巢式聚合酶链反应检测男性尿道炎患者尿液中阴道毛滴虫

目的 建立两种巢式聚合酶链反应（PCR）方法检测男性尿道炎患者尿液中阴道毛滴虫感染状况,评价两种巢式PCR在临床诊断中的应用价值。 方法 2011年4月至2013年12月来我院性病门诊就诊的1 088例男性尿道炎患者为研究对象,收集尿道拭子标本做分泌物涂片镜检、阴道毛滴虫湿片检测以及淋球菌培养,同时收集尿液标本提取DNA,针对阴道毛滴虫重复基因组和β微管蛋白基因,采用两种巢式PCR法检测尿液中阴道毛滴虫。 结果 湿片法检测阴道毛滴虫的阳性率为0,而两种巢式PCR法均检测出29例阳性标本,阳性率为2.67%,且两种巢式PCR法检测出的阳性标本一致。 结论 与湿片法相比,巢式PCR法检测男性尿液标本阴道毛滴虫具有较高的灵敏度和特异性。     

念珠菌性外阴阴道炎患者阴道分泌物中白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶表达

目的 探讨白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶(SAP)家族在白念珠菌无症状性阴道寄居向症状性阴道炎发展过程中的表达.方法 分别从10例无症状携带者、14例念珠菌性外阴阴道炎患者和10例复发性念珠菌性外阴阴道炎患者的阴道分泌物标本中直接提取RNA,逆转录成cDNA后进行RT-PCR.结果 所有无症状携带者和患者均表现出对SAP2和SAP4-6的阳性扩增.10例无症状携带者中无一个标本表现出对SAP1和SAP3的阳性扩增,而念珠菌性外阴阴道炎患者和复发性念珠菌性外阴阴道炎患者阴道分泌物标本提取的RNA可见9个SAP基因的不同表达,并且均不同程度地表现出对SAP1和SAP3的阳性扩增.结论 念珠菌性外阴阴道炎的发病可能与SAP基因的不同表达有关.     

PCR在阴道毛滴虫检测中的引物筛选和条件优化

目的 探讨PCR检测阴道毛滴虫的引物筛选和条件优化。方法 从文献中筛选TVA5-TVA6、TV1-TV2、TVK3-TVK73对引物进行比较,每种PCR对引物、Mg²⁺、dNTPs、Taq酶4个因素,每个因素取3个浓度水平,使用Taguchi法进行优化,筛选出每种PCR的较佳反应条件。在较佳反应条件下,比较3种PCR的敏感性。用培养法及PCR法检测阴道拭子标本,初步评价敏感性最高的PCR方法。结果 3种PCR法均具有较高的特异性,TVK3-TVK7PCR的敏感性最高。25份临床拭子标本中,培养法检测出7份阳性标本,TVK3-TVK7PCR方法检测出8份,所有培养法检测阳性的标本经PCR方法检测的结果均为阳性。结论 TVK3-TVK7PCR具有高度敏感性和特异性,是一种检测阴道毛滴虫感染的有效方法。     

外阴阴道念珠菌病患者阴道念珠菌对抗真菌药物的敏感性测量

了解外阴阴道念珠菌病病原菌对抗真菌药物的敏感性,采用API法对分离自临床外阴阴道念珠菌病患者的120株念珠菌进行菌种鉴定;参照美国国家实验室标准委员会(NCCLS)M-27A方案(1997),采用微量法检测120株临床试验菌株、5株参考株及1株质量控制株对6种常用抗真菌药物的敏感性。结果显示:120株分离自外阴阴道念珠菌病患者的念珠菌中,白念珠菌105株(87.5%),非白念珠菌15株(12.5%);氟康唑、伊曲康唑、两性霉素B、酮康唑、特比萘芬及5-氟胞嘧啶对120株临床菌株的最小抑菌浓度(MIC)均数(μg/mL)分别为:9.474±2.329,0.305±0.062,0.599±0.062,0.855±0.377,9.970±3.324和14.819±5.180。提示氟康唑、伊曲康唑、两性霉素B和酮康唑对念珠菌显示一定的敏感性。外阴阴道念珠菌的主要菌种为白念珠菌。     

