趋化因子CXCL10与肿瘤细胞RNA修饰树突状细胞抗前列腺癌研究

目的探讨肿瘤细胞RNA和趋化因子CXCL10基因共同修饰的树突状细胞(DC)瘤苗对小鼠抗肿瘤免疫反应的诱导作用。方法将小鼠RM 1前列腺癌细胞RNA加载小鼠骨髓来源的DC后,通过脂质体转染法将CXCL10基因导入DC,制备前列腺癌瘤苗;体内外实验检测该瘤苗诱导的抗前列腺癌免疫治疗作用。结果转染CXCL10基因的DC上清对淋巴细胞有较强的趋化作用;DC瘤苗所诱导的特异性效应细胞(CTL)对RM 1细胞具有特异性杀伤作用;经DC瘤苗治疗的荷瘤小鼠模型瘤体生长减慢,存活期延长;该瘤苗还具有明显的免疫保护作用。结论构建的前列腺癌DC瘤苗能够有效诱导抗肿瘤免疫反应和免疫保护功能。     

转基因树突状细胞瘤苗诱导的CTL对肿瘤细胞的靶向性杀伤作用

目的：观察mAFP基因转染的树突状细胞（DC）瘤苗诱导的靶向性细胞毒性T细胞（以下简称靶向性CTL）对肿瘤细胞的杀伤作用。方法：用构建的mAFP基因转染的DC瘤苗免疫C57BL／6小鼠,取免疫小鼠脾细胞诱导CTL,LDH非放射性细胞毒性试验检测其对不同肿瘤细胞的杀伤作用。用ELISA法检测CTL诱导过程中TNF—α和IFN-γ分泌变化规律。结果：AFP基因转染的DC瘤苗免疫小鼠后能诱导具有较高抗肿瘤活性的靶向性CTL,这种靶向性CTL对AFP分泌性肿瘤细胞具有更强的杀瘤活性,且在CTL诱导过程中TNF-α和IFN-γ分泌水平明显增高,与对照组比较差异有统计学意义（P〈O．05）。结论：AFP基因重组腺病毒修饰的DC瘤苗免疫C57BL／6J小鼠,能诱导出针对AFP抗原的靶向性CTL,并也能通过分泌TNF-α和IFN-γ实现对AFP分泌性肿瘤细胞的特异性杀伤。     

白介素-18对树突状细胞瘤苗的抗肿瘤作用

目的：进一步提高树突状细胞（DC）瘤苗的抗肿瘤作用。方法：以腺病毒为载体转染目的基因至DC，研究DC瘤苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用。分别以乳酸脱氢酶（LDH）释放法、酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL）、自然杀伤细胞（NK）活性和细胞因子的分泌水平。结果：IL-18／gp100-DC瘤苗对荷瘤小鼠具有显著的治疗作用。IL-18／gp100-DC瘤苗治疗后，能明显增强CTL和NK活性，提高IFN-r和IL-2的分泌水平，使体内肿瘤细胞发生明显坏死，瘤体及瘤周有大量炎性细胞浸润。CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞为发挥抗肿瘤作用所必须，NK细胞也起到一定的作用。结论：辅助性T细胞1（Th1）型细胞因子IL-18基因修饰的gp100-DC瘤苗能有效地诱导抗肿瘤免疫反应。     

枸杞多糖对小鼠骨髓树突状细胞成熟的影响

目的：研究枸杞多糖对小鼠骨髓树突状细胞（DC）表型及功能成熟的影响。方法：小鼠骨髓细胞用GM-CSF和IL-4培养5d，然后用免疫磁珠法纯化DC细胞，实验组加入枸杞多糖（100μg／ml），空白对照组加等量RPMI1640，阳性对照组加LPS（100ng／ml），3组分别同时作用48h。流式细胞仪检测细胞表型和细胞摄取抗原的能力，ELISA检测产生的细胞因子IL-12，混合淋巴细胞反应检测细胞提呈抗原的能力。结果：用枸杞多糖刺激的小鼠骨髓DC表达I-A／I-E、CD11c和分泌IL-12能力比空白对照组增加，吞噬FITC-dextran的能力下降，并可促进同种异基因T细胞的增殖。结论：枸杞多糖可以促进体外培养的小鼠骨髓DC的成熟，促进DC诱导的免疫应答启动。     

