竹节参总皂苷通过NLRP1和NLRP3炎症小体途径减轻衰老大鼠神经细胞凋亡的作用研究

目的基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1(NLRP1)和NLRP3炎症小体途径探讨竹节参总皂苷(SPJ)减轻衰老大鼠神经细胞凋亡的作用。方法以自然衰老大鼠为研究对象,将SPF级SD雄性大鼠随机分为对照组(9月龄)、模型组(24月龄)和SPJ低、中、高剂量组,从18月龄开始,SPJ低、中、高剂量组分别ig给予SPJ 10、30、60 mg/kg,衰老模型组ig等量生理盐水,给药至24月龄,每周停药2 d,持续给药6个月。TUNEL法检测衰老大鼠皮层和海马区神经细胞凋亡情况,Western blotting法检测衰老大鼠皮层和海马区白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18、凋亡相关微粒蛋白(ASC)、NLRP1、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)表达量的变化。结果 TUNEL实验结果显示,对照组中仅见极少数凋亡细胞;与对照组相比,模型组中凋亡细胞数明显增加。与模型组相比,SPJ组大鼠大脑皮层和海马CA1、CA3、DG区凋亡细胞数明显下降。Western blotting结果表明,大鼠大脑皮层和海马组织中IL-1β、ASC、NLRP3、NLRP1、Caspase-1、IL-18的蛋白表达水平均随着年龄的增长而逐渐上调;给药6个月后,SPJ各剂量组均能下调IL-1β、IL-18、ASC、NLRP3、NLRP1、Caspase-1蛋白的表达水平。结论 SPJ对衰老大鼠脑组织(皮层和海马)神经元损伤具有保护作用,其机制可能与其调节NLRP1和NLRP3炎症小体途径,从而减轻炎症反应有关。     

芩百清肺浓缩丸含药血清对肺炎支原体感染RAW264.7细胞NLRP3炎性体表达的影响

目的:观察芩百清肺浓缩丸含药血清对肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)感染RAW264.7细胞NLRP3炎性体及IL-1β的影响。方法:试验分为空白对照组、模型组和芩百清肺浓缩丸含药血清组。常规培养RAW264.7细胞、肺炎支原体菌株,制备芩百清肺浓缩丸含药血清,用10 MOI MP感染RAW264.7细胞,分别于8、16、24 h收集细胞。FQ-PCR检测NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达;Western-blot检测NLRP3、ASC、Caspase-1 p20蛋白表达;ELISA检测细胞上清液IL-1β含量。结果:与空白对照组比较,MP感染RAW264.7细胞后8、16、24 h NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达显著上调(P0.05或P0.01);感染后16、24 h NLRP3、ASC、Caspase-1 p20蛋白表达显著上调(P0.05或P0.01);感染后24 h细胞上清液IL-1β含量显著升高(P0.01)。与模型组比较,芩百清肺浓缩丸含药血清可显著下调MP感染RAW264.7细胞16、24 h NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA的表达(P0.05或P0.01);显著降低感染后24 h NLRP3、ASC、Caspase-1p20蛋白表达和细胞上清液IL-1β的分泌(P0.05或P0.01)。结论:芩百清肺浓缩丸抗肺炎支原体作用的机制可能与下调NLRP3炎性体表达有关。     

黄芩汤调控TLR2/NF-κB/NLRP3通路对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响

目的 基于TLR2/NF-κB/NLRP3通路探讨黄芩汤对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响。方法 实验分为空白组、模型组、低中高中药血清组。LPS+ATP构建焦亡模型,cck-8法检测生长情况,流式细胞术检测凋亡,Elisa检测IL-18、IL-1β、TNF-α水平,qRT-PCR检测IL-1β、NLRP3、Caspase-1、IL-18、ASC、GSDMD mRNA表达情况,WB检测TLR2、p-NF-κB-p65、GSDMD蛋白水平。结果 与模型组相比,三组中药血清细胞活力均明显上升(P<0.05)、凋亡率均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,三组中药血清IL-18、IL-1β、TNF-α水平均明显降低(P<0.05)。与模型组相比,中剂量组Caspase-1、NLRP3、ASC、IL-18的mRNA表达明显降低(P<0.05),高剂量组IL-1β、NLRP3、Caspase-1、IL-18、ASC、GSDMD的mRNA表达均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,中、高剂量组TLR2、p-NF-κB-p65及高剂量组GSDMD蛋白表达显著降低(P<...     

