正丁酸钠对涎腺腺样囊性癌细胞株ACC-2侵袭、迁移的影响及机制研究

目的：探讨不同浓度正丁酸钠对涎腺腺样囊性癌细胞株ACC‐2侵袭、迁移的影响与其作用机制。方法噻唑蓝（M T T ）法探索正丁酸钠作用ACC‐2细胞的最佳浓度,Transwell小室实验检测正丁酸钠对 ACC‐2细胞侵袭、迁移能力的影响, Western blot和实时荧光定量 PCR（RT‐PCR）分别检测5组浓度药物作用后ACC‐2细胞中高迁移率族蛋白1（HMGB1）、TLR4的mRNA和蛋白的表达。结果与对照组相比,0．625、1．250、2．500、5．000、10．000 mmol／L 5组浓度的正丁酸钠均能抑制ACC‐2细胞增殖（P＜0．05）且呈明显浓度依赖性;5组浓度正丁酸钠对细胞侵袭能力的影响差异无统计学意义（P＞0．05）;2．500、5．000、10．000 mmol／L浓度正丁酸钠可以抑制ACC‐2细胞的迁移能力（P＜0．05）,同时降低ACC‐2细胞 HMGB1、TLR4的mRNA及蛋白表达（P＜0．05）;相关性分析显示TLR4蛋白表达的降低与 HMGB1的抑制呈正相关（r＝0．810,P＜0．05）。结论正丁酸钠能够抑制ACC‐2细胞增殖,浓度较高时可以抑制ACC‐2细胞的迁移能力,同时降低HMGB1、TLR4的mRNA与蛋白表达,提示NaB对ACC‐2迁移能力抑制可能通过下调 HMGB1、TLR4的mRNA及蛋白表达来实现。     

PI3K／AKT信号通路在三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468中的作用及三氧化二砷对其的干预作用

目的：探讨三氧化二砷通过磷脂酰肌醇‐3‐激酶（PI3K）／蛋白激酶B（AKT）信号通路对三阴性乳腺癌细胞MDA‐MB‐468凋亡的影响。方法实验分为空白对照组,三氧化二砷组（2、4、8μmol／L ）,LY294002组（25μmol／L ）,三氧化二砷（4μmol／L）联合LY294002（25μmol／L）组（联合组）;MTT法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞周期;Western blot分析各组PI3K／AKT通路的激活状况及其下游靶分子细胞周期蛋白 A1（Cyclin A1）,Cyclin D1,Bax ,Bcl‐2的表达。结果2、4、8μmol／L三氧化二砷,LY294002都可显著抑制细胞活力（P＜0．05）,并且在48 h抑制程度最高;与对照组比较,4μmol／L三氧化二砷及LY294002都可使细胞周期阻滞在G1期（P＜0．05）,并降低AKT磷酸化水平（P＜0．05）,进而下调Cyclin A1,Cyclin D1, Bcl‐2的表达（P＜0．05）,上调Bax的表达（P＜0．05）;三氧化二砷联合LY294002处理MDA‐MB‐468细胞较药物单独作用效果增强（P＜0．05）。结论三氧化二砷及LY294002可通过阻断PI3K／AKT信号通路来诱导三阴性乳腺癌细胞MDA‐MB‐468凋亡,二者具有协同作用。     

基于 PI3K／A kt信号转导通路探讨电针足三里、曲池对脑缺血再灌注大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：观察电针干预对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用,应用磷脂酰肌醇‐3激酶／丝氨酸‐苏氨酸蛋白激酶（PI3K／Akt）信号转导通路抑制剂LY294002,深入探讨电针的神经保护作用与 PI3K／Akt信号转导通路的关系。方法本研究采用Zealonga线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）缺血再灌注模型。将60只SD大鼠随机分为5组：假手术（SC）组、模型（IC）组、电针（EA）组、电针＋溶剂（DMSO）组,电针＋抑制剂（LY294002）组,每组各12只。术后24 h开始电针治疗30 min ,1次／天,治疗3 d。采用Zealonga 5分评价方法观察神经功能缺损恢复程度;氯化三苯四唑（TTC）法脑组织染色计算脑梗死体积;TUNEL法观察皮质区缺血周围神经细胞凋亡的情况;应用Western blot检测脑组织中PI3K、Akt、p‐Akt、bad、p‐bad蛋白表达水平。结果神经功能评分、TTC染色显示EA组与DMSO组的神经功能恢复及脑缺血改善明显优于IC组和LY294002组（P＜0．05）;EA组与DMSO组凋亡阳性细胞数少于IC组和LY294002组,差异有统计学意义（P＜0．01）;与 IC组及 LY294002组比较,EA组与DMSO组提高了PI3K、p‐Akt及p‐bad的蛋白表达（P＜0．05）。结论 PI3K／Akt信号转导通路参与了电针足三里穴、曲池穴对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。     