肺癌细胞裂解物对树突状细胞的免疫抑制作用

目的:研究Lewis肺癌细胞裂解物对小鼠树突状细胞(DC)的免疫抑制作用。方法:反复冻融法制备Lewis肺癌细胞裂解物,骨髓冲洗提取C57/BL6小鼠DC,GM-CSF、IL-4体外诱导培养DC,ELISA检测肿瘤细胞裂解物(TCL)中透明质酸(HA)含量,ELISA检测DC培养上清液中IL-12和IL-10水平。结果:经检测,Lewis肺癌细胞TCL中含有HA,其含量为42 mg/ml。将这种TCL作用于C57/BL6小鼠DC,同对照组相比,DC的IL-12分泌水平显著下降(P<0.01),而IL-10的分泌水平显著提高(P<0.01),这符合免疫耐受DC细胞因子分泌特点。在用Pep-1抗体封闭DC表面的HA受体CD44后,DC的IL-12、IL-10分泌水平则恢复至同对照组相同的水平(P>0.05)。结论:Lewis肺癌细胞裂解物中含有HA。通过这种物质,肺癌细胞裂解物可以诱生鼠源免疫耐受性DC,从而抑制DC的免疫活性。     

小鼠内源性抗原提呈树突状细胞疫苗的抗瘤作用

目的：将pcDNA3-hCEA真核表达质粒和肿瘤来源的RNA分别转染小鼠骨髓树突状细胞（dendritic cell,DC），观察内源性抗原提DC疫苗诱导BALB／C小鼠对CT26－hCEA^ 的抗肿瘤免疫效应。方法：采用细胞因子rmGM-CSF和rmIL-4诱导培养法制备小鼠骨髓DC，利用Lipofectamine将pcDNA3-hCEA和肿瘤来源的RNA分别转染DC，制备能够内源性表达CEA的DC疫苗。使用DC疫苗预防免疫BALA／C小鼠，观察其对于荷CT26－hCEA^ 小鼠的抗肿瘤效应。结果：内源性抗原提呈DC疫苗明显延长荷CT26－hCEA^ 瘤小鼠生存期；与其他方法制备的DC疫苗相比，有较强的针对性抗肿瘤免疫效应和较长的持续效应。结论:地于免疫逃逸的肿瘤，内源性抗原提呈DC疫苗更具有免疫预防效应。     

树突状细胞负载前列腺癌细胞抗原后的抗肿瘤免疫作用

目的 探讨小鼠树突状细胞(DC)负载前列腺癌细胞株RM-1的裂解产物后，诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)及其抗肿瘤的免疫作用。方法 将RM-1细胞的裂解产物(T-lysate)作为肿瘤抗原负载小鼠骨髓来源的DC，构建DC瘤苗(T-lysate／DC)，采用流式细胞术和四唑氮蓝(MTT)还原法检测其免疫活性；ELISA法检测其诱导细胞因子白介素(IL)-2和γ-干扰素(IFN-γ)的作用；体内实验检测DC瘤苗的抗肿瘤免疫治疗作用和免疫保护作用。结果 DC负载RM-1细胞的裂解产物后，其主要组织相容性复合物(MHC-Ⅰ、Ⅱ)及共刺激分子(B7-1、B7-2)的表达明显增高；T-lysate／DC能够诱导小鼠产生RM-1特异性CTL，使细胞上清液中IL-2和IFN-γ水平升高，对小鼠具有免疫保护作用，并能有效抵抗肿瘤细胞的攻击；经T-lysate／DC治疗的荷瘤小鼠瘤体生长减慢，存活期延长，瘤体出现坏死和炎细胞浸润。结论 DC负载前内腺细胞解产物后，能够有效诱导搞肿瘤免疫反应，为前列腺癌的临床治疗提供了新策略。     

小鼠脾来源树突状细胞与NS_1骨髓瘤细胞融合体的抗肿瘤作用

目的：观察ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾来源树突状细胞（ｓｐｌｅｅｎｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｓ,ｓＤＣ）与肿瘤细胞融合体的抗肿瘤效应。方法：以灭活的ＮＳ１细胞免疫活化ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取其ｓＤＣ与ＮＳ１骨髓瘤细胞融合,并筛选出融合细胞;用此融合细胞作为瘤苗,免疫治疗皮下荷ＮＳ１瘤的小鼠２次,间隔１周。结果：融合细胞瘤苗本身无致瘤性。用融合细胞瘤苗免疫治疗荷瘤小鼠后,其瘤体消失,且在观察期６０ｄ内未见肿瘤转移和复发。结论：脾来源树突状细胞与ＮＳ１细胞融合瘤苗免疫荷瘤小鼠后,激发其体内存在的抗ＮＳ１肿瘤效应。     

