miR-23c对滋养层细胞增殖、侵袭及迁移的影响及作用机制研究

目的探讨miR-23c对滋养层细胞HTR8/SVneo增殖、侵袭和迁移的影响及作用机制。方法选取2019年4月至2020年8月在北海市人民医院行产前检查的子痫前期（PE）及正常妊娠孕妇各35例,收集血清及胎盘组织,采用qRT-PCR法检测miR-23c表达。将HTR8/SVneo细胞分为Blankcontrol组、mimic-NC组、miR-23cmimic组、inhibitor-NC组和miR-23cinhibitor组,采用qRT-PCR法及Westernblot法分别检测miR-23c及磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）、蛋白激酶B（Akt）mRNA和蛋白及p-Akt表达;CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测细胞的增殖、侵袭及迁移能力;双荧光素酶报告实验验证miR-23c对PTEN的靶向作用。结果与正常孕妇相比,PE患者血清及胎盘组织中miR-23c表达水平均显著降低（均P＜0.05）。与Blankcontrol组相比,miR-23cmimic组miR-23c、p-Akt/Akt表达水平均显著升高（均P＜0.05）,PTEN表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞增殖、侵袭及迁移能力均显著增强（均P＜0.05）;miR-23cinhibitor组miR-23c、p-Akt/Akt表达水平均显著降低（均P＜0.05）,PTEN表达水平显著升高（P＜0.05）,细胞增殖、侵袭及迁移能力显著减弱（均P＜0.05）。Blankcontrol组、mimic-NC组和inhibitor-NC组以上各项指标比较差异无统计学意义（P＞0.05）。双荧光素酶报告实验显示miR-23c可靶向抑制PTEN的表达。结论miR-23c通过靶向抑制PTEN的表达来促进Akt活化,进而促进滋养层细胞的增殖、侵袭和迁移。     

Tmub1沉默提高Akt蛋白活性促进肝细胞增殖

目的 探讨Tmub1沉默对Akt磷酸化和肝细胞增殖及生长能力的影响.方法 应用RNAi技术对BRL-3A细胞株Tmub1基因进行沉默,采用qRT-PCR和Western blot分别检测Tmub1、Akt、p-Akt、Cyclin D1、c-myc等基因的mRNA和蛋白表达水平;采用平板集落形成实验和CCK-8检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期.结果 与对照组相比,Tmub1基因沉默后,Cyclin D1和c-myc基因mRNA表达增强(P＜0.05),p-Akt磷酸化水平以及Cyclin D1和c-myc蛋白的表达增高(P＜0.05);BRL-3A细胞的增殖及生长能力增强(P＜0.05);且处于细胞周期S+G2/M期的细胞比例明显增加(P＜0.05).通过MK2206抑制Akt磷酸化后,可显著抑制上述基因的mRNA及蛋白的表达水平,细胞的增殖及生长能力明显降低(P＜0.05),且处于S+ G2/M期的细胞比例下降(P＜0.05).结论 Tmub1沉默通过增加Akt蛋白的磷酸化及Cyclin D1、c-myc的表达水平从而促进BRL-3A细胞的增殖和生长.     

