念珠菌性外阴阴道炎患者身体不同部位白念珠菌基因型研究

目的 研究念珠菌性外阴阴道炎患者身体不同部位的白念珠菌基因型分布情况。方法 采用PCR方法扩增白念珠菌包含Ⅰ类内含子的编码rRNA的25SrDNA区,根据扩增条带大小进行基因分型:A型(~450bp),B型(~840bp),C型(~450bp和~840bp)。结果 60例念珠菌性外阴阴道炎患者中,54例由白念珠菌感染所致,其中表现为非复发性感染者39例,复发性感染者15例;同时从2个或2个以上部位分离到白念珠菌的病例共32例(32/54),其中非复发性念珠菌性外阴阴道炎19例(19/39),复发性念珠菌性外阴阴道炎13例(13/15)。从54例白念珠菌性外阴阴道炎患者的阴道、肛门、口腔部位共分离到92株白念珠菌,其中A型80株,B型8株,C型4株。同一患者不同部位基因型相同者24例(24/32),不同者8例(8/32)。结论 在白念珠菌性外阴阴道炎中,主要以A型白念珠菌为主,B型、C型所占比例较少,且多分离自非阴道部位。在复发性念珠菌性外阴阴道炎患者中,身体其他部位念珠菌的定植率高于非复发性念珠菌性外阴阴道炎,肠道菌库理论在念珠菌性外阴阴道炎的反复发作中,具有一定的作用。     

阴道分离的念珠菌体外抗真菌药物敏感性分析

目的 探讨念珠菌在女性阴道黏膜所致的不同表现与其对抗真菌药物敏感性之间的关系。方法 应用NCCLSM27-A方案推荐的微量液体稀释法,测定对来自外阴阴道念珠菌健康携带者、外阴阴道念珠菌病和复发性外阴阴道念珠菌病的念珠菌对抗真菌药物的敏感性。结果 8种抗真菌药对光滑念珠菌和克柔念珠菌的MIC值几乎均比白念珠菌高。来自复发性外阴阴道念珠菌病患者的菌株MIC值较高,而健康带菌者菌株的MIC值较低。耐药菌株主要来源于复发组,健康带菌者来源的白念珠菌菌株对伊曲康唑、氟康唑、酮康唑和制霉菌素未见有耐药菌株出现。结论 外阴阴道念珠菌病治疗中应重视非白念珠菌的耐药性,长期或间断应用抗真菌药物治疗,可能诱导耐药株的产生。     

念珠菌性阴道炎阴道分泌物天然免疫成分的表达

目的:评价β-防御素(β-defence-2)、甘露糖凝集素(mannose-binding lectin,MBL)和Toll样受体家族(Toll-like receptor,TLR)天然免疫成分在念珠菌性阴道炎患者中的表达.方法:提取念珠菌性阴道炎患者及健康带菌者阴道分泌物的RNA,利用荧光定量PCR检测阴道分泌物中天然免疫成分的表达.结果:β-defence-2表达量在患者阴道炎分泌物标本中均显著升高.MBL在念珠菌性阴道炎患者及健康带菌者阴道分泌物标本间表达的差异无统计学意义.健康带菌者TLR3、TLR2和TLR4表达水平明显低于念珠菌性阴道炎患者.结论:念珠菌性阴道炎患者阴道分泌物中存在多种抗白念珠菌感染的天然免疫因子.     

外阴阴道念珠菌病小鼠模型阴道组织趋化因子MCP-1和MIP-2 mRNA水平测定

目的 探讨趋化因子在白念珠菌性阴道炎模型小鼠阴道组织中的表达情况.方法 采用雌激素化小鼠念珠菌性阴道炎模型,另以雌激素化但未接种白念珠菌组、接种等量白念珠菌但未雌激素化组为对照组,动态观察小鼠阴道灌洗液的真菌生长情况,并在接种后不同时间随机摘取小鼠的阴道组织,半定量RT-PCR方法检测组织内单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)mRNA的表达情况.结果 与未雌激素化的小鼠比较,雌激素化并接种白念珠菌小鼠阴道灌洗液自第2天开始即可发现念珠菌生长并持续到接种后21d,自第4天起阴道组织内有高水平的MCP-1 mRNA表达,并持续高于另外两组直到观察期末.3组小鼠的MIP-2 mRNA表达水平在接种后第2天明显高于完全阴性对照组,但以后各时间点3组间两两比较差异无统计学意义.结论 MCP-1 mRNA高水平表达可能与白念珠菌持续的阴道感染过程有关,而MIP-2在感染过程中的作用不明显.     

