Study on the impact of IL-15 on proliferation of HaCaT cells

目的 观察白介素-15(IL-15)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT)增殖的影响及其可能机制.方法 培养HaCaT细胞,不同剂量IL-15刺激不同时间后,MTT法分析IL-15对HaCaT细胞增殖的影响.Western blot分析IL-15在HaCaT细胞中激活的信号通路:丝裂原蛋白活化激酶-胞外信号调节激酶(MAPKs-ERK1/2)和磷脂酰肌醇激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶(PI3K-AKT).在IL-15刺激HaCaT细胞前1 h,分别加入MAPKs-ERK1/2和PI3K-AKT信号传导特异性抑制剂(PD98059和LY294002)以阻断IL-15激活的相关信号通路,分析阻断剂对IL-15调控HaCaT细胞增殖的影响.结果 MTT分析结果显示:IL-15显著促进HaCaT细胞增殖,且具有时间及剂量依赖性;信号通路分析揭示IL-15能够增加pERK1/2及pAKT的水平;使用阻断剂的研究显示IL-15部分依赖MAPKs-ERK1/2和PI3K-AKT途径发挥其促进增殖作用.结论 IL-15部分依赖MAPKs-ERK1/2 和PI3K-AKT信号途径促进HaCaT细胞增殖.     

IL-15对HaCaT细胞增殖的影响及机制研究

目的观察白介素-15(IL-15)对人皮肤角质形成细胞(HaCaT)增殖的影响及其可能机制。方法培养HaCaT细胞,不同剂量IL-15刺激不同时间后,MTT法分析IL-15对HaCaT细胞增殖的影响。Western blot分析IL-15在HaCaT细胞中激活的信号通路:丝裂原蛋白活化激酶-胞外信号调节激酶(MAPKs-ERK1/2)和磷脂酰肌醇激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶(PI3K-AKT)。在IL-15刺激HaCaT细胞前1h,分别加入MAPKs-ERK1/2和PI3K-AKT信号传导特异性抑制剂(PD98059和LY294002)以阻断IL-15激活的相关信号通路,分析阻断剂对IL-15调控HaCaT细胞增殖的影响。结果 MTT分析结果显示:IL-15显著促进HaCaT细胞增殖,且具有时间及剂量依赖性;信号通路分析揭示IL-15能够增加pERK1/2及pAKT的水平;使用阻断剂的研究显示IL-15部分依赖MAPKs-ERK1/2和PI3K-AKT途径发挥其促进增殖作用。结论 IL-15部分依赖MAPKs-ERK1/2和PI3K-AKT信号途径促进HaCaT细胞增殖。     

TLR7激活上调细胞周期蛋白表达促进Hela细胞增殖

目的 探讨Toll样受体7(TLR7)信号通路激活对人宫颈癌Hela细胞周期蛋白表达及对细胞增殖的影响.方法 使用不同浓度的Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞,采用MTS比色法分析其对Hela细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测同一浓度的TLR7激动剂Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞后对Hela细胞周期的影响; Western blot分析Gardiquimod经过不同的时间刺激Hela细胞后对细胞周期蛋白CyclinB1、Cyclin E表达水平的影响.结果 TLR7的激活促进Hela细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性;Gardiquimod可时间依赖性增加细胞周期在S期的比例;Cyclin B1、Cyclin E的表达水平随着Gardiquimod作用时间的增加而增加.结论 TLR7激动剂Gardiquimod可能通过上调细胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin E表达水平,进而促进Hela细胞增殖.     

TLR7激活对HepG2.2.15细胞株炎症因子TNF-α和IL-6表达的上调作用

目的比较乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因组稳定转染细胞株HepG2.2.15和肝癌细胞株HepG2中TLR7表达,分析HepG2.2.15细胞中TLR7激活后诱导炎症因子表达。方法通过实时荧光定量(Real-time)PCR分析HepG2和HepG2.2.15中TLR7受体、IL-6和TNF-αmRNA水平表达。TLR7配体Gardiquimod刺激20min后,Western blot分析激活的信号通路;刺激6h,Real-timePCR分析TLR7激活后IL-6和TNF-αmRNA水平表达变化;刺激48h,ELISA法分析IL-6和TNF-α蛋白质水平表达变化。结果HepG2.2.15细胞株中TLR7mRNA水平表达比HepG2中的表达高约30倍(P0.01)。在没有任何刺激的条件下,HepG2.2.15细胞株中IL-6和TNF-αmRNA水平表达比HepG2中的表达分别高约7.5和9.3倍;Gardiquimod刺激6h后,HepG2.2.15细胞株中IL-6和TNF-αmRNA表达水平明显升高,并具有剂量依赖关系(P0.01),而HepG2细胞在相同的刺激下IL-6和TNF-αmRNA表达水平升高并不明显(P0.05);刺激48h后,IL-6和TNF-α蛋白质表达水平变化与其mRNA水平变化一致(P0.01)。HepG2.2.15细胞株经Gardiquimod刺激后NF-κBp65亚单位进入细胞核中量显著增加。结论TLR7激活后能够上调HepG2.2.15细胞中IL-6和TNF-α的表达,提示TLR7可能在乙型病毒性肝炎的病理生理过程中发挥作用。     