毛蕊异黄酮对膀胱癌细胞凋亡和 PI3K/Akt 信号通路的影响

目的：探讨毛蕊异黄酮对膀胱癌细胞增殖、凋亡及 PI3K／Akt 信号通路的影响。方法采用0、30、60、120μmol／L 毛蕊异黄酮处理膀胱癌 T24、T739细胞,采用 MTT 法检测此两种细胞接受上述浓度处理0、24、48和72 h 后的细胞增殖情况,流式细胞术检测此两种细胞各浓度处理48 h 的细胞凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法检测 T24细胞各浓度处理48 h 的细胞凋亡情况,Real －time PCR 检测 T24细胞各浓度处理48 h 的 Bax 的 mRNA 表达水平,Western blot 法检测 T24细胞各浓度处理48 h 的 Akt 及其磷酸化形式 p －Akt 的蛋白水平和 Bax 蛋白水平。结果毛蕊异黄酮抑制膀胱癌 T24、T739细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性（P ＜0.05）,对 T24细胞的抑制增殖效应比 T739明显（P ＜0.05）;0、30、60、120μmol／L 毛蕊异黄酮作用48 h 后 T24细胞凋亡率分别为（2.89±1.11）％、（4.11±1.05）％、（16.92±2.67）％、（27.54±2.43）％,而 T739细胞凋亡率分别为（3.05±1.42）％、（3.99±1.52）％、（13.01±2.68）％、（19.99±3.31）％,与0μmol／L 浓度处理比较,60、120μmol／L 处理后明显升高,差异有统计学意义（P ＜0.05）,而且毛蕊异黄酮对 T24细胞的促凋亡效应比 T739细胞明显（P ＜0.05）;Ho－echst 33258荧光染色法显示随药物浓度增高,T24细胞凋亡明显增多;Real －time PCR 结果显示 T24细胞中 Bax的 mRNA 表达水平在60、120μmol ／L 处理后均明显高于0μmol／L 浓度时的表达水平（P ＜0.05）。 Western blot 法检测的 Bax 蛋白表达水平则在30、60、120μmol ／L 处理后高于0μmol ／L 浓度时的表达水平（P ＜0.05）,p －Akt／Akt 值则降低（P ＜0.05）。结论毛蕊异黄酮能抑制膀胱癌 T24细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能通过抑制PI3K／Akt 通路激活进而促进 Bax 表达实现。     

脆性组氨酸三联体和鼠双微体蛋白2蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义

目的探讨脆性组氨酸三联体（FHIT）和鼠双微体蛋白2（MDM2）蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义。方法采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法检测FHIT和MDM2蛋白在72例膀胱尿路上皮癌和42例正常膀胱尿路上皮中的表达情况,并对两项指标的表达情况与膀胱尿路上皮癌临床病理特征的关系进行分析。结果FHIT蛋白在膀胱尿路上皮癌中的阴性表达率为58.33%，在正常膀胱尿路上皮中为4.76%，两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）。有吸烟史的FHIT蛋白阴性表达率为86.84%，无吸烟史的为29.41%，两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）。FHIT蛋白阴性表达率与膀胱尿路上皮癌分化程度、TNM分期、淋巴结转移、肿瘤大小、吸烟、年龄均有密切关系（均P＜0.05），而与性别无关（P＞0.05）。MDM2蛋白在膀胱癌中阳性表达率63.89%，在正常膀胱尿路上皮中为7.69%，两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）。MDM2蛋白阳性表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移、肿瘤大小、吸烟均有关（均P＜0.05），与年龄、性别均无关（均P＞0.05）。在膀胱尿路上皮癌中，FHIT与MDM2蛋白表达呈负相关（r=-0.816，P＜0.05）。结论FHIT阴性表达和MDM2蛋白阳性表达可能促进了膀胱癌恶性增殖及转移，联合检测能为判断膀胱癌的恶性程度及转移潜能提供参考。     

TET2蛋白下调5hmC在膀胱癌细胞T739中低表达

目的:研究膀胱尿路上皮癌细胞中TET2蛋白及5hmC的表达量相关作用。方法:采用Real-time PCR检测正常尿路上皮细胞和膀胱尿路上皮癌细胞中TET2 mRNA的表达,并同时采用细胞免疫化学染色检测正常尿路上皮细胞和膀胱尿路上皮癌细胞中5m C及5hmC表达,了解TET与膀胱癌的作用关系,并探讨其可能的作用机制。结果:TET2 mRNA在正常膀胱细胞T24中的表达(1.400 00±0.057 74,n=3),显著高于膀胱癌T739细胞[(0.866 70±0.120 20,n=3),P=0.016 1];TET2蛋白在T739中表达(1.589 00±0.048 52,n=3)也明显低于T24[(1.310 00±0.049 33,n=3),P=0.015 7]。5-m C在两种细胞中的表达量比较差异无统计学意义(P=0.097 6);5-hm C的表达量T739细胞明显低于T24细胞[(1.840 00±0.055 68,n=3)VS(1.487 00±0.041 77,n=3),P=0.007 1)]。结论:TET2 mRNA和蛋白水平在膀胱肿瘤细胞中低表达,显著低于正常膀胱细胞;且TET2与5hmC低表达存在相关性。     