针刺对抑郁大鼠前额叶皮层NOD样受体蛋白3炎性小体信号通路的影响

目的:观察针刺对抑郁大鼠前额叶皮层NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体信号通路上关键分子NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响,探讨针刺抗抑郁的可能机制。方法:将SD大鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、氟西汀组,每组8只。采用慢性不可预知温和刺激法制备大鼠抑郁模型。造模期间,针刺组大鼠针刺"百会""印堂"10 min, 1次/d,每针刺6 d休息1 d,共针刺36次;氟西汀组给予氟西汀灌胃(10 mg/kg,浓度为1 mg/mL),1次/d,共42次。采用新奇抑制实验观察大鼠摄食行为;采用Western blot法检测前额叶皮层NLRP3和ASC表达;免疫组织化学法检测前额叶皮层Caspase-1表达;酶联免疫吸附法检测前额叶皮层IL-1β的含量。结果:与空白组比较,模型组大鼠新奇抑制摄食实验摄食潜伏期显著延长(P0.01);与模型组比较,针刺组和氟西汀组大鼠新奇抑制摄食实验摄食潜伏期显著缩短(P0.05)。与空白组比较,模型组前额叶皮层NLRP3、ASC、Caspase-1的表达和IL-1β含量显著增加(P0.01);与模型组比较,针刺组和氟西汀组前额叶皮层NLRP3、ASC、Caspase-1的表达和IL-1β含量显著降低(P0.01)。针刺组和氟西汀组上述指标的差异无统计学意义(P0.05)。结论:针刺可缓解大鼠抑郁样行为,其机制可能与抑制前额叶皮层NLRP3炎性小体信号通路相关分子的表达、减轻脑内炎性反应有关。     

隔药灸对克罗恩病大鼠结肠NLRP3炎症小体及IL-1?调节作用的实验研究

目的通过观察隔药灸对克罗恩病大鼠结肠NLRP3炎症小体(NLRP3、ASC、Caspase-1)及下游炎症因子IL-1?表达的影响,探讨隔药灸治疗克罗恩病的抗炎机制。方法将清洁级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、隔药灸组和假灸组4组。采用三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid, TNBS)与乙醇混合溶液灌肠制备大鼠克罗恩病模型。造模成功后,隔药灸组取天枢(双)、气海穴进行隔药饼灸治疗;假灸组取穴、操作同隔药灸组,但不点燃艾炷。治疗结束后,记录各组大鼠结肠长度及CMDI评分;采用HE染色,光学显微镜下观察各组大鼠结肠组织形态结构,并应用免疫组织化学技术检测各组大鼠结肠NLRP3、ASC、Caspase-1及IL-1?的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠结肠组织损伤严重,表现为裂隙样溃疡,炎症细胞浸润伴水肿,部分大鼠结肠黏膜可见肉芽组织形成,且结肠NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1?蛋白表达显著增加(均P0.05);与模型组比较,隔药灸组大鼠结肠损伤有所修复,炎症反应减轻,结肠NLRP3、ASC、Caspase-1及IL-1?蛋白表达显著降低(均P0.05);假灸组大鼠结肠损伤程度、炎症反应与模型组类似,两组结肠NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1?表达比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论隔药灸能下调克罗恩病大鼠结肠NLRP3、ASC、Caspase-1及IL-1?的蛋白表达,促进结肠炎性损伤的修复。     

