基于PPAR-α/CPT-1信号通路的桑叶总黄酮调控T2DM大鼠肝脏脂质代谢作用及其机制

目的 观察桑叶总黄酮改善2型糖尿病（T2DM）大鼠肝脏脂代谢紊乱的药效学作用,并基于肝脏过氧化物酶增殖物激活受体-α（PPAR-α）、肉毒碱棕榈酰基转移酶-1（CPT-l）蛋白探讨其作用机制。方法 采用醇提法+大孔树脂纯化法提取、纯化桑叶总黄酮,并进行鉴定。利用高脂肪饮食（HFD）+链脲佐菌素（STZ）法建立T2DM大鼠模型,选择血糖≥11.1 mmol·L^-1的大鼠,以桑叶总黄酮高、中、低剂量（300、150、75 mg·kg^-1）分别灌胃给药8周,观察大鼠体质量及血糖情况。苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肝脏病理变化,生化法检测大鼠血清脂代谢指标总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝脏组织PPAR-α及CPT-1 mRNA和蛋白的表达。结果 桑叶总黄酮干预8周后,与正常组比较,模型组大鼠摄食量、肝脏指数、空腹血糖显著升高（P<0.01）;与模型组比较,桑叶总黄酮高、中、低剂量组大鼠摄食量、空腹血糖、肝脏指数显著降低（P<0.01）。HE结果显示,正常组大鼠肝组织结构完整未见明显异常;模型组大鼠肝细胞空泡变性且有炎性浸润;桑叶总黄酮高、中、低剂量组大鼠肝脏结构未见明显异常。血脂四项结果显示,与正常组比较,模型组大鼠TC、TG、LDL-C水平显著升高（P<0.01）,HDL-C水平显著降低（P<0.01）;与模型组比较,各给药组TC、TG、LDL-C水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,HDL-C水平显著增加（P<0.01）。Real-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组大鼠PPAR-α和CPT-1 mRNA表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,桑叶总黄酮高剂量组PPAR-α和CPT-1 mRNA表达显著升高（P<0.01）。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠PPAR-α和CPT-1蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,桑叶总黄酮高剂量组PPAR-α和CPT-1蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论 桑叶总黄酮可有效降低T2DM大鼠血糖,改善肝脏脂质代谢紊乱,其发挥降糖调脂的作用机制可能是通过激活调控PPAR-α和CPT-1蛋白、促进脂肪酸氧化分解,发挥调控脂质代谢,进而发挥降糖作用。     

基于PI3K/Akt/GSK-3β信号通路探讨七味白术散对糖尿病脑病大鼠认知功能障碍的影响

目的 观察七味白术散对糖尿病脑病（DE）大鼠模型的治疗作用，基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）通路探究其可能存在的机制。方法 选取SPF级雄性Wistar大鼠48只，随机分为空白组8只、高脂饲料组40只。高脂饲料组大鼠喂养12周后，连续2 d腹腔注射35 mg·kg^-1的1%链脲佐菌素构建DE模型，空白组大鼠注射等量柠檬酸钠缓冲液。造模成功后，按血糖和体质量随机分为模型组、七味白术散低、中、高剂量组（3.15、6.3、12.6 g·kg^-1）、联合西药组（二甲双胍+罗格列酮，0.21 g·kg^-1），每组各6只。给药组灌胃给予相应剂量药物，空白组和模型组灌胃等体积生理盐水，1次/d，连续给药6周。采用Morris水迷宫检测DE大鼠空间记忆能力，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测空腹胰岛素（FINS）水平并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR），苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠海马组织病理变化，ELISA检测海马组织氧化应激指标，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测海马组织PI3K、Akt、核转录因子-κB（NF-κB）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、和白细胞介素-1β（IL-1β）mRNA表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马中PI3K、Akt、磷酸化（p）-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β蛋白表达情况。结果 与空白组比较，模型组大鼠FINS、HOMA-IR值均显著增高（P<0.01）；找到平台原位置的路径显著增长，逃避潜伏期显著延长（P<0.01）；海马组织神经细胞形态破坏；大鼠海马活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）水平升高和超氧化物歧化酶（SOD）活性降低（P<0.05，P<0.01）；PI3K、Akt mRNA表达水平显著降低（P<0.01），NF-κB、TNF-α和IL-1β mRNA表达水平升高（P<0.05，P<0.01）；PI3K、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达水平下降（P<0.05，P<0.01），GSK-3β表达显著增加（P<0.01）。与模型组比较，七味白术散中剂量组和联合西药组FINS、HOMA-IR值均显著下降（P<0.01）；大鼠找到平台原位置的路径显著缩短，逃避潜伏期缩短（P<0.01）；大鼠海马组织结构逐渐恢复，神经细胞形态破坏程度明显改善；大鼠海马组织中ROS、MDA含量降低和SOD水平升高（P<0.01）；PI3K、Akt mRNA表达水平显著升高（P<0.01），NF-κB、TNF-α和IL-1β mRNA表达水平降低（P<0.05，P<0.01）；PI3K、p-Akt、p-GSK-3β蛋白表达升高，GSK-3β表达显著降低（P<0.01）。结论 七味白术散可以缓解DE大鼠的胰岛素抵抗，其可能是通过激活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路来修复DE大鼠海马神经元损伤，改善DE大鼠学习认知能力。     