北五味子多糖对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的 探讨北五味子多糖（SCP）对体外培养人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制。 方法 体外培养人膀胱癌T24细胞,分为对照组和50、100及200 mg·L^－1 SCP组。不同剂量SCP干预24~48 h后,采用MTT法检测各组T24细胞增殖抑制率,Hoechst 33258荧光染色法检测各组T24细胞凋亡情况,Annexin Ⅴ-FITC/碘化丙啶（PI）双染法检测各组T24细胞凋亡率,流式细胞术检测各组T24细胞不同细胞周期细胞百分率和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组T24细胞中磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（Akt）和磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,50、100和200 mg·L^－1 SCP组T24细胞增殖抑制率明显升高（P<0.05或P<0.01）;T24细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）;50、100和200 mg·L^－1 SCP组 T24细胞G₀/G₁期细胞百分率明显升高（P<0.05或P<0.01）,100和200 mg·L^－1 SCP组T24细胞S期和G₂/M期细胞百分率明显降低（P<0.01）;50、100和200 mg·L^－1 SCP组T24细胞中PTEN蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,p-PI3K蛋白表达水平和p-Akt/Akt比值明显降低（P<0.05或P<0.01）。 结论 SCP 能够抑制T24细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控PTEN和PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达有关。     

抗菌肽LL-37 与膀胱尿路上皮癌关系的初步探讨

目的 检测抗菌肽LL-37 在膀胱尿路上皮癌中的表达,同时体外研究LL-37 对膀胱肿瘤细胞株T24、EJ 的作用。方法 ELISA 检测30 例膀胱尿路上皮癌患者和30 例健康体检者新鲜晨尿中LL-37 的表达,同时检测T24、EJ 细胞和尿路上皮SV-HUC-1 细胞经不同浓度LPS 刺激后细胞培养液上清中LL-37水平。免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测30 例膀胱癌患者的肿瘤组织标本、肿瘤基底及周围组织标本中LL-37 的表达。在体外将不同浓度的LL-37 作用于T24、EJ 和SV-HUC-1 细胞,MTT 检测细胞的增殖。结果 健康体检者和膀胱癌患者尿液中LL-37 的水平分别为（2.02±0.06）和（24.32±0.02）ng/ml,差异有统计学意义（P <0.05）。免疫组织化学结果显示,LL-37 在癌组织中表达阴性,而在癌组织周围的炎症细胞、血管壁及平滑肌内却呈阳性表达。RT-PCR 结果表明,癌周围组织中LL-37的表达水平比癌组织高约30 倍。T24、EJ 和SV-HUC-1 细胞经LPS 刺激后培养液上清中LL-37 浓度均升高。在体外,LL-37 呈剂量依赖性地抑制T24、EJ 细胞的增殖,而其对SV-HUC-1 细胞的抑制需更高的浓度。结论 LL-37 与膀胱癌的发生可能有着一定的关联,体外高浓度的LL-37 可抑制膀胱癌T24、EJ 细胞的生长。     