Gardiquimod对HaCaT细胞增殖的影响

目的探讨Gardiquimod对HaCaT细胞增殖的影响及其可能的机制。方法培养HaCaT细胞,以不同剂量的Gardiquimod经不同的时间刺激HaCaT细胞,MTT比色法及流式细胞术分析Gardiquimod对HaCaT细胞增殖的影响。Western-blot-ting分析Gardiquimod在HaCaT细胞中激活的信号通路。结果 MTT比色法及流式细胞分析结果显示:Gardiquimod促进HaCaT细胞增殖,且具有时间及剂量依赖性;信号通路分析揭示Gardiquimod能够增加信号通路AKT的磷酸化水平。结论 Gardiquimod能够促进HaCaT细胞增殖并激活PI3K-AKT信号。     

幽门螺杆菌Tipα对胃癌细胞顺铂敏感性的影响

目的 基于磷酸肌醇-3激酶(PI3 K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路研究幽门螺杆菌肿瘤坏死因子-α诱导蛋白(Tipα)对胃癌细胞顺铂敏感性的作用机制.方法 使用Tipα刺激胃癌SGC-7901细胞,采用CCK8检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白——PI3...     

NF-κB抑制剂对脂多糖刺激的退变人椎间盘髓核细胞炎症因子表达的影响

目的 观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激退变人椎间盘髓核细胞前后,核因子kappB(NF-κB)与炎症因子表达及相互关系.方法 体外培养退变的人椎间盘髓核细胞,设立对照组、LPS (500 μg/mL)刺激组、NF-κB抑制剂(BAY11-7082)+LPS(500 μg/mL)刺激组.ELISA方法检测各组细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β的含量,免疫荧光法检测各组髓核细胞内p65的表达及定位,Western blot检测TNF-α、IL-1β、NF-κB结合蛋白p65以及磷酸化p-p65的表达,Real-time PCR检测TNF-α及IL-1β的表达.结果 LPS刺激髓核细胞后,p65入核增多,p-p65表达明显增加,ELISA实验结果表明LPS刺激组细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平升高(P＜0.05),Western blot及Real-time PCR检测结果也表明其髓核细胞内炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平明显上升(P＜0.05);而与LPS刺激组相比,NF-κB抑制剂+LPS刺激组p65入核减少,p-p65表达明显降低,细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平降低(P＜0.05),Western blot及Real-time PCR检测结果也表明其髓核细胞内炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平明显下降(P＜0.05).结论 LPS能够通过激活人退变髓核细胞NF-κB信号通路,促进炎性因子TNF-α及IL-1β表达增多,抑制NF-κB信号通路后可明显减轻炎性因子的表达.     

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号转导通路在胰蛋白酶激活中性粒细胞中的作用

目的:探讨胰蛋白酶对中性粒细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号转导通路的激活作用及PI3K抑制剂对其的影响。方法:应用Western blot技术检测特定浓度胰蛋白酶(40nmol/L)作用中性粒细胞后及应用PI3K抑制剂Wortmannin和LY294002后的p-PKB活化情况;同时应用ELISA及RT-PCR技术检测细胞培养液及中性粒细胞内TNF-α、IL-1β蛋白和mRNA的变化。结果:40nmol/L胰蛋白酶作用中性粒细胞后p-PKB的水平显著高于对照组(P<0.01);TNF-α和IL-1β蛋白的表达也出现了同样的趋势;预先应用Wortmannin或LY294002后完全阻断了胰蛋白酶对中性粒细胞p-PKB的激活作用,与胰蛋白酶刺激组比较差异显著(P<0.01);TNF-α和IL-1β蛋白及mRNA也随着p-PKB活性的抑制而表达减弱。结论:胰蛋白酶能够激活中性粒细胞内PI3K/PKB信号传导通路,Wortmannin及LY294002可以抑制胰蛋白酶对此通路的激活。     