基于PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨加味三仁汤对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 观察加味三仁汤对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖、细胞外基质及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的干预作用，探讨其改善免疫球蛋白A肾病（IgAN）大鼠炎症病变的相关机制。方法 采用血清药理学方法，将18只大鼠分为3组，正常组，加味三仁汤高、低剂量（20.70，10.35 g·kg^-1·d^-1）组，每组6只，加味三仁汤高、低剂量组给予加味三仁汤相应溶液灌胃，正常组灌胃等体积蒸馏水。分别灌胃5 d后，采血制取含药血清。采用大鼠肾小球系膜细胞（HBZY-1），分为正常组，模型组，贝那普利组（50 μmol·L^-1），加味三仁汤高、低剂量组。釆用噻唑蓝（MTT）比色法检测各组细胞增殖情况，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞培养上清液中Ⅳ型胶原（ColⅣ）的含量，蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）分别检测PI3K/Akt/NF-κB通路相关蛋白表达量和mRNA表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠肾小球系膜细胞增殖显著（P<0.01），ColⅣ分泌显著增多（P<0.01），磷酸化（p）-Akt，p-p65蛋白表达显著增加（P<0.01）；与模型组比较，加味三仁汤高剂量组显著抑制细胞增殖（P<0.01）和ColⅣ分泌（P<0.01），降低Akt磷酸化水平（P<0.01），降低NF-κB p65阳性表达（P<0.01）。结论 加味三仁汤能够抑制脂多糖诱导的HBZY-1细胞增殖，降低ColⅣ蛋白含量，可能与其抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路激活密切相关。     

加味人参乌梅汤调控腹泻大鼠GABA能信号通路的系统效应

目的 研究加味人参乌梅汤对腹泻模型大鼠结肠组织中γ-氨基丁酸（GABA）能信号通路相关调控因子的影响,进一步揭示加味人参乌梅汤益气生津止泻的作用机制。方法 从48只SD幼龄大鼠中随机抽取12只作为正常组,其余大鼠以番泻叶泻下、劳倦力竭及饮食失宜等复合因素造模14 d。造模成功后,随机分为模型组、西药组及中药组,每组12只。正常组与模型组给予生理盐水灌胃（20 mL·kg^-1）,西药组给予妈咪爱灌胃（0.7 g·kg^-1）,中药组给予加味人参乌梅汤灌胃（35 g·kg^-1）,均1次/d,连续干预7 d。每日观测记录大鼠一般情况、稀便率及腹泻指数。获取大鼠结肠标本,采用免疫组化法（IHC）检测大鼠结肠GABA蛋白积分吸光度表达;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B2（Akt2）、磷酸化（p-）Akt及白细胞介素-1β（IL-1β）的含量,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠结肠PI3K、Akt2及γ-氨基丁酸A型受体β₂亚基（GABRB2） mRNA和蛋白的表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠一般情况明显变差,稀便率及腹泻指数差异无统计学意义,GABA蛋白表达明显升高（P<0.05）,PI3K、Akt2、p-Akt及IL-1β表达含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,PI3K、Akt2、GABRB2 mRNA及蛋白表达均极显著升高（P<0.01）。与模型组比较,中药组、西药组大鼠一般情况明显好转,稀便率及腹泻指数显著下调（P<0.01）,中药组、西药组PI3K、Akt2、p-Akt及IL-1β含量均明显下调（P<0.05）,中药组PI3K、Akt2、GABRB2 mRNA均明显下调（P<0.05,P<0.01）,GABA、PI3K及GABRB2蛋白表达明显下调（P<0.05,P<0.01）;西药组PI3K及Akt2 mRNA和PI3K蛋白表达均明显下降（P<0.05）。结论 加味人参乌梅汤能通过调节腹泻大鼠结肠GABA能信号通路,减少肠上皮细胞中Cl^-向肠腔流动,改善腹泻模型大鼠结肠水液代谢失衡状态,进而发挥其益气生津止泻效应。     

淡豆豉异黄酮通过PPARγ/LXRα/ABCA1信号通路改善动脉粥样硬化小鼠脂质代谢的作用

目的 通过卵巢切除结合高脂饲料喂养制备动脉粥样硬化小鼠模型，观察淡豆豉异黄酮（ISSP）对小鼠脂质代谢的影响，并从调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ/肝X受体α/腺苷三磷酸结合盒转运体A1（PPARγ/LXRα/ABCA1）信号通路的角度进一步探讨其作用机制。方法 将50只载脂蛋白E敲除（ApoE^-/-）小鼠随机分为模型组、西药组（阿托伐他汀钙，3.03 mg·kg^-1）、中药低、中、高剂量组（淡豆豉异黄酮，2.5、5、10 mg·kg^-1），每组10只，以手术切除双侧卵巢同时喂食高脂饲料的方法制备动脉粥样硬化模型小鼠，另取10只ApoE^-/-小鼠，以手术切除卵巢旁脂肪同时喂食高脂饲料的方法作为假手术组，其中部分小鼠因术后感染死亡，最终确定每组为6只小鼠，术后1周开始各组灌胃相应药物或等量生理盐水。12周后检测血清及肝脏组织中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、游离脂肪酸（NEFA）的含量；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的含量；苏木素-伊红（HE）及油红O染色观察主动脉斑块形成及肝脏脂质沉积情况；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1、ABCG1 mRNA及蛋白表达。结果 与假手术组比较，模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C、TNF-α及IL-6含量显著升高（P<0.01），HDL-C水平显著降低（P<0.01）；肝脏指数明显升高（P<0.05），肝脏脂肪空泡明显，脂质沉积显著，肝脏中TC、TG、NEFA含量显著增多（P<0.01）；肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1 mRNA表达明显降低（P<0.05，P<0.01），ABCG1 mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，服用阿托伐他汀钙和淡豆豉异黄酮中、高剂量组可使小鼠血清TC、TG、LDL-C、TNF-α和IL-6含量显著降低（P<0.01），HDL-C水平显著降低（P<0.01）；肝脏指数显著降低（P<0.01），肝脏脂肪空泡及脂质沉积显著减少，肝脏中TC、TG、NEFA含量明显增多（P<0.05，P<0.01）；肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1和ABCG1 mRNA及蛋白表达明显上调（P<0.05，P<0.01）。结论 淡豆豉异黄酮可能通过PPARγ/LXRα/ABCA1信号通路调节脂质代谢，减少血清炎症表达及肝脏脂质沉积从而改善动脉粥样斑块的形成。     