黄芪多糖对基底细胞样乳腺癌细胞增殖和Akt磷酸化的影响

目的：观察黄芪多糖对基底细胞样乳腺癌细胞株MDA-MB-468细胞增殖和Akt蛋白磷酸化的影响。方法：用不同浓度的黄芪多糖（Astragalus polysaccharide,APS）干预MDA-MB-468细胞,用甲基噻唑基四唑法检测不同浓度APS干预对MDA-MB-468细胞增殖的量效和时效关系。用细胞内蛋白质印迹法检测APS干预MDA-MB-468细胞株1、2、4和7d后对磷酸化Akt（phospho-Akt,p-Akt）（Thr308）和p-Akt（Ser473）蛋白表达水平的影响,以及p53/鼠双微体2（murine double minute 2,MDM2）信号转导通路中的关键靶点p53、MDM2和人第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN）蛋白表达水平的影响。用小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）技术沉默PTEN的表达,用细胞内蛋白质印迹法检测APS干预MDA-MB-468细胞2d对p-Akt（Thr308）和p-Akt（Ser473）蛋白表达水平的影响。结果：1和0.5mg/mL的APS对MDA-MB-468细胞的增殖有明显的抑制作用。1和0.5mg/mL的APS干预1、2、4和7d后能下调p-Akt（Thr308）的表达;干预1和2d后下调p-Akt（Ser473）的表达,上调MDM2蛋白的表达;干预7d后上调p53和PTEN蛋白的表达。PTEN沉默后,APS在干预2d后对p-Akt（Thr308）和p-Akt（Ser473）的表达没有影响,细胞增殖的抑制率低于PTEN未沉默时。结论：APS能抑制MDA-MB-468细胞的增殖,下调MDA-MB-468细胞Akt磷酸化的水平,其抑制MDA-MB-468细胞增殖的机制可能与通过对p53/MDM2正负反馈环的调节从而上调p53和PTEN蛋白的表达有关。     

EZH2基因在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义

目的 探讨EZH2(enhancer of zeste homolog 2)基因在膀胱尿路上皮癌中的表达及与临床意义. 方法 采用RT-PCR、免疫荧光法分别检测正常膀胱组织(12例)及膀胱癌标本中EZH2 mRNA(38例)及EZH2蛋白(68例)的表达. 结果 免疫荧光法检测显示正常膀胱组织与膀胱癌标本EZH2蛋白表达率分别为33.3%、79.4%(P<0.05).膀胱癌标本中,低分级尿路上皮癌与高分级尿路上皮癌中EZH2蛋白表达率分别为65.0%、100.0%(P<0.05);表浅性膀胱癌与浸润性膀胱癌EZH2蛋白表达率分别为68.9%、100.0%(P<0.05).RT-PCR检测结果 :正常膀胱组织与膀胱癌标本EZH2蛋白表达率分别为25.0%、84.2%(P<0.05).膀胱癌标本中,低分级尿路上皮癌与高分级尿路上皮癌中EZH2 mRNA表达率分别为70.0%、100.0%(P<0.05);表浅性膀胱癌与浸润性膀胱癌EZH2 mRNA表达率分别为72.7%、100.0%(P<0.05).EZH2在膀胱尿路上皮癌明显地高表达,EZH2表达与膀胱尿路上皮癌病理分级、临床分期密切相关. 结论 结果 提示EZH2对于膀胱尿路上皮癌的早期诊断及判断预后可能有重要的意义.     

靶向沉默Notch1基因对膀胱癌细胞系T24增殖的影响

目的探讨Notch1基因沉默对人膀胱癌细胞增殖的影响。方法用pGenesil质粒构建靶向Notch1的siRNA真核表达载体psiRNA1,并将其转染到膀胱癌细胞系T24中,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)、流式细胞术(FCM)检测Notch1沉默后膀胱癌细胞生长变化、细胞周期和凋亡情况。逆转录聚合酶链反应（RT PCR）和蛋白印记法（Western Blot）检测Notch1基因的mRNA和蛋白在转染前后表达变化。结果转染psiRNA1质粒后T24细胞的生长受到显著抑制,呈一定的时间依赖性（60?h内）,凋亡率增加,G0/G1期细胞明显增多（未转染组、空载体组、阴性对照组）,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,且Notch1基因在mRNA和蛋白水平表达相对于对照组明显下调（P＜0.05）。结论沉默Notch1基因能够抑制膀胱癌细胞的增殖,Notch1在膀胱癌中可能具有癌基因的作用。     