二陈汤加味通过抑制NLRP3通路对慢性阻塞性肺疾病的防治作用

目的:观测二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)中Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体相关基因表达的影响,探讨二陈汤加味对COPD抗炎的分子机制。方法:采用脂多糖(LPS)联合香烟烟雾方法制备COPD大鼠模型。40只大鼠随机平均分为正常组,模型组,二陈汤加味组,MCC950(NLRP3抑制剂)组。造模期间(从实验第1～30天),MCC950组于实验第1天单次腹腔注射60 mg·kg~(-1);二陈汤加味组以10 g·kg~(-1)剂量灌胃,1次/2 d。造模成功后,从实验第31～45天,MCC950组腹腔注射3 mg·kg~(-1),1次/2 d;二陈汤加味组以10 g·kg~(-1)剂量灌胃,2次/d;正常组、模型组灌胃生理盐水10 g·kg~(-1)。酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠肺组织匀浆中白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-18(IL-18)和趋化因子8(CXCL8)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠外周血PBMCs中NLRP3,凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PBMCs中NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达;光镜观察肺组织结构变化,免疫组化检测NLRP3,ASC和Caspase-1在肺组织中的定位表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺组织匀浆中IL-1β,IL-18和CXCL8含量均明显升高(P0.05,P0.01);PBMCs中NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA及蛋白表达水平均明显增高(P0.01);与模型组比较,二陈汤加味组PBMCs中NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P0.05,P0.01),肺匀浆中IL-1β,IL-18和CXCL8含量均明显下降(P0.05,P0.01),肺组织结构明显改善。结论:二陈汤加味对COPD有抗炎作用。其机制可能与抑制PBMCs中NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA表达,减少IL-1β,IL-18和CXCL8的释放有关。     

金刚藤颗粒对急性盆腔炎模型大鼠NLRP3炎症小体通路及免疫功能的影响

目的观察金刚藤颗粒对急性盆腔炎(APID)模型大鼠NLRP3炎症小体通路及免疫功能的影响。方法将雌性SD大鼠105只随机分为假手术组、模型组及金刚藤颗粒低、中、高剂量组,每组均15只,灌胃治疗15 d后,ELISA检测大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察子宫组织的病理形态;实时定量PCR及Western blotting分别检测NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1 mRNA及蛋白表达水平。结果 HE染色显示,模型组大鼠子宫内膜上皮细胞脱落坏死,腔壁结构紊乱,全层炎性细胞浸润,有充血水肿;与模型组比较,金刚藤颗粒治疗组症状较模型组有显著改善;与对照组、假手术组比较,模型组血清IL-1β、IL-18水平显著升高(P 0.05),与模型组比较,金刚藤颗粒治疗组IL-1β、IL-18水平显著降低(P 0.05);与对照组比较,模型组NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1 mRNA水平显著升高(P 0.05),与模型组比较,金刚藤颗粒治疗组NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1 mRNA水平显著降低(P 0.05);模型组NLRP3、ASC、IL-1β、Caspase-1蛋白表达水平显著高于假手术组(P 0.05),金刚藤颗粒治疗组NLRP3、ASC、IL-1β、Cas-pase-1蛋白表达水平较模型组显著降低(P 0.05)。结论金刚藤颗粒对急性盆腔炎模型大鼠具有显著治疗作用,其可能通过抑制NLRP3炎症小体通路发挥免疫作用。     

百合地黄汤抑制NLRP3炎症小体激活改善焦虑性抑郁症模型大鼠海马神经元损伤

目的 从NOD样受体热蛋白结构域3（NLRP3）炎症小体探讨经典名方百合地黄汤抗焦虑性抑郁症的作用机制。方法 50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、文拉法辛组（13.5 mg·kg^-1）,百合地黄汤高、低剂量组（16,4 g·kg^-1）,每组10只。采用28 d慢性束缚应激（6 h）联合皮下注射皮质酮（30 mg·kg^-1）的方法建立焦虑性抑郁症大鼠模型,并从造模第8天起各给药组分别灌胃给予相应药物,正常组和模型组给予等体积蒸馏水,连续给药21 d。采用高架十字迷宫评价大鼠焦虑行为,旷场实验评价抑郁行为,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清及海马匀浆液中炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-6（IL-6）,白细胞介素-18（IL-18）的含量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马NLRP3,凋亡相关斑点样蛋白（ASC）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）蛋白的相对表达量,苏木素-伊红（HE）染色观察海马组织病理形态,免疫荧光法检测NLRP3,ASC,Caspase-1的平均荧光强度,电镜观察神经元超微结构。结果 与正常组比较,模型组大鼠总穿臂次数（TE）,进入高架十字迷宫开放臂比（OE%）,开放臂停留时间比（OT%）及自主活动评分均显著降低（P<0.01）,焦虑和抑郁样行为显著,血清及海马中IL-1β,IL-6,IL-18含量显著升高（P<0.01）,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达显著增加（P<0.01）,NLRP3炎症小体激活,海马神经元明显损伤;与模型组比较,百合地黄汤高剂量组大鼠焦虑、抑郁行为均显著改善（P<0.01）,血清及海马IL-1β,IL-6,IL-18含量均明显降低（P<0.05,P<0.01）,海马NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达显著降低（P<0.01）,海马神经元损伤情况得以缓解。结论 百合地黄汤能够通过抑制NLRP3炎症小体的过度激活改善焦虑性抑郁症神经元损伤。     