基于网络药理学探讨黄芪-葛根药对对T2DM模型大鼠PI3K/Akt/FoxO1信号通路的调节作用

目的 基于网络药理学及实验验证探讨黄芪-葛根（芪葛）药对治疗2型糖尿病（T2DM）的作用机制。方法 借助中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）平台筛选黄芪、葛根的有效成分及靶点；于各疾病数据库中检索T2DM的相关靶点，提取药物与疾病的共同靶点，利用STRING数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络分析并构建PPI网络图，并利用Cytoscape 3.7.1软件对关键靶点进行网络拓扑学分析。再利用DAVID在线工具对核心靶点进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析以探究其可能的分子机制。以高脂饲料喂养同链脲佐菌素尾静脉注射联合的方式建立糖尿病大鼠模型，分为正常组、模型组、二甲双胍组、芪葛药对高、中、低剂量组，灌胃4周后检测各组大鼠血清空腹血糖，空腹胰岛素（FINS），天冬氨酸氨基转移酶（AST），丙氨酸氨基转移酶（ALT），甘油三酯（TG），总胆固醇（TC），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C），糖原，白细胞介素（IL）-6，肿瘤坏死因子（TNF）-α水平，采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肝脏组织中胰岛素受体底物（IRS）-2，磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K），蛋白激酶B（Akt），叉头框蛋白O1（FoxO1）蛋白的表达。结果 网络药理学方法筛选出芪葛药对治疗T2DM核心靶点131个，Akt1，丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）1，TNF-α，IL-6等较为关键；KEGG富集分析预测该药对主要通过PI3K/Akt信号通路，TNF信号通路，FoxO信号通路等发挥降糖作用。与模型组比较，芪葛药对高、中剂量组空腹血糖及FINS水平均降低，糖原水平显著升高（P<0.05，P<0.01）；芪葛药对高、中、低剂量组AST，ALT，TG，LDL-C显著降低（P<0.05，P<0.01）；芪葛药对高、低剂量组TC水平明显降低（P<0.05）。与模型组比较，芪葛药对高、中剂量组IL-6，TNF-α水平显著降低（P<0.05，P<0.01）；芪葛药对高剂量组IRS-2，Akt，p-Akt，PI3K，p-PI3K蛋白表达升高，FoxO1蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论 芪葛药对在治疗T2DM上具有多成分-多靶点-多途径的特点，可能通过IL-6，TNF-α等靶点调控PI3K/Akt/FoxO1信号通路影响胰岛素抵抗、糖原合成、糖异生、葡萄糖转运、炎症及免疫反应等过程对糖尿病进行治疗。     

化浊解毒疏肝方对癫痫大鼠学习记忆及PI3K/Akt/GSK-3β信号通路的影响

目的 观察化浊解毒疏肝方对癫痫大鼠学习记忆及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）通路相关蛋白表达的影响，探讨其可能的作用机制。方法 选取SPF级雄性SD大鼠48只，随机分为正常组、模型组、丙戊酸钠组、化浊解毒疏肝方低、中、高剂量组，每组8只。正常组给予0.9%氯化钠溶液腹腔注射（0.035 g·kg^-1），其余5组给予同等剂量戊四氮（PTZ）腹腔注射制备大鼠慢性癫痫模型，共14次。化浊解毒疏肝方低、中、高剂量组分别灌胃化浊解毒疏肝方2.7，5.4，10.8 g·kg^-1，丙戊酸钠组灌胃丙戊酸钠0.19 g·kg^-1，正常组和模型组灌胃同等体积0.9%氯化钠溶液，每天1次，持续28 d。药物干预期间，各造模组大鼠在第7，14，21，28天给予PTZ腹腔注射以维持癫痫模型。应用Morris水迷宫观察大鼠的行为学变化，苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠海马神经元病理形态学变化，免疫组化检测磷酸化（p）-Akt，p-GSK-3β蛋白的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测PI3K，Akt，p-Akt，GSK-3β，p-GSK-3β蛋白表达情况。结果 与正常组比较，模型组大鼠寻找平台时间延长（P<0.01），穿越平台次数减少（P<0.01），海马CA1区神经元结构损伤，海马CA1区p-Akt，p-GSK-3β蛋白表达降低（P<0.05），海马组织PI3K，p-Akt，p-GSK-3β相对表达量降低（P<0.01）。与模型组比较，丙戊酸钠组、化浊解毒疏肝方各剂量组大鼠寻找平台时间缩短（P<0.01）；丙戊酸钠组、化浊解毒疏肝方高、中剂量组大鼠穿越平台次数升高（P<0.01），各治疗组海马CA1区神经元结构明显改善，化浊解毒疏肝方高、中剂量组、丙戊酸钠组海马CA1区p-Akt，p-GSK-3β蛋白表达升高（P<0.05），化浊解毒疏肝方高、中剂量组、丙戊酸钠组PI3K，p-Akt，p-GSK-3β相对表达量升高（P<0.01）。结论 化浊解毒疏肝方可改善癫痫大鼠学习记忆能力，可能与激活PI3K/Akt/GSK-3β通路相关蛋白有关，从而发挥抗癫痫作用。     