多重PCR-反向线点杂交技术在检测女性念珠菌和阴道毛滴虫感染中的应用

目的建立和评价多重PCR-反向线点杂交技术(mPCR-RLB)快速同时检测阴道毛滴虫和念珠菌感染的方法。方法分别选择阴道毛滴虫特异性DNA重复序列设计一对特异性引物,以念珠菌属28srRNA至5.8s rRNA间隔序列Ⅱ(ITS2)为靶基因设计一对检测念珠菌的通用引物,构建二重PCR同时扩增阴道毛滴虫、白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、光滑念球菌、近平滑念珠菌、都柏林念株菌DNA,然后与通过氨基标记固定在尼龙膜上的各特异性寡核苷核探针杂交,并对女性阴道试子标本进行检测。结果多重PCR可同时扩增阴道毛滴虫、白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、光滑念球菌、近平滑念珠菌、都柏林念株菌临床或标准菌株DNA,上述念珠菌标准菌株可扩增出302～441bp DNA片段,阴道毛滴虫临床株可扩增出262bp DNA片段。6种念珠菌和阴道毛滴虫的特异性寡核苷酸探针可分别与其相应的PCR产物杂交。通过对150例女性阴道试子进行检测,mPCR-RLB检测念珠菌的阳性率为47.33%,阴道毛滴虫的阳性率为6.67%,二者同时阳性率为1.33%。而培养法检测念珠菌阳性率为36.00%,阴道毛滴虫的阳性率为2.00%,二者同时阳性率为0.67%。明显高于培养法(P<0.05)。结论多重PCR-RLB可快速同时检测念珠菌和阴道毛滴虫,为女性阴道炎的临床诊断提供了一种可靠的方法。     

培养法及聚合酶链反应检测男性非淋菌性尿道炎患者中阴道毛滴虫

目的：研究男性非淋菌性尿道炎（NGU）患者中阴道毛滴虫感染的状况;评价尿液及尿道拭子聚合酶链反应（PCR）检测阴道毛滴虫感染的敏感性和特异性,建立一种非侵入性检测男性阴道毛滴虫感染的方法。方法：共收集105例患者。每例取2份尿道拭子标本,分别进行InPouchTV培养和PCR检测;取1份尿液标本进行PCR检测。以培养法为“金标准”,将两种PCR法与之比较,分别计算其敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。结果：InPouchTV培养法检出率为4．76％（5／105）;尿液PCR法检出率为3．81％（4／105）;尿道拭子PCR法检出率为4．76％（5／105）。尿液PCR法和尿道拭子PCR法的敏感性,特异性,阳性预测值和阴性预测值分别为80％．100％、100％、99％和80％、99％、80％、99％。结论：阴道毛滴虫感染是男性NGU的病因之一,在本研究中,阴道毛滴虫感染在男性NGU中的检出率为4．76％。尿液PCR法具有较高的敏感性和特异性且适用于非侵入性标本的检测,是具有临床应用价值的检测阴道毛滴虫的方法。     

阴道念珠菌病患者体内白念珠菌抗氧化基因的表达

目的检测阴道念珠菌病患者体内感染状态下白念珠菌抗氧化基因的表达,初步了解抗氧化机制在阴道念珠菌病发病机制中的关系。方法选取7例阴道念珠菌病患者阴道分泌物分离株,培养鉴定为白念珠菌,选取PDA斜面培养3天(体外培养静止期)及临床阴道分泌物检体,用Trizol法提取总RNA反转录为cDNA后进行荧光定量PCR,检测体外培养静止期与体内检体抗氧化基因(CAT,SOD2,SOD5)及抗氧化转录因子(CaSkn7,CaHog1,CAP1)的基因表达情况,运用Ct值比较法进行表达量的相对定量分析。结果白念珠菌阴道病患者体内标本中CaSkn7,CAP1,SOD2,SOD5基因表达量比体外培养静止期少,分别为体外表达量的0.273,0.635,0.039,0.632;而CaHog1及CAT基因表达比体外培养静止期高,分别为体外表达量的3.5倍及1.67倍。经Wilcoxon检验,显示阴道分泌物标本中仅CaSkn7基因表达量较体外培养静止期低,差异有统计学意义P0.05,其余基因与体外培养静止期差异无统计学意义,P均0.05。结论白念珠菌黏膜感染状态下抗氧化相关的基因表达较少,抗氧化机制在念珠菌性阴道炎发病过程中作用不明显。     