淫羊藿苷通过抑制NLRP3炎性小体和Caspase-1通路减轻骨关节炎

目的:考察淫羊藿苷在治疗骨关节炎中的潜在价值,以及淫羊藿苷对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体和半胱天冬酶-1(Caspase-1)的调控作用。方法:本研究通过脂多糖(LPS)诱导大鼠膝关节软骨细胞建立体外骨关节炎模型,通过碘乙酸单钠处理SD大鼠建立体内骨关节炎模型。通过乳酸脱氢酶漏出实验检测细胞毒性,通过MTT实验检测细胞活力。通过qRT-PCR检测NLRP3 mRNA的表达,通过Western Blotting检测NLRP3、IL-1β、IL-18、MMP-1、MMP-13、Collagen Ⅱ、Caspase-1、ASC和GSDMD的蛋白表达。用免疫荧光法和免疫组化法检测软骨细胞和大鼠软骨中的NLRP3表达;番红O/固绿染色评价大鼠软骨病变。结果:与LPS组比较,LPS+ICA组LDH的漏出率、IL-1β、IL-18、MMP-1、MMP-13、NLRP3、Caspase-1、ASC和GSDMD的表达水平明显降低,而Collagen Ⅱ明显升高(P<0.05)。与LPS+ICA+pcDNA3.1-NC组比较,LPS+ICA+pcDNA3.1-NLRP3组的乳酸脱氢酶漏出率及NLRP3炎性小体相关蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,OA组大鼠软骨组织中NLRP3阳性细胞数量显著增加,而OA+ICA组的NLRP3阳性细胞数量明显降低(P<0.05)。与OA组比较,OA+ICA组的NRLP3、IL-1β、IL-18、MMP-1、MMP-13、Caspase-1、ASC和GSDMD的蛋白表达水平明显降低,而Collagen的蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:淫羊藿苷通过抑制NLRP3和Caspase-1信号转导来抑制脂多糖诱导的软骨细胞损伤和细胞焦亡,从而减轻大鼠骨关节炎。     

溃结康对溃疡性结肠炎小鼠NLRP3炎性体基因表达及下游炎性因子影响

目的探讨溃结康对溃疡性结肠炎小鼠NLRP3炎性体及下游炎性因子的影响。方法建立葡聚糖硫酸钠诱导小鼠实验性溃疡性结肠炎(急性期、缓解期)模型,实验分为正常对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶组(0.45 g/kg)、溃结康(12.8、6.4、3.2 g/kg)组。第8天(急性期)及第21天(缓解期)实验结束时,采集结肠组织,量取各组小鼠结肠长度,HE染色观察小鼠结肠病理变化,免疫组化染色法检测结肠组织MPO表达,酶联免疫法检测结肠组织IL-18、IL-33含量变化,实时荧光定量PCR检测结肠NLRP3、ASC、Caspase-1mRNA表达。结果模型组单位结肠长度显著缩短,结肠组织损伤明显,MPO表达显著增加,结肠IL-18,IL-33水平明显升高,NLRP3、ASC、Caspase-1mRNA表达显著上调(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,急性期时,柳氮磺胺吡啶组及溃结康高剂量组单位结肠长度明显增加,MPO表达显著降低,IL-18释放减少,NLRP3及Caspase-1mRNA表达显著下调(P<0.05或P<0.01),同时,溃结康中剂量组IL-18水平也显著降低,NLRP3 mRNA显著下调(P<0.05);溃结康低剂量组Caspase-1mRNA表达明显降低(P<0.05)。缓解期时,柳氮磺胺吡啶组及溃结康高、中剂量组单位结肠长度均明显增加(P<0.05或P<0.01);溃结康高剂量组NLRP3及Caspase-1mRNA表达显著增加,溃结康中剂量组IL18、IL-33含量明显增加,ASC、Caspase-1mRNA表达明显上调,低剂量组IL-33含量也明显增加(P<0.05),NLRP3 mRNA表达上调(P<0.05或P<0.01)。结论溃结康可能通过调节UC小鼠发病不同时期(急性期、缓解期)NLRP3炎性体(NLRP3、ASC、Caspase-1)基因表达及下游炎症因子的释放抑制炎症反应,促进缓解期时结肠黏膜修复。     