黄芪桂枝五物汤加减对糖尿病大鼠坐骨神经内质网应激IRE1α/CHOP通路的影响

目的 基于肌醇需求酶1α（IRE1α）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）通路,研究黄芪桂枝五物汤加减对糖尿病大鼠坐骨神经在内质网应激方面的保护作用。方法 取60只大鼠予高糖高脂饲料喂养6周,然后按35 mg·kg^-1腹腔注射链尿佐菌素,3 d后检测大鼠随机血糖,连续检测3 d,将血糖持续≥16.7 mmol·L^-1的大鼠纳入实验,共48只。将48只大鼠随机分为模型组、α-硫辛酸组（0.026 8 g·kg^-1·d^-1）、中药高、低剂量组（2.5、1.25 g·kg^-1·d^-1）,另设置10只为正常组。连续干预16周。16周后通过卢卡斯快蓝染色（LFB）光镜下观察各组大鼠坐骨神经结构,透射电镜观察各组大鼠坐骨神经超微结构,采用化学荧光法检测大鼠血清活性氧（ROS）含量,蛋白免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链式反应分别检测大鼠坐骨神经磷酸化IRE1α（p-IRE1α）蛋白、IRE1α mRNA、CHOP蛋白和mRNA的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清中ROS含量均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组大鼠血清中ROS含量显著降低（P<0.01）。与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经出现病理改变;与模型组比较,各给药组大鼠坐骨神经病理有所改善。与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经（p-IRE1α）、CHOP蛋白表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组大鼠坐骨神经p-IRE1α、CHOP蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）。与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经IRE1α、CHOP mRNA表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组大鼠坐骨神经IRE1α和CHOP mRNA表达显著降低（P<0.01）。结论 黄芪桂枝五物汤加减可以通过抑制内质网应激IRE1α/CHOP途径相关蛋白和mRNA的表达,从而减轻内质网应激诱导的细胞凋亡,改善糖尿病大鼠坐骨神经结构和功能,从而防治糖尿病周围神经病变。     

逍遥散正丁醇部位基于IGF-1Rβ/PI3K/Akt信号通路的抗抑郁作用

目的 观察逍遥散正丁醇部位对慢性不可预知应激（CUMS）模型小鼠抑郁样行为的干预作用,及其作用发挥与调控类胰岛素生长因子-1受体β（IGF-1Rβ）/磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路的关系。方法 首先基于小鼠行为绝望模型初步获得逍遥散正丁醇部位发挥抗抑郁作用的有效剂量。再将雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、氟西汀组、逍遥散组、逍遥散正丁醇部位20,40 g·kg^-1组,采用CUMS法建立抑郁症模型小鼠研究其抗抑郁作用及机制,以糖水偏好实验检测造模效果。模型成功后,各给药组连续灌胃小鼠5周,正常组与模型组给予等体积溶媒。第5周末,开展小鼠糖水偏好实验、悬尾实验及新奇环境抑制进食实验;酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定小鼠血清、海马区类胰岛素生长因子-1（IGF-1）含量,甲苯胺蓝染色法检测海马CA3区神经元尼氏小体平均光密度,免疫荧光法标记海马齿状回（DG）5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）和双肾上腺皮质激素（DCX）阳性表达神经元,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马区IGF-1Rβ,PI3K,磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）,Akt,磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase-3）,剪切后的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶（cleaved Caspase-3）蛋白表达水平。结果 小鼠强迫游泳和悬尾实验结果表明,逍遥散正丁醇部位生药量9.1,40 g·kg^-1均能明显缩短小鼠不动时间（P<0.05,P<0.01）,表明其在9.1~40 g·kg^-1剂量之间具有有效性。CUMS模型中,与模型组比较,逍遥散正丁醇部位（生药量20,40 g·kg^-1）能明显提高小鼠糖水偏好率（P<0.05,P<0.01）,缩短悬尾不动时间（P<0.01）及新奇环境摄食潜伏期（P<0.01）;并逆转模型小鼠血清、海马区下调的IGF-1含量（P<0.01）,增加小鼠海马CA3区神经元尼氏小体数目（P<0.01）,促进海马DG区Brdu和DCX表达（P<0.05,P<0.01）,下调模型小鼠海马IGF-1Rβ（P<0.05,P<0.01）,p-PI3K/PI3K（P<0.05,P<0.01）,p-Akt/Akt（P<0.05）,cleaved Caspase-3/Caspase-3蛋白表达水平。结论 逍遥散正丁醇部位具有与逍遥散全方相当的抗抑郁作用,可改善CUSM模型小鼠的抑郁样行为,诱导模型小鼠海马CA3区神经元合成尼氏小体,增加DG区神经元增殖、分化,促进神经发生;其作用发挥可能与抑制过度激活的IGF-1Rβ/PI3K/Akt通路、减少神经元凋亡有关。     