lncRNA MIR31HG 对甲状腺乳头状癌细胞 增殖、迁移、侵袭的影响及作用机制研究

目的 探究长链非编码RNA（lncRNA）MIR31HG对甲状腺乳头状癌（PTC）细胞增殖、迁 移、侵袭的影响及可能的作用机制。方法 选取2018 年8 月—2019 年4 月在湖南省中医药大学第一附属 医院行甲状腺癌根治术的48 例患者的新鲜癌组织及癌旁组织标本,男女各24 例。利用TCGA 数据库验证 lncRNA MIR31HG 在甲状腺癌组织与癌旁组织中的表达,患者术后病理报告确诊为PTC,提取样本RNA 行 qRT-PCR 验证lncRNA MIR31HG 在PTC 组织与癌旁组织中表达情况及与患者临床病理特征的相关性;利 用lncRNA MIR31HG 的小干扰RNA 转染PTC 细胞系TPC-1 并验证抑制率,保证抑制率>60%,MTT 检测 TPC-1 细胞增殖能力,细胞划痕实验和Transwell 小室实验检测细胞迁移及侵袭能力,Western blotting 检测 Akt 信号通路关键蛋白分子Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、PTEN 的表达。结果 宫颈鳞状细胞癌、乳头状肾细 胞癌、头颈部鳞癌、胰腺癌及甲状腺癌组织lncRNA MIR31HG 相对表达量较癌旁组织高（P <0.05）,膀胱癌、 前列腺癌组织较癌旁组织低（P <0.05）。PTC 组织lncRNA MIR31HG 相对表达量较癌旁组织高（P <0.05）。 TPC-1、K1 及BCPAP 的lncRNA MIR31HG 相对表达量较Nthy-ori 3-1 高（P <0.05）,且TPC-1 相对表 达量最高。实验组lncRNA MIR31HG 相对表达量均较siRNA-NC 组下降（P <0.05）,其中siRNA-1 组与 siRNA-3 组沉默效率均>60%。各组OD 值比较,差异有统计学意义（P <0.05）。siRNA-1 组与siRNA-3 组 划痕愈合率较siRNA-NC 组低（P <0.05）。siRNA-1 组、siRNA-3 组侵袭至Transwell 小室下室的细胞数较 siRNA-NC 组低（P <0.05）。siRNA-1 组、siRNA-3 组PTEN mRNA 和蛋白较siRNA-NC 组升高（P <0.05）, 且siRNA-3 组最高;siRNA-1 组、siRNA-3 组p-Akt 蛋白较siRNA-NC 组低,且siRNA-3 组最低（P <0.05）。 结论 lncRNA MIR31HG 在PTC 组织中高表达并与PTC 患者肿瘤分期有关;下调lncRNA MIR31HG 的表 达可以抑制TPC-1 细胞增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能与lncRNA MIR31HG 抑制PTEN 表达从而激 活Akt 通路有关。     

PTEN抑制增生性瘢痕成纤维细胞转分化作用及其机制

目的观察染色体10上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten,PTEN)编码蛋白对TGF-β1刺激下瘢痕成纤维细胞转分化的抑制作用及其机制。方法用重组PTEN腺病毒转染体外培养的人瘢痕成纤维细胞,倒置荧光显微镜检测PTEN转染组及空载体转染组绿色荧光蛋白表达;将实验分为对照组、PTEN转染组、空载体转染组、TGF-β1刺激组(给予TGF-β1刺激)、PTEN+TGF-β1组(PTEN基因转染后给予TGF-β1刺激)、空载体+TGF-β1组(空载体转染后给予TGF-β1刺激),RT-PCR和Western blot分别检测对照组、PTEN转染组、空载体转染组中PTEN mRNA和蛋白表达;Western blot检测各组中α-SMA、Akt、p-Akt表达水平。结果 PTEN基因转染瘢痕成纤维细胞36h后可见明显绿色荧光蛋白表达,PTEN转染组PTEN mRNA及蛋白的表达明显升高,与对照组及空载体转染组相比,差异有统计学意义(P<0.05),而p-Akt和α-SMA的表达明显下降(P<0.05);TGF-β1组α-SMA表达较对照组明显升高,同时伴有p-Akt表达上升,与对照组、PTEN转染组、PTEN+TGF-β1组相比,差异均有统计学意义(P<0.01);空载体转染组与对照组相比,p-Akt、α-SMA蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05);空载体+TGF-β1组与TGF-β1刺激组相比,p-Akt、α-SMA蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。各组细胞的Akt表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 TGF-β1可促进PI3K/Akt通路活化,使瘢痕成纤维细胞α-SMA表达升高,促进其转分化;空载体转染对p-Akt、α-SMA的表达无明显影响,高表达PTEN可使瘢痕成纤维细胞α-SMA的表达明显降低,并且可拮抗TGF-β1对瘢痕成纤维细胞的转分化作用,其机制可能是抑制PI3K/Akt通路活化。     