蠲痹历节清方抑制NLRP3炎症体抗大鼠急性痛风性关节炎机制研究

目的 观察蠲痹历节清方对急性痛风性关节炎(AGA)大鼠NLRP3炎症体相关蛋白及白介素-1β(IL-1β)表达的影响,探讨蠲痹历节清方防治AGA大鼠可能存在的机制.方法 将50只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白组、造模组,造模组造模成功后随机分成模型组、蠲痹历节清方组、依托考昔组、异甘草素组,并予相应药物干预,模型组及...     

消肿喷剂主药对体外炎症模型小鼠白细胞介素及NLRP3相关蛋白表达影响的研究

目的:研究消肿喷剂促进急性骨骼肌损伤炎症修复的作用机制,及炎症在急性骨骼肌损伤修复过程中的作用机制.方法:采用脂多糖(LPS)诱导C2C12小鼠成肌细胞,建立体外细胞炎性模型,ELISA试剂盒检测C2C12细胞上清中白细胞介素(IL-1β、IL-18)含量,qRT-PCR检测C2C12细胞ASC、Caspase-1、N...     

柴胡加龙骨牡蛎汤对心肌梗死合并焦虑大鼠海马区NLRP3/GSDMD炎性信号通路的影响

目的探讨心肌梗死合并焦虑大鼠海马区NLRP3/GSDMD炎性信号通路变化及柴胡加龙骨牡蛎汤对大鼠海马区炎性损伤的作用效应。方法将60只SD大鼠随机分为假手术组9只、心梗并焦虑组17只、心梗组17只、心梗并焦虑+中药组17只。心梗组采用结扎冠状动脉左前降支方法进行造模;假手术组穿线不结扎;心梗并焦虑组和心梗并焦虑+中药组先采用空瓶刺激方法进行焦虑造模(周期21 d),于造模第15天采用结扎冠状动脉左前降支方法进行心肌梗死造模。心肌梗死造模后第2天,心梗合并焦虑+中药组给予柴胡加龙骨牡蛎汤10 mL/kg灌胃,其余组灌胃等量蒸馏水,均1次/d,连续7 d。灌胃结束后进行心脏超声检查,采用高架十字迷宫实验、旷场实验评价各组大鼠行为学,大脑海马区HE、尼氏染色观察脑神经元病理改变,免疫组化检测大鼠海马区NLRP3、Caspase-1、GSDMD表达情况,Western blot法检测大鼠海马组织中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白表达水平。结果与心梗并焦虑组比较,心梗并焦虑+中药组左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)均明显升高(P均<0.05),左心室舒张末期内径(LVIDd)和左心室收缩末期内径(LVIDs)均明显缩短(P均<0.05),大鼠进入开放臂次数所占比和开放臂停留时间所占比、大鼠水平运动得分和垂直运动得分均明显升高(P均<0.05)。心梗并焦虑组和心梗组大鼠海马区尼氏阳性面积均明显低于假手术组(P均<0.05),心梗并焦虑+中药组明显高于心梗并焦虑组和心梗组(P均<0.05)。心梗并焦虑组和心梗组大鼠海马区NLRP3、Caspase-1、GSDMD表达IOD值和海马组织中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白表达水平均明显高于假手术组(P均<0.05),且心梗并焦虑组GSDMD表达IOD值和NLRP3、Caspase-1、IL-18蛋白表达水平均明显高于心梗组(P均<0.05),而心梗并焦虑+中药组NLRP3、Caspase-1、GSDMD表达IOD值和NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白表达水平均明显低于心梗并焦虑组(P均<0.05)。结论柴胡加龙骨牡蛎汤可能通过调控海马区NLRP3/GSDMD炎性信号通路,抑制心肌梗死合并焦虑大鼠海马区的炎性反应,缓解大鼠焦虑状态。     