肿瘤抗原致敏树突状细胞诱导机体产生抗肿瘤作用的实验研究

目的：探讨肿瘤抗原冲击致敏的树突状细胞（Dc）诱导机体产生的特异性抗肿瘤作用。方法：体外培养的小鼠骨髓树突状细胞用小鼠结肠腺癌细胞株CT26细胞抗原冲击致敏；混合淋巴细胞反应检测肿瘤抗原致敏DC刺激同基因型T淋巴细胞增殖的能力；观察小鼠经皮下免疫肿瘤抗原致敏DC后诱导产生肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）和抵抗CT26细胞再攻击的能力。结果：肿瘤抗原致敏DC能有效刺激同基因型T淋巴细胞增殖反应；小鼠经肿瘤抗原致敏DC免疫后可诱导强烈的CT[，杀瘤活性，产生免疫保护作用，能有效抵抗CT26细胞再攻击，肿瘤生长明显减缓，与未经抗原致敏DC免疫的小鼠组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：肿瘤抗原致敏的DC能有效诱导机体产生特异性的抗肿瘤作用。     

白细胞介素-23基因修饰树突细胞获取凋亡癌细胞抗原诱导的抗胰腺癌免疫治疗

目的 探讨白细胞介素23（IL-23）基因转染的树突状细胞（DC）负载凋亡癌细胞抗原后诱导的免疫应答对小鼠胰腺癌的治疗作用。方法 克隆并构建IL-23基因真核双表达载体,转染DC后检测其表型及自分泌IL-23和IL-12的能力;观察各组脾脏T淋巴细胞γ干扰素（IFN-γ）和IL4的分泌量以及DC诱导的细胞毒T淋巴细胞（CTL）对胰腺癌细胞的杀伤作用。转染DC并负载肿瘤抗原后制备成疫苗对小鼠抗肿瘤的免疫保护作用和肿瘤抑制作用。结果基因测序证实IL-23基因克隆及双表达载体构建成功,转染后DC对共刺激分子MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ的表达增强;DC自分泌IL-23和IL-12的能力显著增强。DC介导的免疫应答促进了IFN-γ生成型Th1细胞的产生,IL-23转染组每24hIFN-γ的分泌（最高为535pg／ml／10^6）与其他各组比较（对照组每24h为60pg／ml／10^6）,P〈0．01;转染的DC疫苗在体内诱导出高水平的CTL活性（P〈0．05）。接种IL-23修饰DC疫苗后小鼠的免疫防御能力显著增强;对肿瘤的生长有明显抑制作用,治疗组荷瘤鼠生存期与其他各组比较差异有显著意义。结论IL-23使DC抗原递呈能力更强,IL-23修饰DC疫苗可强化宿主针对特异肿瘤的CTL免疫应答,使宿主不仅产生防御性免疫反应而且增强自动免疫能力。     

抗结核DC疫苗的初步研究

目的:研制抗结核的新型疫苗(DC疫苗)。方法:无菌分离C57BL/6小鼠骨髓细胞,以rGM-CSF及rIL-4诱导分化获得树突状细胞(DC),以pEGHsp65融合质粒转染DC,共聚焦激光扫描显微镜检测转染率,继以电镜鉴定细胞形态、流式细胞术分析组合性表面分子表达、混合淋巴细胞反应(MLR)检测体外刺激T细胞增殖的功能。将制备的DC疫苗静脉接种正常同系小鼠,分别取各脏器冰冻切片后荧光显微镜观察;取小鼠静脉血用ELISA法检测IL-12及IFN-γ的表达量。结果:24 h DC转染率约20%,电镜可见细胞呈典型毛刺状突起,流式细胞分析表明转染后的DC表面MHCⅡ、33D1的表达量均呈显著增高。MLR显示,pEGHsp65转染DC组与pEG-FP-C1转染DC组及空白DC组比较呈统计学增高。脏器冰冻切片显示,接种pEGHsp65转染DC小鼠组及pEG-FP-C1转染DC小鼠组与未转染DC组比较,在各脏器分布中,以脾脏分布显著增高。其余脏器分布无显著差别。pEGHsp65转染DC小鼠组IL-12及IFN-γ表达量显著高于pEGFP-C1转染DC小鼠组及未转染DC小鼠组,P<0.05,未转染DC组与阴性对照组相比,IL-12及IFN-γ表达量也有统计学增高,P<0.05。结论:pEGHsp65制备的DC疫苗具有成熟表型及功能,能够刺激小鼠IFN-γ及IL-12分泌增高。     

