖饲料诱导连续8周后按单次35 mg·kg^-1链脲佐菌素（STZ）腹腔注射造模。成模后按体质量、血糖随机将大鼠分为模型组和各给药组、糖痹康颗粒低、中、高剂量组（0.625、1.25、2.5 g·kg^-1）及硫辛酸组（0.026 8 g·kg^-1）,并设正常组。成模后持续给药干预12周。期间分别检测治疗前及治疗第4、8、12周大鼠的体质量、血糖水平及热痛阈;于给药第12周时取材坐骨神经进行苏木素-伊红（HE）、劳克坚牢蓝（LFB）染色,扫描电镜观察坐骨神经超微结构变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测坐骨神经中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠坐骨神经组织中AMPK、磷酸化（p）-AMPK、NF-κB的蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠造模后各时间点血糖浓度、热痛阈均显著升高（P<0.01）;坐骨神经IL-1β、TNF-α水平及NF-κB蛋白表达显著升高（P<0.01）,p-AMPK/AMPK蛋白表达显著降低（P<0.01）。经糖痹康颗粒治疗后,与模型组比较,糖痹康颗粒各组热痛阈明显降低（P<0.05,P<0.01）,坐骨神经IL-1β、TNF-α水平及NF-κB蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）;糖痹康颗粒高、中剂量组p-AMPK/AMPK蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。坐骨神经形态学观察显示,糖痹康颗粒治疗后大鼠坐骨神经排列整齐度、致密程度、脱髓鞘变化均优于模型组。结论 糖痹康颗粒可以改善糖尿病大鼠坐骨神经功能、减轻神经炎症损伤,其作用机制可能与上调AMPK/NF-κB通路中AMPK的表达,抑制下游NF-κB表达,从而减轻因NF-κB激活引起IL-1β、TNF-α等炎症因子升高造成的神经炎症反应相关。     

穿山龙颗粒制剂对自身免疫性甲状腺炎大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的 通过观察穿山龙颗粒制剂对Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响，探讨其治疗自身免疫性甲状腺炎（AIT）大鼠的作用机制。方法 40只Lewis大鼠采用高碘饮水诱导和猪甲状腺球蛋白佐剂注射的方法制备AIT模型。6周后随机分为模型组、穿山龙低、中、高剂量组（0.52、1.03、2.06 g·kg^-1·d^-1），每组10只，分别予以0.01 mL·g^-1·d^-1相应体积混悬液，正常组及模型组大鼠予以同体积去离子水，灌胃8周后取材。取大鼠血清用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测甲状腺球蛋白抗体（TGAb）、甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）；检测游离三碘甲状腺原氨酸（FT₃）、游离甲状腺素（FT₄）、促甲状腺激素（TSH）的浓度；取大鼠甲状腺组织行苏木素-伊红（HE）染色，光镜下观察甲状腺组织的病理变化，并用免疫组化法及实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）测定TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及mRNA的相对表达量。结果 与正常组比较，模型组大鼠血清中TPOAb、TGAb浓度均显著升高（P<0.01），FT3、FT4显著升高（P<0.01），TSH显著降低（P<0.01）；与模型组比较，3个穿山龙剂量组的TPOAb、TGAb浓度均显著下降（P<0.01），穿山龙高剂量组FT3、FT4浓度显著下降（P<0.01），TSH显著升高（P<0.01）。HE染色示模型组甲状腺滤泡间隙存在淋巴细胞浸润，大量滤泡腔被破坏或变小，腔内胶质含量减少，滤泡壁变薄或被破坏，而穿山龙治疗组大鼠甲状腺组织内淋巴细胞浸润较模型组明显减少，甲状腺滤泡结构更为完整。与正常组比较，模型组的TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达显著上调（P<0.01），TLR4、MyD88 mRNA相对表达量显著上调（P<0.01），NF-κB mRNA相对表达量显著上调（P<0.01）；与模型组比较，穿山龙高剂量组的TLR4蛋白及mRNA相对表达量显著下调（P<0.05），MyD88蛋白表达显著下调（P<0.01）、mRNA相对表达量显著下调（P<0.05），NF-κB蛋白及mRNA相对表达量均显著下调（P<0.01）。结论 穿山龙颗粒制剂可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路的激活，对自身免疫性甲状腺炎起到治疗作用。     

甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎大鼠T-bet/GATA3的影响＊

目的 观察甲炎康泰（JYKT）复方颗粒对自身免疫性甲状腺炎（autoimmune thyroiditis，AIT）大鼠Th1/Th2细胞转录因子T-bet/GATA3的影响。方法 50只Lewis大鼠，雌性，每组10只随机分为正常对照组、模型组、JYKT低、中、高剂量组。模型组与给药组大鼠皮下多点注射猪甲状腺球蛋白和弗化剂的方法建立自身免疫性甲状腺炎大鼠（AIT大鼠），大鼠造模6周后，正常、模型组大鼠每日予以0.9 mL/100 g双蒸水，中药组大鼠予以同体积药物混悬液连续8周。给药结束后RT-PCR检测各组大鼠脾脏中T-bet、GATA3 mRNA的表达情况；Western Blot检测各组大鼠脾脏中T-bet、GATA3的蛋白表达情况；免疫组化法测定大鼠甲状腺组织T-bet、GATA3蛋白的表达情况。结果 与正常组比较，模型组T-bet、GATA3 mRNA及蛋白表达均显著上升（P < 0.01）；与模型组比较，甲炎康泰低、中、高剂量组T-bet、GATA3 mRNA及蛋白均下降（P < 0.05，P < 0.01）。结论 T-bet/GATA3是影响Th1/Th2平衡的关键转录因子，甲炎康泰可调控T-bet/GATA3表达，从而影响了自身免疫性甲状腺炎的发生与发展。     

橄榄苦甙改善db/db小鼠肝脏胰岛素抵抗作用机制研究

目的：本研究主要观察橄榄苦甙（OL）改善肥胖db/db小鼠胰岛素抵抗的作用机制。方法：6-8周龄雄性db/db小鼠12只,按体质量和随机血糖随机分为OL组和模型组,每组6只,另设同周龄C57BL/6J小鼠6只为正常组。OL组灌服OL水溶液50mg·kg^-1体重,其余组给以等剂量生理盐水。治疗4周后,检测各组小鼠的空腹血糖（FBG）、胰岛素水平、计算胰岛素抵抗指数以及口服葡萄糖耐量实验（OGTT）,取肝脏组织,采用RT-PCR、Western Blot检测相关基因和蛋白表达。结果：治疗4周后,与模型组比较,OL组体重、空腹血糖、血清胰岛素水平和胰岛素抵抗指数显著降低（P<0.05或P<0.01）;OGTT实验后,OL组血糖明显低于模型组（P<0.01）;OL组小鼠肝脏组织InsR、IRS-1、GLUT-2 mRNA和蛋白表达显著升高（P<0.01）。结论：OL通过提高肝脏InsR、IRS-1、GLUT-2 mRNA和蛋白的表达起到降低血糖、改善胰岛素抵抗的作用。     

南非草药蝴蝶亚仙人掌对db/db小鼠肝脏糖脂代谢和PI3K/Akt/FoxO1信号通路的影响

目的：观察南非草药蝴蝶亚仙人掌(HG)对糖尿病db/db小鼠糖脂代谢的影响,基于磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头转录因子O亚族1(FoxO1)信号通路探索HG对db/db小鼠肝脏可能的机制。方法：30只db/db小鼠根据空腹血糖随机分为5组：模型组、二甲双胍组(0.195 g·kg^-1)、HG低剂量组(0.39 g·kg^-1)、HG中剂量组(0.78 g·kg^-1)、HG高剂量组(1.56 g·kg^-1),每组6只,并设6只m/m小鼠为正常组。正常组和模型组小鼠给予9 mL·kg^-1等体积生理盐水灌胃。每周检测各组小鼠体质量、饮食水量及空腹血糖。连续给药6周后取材,测空腹血清胰岛素(FINS)、低密度脂蛋白(LDL)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素(UREA)、肌酐(CREA),取肝脏包埋切片行苏木素-伊红(HE)、过碘酸雪夫(PAS)及油红O染色。免疫组化检测肝脏中PI3K p85、...     