PI3K-AKT信号通路在蛛网膜下腔出血后的抗凋亡作用

目的蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）后病理生理机制复杂,其中神经元的凋亡及其影响逐渐被重视,实验探讨大鼠SAH后海马神经元的凋亡及PI3K-AKT信号通路的抗凋亡作用。方法建立大鼠枕大池2次注血模型,给药方法为枕大池注血前20 min经脑室注射,大鼠随机分为空白对照组、SAH模型组、SAH＋去离子水处理组、SAH＋DMSO（二甲基亚砜,有机溶剂）处理组、SAH＋IGF-1（PI3K-AKT通路激动剂）处理组、SAH＋Ly294002（PI3K-AKT通路抑制剂）处理组。分别于2次注血后1 d、3 d甲醛灌注取脑,通过免疫组化观察PI3K-AKT通路活化后P-AKT的表达,通过凋亡细胞原位末端标记技术（TUNEL）检测海马区神经元凋亡。结果 IGF-1激活PI3K-AKT通路后P-AKT表达增加可抑制神经元凋亡,而Ly294002阻断PI3K-AKT通路后P-AKT水平下降神经元凋亡明显增加。结论 PI3K-AKT通路激活后可明显减少SAH后神经元的凋亡,具有脑保护作用。     

IL-10调控HaCaT细胞增殖及分化的分子机制

目的 探讨白细胞介素10 (IL-10)对皮肤角质形成细胞(Ha Ca T)增殖影响和对氯化钙(Ca Cl2)诱导的角质形成细胞分化标志物的表达影响及其可能的分子机制。方法以不同浓度IL-10(0、3、10、30 ng/ml)处理Ha Ca T细胞不同时间(0、24、48、72 h),MTS分析细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期; IL-10(终浓度为10 ng/ml)预处理Ha Ca T 1 h，加入或不加Ca Cl2(终浓度为1.2 mmol/L)培养24、48、72 h,Western blot检测IL-10对Ha Ca T分化标志物表达影响;丝裂原蛋白激活激酶-胞外信号调节激酶(MAPKs-ERK1/2)特异性抑制剂PD98059及磷脂酰肌醇激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶(PI3K-AKT)特异性抑制剂LY294002预处理Ha Ca T细胞，分别提取细胞总RNA和蛋白，荧光定量PCR(RTq PCR)和Western blot检测IL-10对Ha Ca T细胞分化标志物(Keratin1、Keratin5、Involucrin)表达影响。结果 MTS结果显示，在72 h内，IL-10...     

EGCG经PI_3K-AKT信号通路诱导人胃癌BGC-823细胞G1期阻滞

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin-3-gallate，EGCG）通过PI3K-AKT通路对人胃癌BGC-823细胞周期调控的分子机制。方法采用噻唑蓝比色法（MTT）检测BGC-823细胞的存活率；碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（flow cytometry，VCM）检测EGCG处理前后BGC823细胞周期的变化；Western blot检测PI3K-AKT信号传导通路相关蛋白的表达。结果EGCG能够抑制BGC823细胞的生长，且这种抑制作用与诱导BGC823细胞G1期阻滞有关。EGCG可以下调巩K-AKT信号通路蛋白Akt的磷酸化表达，对通路下游周期相关蛋白cyclinD1的表达也有抑制作用。结论EGCG能够通过活化PLK-AKT信号通路发挥诱导人胃癌BGC823细胞G1期阻滞的作用。     

基于PTEN-PI3K-AKT信号通路探讨非小细胞肺癌Treg细胞上调的分子机制

目的:通过观察肺癌患者Treg细胞PTEN-PI3K-AKT信号通路分子的表达变化,探讨肺癌患者Treg细胞上调的作用机制。方法:选择30例非小细胞肺癌为研究组,30例健康人作为对照组,采用流式细胞术检测各组人群外周血Treg细胞表达变化;运用免疫磁珠法分选外周血单个核细胞中Treg细胞,Western-blot、Real-time PCR技术检测Treg细胞PI3K、AKT、PTEN蛋白及PTEN mRNA、PI3K mRNA、AKT mRNA的表达情况。结果:研究组外周血Treg细胞占CD+4T细胞的比例(Treg/CD4=4.53%±1.85%)明显高于对照组(Treg/CD4=1.87%±0.93%),差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,研究组PI3K、AKT蛋白表达明显升高,PTEN表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,研究组PI3K mRNA、AKT mRNA表达明显升高,PTEN mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:肺癌患者外周血Treg细胞水平明显升高,其机制可能与PTEN表达下调进而激活PI3K-AKT信号通路相关。     