基于PI3K/Akt信号通路研究升降通癃方中空栓对前列腺增生大鼠的影响

目的 通过观察升降通癃方中空栓对前列腺增生大鼠前列腺中双氢睾酮（DHT）的水平、及前列腺中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路相关蛋白的影响，探究升降通癃方中空栓治疗前列腺增生大鼠的机制。方法 从60只SD雄性大鼠中随机选取10只为假手术组，其余大鼠经去势后连续4周皮下注射丙酸睾丸酮造前列腺增生大鼠模型，采用随机数字表法随机分为模型组、非那雄胺（0.45 mg·kg^-1）组、升降通癃方中空栓高、中、低剂量（3.98、1.99、0.99 g·kg^-1）组，每组10只。去势7 d后，假手术组及模型组选用空白中空栓、非那雄胺组及升降通癃方中空栓组选用相应中空栓，连续肛塞直肠给药28 d。杀检大鼠，分离并称量前列腺组织，观察药物对各组大鼠前列腺指数的影响，苏木素-伊红（HE）染色前列腺组织进行病理观察，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测DHT的水平，并采用蛋白免疫印迹法检测前列腺组织PI3K/Akt信号通路蛋白及B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、αB-晶状体蛋白（CRYAB）蛋白表达水平。结果 与假手术组比较，模型组大鼠前列腺指数显著升高，光镜下模型组大鼠前列腺明显增生，DHT水平明显升高，CRYAB、Bcl-2、PI3K及Akt蛋白表达水平上升，Caspase-3及Bax蛋白表达水平下降（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，升降通癃方中空栓高剂量组大鼠前列腺指数下降（P<0.05），升降通癃方中空栓各剂量组大鼠前列腺中DHT水平、CRYAB、Bcl-2、PI3K及Akt蛋白表达水平下降，Caspase-3及Bax蛋白表达水平上升（P<0.05，P<0.01）。结论 升降通癃方中空栓可通过降低CRYAB蛋白表达，负性调控PI3K/Akt信号通路，下调DHT水平，Bcl-2、PI3K及Akt蛋白表达水平，上调Caspase-3及Bax蛋白表达水平，抑制细胞增殖和促进细胞凋亡，从而发挥对BPH的治疗作用；高剂量升降通癃方中空栓改善大鼠前列腺增生效果显著。     

山豆根水提物对类风湿关节炎骨破坏及PI3K/Akt信号通路的影响

目的 观察山豆根水提物对类风湿关节炎（RA）的干预影响，并基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路研究其抗RA骨破坏的作用及机制。方法 采用高效液相色谱（HPLC）测定山豆根水提物中主要活性物质的含量，应用Ⅱ型胶原诱导法建立类风湿关节炎模型（CIA）小鼠，设正常组、模型组、甲氨蝶呤组（0.5 mg·kg^-1）、山豆根水提物低、高剂量组（100、200 mg·kg^-1）。观察CIA小鼠关节红肿畸形表现及关节炎临床积分；苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠关节组织病理改变；微计算机断层扫描技术（Micro-CT）检测小鼠关节骨破坏程度；抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色观察小鼠关节组织中破骨细胞形成情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠关节组织中PI3K/Akt信号通路关键蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠关节红肿畸形程度、关节炎临床积分、滑膜增生及炎性细胞浸润程度显著升高（P<0.01），关节组织骨破坏程度、破骨细胞形成数目及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、组织蛋白酶K（CTSK）、活化T细胞核因子1蛋白（NFATc1）、PI3K和磷酸化（p）-Akt蛋白表达均显著升高（P<0.01）。与模型组比较，山豆根水提物各剂量组能明显改善CIA小鼠关节畸形程度及关节炎临床积分（P<0.05，P<0.01），缓解小鼠关节组织病理改变（P<0.01），且降低小鼠关节骨破坏程度和破骨细胞形成情况（P<0.05，P<0.01），此外还显著下调小鼠关节组织中PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达（P<0.01）。结论 山豆根水提物能够显著延缓RA炎症反应，尤其抑制骨破坏，其作用机制可能与下调PI3K/Akt信号通路有关。     

基于miRNA126调控PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨肾衰泄浊汤干预慢性肾脏病合并动脉粥样硬化作用机制

目的 探讨微小核糖核酸126（miRNA126）调控磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路在慢性肾脏病合并动脉粥样硬化（CKD AS）中的作用,以及肾衰泄浊汤干预5/6肾切除术联合高脂饲养的CKD AS大鼠的作用机制。方法 将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、氯沙坦组、肾衰泄浊汤低、中、高剂量组。通过5/6肾切除术联合高脂饲养10周建立大鼠CKD AS模型,肾衰泄浊汤低、中、高剂量组（6.0、12.0、24.0 g·kg^-1·d^-1）,氯沙坦组（20 mg·kg^-1·d^-1）剂量灌胃,进行相应的干预8周,然后处死大鼠,取材进行相应检测。全自动生化分析仪器检测大鼠肾功能和血脂：血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平;苏木素-伊红（HE）、马松（Masson）染色主动脉组织并在光学显微镜下进行病理学观察;通过透射电子显微镜观察自噬体和自噬溶酶体;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠miRNA126、PI3K、Akt、mTOR mRNA水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠磷酸化（p）-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR、苄氯素-1（Beclin-1）、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/LC3Ⅰ）蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠血清SCr、BUN、TC、TG、LDL-C均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,氯沙坦组与肾衰泄浊汤低、中、高剂量组大鼠SCr、BUN、TC、TG、LDL-C明显降低（P<0.05）;与假手术组比较,模型组大鼠内膜可见增厚斑块形成,单核巨噬细胞浸润,少量泡沫细胞,中膜平滑肌纤维排列紊乱,胶原纤维增多,氯沙坦组与肾衰泄浊汤各组较模型组病变减轻;与模型组比较,肾衰泄浊汤中、高剂量组中电镜的自噬小体及自噬溶酶体的数量增多;与假手术组比较,模型组大鼠主动脉组织miRNA126表达显著下降（P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,肾衰泄浊汤高、中、低剂量组及氯沙坦组大鼠主动脉组织miRNA126表达显著升高（P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR mRNA表达显著降低（P<0.01）。与假手术组比较,模型组p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达显著升高（P<0.01）,Beclin-1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白水平显著降低（P<0.01）。与模型组比较,氯沙坦组和肾衰泄浊汤低、中、高剂量组的p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达降低（P<0.05）,Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平升高（P<0.05）。结论 CKD AS大鼠主动脉组织miRNA126表达降低,激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制自噬通量;肾衰泄浊汤通过miRNA126调控PI3K/Akt/mTOR信号通路,恢复主动脉内皮细胞的自噬,保护CKD血管损伤,减少As斑块的形成,减缓心血管并发症的发展。     