1-MT enhances potency of tumor cell lysate-pulsed dendritic cells against pancreatic adenocarcinoma by downregulating the percentage of tregs

This study examined whether 1-methyl-tryptophan [1-MT,an indoleamine 2,3-dioxygenase(IDO) inhibitor] could reduce CD4+CD25+ regulatory T cells(Tregs) proliferation and improve the anti-tumor efficacy of dendritic cells(DCs) pulsed with tumor cell lysate in the mice bearing pancreatic adenocarcinoma.The models of pancreatic adenocarcinoma were established in C57BL/6 mice by subcutaneous injection of Pan02 cells.Eight mice which were subcutaneously injected with PBS served as control.The expression of IDO was...     

The inhibitory effects of prostaglandin E1 and indomethacin on the growth and metastasis of transplanted Lewis lung carcinoma in C57BL mice.

The effects of prostaglandin E1(PGE1), prostaglandin synthesis inhibitor and indomethacin (IN) on the growth and metastasis of Lewis lung carcinoma (LLC) were studied and their mechanisms of action were investigated. Seventy-five C57BL mice of both sexes were utilized in the experiment. It was found that both PGE1 and IN could significantly retard the growth of transplanted LLC and reduce the number of pulmonary metastatic foci. PGE1 obviously decreased the acid phosphatase (ACP) activity of LLC cells while IN showed no such effect. Besides, PGE1 could markedly elevate the plasma cAMP level of LLC-bearing mice, but not normal controls. Meanwhile, it could decrease plasma cGMP concentration of both normal and tumor-bearing mice. IN, like PGE1, could increase plasma cAMP and decrease plasma cGMP levels of LLC-bearing animals. TEM observation revealed that tumor cells treated with PGE1 and IN presented a series of degenerative and destructive changes. In addition, PGE1 and IN exhibited a different effect on several cell-mediated immune responses of the tumored hosts, the former inhibitory and the latter stimulatory. The possible mechanisms of action of the two chemicals are discussed.

     

吞噬凋亡肿瘤细胞的树突细胞疫苗抗肿瘤效果观察

目的：研究吞噬凋亡肿瘤细胞的树突细胞疫苗的抗肿瘤效果,以确定一种有效的树突细胞疫苗。方法：由黑色素瘤细胞（BLb-10)生成凋亡细胞,树突细胞（DC）与凋亡肿瘤细胞培育后,收集和提纯吞噬凋亡肿瘤细胞的树突细胞,再对其表型变化及抗肿瘤效果进行检测,并与加肿瘤细胞肽（mTRP2)的树突细胞的结果比较。结果：吞噬凋亡肿瘤细胞后,DC更加成熟。表现出促炎症细胞因子（IL－1,IL－6,TNF－α,IFN--γ和GM－CSF）,趋化因子（MIP－1,MIP－1和MIP－2）,细胞表面分子（HMC-Ⅱ,CD11bCD40和CD86）以及某些趋化因子受体（CCR7）表达增加而某些趋化因子受体（CCR2和CCR5）表达减少。吞噬了凋亡黑色素瘤细胞的树突细胞疫能（i）更强地刺激体外T细胞增生,（ii）诱导体内Th1型免疫反应而导致更有效的肿瘤特异细胞毒CD8＋细胞 介导的免疫,和（iii)防止了免疫鼠肺肿瘤转移,而加肿瘤细胞肽的树突细胞疫苗只能减少免疫鼠的肺肿瘤转移。结论：吞噬凋亡黑色素瘤细胞的树突细胞疫苗为癌细胞疫苗研究提供了新的途径。     