rhEPO通过调节PI3K/AKT信号通路改善大鼠脑出血后神经元损伤

目的 研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)是否可以通过调节PI3K/AKT信号通路来改善大鼠脑出血后的神经元损伤。方法SD大鼠构建脑出血(ICH)模型,并给予rhEPO药物治疗,采用TUNEL法和试剂盒检测神经细胞凋亡及凋亡蛋白Caspase 9表达;采用Real-Time PCR法和Western blot法检测PI3K、AKT的基因和蛋白磷酸化水平的表达。结果与ICH非治疗组相比,rhEPO治疗组中神经元凋亡细胞数和Caspase 9活性表达明显降低(P<0.05); rhEPO治疗组PI3K和AKT的蛋白磷酸化水平表达和mRNA表达显著升高 (P<0.05)。结论重组人促红细胞生成素rhEPO具有神经保护作用,可以通过调节PI3K/AKT信号来改善大鼠脑出血后的神经元损伤。     

高迁移率蛋白B1对血管平滑肌细胞迁移的影响及分子机制研究

目的：探讨高迁移率蛋白B1（HMGB1）对血管平滑肌细胞（VSMCs）迁移的影响及 TLR4依赖的 TLR4／PI3K／Akt信号通路介导的分子机制。方法体外分离培养大鼠胸主动脉VSMCs ,采用不同浓度 HMGB1（0．1～1000．0 ng ／mL）处理,分为对照组（未经任何处理）、HMGB1组、HMGB1＋ TLR4 siRNA转染组、Control siRNA转染组和磷脂酰肌醇3‐激酶（PI3K）抑制剂（LY294002）干预组,观察各组细胞活性及 HMGB1对 VSMCs 迁移的影响;实时定量 RT‐PCR与 Western blot 分别检测TLR4、Akt、p‐Akt、PI3K mRNA和蛋白的表达;ELISA测定PI3K的活性。结果 HMGB1（0．1～1000．0 ng／mL）呈剂量依赖性促进VSMCs迁移（P＜ 0．05）;经细胞活性测定,HMGB1在使用的浓度范围内对 VSMCs未造成细胞毒性作用（P＜ 0．05）;HMGB1（100 ng／mL）处理的 VSMCs细胞组 PI3K 活性及 Akt磷酸化水平明显增加（P＜ 0．05）;经 TLR4 siRNA 转染发现, HMGB1引起的VSMCs迁移明显减弱（P＜0．05）,同样在PI3k抑制剂干预组,PI3K／Akt途径活化和HMGB1介导的VSMCs迁移也被明显抑制（P＜0．05）。结论 HMGB1呈剂量依赖性促进VSMCs迁移,TLR4依赖的 TLR4／PI3K／Akt信号通路参与了此过程,提示以TLR4依赖的PI3K／Akt途径为靶点,可为阻塞性血管疾病的治疗提供新思路。     

丙泊酚通过靶向调控PI3K/AKT/mTOR信号通路体外抑制乳腺癌细胞生长

探讨丙泊酚通过PI3K/AKT/mTOR信号通路对乳腺癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。方法 在体外,丙泊酚10 mg/mL分别与乳腺癌MCF-7和BT474细胞系共孵育分为对照组和丙泊酚组。PI3K过表达质粒经丙泊酚处理后转染MCF-7细胞分为对照组、丙泊酚+PI3K组、PI3K组,分别检测细胞的生存、侵袭及凋亡情况。Western blot检测PI3K/AKT/ mTOR信号通路相关蛋白表达水平。在体内构建MCF-7小鼠模型,免疫组化和TUNEL实验用于检测乳腺癌细胞的生长和凋亡情况。结果 丙泊酚显著抑制乳腺癌细胞的生长和侵袭能力（P＜0.05）。Western blot和细胞凋亡实验结果显示,丙泊酚通过降低Bcl-2和Bcl-w在乳腺癌细胞中的表达水平来诱导细胞凋亡（P＜0.05）。丙泊酚降低了乳腺癌细胞中磷酸肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B (AKT)和mTOR蛋白表达水平（P＜0.05）。对P13K进行过表达处理后显示,PI3K过表达逆转了丙泊酚对MCF-7细胞的生长和侵袭的抑制作用（P＜0.05）。体内实验表明,丙泊酚治疗明显抑制MCF-7小鼠模型中的肿瘤生长,促进了细胞凋亡（P＜0.05）。结论 丙泊酚通过PI3K/AKT/mTOR信号通路体外抑制乳腺癌细胞的生长和侵袭,促进细胞凋亡     