miR-21对人喉鳞癌细胞Hep2迁移侵袭能力的影响

目的：探讨微小RNA‐21（miR‐21）对人喉鳞癌细胞Hep2迁移、侵袭能力的影响。方法用脂质体Lipofectami‐neTM2000将miR‐21抑制剂和miR‐21NC转入人喉鳞癌细胞Hep2中,48h后,运用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因（PTEN）／磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）／蛋白激酶B（Akt）的激活情况,以及基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP9与伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白（RECK）的表达。结果与miR‐21NC比较,miR‐21抑制剂能明显降低Hep2细胞活力[（0．688±0．043）vs．（0．375±0．012）],抑制细胞迁移能力[（6．57±0．02）μmvs．（20．49±2．18）μm]及细胞侵袭能力[（100．7±10．2）vs．（46．8±4．3）],差异均有统计学意义（P＜0．01）;同时miR‐21抑制剂能明显下调PI3K、MMP2及MMP9的表达（P＜0．01）,降低Akt的磷酸化水平（P＜0．01）,并上调PTEN及RECK的表达（P＜0．01）。结论miR‐21抑制剂能明显抑制人喉鳞癌细胞Hep2的迁移、侵袭能力,可能与PTEN／PI3K／Akt信号通路有关。     

α-胞衬蛋白siRNA对人涎腺导管细胞的影响

目的：观察α‐胞衬（α‐Fodrin）蛋白小干扰RNA（siRNA）对人涎腺导管（HSG）细胞的影响,探讨α‐Fodrin siRNA治疗干燥综合征（SS）的作用。方法实验分对照组、空载体组、α‐Fodrin siRNA1组及α‐Fodrin siRNA2组,将成功构建的10μg α‐Fodrin siRNA1和α‐Fodrin siRNA2表达载体分别采用脂质体法转染 HSG细胞,空载体组 HSG细胞转染等剂量的pGFP‐V‐RS空载体。转染后24、48、72和96 h观察细胞转染效率,实时荧光定量（RT ）‐PCR法检测4组HSG细胞中α‐Fodrin mRNA的表达水平;细胞荧光免疫法检测4组细胞中α‐Fodrin蛋白的表达水平;ELISA法检测4组细胞上清液中IFN‐γ、IL‐10的表达水平。结果转染后48 h HSG细胞转染效率最高;转染后48 hα‐Fodrin siRNA1组和α‐Fodrin siRNA2组 HSG细胞中α‐Fodrin mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组和空载体组（P＜0．05）,且α‐Fodrin siRNA2组中α‐Fodrin mRNA的表达水平低于α‐Fodrin siRNA1组的表达水平（P＜0．05）;α‐Fodrin siRNA1组和α‐Fodrin siRNA2组细胞上清液中IL‐10的水平明显升高,较对照组和空载体组差异有统计学意义（P＜0．05）,α‐Fodrin siRNA1组和α‐Fodrin siRNA2组比较差异无统计学意义（P＞0．05）;α‐Fodrin siRNA1组和α‐Fodrin siRNA2组细胞上清中 IFN‐γ的水平低于对照组和空载体组,但4组之间比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 HSG细胞转染α‐Fodrin siRNA载体后,α‐Fodrin mRNA和蛋白的表达水平下降,同时细胞上清中IL‐10的水平升高、IFN‐γ水平下降,提示α‐Fodrin siRNA可以减轻炎性反应,为SS的治疗提供实验依据。     