长链非编码RNA linc00261在肝细胞癌中的表达及意义

目的研究长链非编码RNA linc00261 在肝细胞癌（HCC）中的表达、功能及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）法检测linc00261在74例肝癌、癌旁肝组织中的表达;采用卡方检验分析其表达量与临床病理指标的相关性;应用 COX回归模型分析其表达水平与肝癌患者术后预后的关系;qRT-PCR检测linc00261在5株肝癌细胞株中的表达;在肝癌细胞 株MHCC-LM3和SNU-449中采用siRNA（si-linc00261-1,si-linc00261-2,si-NC和空白对照组）和Lipofectamine3000进行转染 敲低linc00261,活细胞计数（CCK8）、Transwell实验分别研究linc00261对肝癌细胞增殖,侵袭迁移能力的影响。结果HCC组 织中linc00261的表达水平与肝癌患者术前血清AFP（P=0.032）、肿瘤大小（P=0.007）、有无微血管癌栓（P=0.01）、TNM分期（P= 0.02）显著相关;HCC组织中linc00261的低表达与患者的不良预后相关,其术后无瘤生存期明显缩短（P<0.05）,是影响HCC患 者术后无瘤生存期的一个独立危险因素;下调linc00261的表达可促进肝癌细胞株MHCC-LM3（P<0.01）和SNU-449（P<0.001） 的迁移和侵袭能力,对细胞增殖无明显影响（P>0.05）。结论Linc00261有望成为肝癌切除术后的一种新的预后指标。     

长链非编码RNA-scarna 4在膀胱尿路上皮癌的作用研究

目的 观察长链非编码RNA-scarna 4(LncRNA-scarna 4)在膀胱尿路上皮癌的表达,探讨抑制其表达对癌细胞的生长活力、凋亡和增殖活动的影响,明确其调控通路。方法 收集尿路上皮癌组织及癌旁组织标本(n=6)、T24和HT1376尿路上皮癌细胞及正常尿路上皮细胞SV-HUC-1,qRT-PCR检测其LncRNA-scarna 4表达。分别将T24及HT1376细胞分为3组:Lnc-S组转染LncRNA-scarna 4的siRNA,Lnc-C组转染随机序列siRNA,C组与单纯培养基培养。通过台盼蓝拒染法鉴定细胞生长活力、Hoechst33342凋亡染色及Western Blot检测凋亡蛋白Bcl2表达,观察细胞凋亡活动、软琼脂集落形成实验观察肿瘤细胞增殖活动;Western Blot观察PI3K/Akt通路蛋白表达。结果 LncRNA-scarna 4在膀胱癌组织、T24及HT1376细胞表达显著增高(P<0.05)。转染抑制LncRNA-scarna 4表达导致Lnc-S组活细胞率显著降低(T24:42.1%±11.2% vs. 87.3%±8.5%;HT1376:35.3%±8.2% vs. 81.4%±10.4%,P<0.05),凋亡细胞数(/10³细胞)显著增加(T24:88±11 vs. 41±9;HT1376:79±8 vs. 47±8,P<0.05),凋亡蛋白Bcl2表达亦显著增加(T24:181.4%±20.6% vs. 119.6%±11.3%;HT1376:213.3%±34.6% vs. 121.4%±24.4%,P<0.05),克隆形成数显著降低(T24:2.6±1.1 vs. 12.5±4.6;HT1376:3.6±2.0 vs. 12.1±2.0,P<0.05),增殖及迁移PI3K/Akt通路蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论 LncRNA-scarna 4在膀胱尿路上皮癌表达异常增高,通过抑制其表达促进癌细胞凋亡、抑制其增殖能力,其作用通路是PI3K/Akt通路。     

Relationship between aberrant methylation of FAS promoter and biological behavior of bladder urothelial carcinoma

This study examined the promoter methylation of APO-1/CD95 (Fas) gene in bladder urothelial carcinoma and analyzed the relationship between the Fas promoter methylation and the biological behavior of b...     