高糖诱导人THP1细胞Toll样受体4信号通路变化及匹伐他汀的拮抗作用

目的探讨高糖刺激下人单核/巨噬细胞系（Thp1）细胞表面Toll样受体4（TLR4）表达和信号通路活性变化,并探讨匹伐他汀对高糖引起该信号通路表达变化的作用及可能的机制。方法体外培养Thp1细胞,分为对照组（0mmol·L~（-1）葡萄糖）、低葡萄糖浓度组（5.5mmol·L~（-1）葡萄糖）、高葡萄糖浓度组（15、25 mmol·L~（-1）葡萄糖）、高糖（15mmol·L~（-1）葡萄糖）＋匹伐他汀组（0.01、0.1、1μmol·L~（-1）匹伐他汀）,各组细胞干预24 h后,Real-TimePCR方法检测各组细胞TLR4、MCP1、IL6基因表达水平,Western印迹法检测各组细胞TLR4、Myd88蛋白表达水平。结果随着葡萄糖浓度从5.5mmol·L~（-1）升高到25 mmol·L~（-1）,Thp1细胞TLR4、MCP1、IL6基因表达及TLR4、Myd88蛋白水平逐渐增加。Thp1细胞在高糖刺激前给予匹伐他汀预孵1 h,TLR4、MCP1、IL6基因水平及TLR4、Myd88蛋白水平随匹伐他汀浓度的增加逐渐下降。结论高糖能剌激人Thp1细胞TLR4信号通路激活,呈剂量依赖性诱导TLR4、IL6、MCP1表达升高,且高糖激活的信号通路可能为Myd88依赖途径;匹伐他汀可以拮抗高糖诱导的TLR4信号通路激活,抑制炎症反应的放大。     

linc00346调控膀胱癌细胞增殖的分子机制

目的：探讨长链非编码RNA-linc00346 调控膀胱癌细胞增殖的分子机制。方法：通过实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测膀胱尿路上皮癌组织中linc00346 mRNA和PTEN mRNA的表达情况;沉默膀胱癌T24细胞系内linc00346的表达,通过RT-PCR检测T24细胞内的linc00346 mRNA和PTEN mRNA表达变化情况,通过蛋白质印迹（Western blot）法检测T24细胞内PTEN蛋白和PI3K/Akt信号通路中Akt、p-Akt蛋白的表达情况;CCK-8实验检测各组T24细胞的增殖能力。结果：与膀胱正常组织比较,膀胱尿路上皮癌组织中linc00346 mRNA表达上调,而PTEN mRNA的表达水平降低（均P ＜0.05）。沉默linc00346表达后,T24细胞内linc00346 mRNA的表达水平显著下降,PTEN mRNA的表达水平显著上调,PTEN蛋白水平升高,p-Akt蛋白水平降低（均P ＜0.05）;给予PTEN特异性抑制剂SF1670处理后,PTEN蛋白水平显著下调,p-Akt蛋白水平明显增加（均P ＜0.05）。沉默linc00346表达后,T24细胞的增殖能力明显受到抑制,给予SF1670处理后细胞的增殖能力显著增强（均P ＜0.05）。结论：linc00346可以增强膀胱尿路上皮癌细胞的增殖能力,其作用机制可能是通过抑制PTEN表达,激活PI3K/Akt信号通路实现的。     

蜂毒素对人肝癌细胞生长的抑制作用及其机制探讨

目的：研究蜂毒素对人肝癌细胞( HepG2、SMMC-7721)生长的抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测蜂毒素对HepG2和SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,实时定量PCR检测细胞中microRNA-203(mir-203)以及PIK3CA mRNA 的表达变化, Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)的表达变化,瞬时转染人mir-203 mimics 过表达 mir-203后应用实时定量 PCR 和Western blot 检测 mir-203对 PI3K/AKT 信号通路的作用。结果与正常组比较,蜂毒素处理组细胞增殖明显受到抑制,并呈浓度依赖性;实时定量PCR结果显示蜂毒素(1、2、4 mg/L)可以明显升高mir-203的表达,PIK3CA mRNA 的表达无明显改变;Western blot法结果显示蜂毒素(1、2、4 mg/L)可以降低 PI3K 以及 P-AKT 蛋白的表达。在 HepG2和SMMC-7721细胞中过表达mir-203后,与正常组及转染阴性对照组比较,PIK3CA mRNA的表达无明显改变但PI3K以及P-AKT的蛋白表达降低。结论蜂毒素能抑制 HepG2和SMMC-7721细胞的增殖,其机制可能是通过上调mir-203的表达,进而在转录后水平靶向抑制PI3K的表达,抑制PI3K/AKT信号通路的活化。