H2型松弛素促进人血管平滑肌细胞迁移的作用及机制

目的：探讨H2型松弛素（Relaxin‐2）对血管平滑肌细胞（VSMCs）迁移的作用及分子机制。方法采用划痕实验和Transwell实验检测Relaxin‐2对VSMCs的迁移作用;采用蛋白质印迹法检测其对细胞信号蛋白丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（Akt）、细胞外信号调节激酶（ERK）、核因子‐κB（NF‐κB） p65的影响。结果 Relaxin‐2可剂量依赖性促进VSMCs的迁移,应用NF‐κB抑制剂BAY 11‐7082可阻断Relaxin‐2诱导的基质金属蛋白酶‐9（MMP‐9）和基质金属蛋白酶‐2（MMP‐2）的表达,磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002和ERK抑制剂 U0126预处理可以降低Relaxin‐2引起的NF‐κB p65的激活。结论 Relaxin‐2可能通过活化PI3K／Akt和ERK信号通路激活NF‐κB p65,进而促进MMP‐9和MMP‐2的表达,从而诱导VSMCs迁移效应。     

m iR-335通过靶向生存素对乳腺癌细胞增殖的调控作用

目的：探讨miR‐335通过靶向生存素对乳腺癌细胞增殖的调控作用。方法（1）选取乳腺癌组织及癌旁正常组织,分别采用RT‐PCR、Western blot检测组织中 miR‐335及生存素蛋白表达。（2）选取乳腺癌细胞系 MCF‐7,分别转染 miR‐335 mimic及mimic对照组,采用RT‐PCR、Western blot检测组织中miR‐335及生存素蛋白表达。（3）选取乳腺癌细胞系MCF‐7,分别将野生型survivin 3′‐UTR质粒（survivin‐wt）和突变型survivin 3′‐UTR质粒（survivin‐Mut）与miR‐335 mimic或模拟物阴性对照（NC）共转染至乳腺癌细胞系MCF‐7,双荧光素酶报告基因检测细胞荧光素酶活性。（4）选取乳腺癌细胞系MCF‐7,分别转染mimic对照组、miR‐335 mimic及miR‐335 mimic＋survivin ,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖活性。结果（1）与癌旁组织相比较,乳腺癌组织中miR‐335表达显著降低（P＜0．05）,同时生存素蛋白表达显著增高（P＜0．05）。（2）与转染mimic对照组相比较,转染miR‐335 mimic可使乳腺癌细胞MCF‐7中miR‐335表达上调（P＜0．05）,同时生存素蛋白表达表达下调（P＜0．05）。（3）与转染NC相比较,共转染miR‐335 mimic与survivin‐wt可使MCF‐7荧光素酶活性降低（P＜0．05）,而共转染miR‐335 mimic与survivin‐Mut则MCF‐7荧光素酶活性无显著性变化（P＞0．05）。（4）转染miR‐335mimic后,MCF‐7增殖活性较转染mimic对照组显著降低（P＜0．05）;而转染miR‐335 mimic＋survivin后,MCF‐7增殖活性较单纯转染miR‐335 mimic显著提高（P＜0．05）,但仍显著低于转染mimic对照组（P＜0．05）。结论在乳腺癌组织中miR‐335呈现低表达,生存素呈现高表达;而miR‐335可通过靶向生存素抑制乳腺癌细胞系MCF‐7增殖。     

miR-302a对叶酸缺乏小鼠胚胎干细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨miR‐302a对叶酸缺乏小鼠胚胎干细胞（mESC）增殖和凋亡的影响。方法mESC分为完全培养基组（对照组）,无叶酸培养基组（无叶酸组）,无叶酸培养基＋miR‐302amimic组（miR‐302a组）,通过RT‐PCR进行检测miR‐302a在完全培养基及无叶酸培养基中的表达。构建miR‐302amimic,后转染到无叶酸培养基mESC中,采用MTT法检测miR‐302amimic对mESC活力的影响,AnnexinV‐FITC／PI流式细胞术检测miR‐302amimic对mESC细胞凋亡的影响;流式细胞术检测miR‐302amimic对mESC细胞周期的影响;Westernblot检测及磷脂酰肌醇3羟激酶（PI3K）／蛋白激酶B（Akt）／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路激活情况,以及下游分子细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、p27表达的影响。结果RT‐PCR证实无叶酸组中miR‐302a表达量下降（P＜0．01）。与完全培养基比较,无叶酸培养基中,mESC细胞活力下降,细胞凋亡增加,细胞周期阻滞在G1期,Akt及mTOR磷酸化水平下降,CyclinD1表达下调,p21及p27表达上调,差异均具有统计学意义（P＜0．01）。与无叶酸组比较,miR‐302a组中,mESC细胞活力上升,凋亡下降,G1期缩短,AKT及mTOR磷酸化水平提高,CyclinD1表达上调,p21及p27表达下调,差异均具有统计学意义（P＜0．01）。结论miR‐302a类似物能显著抑制缺乏叶酸mESC凋亡,能促进其增值,与PI3K／AKT／mTOR信号通路有关。     