外阴阴道念珠菌病患者临床分离菌株的菌种及基因型分析

目的 探讨初发型、复发型外阴阴道念珠菌病患者及健康带菌者阴道分离的念珠菌菌种及菌株基因型与初发及复发的关系。方法 选择分别来自健康带菌者、外阴阴道念珠菌病患者和复发性外阴阴道念珠菌病患者。首先经菌种鉴定,然后用RAPD技术对来自3组人群的菌株进行基因分型。结果 临床分离株菌种鉴定结果为白念珠菌83株,非白念珠菌共14株。从9个随机引物中筛选出的2条引物(引物4和引物7)对初发组、复发组及健康带菌组分离株的扩增带型多数未表现出与菌株来源的联系,但少数菌株依来源不同表现出了一定区别。引物4和引物7可将来源于不同临床分型的97株菌及2株标准菌株分成19型和21型。结论 外阴阴道念珠菌病致病菌以白念珠菌为主,非白念珠菌中以光滑念珠菌为主。     

白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶基因在急性念珠菌性外阴阴道炎中的表达

目的 了解白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶(Sap)基因在人类阴道白念珠菌感染时的表达情况。方法 收集9例阴道念珠菌检测阴性及20例阴道念珠菌感染者的阴道分泌物,通过用特异引物系列进行RT-PCR反应来评价Sap1~Sap6在人体阴道环境中的表达情况。结果 Sap2和Sap5在阴道白念珠菌感染者中是最主要的表达基因;Sap3和Sap4在所有检查者中均被检测到;所有6种Sap基因在某些阴道念珠菌病患者中同时被检出。结论 Sap基因可能与阴道念珠菌病的发病机制有关。     

白念珠菌性阴道炎动物模型的构建

目的 构建白念珠菌性阴道炎的小鼠模型。方法 采用ICR雌性小鼠,预先给其皮下注射苯甲酸雌二醇以造成小鼠的假发情,再给予小鼠阴道内注射约5×10⁴个白念珠菌稳态芽生孢子,动态观察其阴道分泌物生成及镜检情况;并进行阴道灌洗液的真菌载量分析以及阴道组织病理观察。结果 与未雌激素化的小鼠比较,雌激素化小鼠阴道灌洗液的真菌载量分析显示自第2天开始可分离出高水平的计数结果并直到接种后21d;阴道组织病理结果发现自第4天至实验结束均可见到阴道粘膜浅层有菌丝生长,并有炎性细胞浸润。结论 此动物模型可以作为一个研究念珠菌性阴道炎发病机制的手段。     

阴道念珠菌随机扩增多态性DNA分型研究

目的 对分离自外阴阴道念珠菌病患者阴道的念珠菌进行基因分型,并对不同菌株间的亲缘关系作相似性分析。方法 用形态学及生化方法对分离到的致病性念珠菌进行鉴定,然后采用随机扩增多态性DNA技术(RAPD)对45株临床分离株基因组DNA进行扩增,并将DNA扩增带型进行聚类分析。结果 30株白念株菌可以分成7群共19个亚群,15株非白念珠菌(包括光滑念珠菌6株,克鲁斯念珠菌、近平滑念珠菌和热带念珠菌各3株)至少可鉴定到种水平。白念珠菌种内不同菌株间的相似性系数在90%以上,不同念珠菌种间的相似性系数介于80%~90%。结论 外阴阴道念珠菌病的主要致病菌是白念珠菌,用RAPD技术可将之分成不同的基因组型别。     