肉桂酸对db/db小鼠肝脏PI3K/AKT/FoxO1信号通路的影响＊

目的 通过研究肉桂酸对db/db小鼠肝脏PI3K/AKT/FoxO1信号通路的影响，探讨其在肝脏胰岛素抵抗方面的作用机制。方法 连续两日同一时间测空腹血糖，并参考体重用随机分层抽样法将18只db/db小鼠分为模型组、吡格列酮组和肉桂酸组，正常组为同周龄db/m + 小鼠，每组6只，分别给予肉桂酸溶液与等量DMSO灌胃4周。Elisa法检测血清胰岛素水平，全自动生化分析仪检测血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和游离脂肪酸（FFA），Western blot法检测肝脏组织PI3K、AKT、FoxO1的蛋白表达。结果 肉桂酸可降低db/db小鼠空腹血糖水平及血清ALT、AST、TG、TC和FFA的水平；其亦可上调肝脏组织PI3K、p-FoxO1、p-AKT蛋白表达水平，下调FoxO1蛋白表达水平。结论 肉桂酸可以改善db/db小鼠的空腹葡萄糖水平，调节血脂及改善胰岛素抵抗，其作用机制可能是通过激活PI3K/AKT/FoxO1信号通路来实现的。     

基于血清药物化学和网络药理学的藏族药七十味珍珠丸安全性评价

采用血清药物化学和网络药理学探讨七十味珍珠丸入血活性成分抑制复方中佐太组分肝肾毒性的相关机制,为七十味珍珠丸的临床安全应用提供依据。通过色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)鉴定小鼠七十味珍珠丸含药血清中的小分子化合物。综合运用TCMSP、HERB、PubChem、GeneCards、SuperPred等多个数据库,检索七十味珍珠丸入血活性成分,预测其作用靶点,并与数据库检索到的汞毒性肝肾损伤相关靶点交集比对,筛选出七十味珍珠丸抑制佐太组分潜在汞毒性的作用靶点。采用Cytoscape软件构建七十味珍珠丸入血活性成分-靶点网络,使用STRING数据库构建交集靶点蛋白蛋白互作(PPI)网络,通过DAVID数据库对靶点基因进行GO功能与KEGG通路富集分析,构建活性成分-靶点-通路网络,并筛选出关键成分和靶点进行分子对接验证。结果显示,七十味珍珠丸含药血清中共鉴定出活性成分44种,其中13种可能是原型药物成分,作用于肝肾汞毒性的潜在靶点70个。通过PPI网络拓扑分析,得到12个关键靶点基因(HSP90AA1、MAPK3、STAT3、EGFR、MAPK1、APP、MMP9、NOS3、PRKCA、...     

糖痹康颗粒调控AMPK/PGC-1α/SIRT3信号通路抑制糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激反应