小分子RNA干扰磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α基因对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨小分子RNA干扰磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α(PIK3CA)基因对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖和侵袭能力的影响。方法培养人骨肉瘤Saos-2细胞,将细胞随机分为siRNA-PIK3CA组、siRNA对照组和空白对照组,siRNA-PIK3CA组细胞转染siRNA-PIK3CA序列,siRNA对照组细胞转染siRNA对照序列,空白对照组细胞正常培养,不作任何干预。实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中PIK3CA mRNA表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测各组细胞中PIK3CA、磷酸肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化-PI3K (p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化-Akt(p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)和磷酸化-m TOR(p-mTOR)蛋白表达。结果 siRNA-PIK3CA组细胞中PIK3CA mRNA和蛋白相对表达量均低于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05); siRNA-PIK3CA组细胞转染后24、48、72、96 h增殖能力均低于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05); siRNA-PIK3CA组细胞凋亡率高于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05); siRNA-PIK3CA组迁移细胞数和侵袭细胞数均少于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05); siRNAPIK3CA组细胞中PI3K、Akt、m TOR蛋白相对表达量均高于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05),而p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量均低于siRNA对照组和空白对照组(P <0. 05)。siRNA对照组与空白对照组细胞中PIK3CA mRNA和蛋白相对表达量、细胞增殖能力、迁移细胞数和侵袭细胞数及PI3K、Akt、m TORp-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论下调PIK3CA基因可减少人骨肉瘤细胞增殖,抑制细胞迁移及侵袭能力,增加细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路有关。     

RN Ai对胃癌SGC-7901细胞侵袭及迁移能力的影响

目的：运用RNA干扰（RNAi）技术抑制HER2基因的表达,探讨其对胃癌SGC‐7901细胞侵袭及迁移能力的影响。方法设计、构建RNAi片段靶向抑制HER2高表达的胃癌细胞株（HER2‐RNAi组）,以转染阴性对照系列（阴性对照组）及未转染的SGC‐7901细胞（空白对照组）为对照组。利用RT‐PCR和Western blot法检测各组胃癌SGC‐7901细胞中 HER2的表达情况;采用Transwell小室模型及划痕实验检测RNAi对胃癌细胞体外的侵袭和迁移能力的影响。结果 RNAi片段转染后SGC‐7901细胞的HER2 mRNA和蛋白表达水平明显下降（P＜0．05）;侵袭实验结果显示,HER2‐RNAi组的穿膜细胞数[（31．5±3．8）个／视野]显著低于未转染组[（103．6±4．5）个／视野];迁移实验结果显示,HER2‐RNAi组的穿膜细胞数[（63．6±5．1）个／视野]显著低于未转染组[（193．5±6．2）个／视野],各组间比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 RNAi沉默 HER2基因可以抑制胃癌SGC‐7901细胞的侵袭和迁移能力,提示RNAi基因沉默技术有可能成为进展期胃癌治疗的新方法。     

HMGB1、TLR4在重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织中的表达及乌司他丁的干预效应

目的：探讨 HMGB1、TLR4在重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织中的作用机制以及乌司他丁的干预效应。方法将54只SD大鼠分为对照组、SAP组和乌司他丁治疗组,3组又分为6、12 h和24 h 3个小组（每小组n＝6）。对照组开腹后仅翻动胰腺组织,SAP组用5％的牛磺胆酸钠制备SAP模型,治疗组在SAP造模成功后经尾静脉注射乌司他丁。观察3组大鼠胰腺组织的病理学改变;EPS‐G7法检测血清中的淀粉酶;ELISA法检测血清及胰腺组织中的HMGB1;Envision两步免疫法检测胰腺组织中的HMGB1、TLR4的表达水平。结果 SAP组、治疗组各时间点的淀粉酶与对照组比较明显升高,病理学改变明显,差异均有统计学意义（P＜0．05）,示SAP造模成功;SAP组在胰腺组织及血清中的 HMGB1表达在6 h开始升高,于12 h快速上升,至24 h保持上升趋势,与对照组大鼠相同时间点比较明显升高,差异有统计学意义（P＜0．05）,治疗组与SAP组相同时间点的 HMGB1比较明显降低,差异有统计学意义（P＜0．05）;SAP组胰腺组织中的 TLR4表达在6 h开始升高,12 h达高峰,24 h开始下降,与对照组大鼠相同时间点比较明显升高,差异有统计学意义（P＜0．05）。治疗组与SAP组相同时间点的TLR4比较明显降低,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 HMGB1在SAP大鼠胰腺中的致炎作用可能是部分结合其受体 TLR4并通过MyD88依赖性途径而实现的,而乌司他丁可能是通过中断SAP大鼠胰腺组织中的 HMGB1、TLR4信号通路发挥保护作用。     