糖痹康颗粒调控AMPK/PGC-1α/SIRT3信号通路抑制糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激反应

目的 探讨糖痹康颗粒通过调节腺苷酸活化蛋白激酶/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α/线粒体Sirtuins3（AMPK/PGC-1α/SIRT3）信号通路对糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激的影响。方法 采用ZDF大鼠建立自发性肥胖型2型糖尿病模型。成模后随机分为糖痹康颗粒高、中、低剂量组（2.5、1.25、0.625 g·kg^-1·d^-1）及硫辛酸组（0.026 8 g·kg^-1·d^-1），并设立正常组。成模后持续给药干预12周。分别检测干预前及干预后第4、8、12周大鼠血糖。第12周检测各组大鼠运动神经传导速度（MNCV）、感觉神经传导速度（SNCV）、神经血流速度、机械痛阈及热痛阈并取材坐骨神经进行苏木素-伊红（HE）染色观察组织形态；透射电镜观察坐骨神经超微结构变化；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测坐骨神经中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠坐骨神经组织AMPKα、AMPKβ、PGC-1α、SIRT3 mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠各时间点空腹血糖升高（P<0.01），机械痛阈降低（P<0.05），热板潜伏时间延长（P<0.01），MNCV、SNCV、神经血流速度减慢（P<0.05），SOD表达降低（P<0.01），MDA、IL-1β、TNF-α表达升高（P<0.01），AMPKα、AMPKβ、PGC-1α、SIRT3 mRNA表达均降低（P<0.01）；模型组大鼠坐骨神经纤维结构松散、排列混乱、脱髓鞘改变明显。与模型组比较，糖痹康颗粒高剂量组大鼠在干预8、12周空腹血糖降低（P<0.01），机械痛阈升高（P<0.05），热板潜伏时间缩短（P<0.01），MNCV、SNCV、神经血流速度（Flux）增快（P<0.05），SOD表达升高（P<0.01），MDA、IL-1β、TNF-α表达降低（P<0.01），AMPKα、AMPKβ、PGC-1α、SIRT3 mRNA表达升高（P<0.01）；糖痹康颗粒高剂量组大鼠坐骨神经纤维结构更紧密、排列更整齐，仅有少部分脱髓鞘改变。糖痹康颗粒高、中、低剂量组有明显的量效趋势。结论 糖痹康颗粒可能部分通过调控AMPK/PGC-1α/SIRT3信号通路发挥抗氧化应激作用，改善糖尿病大鼠坐骨神经功能。     

大柴胡汤通过CREB/PGC-1α通路保护营养型肥胖大鼠肝脏粒体功能

目的 观察大柴胡汤对营养型肥胖大鼠环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB）/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子α（PGC-1α）通路的作用及肝脏线粒体的保护机制。方法 8周龄SD雄性大鼠120只,随机分为正常组20只和造模组100只。正常组给予大鼠维持饲料喂养,造模组给予高脂饲料喂养。造模成功大鼠随机分为模型组、阳性药（二甲双胍）组、大柴胡汤低、中、高剂量组（4.25,8.5,17 g·kg^-1）,每组20只。电子天平称取并比较各组大鼠体质量,计算Lee''s指数,分光光度法检测肝脏线粒体膜电位,电镜检测线粒体超微结构,蛋白免疫印迹法检测PGC-1α蛋白表达和CREB磷酸化作用。结果 与正常组比较,模型组大鼠体质量及Lee''s指数显著增加（P<0.01）,线粒体膜电位显著下降,PGC-1α蛋白表达和CREB磷酸化水平显著下降（P<0.01）;与模型组比较,大柴胡汤能够明显降低肥胖大鼠体质量和Lee''s指数（P<0.05,P<0.01）,提高肝脏线粒体膜电位（P<0.05,P<0.01）和保护线粒体结构完整性,上调PGC-1α蛋白表达和促进CREB磷酸化（P<0.05,P<0.01）。结论 大柴胡汤激活CREB/PGC-1α通路,保护线粒体结构与功能,有效抑制肥胖大鼠体质量增加。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨黑逍遥散对AD模型大鼠神经炎症的影响