阴道白念珠菌致病株与携带株分泌性蛋白酶活力的比较

目的比较阴道白念珠菌致病株与携带株分泌性蛋白酶的活力,以探讨其与外阴阴道念珠菌病之间的关系。方法:采用牛血清白蛋白培养基对外阴阴道念珠菌病患者和无症状携带者阴道白念珠菌分离株的分泌性蛋白酶活力进行测定。结果:致病株组和携带株组分泌性蛋白酶阳性株的检出率无明显差异,但二组间酶的活力有显著性差异(P<0.001)。结论:外阴阴道念珠菌病的发病可能与白念珠菌分泌性蛋白酶在宿主局部某些因素的影响下表达水平升高有关。     

外阴阴道白念珠菌氟康唑敏感株与耐药株型别分布比较

目的：分离念珠菌性外阴阴道炎白念珠菌临床株,比较氟康唑敏感株组和耐药株组的A、B、C型别分布。方法：收集念珠菌性外阴阴道炎患者阴道分泌物标本,用柯玛嘉显色培养基初步鉴定并分纯其中的白念珠菌临床株。联用微量稀释法和药敏纸片法体外测定菌株对氟康唑的敏感性。分别各取15株敏感株和耐药株,扩增其25SrDNA转座内含子保守序列,鉴定分型。结果：15株敏感株包括9株A型、5株B型和1株C型;15株耐药株全部为A型。敏感株组和耐药株组间的A、B、C型别分布有显著性差异（P〈0.005）。结论：念珠菌性外阴阴道炎耐药白念珠菌以A型为主,白念珠菌耐药性形成与型别相关。     

阴道局部免疫状态与复发性外阴阴道念珠菌病发病的关系

目的：检测人β防御素-2（HBD-2）、白细胞介素-4（IL-4）、干扰素-γ（IFN-γ）在健康女性、外阴阴道念珠菌病（VVC）及复发性外阴阴道念珠菌病（RVVC）患者阴道灌洗液中的表达水平,探讨阴道局部免疫状态与RVVC发病的关系。方法：选取对照组20例,VVC组患者22例及RVVC组患者26例,分别测定三组人群阴道pH值,并用ELISA法测定阴道灌洗液中HBD-2、IL-4、IFN-γ的表达水平。结果：①VVC组及RVVC组阴道pH值明显高于对照组（P〈0.05）,两组间阴道pH值之间无统计学差异;②VVC组和RVVC组HBD-2的表达水平明显高于对照组（P〈0.05）,RVVC组较VVC组的HBD-2的表达水平升高（P〈0.05）;③VVC组和RVVC组IL-4表达水平均高于对照组,RVVC组较VVC组的IL-4表达水平升高（P〈0.05）;④IFN-γ表达水平在三组中无统计学差异（P〉0.05）。结论：阴道局部免疫状态紊乱可能与念珠菌性阴道炎发病和复发有关。     

Oligo芯片技术分析阴道念珠菌病患者阴道分泌物中致病相关因子的表达谱

目的 借助Oligo基因芯片的优势,整体地分析探讨阴道念珠菌病患者阴道分泌物中各致病相关因子的表达。方法 分别提取10例阴道念珠菌病患者及3例无症状带菌者阴道分泌物标本的RNA,将其与疾病相关因子Oligo表达谱芯片杂交,筛选出表达改变超过2倍（比值≥2或≤0.5）的因子,并绘制成差异基因表达谱进行分析。结果 与正常人对照组相比,在患者组中表达上调的基因有44个,其中,MIP-1α、NF-κB、TNF-α、IFN-γ、TLR4、HWP1、SAP2、SAP5、LIP4、EFG1、CPH1在80%以上的标本中表达上调（平均比值为4.013）;表达下调的基因有17个,其中,LIP6、WH11在80%以上的标本中表达下调（平均比值为0.326）。分析表达差异明显因子的生物信息功能,MIP-1α、NF-κB、TNF-α、IFN-γ、TLR4与机体天然免疫相关,HWP1与菌丝黏附及形成相关,SAP2、SAP5、LIP4、LIP6与菌株胞外水解酶相关,EFG1、CPH1、WH11与菌株表型转换有关。结论 宿主适应性免疫功能受限以及致病菌株毒力增强均参与阴道念珠菌病的发病机制,TLR4在该病局部宿主免疫机制中可能起一定作用。     