基于NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路探讨复方蛇龙胶囊对膜性肾病大鼠的作用

目的:观察复方蛇龙胶囊对膜性肾病大鼠核苷酸结合域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)/白细胞介素(IL-1β)细胞焦亡信号通路的作用机制。方法:SD雄性大鼠分为正常组,模型组,复方蛇龙胶囊高、中、低剂量组,雷公藤多苷片组。给药结束后检测大鼠24 h尿蛋白(24 h-UTP)和血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、总胆固醇(TC)。马松(Masson)染色和电镜观察大鼠病理和足细胞超微结构;ELISA检测大鼠血清IL-1β、IL-18水平;荧光定量PCR和免疫组化法(IHC)检测肾脏组织中NLRP3、 Caspase-1、IL-1β、GSDMD的mRNA和蛋白表达水平。结果:病理显示肾脏纤维化明显;足突融合变宽,肾小球基底膜增厚;与模型组相比较,各给药组TP、ALB、Scr、BUN、TC、24 h-UTP及IL-1β、IL-18水平明显降低(P<0.05),NLRP3、 Caspase-1、IL-1β、GSDMD的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:复方蛇龙胶囊可能通过抑制N...     

木犀草素抑制类风湿关节炎大鼠NLRP3炎性小体活化增强关节骨保护作用研究

目的:考察木犀草素对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠NLRP3炎性小体调节作用,观察木犀草素对动物模型关节骨保护表现。方法:随机选取雌性SD大鼠分为空白组、模型组、木犀草素100mg/kg组(木犀草素组)、木犀草素50mg/kg+MCC95020mg/kg组(联合给药组)。除空白组外,其余各组构建关节炎模型。连续给药5周并测量大鼠足跖容积,免疫组化法检测骨组织内骨保护素(OPG)表达,免疫蛋白印迹法检测足跖内NLRP3、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、RANKL、血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达,ELISA试剂盒检测血浆白介素(IL)-1β和IL-18表达。结果:与模型组比较,木犀草素组、联合给药组大鼠足跖肿胀度显著降低(P<0.01);免疫组化显示木犀草素组、联合给药组骨组织内OPG蛋白表达较高(P<0.01);免疫蛋白印迹显示木犀草素组、联合给药组关节滑膜内NLRP3、Caspase-1、RANKL、VEGF和HIF-1α蛋白表达下调(P<0.01,P<0.05);ELISA显示木犀草素组、联合给药组血浆IL-1β、IL-18表达下调(P<0.01)。结论:木犀草素可抑制类风湿关节炎NLRP3炎性小体的表达,进一步降低足跖内Caspase-1、RANKL、VEGF和HIF-1α蛋白表达并增强骨组织内骨保护素OPG蛋白表达,从而起到骨关节保护作用。     

基于NALP3炎性体的痛风宁对急性痛风性关节炎大鼠抗炎作用量效和时效研究

目的观察痛风宁对急性痛风性关节炎(AGA)大鼠NALP3炎性体及相关炎症因子的影响,探讨其抗炎作用的量效与时效关系。方法将240只SD大鼠随机分为造模组200只和正常组40只。右后踝关节腔内注射尿酸盐混悬液制作大鼠AGA模型,成模大鼠随机分为模型组、秋水仙碱组及痛风宁低、中、高剂量组,每组40只。正常组和模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃,其余组大鼠给予相应药物灌胃干预。首次干预后6、12、24、48 h各组随机取10只大鼠处死,收集右后踝关节液与滑膜组织,采用ELISA、Western blot和RT-qPCR分别检测白细胞介素-1β(IL-1β)、前列腺素E2(PGE2)含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠各时间点IL-1β、PGE2含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,痛风宁中、高剂量组及秋水仙碱组大鼠各时间点IL-1β、PGE2含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达均明显降低(P<0.01,P<0.05);与秋水仙碱组比较,痛风宁中、高剂量组大鼠各时间点IL-1β、PGE2含量及NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达无明显差异(P>0.05),痛风宁低剂量组大鼠明显升高(P<0.01,P<0.05)。结论中剂量痛风宁在下调模型大鼠NALP3、ASC、Caspase-1蛋白和mRNA表达及降低IL-1β、PGE2含量方面作用相对较佳,且首次干预后48 h抗炎作用相对明显。     