外阴阴道念珠菌病患者临床分离菌株的菌种及基因型分析

目的 探讨初发型、复发型外阴阴道念珠菌病患者及健康带菌者阴道分离的念珠菌菌种及菌株基因型与初发及复发的关系。方法 选择分别来自健康带菌者、外阴阴道念珠菌病患者和复发性外阴阴道念珠菌病患者。首先经菌种鉴定,然后用RAPD技术对来自3组人群的菌株进行基因分型。结果 临床分离株菌种鉴定结果为白念珠菌83株,非白念珠菌共14株。从9个随机引物中筛选出的2条引物(引物4和引物7)对初发组、复发组及健康带菌组分离株的扩增带型多数未表现出与菌株来源的联系,但少数菌株依来源不同表现出了一定区别。引物4和引物7可将来源于不同临床分型的97株菌及2株标准菌株分成19型和21型。结论 外阴阴道念珠菌病致病菌以白念珠菌为主,非白念珠菌中以光滑念珠菌为主。     

几种快速提取新生隐球菌DNA的方法

目的　探讨几种快速提取新生隐球菌DNA方法的效果。方法　分别用玻璃珠机械破裂法、酶消化法、高渗剂破裂法及三法联合法提取有荚膜的新生隐球菌B 3 50 1野生株DNA ,用联合法提取 5种血清型新生隐球菌标准株的DNA ,用紫外分光光度计检测提取DNA的浓度和纯度。结果　 4种方法抽提 2ml新生隐球菌培养液 (菌体数约为 1×10 8个 /ml) ,可获得DNA的量约是 64～ 2 0 3 μg。酶消化法、高渗剂破裂法及三法联合法抽提的DNA ,其OD2 60 /OD2 80比值均小于 1.8。结论　除玻璃珠机械破裂法外 ,酶消化法、高渗剂破裂法 ,以及三法联合法均可用于快速抽提新生隐球菌的DNA。以三法联合法效果最好     

阴道分离的念珠菌体外抗真菌药物敏感性分析

目的 探讨念珠菌在女性阴道黏膜所致的不同表现与其对抗真菌药物敏感性之间的关系。方法 应用NCCLSM27-A方案推荐的微量液体稀释法,测定对来自外阴阴道念珠菌健康携带者、外阴阴道念珠菌病和复发性外阴阴道念珠菌病的念珠菌对抗真菌药物的敏感性。结果 8种抗真菌药对光滑念珠菌和克柔念珠菌的MIC值几乎均比白念珠菌高。来自复发性外阴阴道念珠菌病患者的菌株MIC值较高,而健康带菌者菌株的MIC值较低。耐药菌株主要来源于复发组,健康带菌者来源的白念珠菌菌株对伊曲康唑、氟康唑、酮康唑和制霉菌素未见有耐药菌株出现。结论 外阴阴道念珠菌病治疗中应重视非白念珠菌的耐药性,长期或间断应用抗真菌药物治疗,可能诱导耐药株的产生。     