PI3K／AKT及MEK／ERK信号通路在肿瘤血管内皮细胞迁移中的作用

目的：研究磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）／丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（AKT）及丝裂原细胞外信号调节激酶（MEK）／细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路在肿瘤血管内皮细胞迁移中的作用及机制。方法用不同浓度的PI3K／AKT信号通路抑制剂LY294002（2．50、7．50、15．00μmol／L）;MEK／ERK信号通路抑制剂PD98059（2．50、7．50、15．00μmol／L）分别处理肿瘤血管内皮细胞,以DMEM‐F12培养基,加入0．10％二甲基亚砜（DMSO）的培养基分别作为对照,通过细胞划痕试验,定向迁移试验和Transwell试验来检测不同的信号通路抑制剂对肿瘤血管内皮细胞的水平、垂直和定向迁移能力的影响。结果0．1％DMSO对内皮细胞的迁移无明显影响,其作用后内皮细胞的迁移能力与DMEM‐F12单独作用无明显区别,说明小剂量DMSO作为LY294002、PD98059的溶剂不影响肿瘤血管内皮细胞的迁移功能;应用信号通路抑制剂LY294002、PD98059处理后,内皮细胞迁移能力受抑制,且随着抑制剂浓度增高而增大;LY294002与PD98059组比较,前者迁移距离更小,细胞迁移数较后者少,二者比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论抑制PI3K／AKT和MEK／ERK信号通路均能抑制肿瘤血管内皮细胞的水平、垂直和定向迁移,且与抑制剂浓度呈正相关;PI3K／AKT信号通路对内皮细胞迁移的影响比MEK／ERK信号通路明显。     

鞘内注射LY294002对保留性脊神经损伤大鼠脊髓中PI3K和pERK信号的影响

目的：观察保留性脊神经损伤（SNI）大鼠鞘内注射LY294002能否通过抑制脊髓中磷脂酰肌醇‐3‐激酶PI3K ,进而影响pERK信号而缓解神经病理性疼痛。方法24只雄性 SD大鼠随机分为4组,即假手术（Sham）组、SNI组、SNI＋二甲基亚砜（DMSO）组及 SNI＋ LY294002（PI3K 抑制剂）组,每组6只,其中 SNI＋LY294002组和SNI＋DMSO组分别于SNI后第5天经鞘内注射LY294002和等体积DMSO ,每天1次,直到SNI后第14天。SNI前和SNI后1,3,5,7,10,14 d ,测定大鼠机械刺激缩足反应阈值（PWM T ）和热辐射刺激缩足反应潜伏期（PWTL）。SNI后第14天,大鼠麻醉后取腰段脊髓行Western‐blot检测PI3K和pERK的表达。结果与Sham组比较,SNI后各时点SNI组大鼠的 PWMT 和PWTL 均下降,脊髓中PI3K和 pERK表达则显著增强（P＜0．05）。与SNI组和SNI＋DMSO组比较,SNI后各时点SNI＋LY294002组大鼠的PWMT和PWTL均显著增高（P＜0．05）,PI3K和pERK的表达则下降（P＜0．05）。结论经鞘内注射LY294002可抑制脊髓中PI3K ,进而影响pERK信号而缓解SNI大鼠神经病理性疼痛。     

Effects of Liancao-Xieli capsule on intestinal mucosal inflammatory factors and TLR4/PI3K/Akt/mTOR signaling pathway in mice with ulcerative colitis