目的 研究黑逍遥散是否可以通过调控激活Wnt β-连环蛋白（β-catenin）信号通路抑制阿尔茨海默病（AD）大鼠海马区炎症反应，改善AD大鼠认知和记忆功能障碍。方法 90只雄性Wistar大鼠先随机分别选择12只作为空白组和假手术组，剩余大鼠在左右两侧海马区注射β淀粉样蛋白₄₂（Aβ₄₂）制造AD模型大鼠，随机分为模型组、黑逍遥散低、中、高剂量组和多奈哌齐组，每组12只，并连续42 d给予相应剂量黑逍遥散和多奈哌齐灌胃。尼氏染色观察海马CA1区病理形态学变化；Morris水迷宫实验检测1~5 d大鼠逃避潜伏期的变化，第6天的空间探索能力。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠海马组织和血清中白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测检测海马中海马区糖原合成激酶-3β（GSK-3β）、β-catenin、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的蛋白表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠GSK-3β、β-catenin、PPARγ mRNA的水平。结果 与空白组比较，模型组大鼠海马CA1区神经元数量明显减少，排布不均，细胞体损坏比较明显，尼式小体不清；模型组大鼠第3~5天的逃避潜伏期均相比治疗组显著延长（P<0.01），跨台次数显著减少（P<0.01）；模型组大鼠血清和海马组织中IL-10水平显著降低，IL-6、TNF-α水平显著升高（P<0.01）；模型组GSK-3β蛋白和mRNA显著升高，β-catenin、PPARγ蛋白表达显著降低（P<0.01），差异较为明显；与模型组比较，黑逍遥散中、高剂量组和盐酸多奈哌齐组大鼠神经元细胞数量分布较多，排列整齐，结构完整，尼式小体清晰明确；黑逍遥散中、高剂量组和多奈哌齐组的第3~5天逃避潜伏期显著缩短（P<0.01），跨越平台次数显著增多（P<0.01）；大鼠海马组织和血清中IL-10的表达水平明显升高，IL-6和TNF-α显著降低（P<0.01）；大鼠海马中GSK-3β蛋白和GSK-3β mRNA表达明显降低，β-catenin、PPARγ蛋白和β-catenin、PPARγ mRNA表达水平显著升高（P<0.01）。盐酸多奈哌齐组与黑逍遥散高剂量组之间各指标比较，差异无统计学意义。结论 黑逍遥散可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制AD大鼠海马区炎症反应，改善AD模型大鼠认知和记忆障碍。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬探讨当归四逆汤对痛风性关节炎大鼠的影响

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路,探讨当归四逆汤对痛风性关节炎（GA）大鼠自噬水平的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组（0.3 mg·kg^-1）和当归四逆汤低、中、高剂量组（6.54、13.08、26.16 g·kg^-1）,每组10只,并分别给予相应药物灌胃,正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续7 d。于第5天给药1 h后向各组（正常组除外）大鼠右侧踝关节注射尿酸钠混悬液（50 g·L^-1）建立GA模型,正常组注射等体积的无菌生理盐水。观察大鼠踝关节肿胀情况;测定血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、IL-1β水平;观察踝关节病理形态变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测滑膜PI3K、磷酸化（p）-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/Ⅰ）、自噬效应蛋白（Beclin-1）、泛素结合蛋白（p62）表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测PI3K、Akt、mTOR、LC3、Beclin-1、p62 mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠关节肿胀指数显著升高（P<0.01）,血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高（P<0.01）,踝关节滑膜组织可见明显炎性细胞浸润和纤维组织增生,滑膜组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p62蛋白表达显著升高（P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA表达显著升高（P<0.01）,LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白和LC3、Beclin-1 mRNA表达降低（P<0.01）。与模型组比较,当归四逆汤中、高剂量组大鼠关节肿胀明显减轻（P<0.05）;血清中TNF-α、IL-6、IL-1β表达量显著明显降低（P<0.05）;踝关节滑膜组织未见明显炎性细胞浸润,纤维组织增生减轻;滑膜组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p62蛋白表达量均明显降低（P<0.05）,PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA表达量亦明显降低（P<0.05）,而LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白和LC3、Beclin-1 mRNA表达量均明显上升（P<0.05）。结论 当归四逆汤可以抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,提高大鼠滑膜组织自噬水平,改善痛风性关节炎,并且以高剂量效果最佳。     

参白解毒方通过调控PTEN/PI3K/Akt信号通路抑制结直肠癌细胞增殖

目的 研究参白解毒方基于磷酸酶及张力蛋白同源物（PTEN）/磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路抑制结直肠癌细胞HCT116增殖的作用机制。方法 采用水提醇沉法提取参白解毒方有效部位进行冻干粉制备;体外培养HCT116细胞,用参白解毒方（2、4、8、16 g·L^-1）对HCT116细胞进行处理,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测参白解毒方对HCT116细胞增殖的抑制作用;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测细胞PTEN、PI3K、Akt、糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）、c-核蛋白类基因（c-Myc）、生存素（Survivin）和细胞周期蛋白D₁（CyclinD₁）mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测PTEN、磷酸化磷酸酶及张力蛋白同源物（p-PTEN）、PI3K、Akt、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、GSK-3β、磷酸化糖原合成酶激酶-3（p-GSK-3β）、c-Myc、Survivin、CyclinD₁的蛋白表达水平;免疫荧光检测β-连环蛋白（β-catenin）入核情况。结果 与空白组比较,参白解毒方各质量浓度均可以显著抑制HCT116细胞的增殖（P<0.01）,且具有浓度依赖性。与空白组比较,参白解毒方处理细胞后PTEN、GSK-3β mRNA表达水平均上调,PI3K、Akt、c-Myc、Survivin、CyclinD₁ mRNA表达水平均下调（P<0.01）;细胞PTEN、p-PTEN和GSK-3β蛋白表达水平上调,PI3K、Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β、c-Myc、Survivin、CyclinD₁蛋白表达水平均下调（P<0.05,P<0.01）。免疫荧光结果显示参白解毒方可以抑制结直肠癌细胞HCT116中β-catenin的入核。结论 参白解毒方可以抑制结直肠癌细胞HCT116的增殖,其作用机制可能是通过调节PTEN/PI3K/Akt信号通路。     