IL-6通过调控miR-152/PIK3R3通路促进胃癌细胞的增殖和上皮-间质转化

目的：探索白细胞介素(interleukin,IL)-6在胃癌中的作用及相关的分子机制。方法：50 ng/mL IL-6刺激 胃癌细胞MGC-803后,利用MTT法检测细胞增殖、划痕实验检测细胞迁移的变化,RT-qPCR实验检测E-钙黏蛋白 (E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、锌指转录因子Snail1和miR-152在mRNA水平的表达, Western印迹检测E-cadherin,N-cadherin,vimentin,Snail1在蛋白水平的表达;IL-6与miR-152模拟物(miR-152 mimics)单 独处理或者共同处理MGC-803细胞后,RT-qPCR检测PIK3R3在mRNA水平的表达,Western印迹检测PIK3R3、蛋白激 酶B(Akt)和磷酸化-Akt(p-Akt)在蛋白水平的表达。结果：外源性IL-6明显促进MGC-803细胞的增殖与迁移(P<0.05),降 低E-cadherin蛋白和mRNA和miR-152 mRNA的表达(P<0.01),增加N-cadherin,vimentin,Snail1,PIK3R3蛋白和mRNA及 p-Akt蛋白的表达(P<0.05)。转染miR-152 mimics后明显降低了PIK3R3和p-Akt蛋白水平的表达(P<0.01)。同时,过表达miR-152 能够降低IL-6诱导的PIK3R3及p-Akt的表达水平(P<0.01)。各组中Akt的表达均无明显变化(P>0.05)。结论：IL-6可能是通过 下调miR-152表达,诱导PIK3R3表达,激活PI3K/Akt信号通路,从而促进胃癌细胞的增殖、迁移和上皮-间质转化。     

高表达PTEN抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化

目的 研究PTEN高表达对TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化的抑制及其信号传导机制.方法 脂质体介导含人全长PTEN基因或空载体转染人肾小管上皮细胞(HKC细胞)48 h,倒置荧光显微镜检测PTEN转染组及空载体转染组绿色荧光蛋白表达;Western blot检测正常组、PTEN转染组、空载体转染组中PTEN蛋白表达;RT-PCR检测3组中PTEN mRNA表达.然后将实验分为正常组、TGF-β1刺激组(给予TGF-β1刺激)、PTEN+TGF-β1组(PTEN基因转染后给予TGF-β1刺激)、空载体+TGF-β1组(空载体转染后给予TGF-β1刺激),Western blot检测各组细胞E-cad-herin、α-SMA、Akt、p-Akt表达水平.结果 FTEN基因及空载体转染HKC细胞48 h后可见明显绿色荧光蛋白表达;PTEN转染组PTEN蛋白及PTEN mRNA表达较正常组及空载体转染组细胞均显著上升(均P<0.05).在正常组、TGF-β1刺激组、PTEN+TGF-β1组、空载体+TGF-β1组中,TGF-β1刺激组及空载体+TGF-β1组较正常组E-cadherin表达明显下降(均P<0.05),而a-SMA及p-Akt表达显著上升(均P<0.05);PTEN+TGF-β1组较TGF-β1刺激组及空载体+TGF-β1组a-SMA及p-Akt表达明显下降(均P<0.05).而E-cadherin表达上升(均P<0.05);各组细胞Akt表达水平差异不明显(P>0.05).结论 PTEN通过阻止PI3K/Akt通路活化而抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化.     