火针对脊髓损伤模型大鼠IL-1β、Caspase-3蛋白表达的影响

目的探讨火针对脊髓损伤（SCI）模型大鼠Caspase-3、IL-1β蛋白表达的影响。方法选择SD大鼠80只,随机分为假手术组、模型组、火针组与毫针组,采用改良Allen＇s法建立急性SCI模型,经不同针刺方法干预后,在不同时段取材并通过免疫组化SABC法检测Caspase-3、IL-1β蛋白表达。结果模型组中,SCI大鼠脊髓内IL-1β与Caspase-3的蛋白表达明显增高;两个针刺干预组中,IL-1β与Caspase-3的蛋白表达明显降低,其中火针干预组更为明显。结论火针可降低SCI模型大鼠IL-1β、Caspase-3蛋白表达。     

通腑泻肺方对脓毒症急性肺损伤大鼠NLRP3调控作用的实验研究

目的观察通腑泻肺方对脓毒症急性肺损伤大鼠NLRP3炎性体表达的影响,探索通腑泻肺方治疗脓毒症急性肺损伤的作用机制。方法采用盲肠结扎穿孔法（CLP）复制脓毒症急性肺损伤动物模型。将32只清洁级健康成年雄性SD大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组和治疗组,每组8只。空白对照组麻醉后腹主动脉采血致死;假手术组麻醉后开腹,翻动胃肠后关腹,24h后麻醉并腹主动脉采血致死;模型组于CLP后立即予生理盐水2mL灌胃1次,CLP后6h、12h,再分别给予生理盐水2mL灌胃1次。CLP后24h予麻醉并腹主动脉采血致死;治疗组于CLP后立即予通腑泻肺方中药灌胃1次,CLP后6h、12h。再分别给予通腑泻肺方中药灌胃1次,CLP后24h予麻醉并腹主动脉采血致死。观察各组大鼠的一般表现,ELISA法检测各组血清中Caspase-1含量,Western blot法检测各组大鼠肺组织中NLRP3、ASC含量,RT—PCR法检测肺组织中NLRP3、ASC的mRNA表达量。结果模型组和治疗组肺组织NLRP3、ASC的蛋白水平、mRNA表达水平以及血清中Ccaspase-1水平均显著高于空白对照组和假手术组（P〈0．01）;模型组肺组织NLRP3、ASC的蛋白水平、mRNA表达水平以及血清中Caspase-1水平显著高于治疗组（P〈0．01）。结论通腑泻肺方能够下调脓毒症急性肺损伤大鼠NLRP3、ASC、Caspase-1的表达水平,具有调控NLRP3炎性体合成的作用。     

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??OBJECTIVE To explore the protection mechanism of orthogonal compatibility of puerarin(A),ligustrazine(B), astragaloside IV(C) and catalpolon(D),the main active ingredients from yangyin tongnao granules, on SD rats damaged by ischemic reperfusion injury, and select the optimal combination. METHODS SD rats were randomly divided into sham operation group, model group, orthogonal compatibility group and positive control group. The rat middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was established. The compatibility of components was arranged by L₉(34) orthogonal design. The symptoms of neurological deficit in rats and the pathological changes in hippocampus were observed; TTC staining was used to detect the cerebral infarction volume. IHC was used to evaluate the expression of NLRP3 protein ischemic brain tissue. RT-PCR was used to detect the expressions of ASC, caspase-1, IL-1, mRNA, IL-18 and MMP-9 in the hippocampal of brain tissue. The RESULTS of orthogonal test were analyzed by range analysis. RESULTS The orthogonal combination groups could effectively improve neurological deficits in cerebral ischemia reperfusion injury, reduce infarction volume, inhibit the expression of NLRP3 inflammasome, decrease the expression of ASC, caspase-1, IL-1, IL-18 and MMP-9. The analysis of test results showed that the combination with ligustrazine 100 mg??kg^-1,puerarin 20 mg??kg^-1, astragaloside ?? 80 mg??kg^-1 and catalpol 20 mg??kg^-1 was the superior one. CONCLUSION The main active ingredients combination of yangyin tongnao granules played a protective mechanism on focal cerebral ischemia reperfusion injury rats. Its mechanism might be related to inhibition of NLRP3 inflammasome,down-regulation of ASC, caspase-1, IL-1, IL-18 and MMP-9.