Oligo芯片技术分析阴道念珠菌病患者阴道分泌物中致病相关因子的表达谱

目的 借助Oligo基因芯片的优势,整体地分析探讨阴道念珠菌病患者阴道分泌物中各致病相关因子的表达。方法 分别提取10例阴道念珠菌病患者及3例无症状带菌者阴道分泌物标本的RNA,将其与疾病相关因子Oligo表达谱芯片杂交,筛选出表达改变超过2倍（比值≥2或≤0.5）的因子,并绘制成差异基因表达谱进行分析。结果 与正常人对照组相比,在患者组中表达上调的基因有44个,其中,MIP-1α、NF-κB、TNF-α、IFN-γ、TLR4、HWP1、SAP2、SAP5、LIP4、EFG1、CPH1在80%以上的标本中表达上调（平均比值为4.013）;表达下调的基因有17个,其中,LIP6、WH11在80%以上的标本中表达下调（平均比值为0.326）。分析表达差异明显因子的生物信息功能,MIP-1α、NF-κB、TNF-α、IFN-γ、TLR4与机体天然免疫相关,HWP1与菌丝黏附及形成相关,SAP2、SAP5、LIP4、LIP6与菌株胞外水解酶相关,EFG1、CPH1、WH11与菌株表型转换有关。结论 宿主适应性免疫功能受限以及致病菌株毒力增强均参与阴道念珠菌病的发病机制,TLR4在该病局部宿主免疫机制中可能起一定作用。     

外阴阴道念珠菌病患者阴道分泌物IL-12和IL-23的检测

目的探讨细胞因子IL-12和IL-23的表达水平与不同严重程度外阴阴道念珠菌病发病的关系。方法ELISA法检测轻中度、重度各组外阴阴道念珠菌病及复发性外阴阴道念珠菌病(RVVC)患者阴道分泌物中IL-12p70和IL-23p19的表达水平,以正常女性白念珠菌携带者为对照组。结果各组外阴阴道念珠菌病患者的IL-12p70和IL-23p19表达水平均低于对照组,且各组间比较差异均有显著性(F=13.486,P=0.000:F=11.869,P=0.000);组间两两比较,重度外阴阴道念珠菌病组和RVVC组IL-12p70的水平均低于对照组,差异有显著性(t=2.243,P=0.035;t=3.397,P=0.000);RVVC组IL-23p19的水平低于对照组,差异有显著性(t=3.289,P=0.000)。结论IL-12和IL-23的表达异常可能与外阴阴道念珠菌病的发病、病情严重程度和复发有关。     

T细胞亚群及相关细胞因子在复发性外阴阴道念珠菌病发病中的作用

目的探讨T细胞亚群及局部分泌物中相关的细胞因子在复发性外阴阴道念珠菌病发病机制中的作用。方法采用碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶(APAAP)桥联酶法技术,对28例外阴阴道念珠菌病(VVC)、35例复发性外阴阴道念珠菌病(RVVC)和31例健康对照者外周血进行T淋巴细胞亚群CD4+,CD8+细胞检测,ELISA法检测以上各组女性阴道分泌物中IL-12,IL-4和IFN-γ的表达水平。结果 RVVC组CD4+T淋巴细胞低于VVC组和对照组(P均<0.05),而CD8+T淋巴细胞均高于VVC组和对照组(P均<0.05)。VVC组IL-12水平明显高于RVVC组和对照组(P<0.05);IFN-γ水平在RVVC组、VVC组差异无统计学意义(P>0.05),但均高于对照组(P均<0.05);IL-4水平在三组间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论复发性外阴阴道念珠菌病患者可能存在一定的免疫缺陷,Th1型和Th2型细胞因子的表达异常可能与外阴阴道念珠菌病的发病以及复发有关。     

Immunohistochemical study of in vivo and in vitro IgA coating of candida species in vulvovaginal candidiasis.

OBJECTIVE--To evaluate whether quantitative or qualitative IgA deficiencies in cervicovaginal secretions can be identified in patients with recurrent vulvovaginal candidiasis. DESIGN--Prospective and controlled study. SETTING--Department of Dermatology, University of Vienna. SUBJECTS--30 patients with symptomatic and recurrent vulvovaginal candidiasis at the time of their presentation. 30 healthy women as a control group. INTERVENTION--Blood samples were drawn for measurement of serum IgA levels. Smears of the cervix and vagina were taken for direct microscopy and microbiological culture. Lavage of the vagina and ectocervix was performed with sterile saline solution for measurement of cervicovaginal IgA levels. MAIN OUTCOME MEASURES--IgA levels of serum and cervicovaginal secretion evaluated by Single Radial Immunodiffusion. IgA labelling was demonstrated on fungal elements in vaginal smears and subcultured blastospores after incubation with vaginal secretions by immunohistochemistry. RESULTS--We could not find any significant difference of IgA levels in serum and cervicovaginal secretions between the symptomatic group and healthy controls (p value for serum = 0.5796, p value for secretion = 0.2381). In vaginal smears yeasts revealed IgA coating on their surfaces, whereas three of the 61 subcultures were negative. Negative subcultures were assigned to three patients with recurrent candidiasis. No correlation was found between IgA levels of cervicovaginal secretions and staining intensity of subcultured blastospores after incubation with vaginal secretions (r = -0.0578). IgA levels of serum and vaginal secretion showed no correlation (r = -0.00012). CONCLUSION--Recurrent vulvovaginal candidiasis cannot be attributed to IgA deficiency. In some cases an IgA coating defect of yeasts might be involved. In addition inactivation of the IgA molecule by candida proteases might be of pathogenetic importance.     