目的 探讨糖痹康颗粒通过调节腺苷酸活化蛋白激酶/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α/线粒体Sirtuins3（AMPK/PGC-1α/SIRT3）信号通路对糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激的影响。方法 采用ZDF大鼠建立自发性肥胖型2型糖尿病模型。成模后随机分为糖痹康颗粒高、中、低剂量组（2.5、1.25、0.625 g·kg^-1·d^-1）及硫辛酸组（0.026 8 g·kg^-1·d^-1），并设立正常组。成模后持续给药干预12周。分别检测干预前及干预后第4、8、12周大鼠血糖。第12周检测各组大鼠运动神经传导速度（MNCV）、感觉神经传导速度（SNCV）、神经血流速度、机械痛阈及热痛阈并取材坐骨神经进行苏木素-伊红（HE）染色观察组织形态；透射电镜观察坐骨神经超微结构变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测坐骨神经中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠坐骨神经组织AMPKα、AMPKβ、PGC-1α、SIRT3 mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠各时间点空腹血糖升高（P<0.01），机械痛阈降低（P<0.05），热板潜伏时间延长（P<0.01），MNCV、SNCV、神经血流速度减慢（P<0.05），SOD表达降低（P<0.01），MDA、IL-1β、TNF-α表达升高（P<0.01），AMPKα、AMPKβ、PGC-1α、SIRT3 mRNA表达均降低（P<0.01）；模型组大鼠坐骨神经纤维结构松散、排列混乱、脱髓鞘改变明显。与模型组比较，糖痹康颗粒高剂量组大鼠在干预8、12周空腹血糖降低（P<0.01），机械痛阈升高（P<0.05），热板潜伏时间缩短（P<0.01），MNCV、SNCV、神经血流速度（Flux）增快（P<0.05），SOD表达升高（P<0.01），MDA、IL-1β、TNF-α表达降低（P<0.01），AMPKα、AMPKβ、PGC-1α、SIRT3 mRNA表达升高（P<0.01）；糖痹康颗粒高剂量组大鼠坐骨神经纤维结构更紧密、排列更整齐，仅有少部分脱髓鞘改变。糖痹康颗粒高、中、低剂量组有明显的量效趋势。结论 糖痹康颗粒可能部分通过调控AMPK/PGC-1α/SIRT3信号通路发挥抗氧化应激作用，改善糖尿病大鼠坐骨神经功能。     

滋肾丸对糖尿病肾病小鼠肾小管上皮细胞焦亡及上皮-间充质转化的影响

目的 研究滋肾丸（ZSW）对糖尿病肾病（DN）小鼠肾小管上皮细胞焦亡及上皮-间充质转化（EMT）的作用及机制,为ZSW治疗DN提供科学依据。方法 自发性糖尿病db/db小鼠随机分为模型组、达格列净组（1.0 mg·kg^-1）及ZSW高、中、低剂量（6.0,3.0,1.5 g·kg^-1）组,非糖尿病db/m小鼠为正常组。模型组和正常组给予等体积去离子水灌胃,其余各组使用相应药物干预12周。每2周检测尾静脉空腹血糖（FBG）;每4周检测尿白蛋白/肌酐（ACR）,N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）和胱抑素C（CysC）;给药12周后摘眼球取血,血清检测尿素氮（BUN）和肌酐（SCr）;光镜及投射电镜观察肾组织病理学改变;免疫组化法观察分析肾小管上皮EMT标志物表达强度;原位末端标记法（TUNEL）染色观察分析肾小管上皮细胞的核损伤水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测EMT标志物、核苷酸寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体相关蛋白及焦亡相关炎症因子的蛋白表达水平。实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测上述蛋白的mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组FBG,BUN,血SCr及尿ACR,NAG酶,CysC显著升高,肾组织出现病理损伤,肾小管上皮细胞EMT标志物表达强度、蛋白及mRNA表达显著改变,肾小管上皮细胞TUNEL染色阳性率、肾组织焦亡相关炎症因子和NLRP3炎症小体相关蛋白及mRNA表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,ZSW及达格列净组FBG,BUN,血SCr及尿ACR,NAG酶,CysC显著降低（P<0.01）,肾组织病理损伤不同程度减轻,肾小管上皮细胞EMT标志物表达强度显著改变（P<0.01）,蛋白及mRNA表达不同程度改变（P<0.05,P<0.01）,肾小管上皮细胞TUNEL染色阳性率及肾组织焦亡相关炎症因子的蛋白及mRNA表达显著降低（P<0.01）,NLRP3炎症小体相关蛋白及mRNA表达不同程度降低（P<0.05,P<0.01）。结论 ZSW抑制肾小管上皮细胞焦亡及EMT,可能是其治疗DN的作用机制。