In vivo expression and localization of Candida albicans secreted aspartyl proteinases during oral candidiasis in HIV-infected patients

Isoforms of aspartyl proteinase (Sap), which are encoded by at least nine related SAP genes, have been implicated to be a major virulence factor of the opportunistic yeast Candida albicans in experimental infections. Although it is generally assumed that proteinases are important for infections, detailed information on the pathogenetic role of Saps is still lacking. The same applies to the question whether the genes and corresponding isoforms of the enzyme are expressed during oral infection. For in vivo investigations, parts of the lesional oral epithelium were collected from three HIV-infected patients with oropharyngeal candidiasis. Immunoelectron microscopy was performed (pre- and post-embedding gold labeling with silver enhancement) using an anti-Sap murine monoclonal antibody directed against the gene products Sap1-3. It was possible to demonstrate expression of Sap antigens in each of the three samples of human oral candidiasis. This suggests that at least one of the genes SAP1-3 was expressed at the time of sample collection. Furthermore, a possible role of the enzymes during the interaction of yeast cells and mucosal cells is suggested: the majority of Sap antigens is secreted by those C. albicans cells that adhere directly to the epithelial surface. Sap immunoreactivity can be detected in particular at the site of close contact between C. albicans and epithelial cells, suggesting a pathogenetic role of the Saps in host-fungal interaction. Thus, inhibition of the enzyme might prove to be an important alternative in the prevention and treatment of candidiasis.     

外阴阴道假丝酵母菌病临床特征和抗真菌药物敏感性研究

目的：探讨外阴阴道假丝酵母菌病（VVC）的临床特征和抗真菌药物敏感性。方法：对1120例VVC患者进行临床特征分析,阴道分泌物标本采集、真菌培养及体外药敏实验。结果：单纯型VVC占36．79％,重度VVC占37．77％,RVVC占14．38％,非白假丝酵母菌VVC占11．07％。重度VVC的特征最为严重（P均=0．000）,以白假丝酵母菌最多见（P=0．000）。抗菌药物的敏感性依次为制霉菌素、克霉唑、氟康唑、伊曲康唑、益康唑、咪康唑及酮康唑,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：白假丝酵母菌是VVC主要的病原体,复杂型VVC临床较为常见且临床特征较单纯型VVC严重。白假丝酵母菌对唑类抗真菌药物仍有较高敏感性,制霉菌素、克霉唑抗真菌敏感性较高,可以供临床治疗选用。     

复发性外阴阴道念珠菌病患者阴道分泌物IL-4和IL-12的检测

目的 探讨阴道分泌物中IL-4与IL-12的表达与复发性外阴阴道念珠菌病复发的关系。方法 ELISA法检测复发性外阴阴道念珠菌病(RVVC)患者组、外阴阴道念珠菌病(VVC)患者组阴道中IL-4,IL-12的表达水平,以正常女性白念珠菌携带者为对照组。结果 RVVC组的IL-4水平高于VVC组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但3组的IL-12水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IL-4表达差异可能与RVVC复发有关。     

阴道白念珠菌细胞外磷脂酶活力测定

目的　探讨白念珠菌细胞外磷脂酶活力与外阴阴道念珠菌病的关系。方法　随机选择外阴阴道念珠菌病患者和无症状携带者 ,采用卵黄平皿方法测定其阴道白念珠菌分离株的细胞外磷脂酶活力。结果　患者组细胞外磷脂酶阳性菌株的检出率及其磷脂酶的活力均显著高于携带者组 (P值均 <0 .0 0 1)。结论　白念珠菌细胞外磷脂酶可能是引起外阴阴道念珠菌病的重要毒力因子之一。     

白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶研究进展

念珠菌病是一种常见的真菌病,大多数是由念珠菌属中最常见的条件致病真菌白念珠菌引起。分泌型天冬氨酸蛋白酶是与白念珠菌毒力有关的重要因素之一,对其生化特性、编码基因的表达及调控,与宿主的作用加以综述,从而帮助我们更好的了解白念珠菌的致病机制并寻找治疗念珠菌病的新途径。