复发性外阴阴道假丝酵母菌病菌种与药敏特征的研究

目的:了解假丝酵母菌在复发性外阴阴道假丝酵母菌病的菌种分布和药物敏感性,为临床治疗提供帮助。方法:收集108例复发性外阴阴道假丝酵母菌病阴道分泌物标本,应用法国生物梅里埃酵母菌鉴定试剂盒ID32C和药敏试剂盒ATBTM FUNGUS3进行鉴定和药敏试验。结果:108株假丝酵母菌中分离出光滑假丝酵母菌36例,白色假丝酵母菌35例,近平滑假丝酵母菌20例,热带假丝酵母菌7例,其他11例;对抗真菌药物AMB、5FC敏感性分别为96.30%、85.19%,对FCA、VRC、ITR耐药率分别为42.59%、50.93%、72.22%。有26株白色假丝酵母菌对3种三唑类药物均耐药。光滑假丝酵母菌对ITR耐药率高达83.33%。结论:复发性外阴阴道假丝酵母菌病的致病菌主要是光滑假丝酵母菌、白色假丝酵母菌,呈现非白假丝酵母菌占67.59%的分布特征,并且对AMB、5FC敏感性高,ITR耐药率高于VRC、FCA。     

Zinc levels of serum and cervicovaginal secretion in recurrent vulvovaginal candidiasis.

OBJECTIVE--To determine whether zinc deficiency in serum or vulvovaginal secretion is a risk factor for recurrent vulvovaginal candidiasis. DESIGN--Prospective and controlled study. SETTING--Department of Dermatology, University of Vienna. SUBJECTS--21 women who had experienced at least three documented episodes of acute vulvovaginal candidiasis within the previous 12 months. Fifteen women without anamnesis of vulvovaginal candidiasis as a control group. INTERVENTIONS--Blood samples were drawn for measurement of plasma zinc levels. Lavage of the vagina and ectocervix was performed with sterile saline solution for measurement of cervicovaginal zinc levels. MAIN OUTCOME MEASURES--Zinc levels of serum and cervicovaginal secretions were determined by flame atomic absorption spectrophotometry. RESULTS--We found no significant difference in the mean zinc concentration of plasma and cervicovaginal secretions between the recurrent vulvovaginal candidiasis and the control group. (p value for serum = 0.71, p value for secretion = 0.80). Zinc levels of plasma and cervicovaginal secretions showed no correlation (patient group: r = -0.05, control group: r = -0.07). CONCLUSION--It is well known that zinc not only exerts a major impact on different immune functions, but also participates in growth and morphogenesis of Candida albicans. Our results could not confirm the previous hypothesis that zinc deficiency of serum is a risk factor in recurrent vulvovaginal candidiasis. It is possible that the local zinc level of cervicovaginal secretions essentially influences antifungal activity of third generation azole antimycotics.     