异丙酚抑制胶质瘤U87细胞增殖和侵袭的作用机制及其对miR-134表达的影响

目的： 探讨异丙酚对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭的影响,并探讨其抗肿瘤作用的可能机制。方法： 胶 质瘤 U87 细胞分为空白组、阳性对照组和异丙酚处理组(1.00、2.00、5.00 mmol/L)。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖能力,Transwell小室检测异丙酚对U87细胞侵袭、迁移能力的影响;采用real time PCR检测细胞微RNA-134(microRNA-134,miR-134)的表达;采用蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原Ki-67、侵 袭相关蛋白基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)以及磷酸肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路相关蛋白 的表达。结果： 与空白组相比,阳性对照组和异丙酚处理组48 h后U87细胞增殖倍数,细胞侵袭和迁移数量,Ki- 67、MMP-2 和 MMP-9 蛋白表达,以及磷酸化 PI3K (p-PI3K)/PI3K 和磷酸化 Akt(p-Akt)/Akt 比值均显著降低(均 P< 0.05);miR-134水平显著升高(P<0.05)。与阳性对照组和1.00 mmol/L异丙酚处理组相比,2.00和5.00 mmol/L异丙酚 处理组48 h后U87细胞增殖倍数,细胞侵袭和迁移数量,Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达,以及p-PI3K/PI3K和p Akt/Akt比值均显著降低(均P<0.05);miR-134水平显著升高(P<0.05)。与2.00 mmol/L异丙酚处理组相比,5.00 mmol/L 异丙酚处理组48 h后U87细胞增殖倍数,细胞侵袭和迁移数量,Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达,以及p-PI3K/ PI3K和p-Akt/Akt比值均显著降低(均P<0.05);miR-134水平显著升高(P<0.05)。结论：异丙酚能降低人胶质瘤U87细 胞增殖速度,降低 U87 细胞侵袭和迁移能力,这可能是通过上调 miR-134 表达、抑制 PI3K/Akt 信号通路激活来实 现的。     

长链非编码RNA Linc00658在结直肠癌中的表达及其与西妥昔单抗抵抗的关系

目的：探究长链非编码RNA（LncRNA）Linc00658 在结直肠癌（CRC）中的表达及其与西妥昔单抗抵抗的关系。方法：采用生物信息学方法预测与miR-19a-3p及PTEN表达密切相关的LncRNA，分别用西妥昔单抗和DMSO诱导处理人CRC细胞CaCo2 作为抵抗组和对照组，并利用细胞转染过表达抵抗组细胞的Linc00658作为过表达组，分别转染miR-19a-3p mimic及NC于CaCo2细胞中，作为mimic组及NC组。qRT-PCR检测Linc00658、miR-19a-3p及PTEN mRNA在对照组、抵抗组和过表达组细胞中的表达水平，Western blot检测PTEN及其下游基因磷酸化AKT（p-AKT）及磷酸化mTOR（p-mTOR）的表达，CCK-8 实验检测各组细胞西妥昔单抗的半数抑制浓度（IC50），荧光素酶报告基因实验验证Linc00658与miR-19a-3p的结合及其对miR-19a-3p与PTEN结合作用的影响。结果：相比对照组，抵抗组细胞Linc00658、PTEN mRNA及蛋白表达显著降低，miR-19a-3p、p-AKT及p-mTOR表达显著升高，西妥昔单抗IC50 显著增高（均P ＜0.01）；相比抵抗组，过表达组细胞Linc00658、PTEN mRNA及蛋白表达显著升高，miR-19a-3p、p-AKT及p-mTOR表达显著降低，西妥昔单抗IC50 显著降低（P ＜0.05）；相比NC组，mimic组西妥昔单抗IC50显著升高（P ＜0.01）；miR-19a-3p mimic可显著抑制pGL3-basic-Linc00658荧光素酶活性，提示miR-19a-3p与Linc00658存在结合作用，过表达Linc00658可使miR-19a-3p mimic对pGL3-basic-PTEN的荧光抑制作用恢复。结论：Linc00658通过吸附miR-19a-3p促进PTEN的重新表达及CRC细胞对西妥昔单抗的敏感性。