Objective: To observe the effect of Liancao-Xieli capsule on intestinal mucosal inflammatory factors and TLR4/PI3K/Akt/mTOR signaling pathway in mice with ulcerative colitis (UC); Methods: 40 male C57BL/6 mice were randomly divided into the control group, model group, Liancao-Xieli group and mesalazine group, with 10 mice in each group. In addition to the control group, the remaining three groups of mice were induced by 3％ dextran sulfate sodium (DSS) to induce acute UC model. During the modeling period, mice in each group were given corresponding drugs and normal saline by gavage. At the end of the experiment, HE staining was used to observe the pathological changes of colonic tissue in each group, and ELISA was used to detect the inflammatory factors (TNF-α, IL-6, IL-1β, IL-8, IL-17, and INF-γ) in serum and colonic tissue. The expression levels of TLR4/PI3K/Akt/mTOR signaling pathway related proteins were also detected by Western blot; Results: Compared with the model group, Liancao-Xieli capsule could significantly increase the colon length and decrease the score of colon histopathology in UC mice (P<0.01). In addition, the levels of TNF-α, IL-6, IL-1β, IL-8, IL-17, and INF-γ were significantly reduced in serum and colon tissue, and the expressions of TLR4, PI3K, p-Akt and p-mTOR were significantly down-regulated in Liancao-Xieyi group when compared with the model group (P<0.01).While the expressions of Akt and mTOR were not significantly affected in Liancao-Xieyi group (P>0.05); Conclusion: Liancao-Xieli capsule can reduce the secretion of inflammatory factors, improve the intestinal mucosal damage and inflammatory response in UC by inhibiting the activation of TLR4/PI3K/Akt/mTOR signaling pathway.     

邻苯二甲酸二(2-乙基已基)酯对人神经母细胞瘤细胞增殖的影响

目的 探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二（2-乙基已基）酯（di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP）对人神经母细胞瘤细胞增殖的影响及机制。方法 体外培养人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,分为5组：不加干预药物（对照组）、加17β-雌二醇（17β-estradiol,E₂组）、加DEHP（DEHP组）、同时加E₂和磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinases,PI3K）抑制剂LY294002（E₂ + LY294002组）、同时加DEHP和LY294002（DEHP + LY294002组）。检测各组细胞0、2、5 d时光吸收度值（absorbance value,AV）,5 d时DNA增殖指数（proliferation index,PI）,凋亡指数（apoptotic index,AI）、Capase-3蛋白、蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶（protein-serine-threonine kinase,Akt）以及磷酸化Akt（phosphor-AktSer473,p-AktSer473）蛋白表达。结果 E₂和DEHP组2、5 d时AV值及5 d时PI值均较对照组明显增高（P<0.01）,而E₂ + LY294002和DEHP + LY294002组则较E₂和DEHP组明显降低（P<0.01）,各组AI及Caspase-3蛋白表达无明显变化。5 d时p-AktSer473蛋白表达,E₂和DEHP组较对照组增加（P<0.01）,而E₂ + LY294002和DEHP + LY294002组则较E₂和DEHP组明显减少（P<0.01）,各组Akt蛋白表达无明显变化。结论 DEHP可促进人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞体外增殖,作用与雌激素相仿。该促增殖效应可能通过PI3K/Akt信号通路起作用,与细胞凋亡途径无关。     

Activation of Rac1-PI3K/Akt is required for epidermal growth factor-induced PAK1 activation and cell migration in MDA-MB-231 breast cancer cells

Epidermal growth factor (EGF) may increase cell motility, an event implicated in cancer cell invasion and me-tastasis. However, the underlying mechanisms for EGF-induced cell motility remain elusive. In this study, we found that EGF treatment could activate Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1 (Rac1), PI3K/Akt and p21-actived kinase (PAK1) along with cell migration. Ectopic expression of PAK1 K299R, a dominant negative PAK1 mutant, could largely abolish EGF-induced cell migration. Blocking PI3K/Akt signalling with LY294002 or Akt siRNA remarkably inhibited both EGF-induced PAK1 activation and cell migration. Furthermore, expression of dominant-negative Rac1 (T17N) could largely block EGF-induced PI3K/Akt-PAK1 activation and cell migration. Interestingly, EGF could induce a significant production of ROS, and N-acetyl-L-cysteine, a scavenger of ROS which abolished the EGF-induced ROS generation, cell migration, as well as activation of PI3K/Akt and PAK, but not Rac1. Our study demonstrated that EGF-induced cell migration involves a cascade of signalling events, in-cluding activation of Rac1, generation of ROS and subsequent activation of PI3K/Akt and PAK1.