阴道局部免疫状态与复发性外阴阴道念珠菌病发病的关系

目的：检测人β防御素-2（HBD-2）、白细胞介素-4（IL-4）、干扰素-γ（IFN-γ）在健康女性、外阴阴道念珠菌病（VVC）及复发性外阴阴道念珠菌病（RVVC）患者阴道灌洗液中的表达水平,探讨阴道局部免疫状态与RVVC发病的关系。方法：选取对照组20例,VVC组患者22例及RVVC组患者26例,分别测定三组人群阴道pH值,并用ELISA法测定阴道灌洗液中HBD-2、IL-4、IFN-γ的表达水平。结果：①VVC组及RVVC组阴道pH值明显高于对照组（P〈0.05）,两组间阴道pH值之间无统计学差异;②VVC组和RVVC组HBD-2的表达水平明显高于对照组（P〈0.05）,RVVC组较VVC组的HBD-2的表达水平升高（P〈0.05）;③VVC组和RVVC组IL-4表达水平均高于对照组,RVVC组较VVC组的IL-4表达水平升高（P〈0.05）;④IFN-γ表达水平在三组中无统计学差异（P〉0.05）。结论：阴道局部免疫状态紊乱可能与念珠菌性阴道炎发病和复发有关。     

两性霉素 B 对外阴阴道假丝酵母菌病抗真菌后巩固治疗效果观察

目的：分析外阴阴道假丝酵母菌患者的临床有效治疗方法。方法：选取外阴阴道假丝酵母菌患者共104例作为研究对象,随机分为两组。其中对照组使用克霉唑治疗,实验组使用两性霉素B治疗,观察比较两组患者疗效。结果：实验组患者疼痛、阴道充血水肿改善高于对照组,P＜0.05,差异有统计学意义;两组患者瘙痒症状、分泌物改善比较差异不明显,P＞0.05,差异无统计学意义。结论：对外阴阴道假丝酵母菌患者使用两性霉素B治疗具有较好的效果,是一种有效的治疗方案。     

Oligo基因芯片和小鼠模型研究外阴阴道念珠菌病的发病机制

目的 探讨外阴阴道念珠菌病的发病机制。方法 将来自感染组、阴性对照组及空白对照组小鼠模型的标本分别与自制的疾病相关因子基因表达谱芯片杂交,将感染组与对照组中各疾病相关因子信号值进行比较,筛选出表达升高或降低2倍的因子,并绘制成差异基因表达谱进行分析。结果 与空白对照组相比在感染组中可以出现表达上调的基因有39个,可以出现表达下调的基因有4个。在宿主免疫方面,炎性趋化因子普遍表达增高,适应性免疫调节因子IL-1、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-κB以及TGF-β均有不同程度增强,全部标本天然免疫成分TLR4的表达增高,TLR2仅表达增高于1/3的标本。在致病菌株毒力方面,菌丝生成调控因子EFG1、分泌型天冬氨酸蛋白酶（SAP）2、4、5、6、10、脂酶（LIP）2、LIP4和菌丝胞壁蛋白（HWP）1表达显著增强。其中,单核细胞趋化蛋白（MCP）-1、巨噬细胞炎性蛋白（MIP）-1α和MIP-2、IL-1、Toll样受体（TLR）4、LIP4、HWP1在全部感染组标本中显著增高,这些因子涉及白念珠菌胞外水解酶、菌丝形成、表型转换及宿主天然免疫过程。结论 适应性免疫的功能不足以及致病菌株的毒力增强均参与小鼠阴道念珠菌病的发病机制,TLR4在该病局部宿主免疫机制中可能起较为重要的作用。     

外阴阴道念珠菌病的病因研究及体外药敏检测

目的了解福州地区阴道念珠菌病的病因、致病菌的菌种特征。方法采用科玛嘉念珠菌显色培养基和YBC鉴定卡及API-20C AUX酵母菌鉴定系统对门诊就诊661例患者阴道分泌物分离到的332株致病真菌进行鉴定,并采用ROSCO纸片扩散法对4种抗真菌药进行药物敏感检测。结果总感染率为69.45%共分离菌种6种。339株念珠菌,其中白念珠菌为288株占85%,光滑念珠菌23株占6.8%,热带念珠菌12株占3.54%,克柔念珠菌7株占2%,近平滑念珠菌4株占1.18%,光滑假丝酵母菌4株占1.18%,酿酒酵母菌1株占0.29%。结论本地区念珠菌性阴道炎主要的病原菌以白色念珠菌为主,其次是光滑念珠菌、热带念珠菌。