RNA致敏树突状细胞治疗胶质瘤的实验研究

目的:肿瘤RNA致敏树突状细胞(DC)治疗颅内荷瘤小鼠,观察DC疫苗对脑胶质瘤的治疗作用,探讨免疫反应的机理,为DC疫苗的临床应用提供实验基础。方法:用G422胶质母细胞瘤RNA冲击致敏DC制成DC疫苗,检测DC疫苗的CTL活性,瘤内和皮下两种途径注射荷瘤小鼠以进行免疫治疗,观察小鼠生存期,并与PBS、单纯DC组进行比较,同时检测血清IFN-γ、IL-2、IL-10、IL-4等细胞因子,并行病理检查。结果:DC疫苗的CTL活性明显高于对照组(P<0.01)。两种途径注射DC疫苗,治疗组小鼠生存时间均明显延长(P<0.01),血清IFN-γ显著升高(P<0.01),IL-10明显下降(P<0.05),病理提示肿瘤出现坏死。两种注射途径间以上指标无明显差异。结论:肿瘤RNA冲击致敏DC注射荷瘤小鼠具有明显的免疫治疗作用,能显著延长动物生存期,并能诱导特异性抗肿瘤细胞免疫反应,其机理主要是Th1细胞介导的细胞免疫反应,且免疫反应的程度与注射途径无关。     

Tumor Antigen-pulsed CD8α＋ Dendritic Cells Induce T Cell-mediated Graft-versus-tumor Effect In Vitro

The graft-versus-tumor (GVT) effect of T cells induced by tumor antigen-pulsed CD8α+dendritic cells (DCs) in vitro was investigated in this study.Immature CD8α+ DCs were prepared from C57BL/6 (H-2b) bo...     

肿瘤抗原脉冲致敏的树突状细胞疫苗抗肿瘤作用的实验研究

目的：进一步研究体外肿瘤抗原脉冲致敏的骨髓树突状细胞瘤苗主动免疫诱导小鼠体内抗肿瘤免疫应答,并观察其抵抗野生性肿瘤攻击的免疫保护作用及对荷瘤小鼠模型的免疫应答。方法：采用本室建立的骨髓树突状细胞分离与细胞因子体外扩增培养方法,并在体外经灭活ＮＳ１骨髓瘤细胞及其裂解产物脉冲刺激后直接作为疫苗,然后进行免疫预防与治疗的在体动物实验。结果：可从１只小鼠股骨中获得（３～５）×１０５个树突状细胞（ＤＣ）,其纯度为９５％以上,对混合Ｔ淋巴细胞具有强刺激活性。主动免疫同系健康ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的试验显示,ＤＣ疫苗能诱导抗原特异的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）活性,免疫１次的动物首次受到肿瘤攻击后诱发肿瘤形成率为０％,再次攻击的肿瘤形成率为２０％;而免疫３次的动物两次攻击的肿瘤形成率皆为０％。主动免疫治疗同种荷瘤动物的试验表明,ＤＣ疫苗也能抑制肿瘤生长,荷瘤动物存活率提高及生存期明显延长。结论：肿瘤抗原体外致敏的树突状细胞能诱导宿主体内的抗肿瘤免疫保护性反应,且对荷瘤模型动物具有明显的免疫治疗作用。     

TNF-α gene-modified dendritic cells act as more potent adjuvants for peptide delivery to induce specific antitumor immunity in mice

Objective To investigate the antitumor immune efficiency of mouse dendritic cells (mDCs) by using adenovirus-mediated tumor necrosis factor-alpha (AdV-TNF-α) gene transfer.Methods MDCs infected with AdV-TNF-α and AdV-pLpA (no gene insert) at 100 multiplicity of infection (MOI) were analyzed by RNase protection assay for their cytokine secretion. Mixed lymphocyte reactions were also performed to analyze their capacity for alloantigen-presentation. C57BL/6 mice were challenged with R3LL tumor cells (Lewis lung carcinoma line) 10 days after vaccination with different engineered DCs and regular DCs as well.Results Compared to AdV-pLpA and mock-infected DCs, AdV-TNF-α-infected DCs displayed up-regulated expression of alpha tumor necrosis factor, interleukin-12 (IL-12), interleukin-18 (IL-18) and granulocyte macrophage colony stimulation factor (GM-CSF), and indicated stronger allogeneic T cell proliferative responses. Furthermore, vaccination of mice with dendritic cell tumor necrosis factor-alpha (DCTNF-α) pulsed with Mut1 peptide induced more efficient tumor-specific cytotoxic T lymphocyte (CTL) cytotoxicity against R3LL tumor cells in vitro and with efficient antitumor immunity in vivo. Conclusion This type of engineered DCs could be applied in clinical settings of DC-based cancer vaccines