补肾活血方通过调节PI3K/Akt/mTOR信号通路改善DOR大鼠卵巢储备功能

目的 观察补肾活血方调节磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路相关因子改善卵巢储备功能下降（DOR）大鼠卵巢储备功能的作用机制。方法 运用Ataya法腹腔注射环磷酰胺复制60只DOR模型大鼠，将其随机分为模型组、戊酸雌二醇组（0.000 9 g·kg^-1），补肾活血方高、中、低剂量组（33，16.5，8.25 g·kg^-1），同时另设正常组，每组12只；各组相应药物治疗，正常组和模型组给予等体积生理盐水，连续灌胃14 d，每天1次。治疗结束后，苏木素-伊红（HE）染色卵巢组织，光镜观察初级卵泡数、成熟卵泡数、总卵泡数的变化；免疫组化检测卵巢组织中血管内皮生长因子（VEGF）的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测卵巢组织中PI3K，Akt，mTOR，半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）法检测卵巢组织中PI3K，Akt，mTOR mRNA表达。结果 与正常组比较，模型组卵巢组织中成熟卵泡数量、总卵泡数量明显减少（P<0.05，P<0.01），卵巢组织中VEGF，Caspase-3表达升高（P<0.05），PI3K，Akt，mTOR蛋白及mRNA表达水平降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，补肾活血方中、高剂量组成熟卵泡数量、总卵泡数量均有不同程度上升（P<0.05，P<0.01），VEGF补肾活血方中剂量组升高最为明显（P<0.05），补肾活血方低、中、高剂量组及戊酸雌二醇组Caspase-3下降，补肾活血方中、高剂量组PI3K，Akt，mTOR蛋白及mRNA表达水平均升高（P<0.05，P<0.01），且补肾活血方中剂量组更加接近于正常组。结论 补肾活血方可以有效地改善DOR大鼠卵巢储备功能，促进卵泡数量增加。作用机制可能与补肾活血方通过增加卵巢组织中VEGF的表达有关，进而激活PI3K/Akt/mTOR信号通路，从而调节Caspase-3的含量，最后促进卵泡数量的增加。     

基于HIF-1α/VEGFA信号通路探讨柴胡桂枝汤对三阴性乳腺癌细胞的影响

目的 基于缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）/血管内皮生长因子A（VEGFA）信号通路探讨柴胡桂枝汤对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞的影响。方法 建立TNBC移植瘤模型,随机分为模型组,卡培他滨组（0.2 mg·kg^-1）,柴胡桂枝汤低、中、高剂量组（10.62、21.23、42.46 g·kg^-1）,每组10只,干预21 d。给药结束后,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肿瘤组织中HIF-1α mRNA表达情况;免疫组化法（IHC）检测肿瘤组织中HIF-1α、TNF-α、VEGFA的表达水平及CD34染色检测肿瘤内血管生成情况并计算微血管密度（MVD）;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肿瘤组织中HIF-1α、VEGFA、表皮生长因子受体（EGFR）蛋白的表达。结果 与模型组比较,卡培他滨组、柴胡桂枝汤低、中、高剂量组TNF-α水平显著降低（P<0.01）,HIF-1α mRNA显著降低（P<0.01）,HIF-1α、TNF-α、VEGFA和CD34阳性细胞表达及MVD明显降低（P<0.05,P<0.01）,HIF-1α、VEGFA、EGFR蛋白水平显著降低（P<0.01）。与卡培他滨组比较,柴胡桂枝汤中、高剂量组TNF-α水平显著降低（P<0.01）,HIF-1α mRNA显著降低（P<0.01）,HIF-1α、TNF-α和VEGFA阳性细胞表达显著降低（P<0.01）,CD34表达及MVD显著降低（P<0.01）,HIF-1α、VEGFA、EGFR蛋白水平均显著降低（P<0.01）。结论 柴胡桂枝汤可能通过调控HIF-1α/ VEGFA信号通路,抑制TNBC细胞血管生成,从而发挥抗肿瘤作用。     

芍药汤通过抑制HIF-1α调节Th17/Treg平衡治疗溃疡性结肠炎

目的 探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在溃疡性结肠炎辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）平衡中的作用及芍药汤的干预机制。方法 将48只SD大鼠随机分为正常组，模型组，美沙拉嗪组（0.42 g·kg^-1），芍药汤组（11.1 g·kg^-1），抑制剂组（2-甲氧基雌二醇，0.015 g·kg^-1），芍药汤+抑制剂组，采用2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）诱导溃疡性结肠炎模型，各组分别对应给予生理盐水，美沙拉嗪，芍药汤，抑制剂及芍药汤+抑制剂治疗7 d，观察各组大鼠一般情况和疾病活动指数，采用苏木素-伊红（HE）染色观察结肠组织病理学改变，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清中白细胞介素-10（IL-10），IL-17，IL-23水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织叉头状/翼状螺旋转录因子P3（FoxP3），维甲酸相关孤儿受体（RORγt），HIF-1α蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠疾病活动指数（DAI）评分，肠黏膜病理学评分显著升高（P<0.01），血清中的IL-10水平显著降低（P<0.01），IL-17和IL-23显著升高（P<0.01），结肠RORγt及HIF-1α蛋白水平显著升高（P<0.01），FoxP3蛋白表达显著降低（P<0.01）；与模型组比较，芍药汤组DAI评分，肠黏膜病理学评分降低（P<0.05，P<0.01），血清中IL-10水平升高（P<0.01），IL-17，IL-23降低（P<0.01），结肠RORγt及HIF-1α蛋白水平降低（P<0.01），FoxP3蛋白表达升高（P<0.01）；与抑制剂组比较，芍药汤组及芍药汤+抑制剂组RORγt，FoxP3及HIF-1α蛋白表达差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。结论 芍药汤可以有效治疗溃疡性结肠炎，其作用机制可能与抑制HIF-1α来调节Treg/Th17的重新平衡相关。