彝药益元化腐汤浸膏对溃疡性结肠炎模型T细胞亚群干预机制研究*

目的研究彝药益元化腐汤调控T细胞亚群介导治疗溃疡性结肠炎的效应机制，为益元化腐汤临床应用治疗溃疡性结肠炎提供科学基础。方法 32只C57BL/6健康雌性小鼠随机分为正常组、模型组、益元化腐汤中剂量（4.05 g·kg-1）和高剂量组（8.1 g·kg-1），每组8只。除正常组，其余以自由饮水的方式给予3%葡聚糖硫酸钠（sodium dextran sulfate，DSS）诱导建立溃疡性结肠炎小鼠模型，每2 d更换1次饮用水，自饮用DSS第1天起，各组按相应剂量灌胃给药，每日1次，连续8 d；采用疾病活动指数（diseases activity index，DAI）和苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）分别评价溃疡性结肠炎症状及结肠组织形态学变化；荧光定量PCR（qPCR）检测淋巴细胞T细胞亚群相关因子转录的相对表达水平；流式细胞术（flow cytometry）检测T细胞亚群中辅助性T细胞1（T-helper 1 cell, Th1）、辅助性T细胞17（T-helper 17 cell，Th17）和调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）的表达水平。结果 与正常组比较，病理模型组小鼠体质量和结肠质量显著下降、结肠长度显著缩短（P<0.05或P<0.01）；与病理模型组比较，益元化腐汤组显著增加小鼠体质量、结肠质量及其长度（P<0.05或P<0.01），改善结肠病理损伤程度；流式细胞术检测结果显示，益元化腐汤药物干预显著下调γδTCR表达（P<0.05），且抑制Th1细胞（CD4+ IFN-γ+ T细胞）、Th17细胞（CD4+ IL-17+ T细胞）绝对数量和比例（P<0.01），然而对Treg细胞（CD4+ Foxp3+ 调节性T细胞）表达无明显影响。qPCR检测结果显示，益元化腐汤显著下调UC小鼠Th17细胞因子IL-17A和转录因子RORγτ mRNA表达（P<0.01）。结论 彝药益元化腐汤可能通过抑制Th17细胞诱导的炎症反应介导治疗溃疡性结肠炎。     

滋阴清热活血方联合激素对系统性红斑狼疮肾纤维化干预机制的研究

目的 研究滋阴清热活血方联合激素对MRL/lpr狼疮小鼠肾纤维化的影响，揭示该方抗狼疮肾纤维化效应机制。方法 将MRL/lpr自发性狼疮小鼠按尿蛋白水平平均分为5组:模型组、醋酸泼尼松组、滋阴清热活血方组、滋阴清热活血方加激素全量组、滋阴清热活血方加激素半量组。药物干预4周后，H＆E染色和Masson染色分别检测狼疮小鼠肾组织病理学改变和肾纤维变化情况；免疫荧光法检测肾脏IgG免疫复合物沉积；Western blot法测定模型肾脏Smad4和Smad7蛋白表达水平。结果 与模型组比较，各治疗组小鼠肾脏病理损伤显著减少；Masson染色结果显示，与模型组比较，滋阴清热活血方组和醋酸泼尼松组胶原沉积减少；与滋阴清热活血方组比较，滋阴清热活血方加激素全量组和滋阴清热活血方加激素半剂量组胶原沉积面积均减少。免疫荧光染色检测结果显示，与模型组比较，滋阴清热活血方组和醋酸泼尼松组肾脏免疫复合物沉积减弱；与滋阴清热活血方组比较，滋阴清热活血方加激素全量和半量组肾脏IgG免疫复合物荧光显著减少。与模型组比较，滋阴清热活血方组、滋阴清热活血方加激素全量组和激素半剂量组肾组织Smad4蛋白显著下降；滋阴清热活血方组、滋阴清热活血方加激素全量组和激素半剂量组肾组织Smad7显著增加，其中，中药联合激素的2组尤为显著。结论 滋阴清热活血方联合激素对MRL/lpr小鼠肾组织肾纤维化具有较好的改善作用，其作用机制可能与抑制Smad4表达、上调Smad7蛋白表达有关，该研究为临床滋阴清热活血方联合激素治疗系统红斑狼疮肾纤维化提供了生物学依据。     

痛风气雾剂皮肤用药毒性实验研究

目的:通过对痛风气雾剂的皮肤用药毒性实验,探讨该药治疗急性痛风性关节炎的皮肤用药安全性,为下一步开展临床前研究,开发安全有效、简便易行的痛风外用制剂提供理论依据。方法:观察痛风气雾剂皮肤用药毒性试验,实验采用健康日本大耳白家兔各24只进行皮肤用药急性毒性试验及皮肤刺激性试验,用30只健康豚鼠进行皮肤过敏试验(致敏接触、激发接触)。结果:痛风气雾剂高低两个剂量组用于完整皮肤及破损皮肤家兔观察7天,全部动物均健康存活,未见毒性反应;痛风气雾剂连续7天给予家兔完整皮肤和破损皮肤区,皮肤刺激反应平均分为0,无刺激性;用于豚鼠皮肤未见过敏反应,致敏发生率为0,全部动物健康存活。结论:痛风气雾剂无明显毒副作用,是一种安全有效、方便易行的治疗急性痛风性关节炎的外用药物,具有临床实用价值,值得进一步开发和推广应用。     

三七总皂苷对巨噬细胞分泌NO、TGF-β_1、MMP-9的影响研究

目的研究三七总皂苷对脂多糖（LPS）诱导RAW264.7巨噬细胞分泌一氧化氮（NO）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及TGF-β1、MMP-9 mRNA表达的影响,在细胞水平探讨三七总皂苷治疗慢性阻塞性肺疾病（COPD）发病过程中气道炎症及气道重建的可能作用机制。方法以LPS激活巨噬细胞构建炎症细胞模型。采用MTT法测定不同浓度三七总皂苷对巨噬细胞活力的影响。分别用10,30,100,300μg/m L浓度三七总皂苷与各组细胞共同孵育,Griess法测定NO释放量,ELISA法检测细胞培养液中TGF-β1、MMP-9的含量,实时荧光定量法检测巨噬细胞TGF-β1、MMP-9 mRNA的表达量。结果 10～300μg/m L的三七总皂苷作用于巨噬细胞24 h后,细胞活性无显著变化;100μg/m L的三七总皂苷可显著抑制LPS诱导巨噬细胞NO、TGF-β1的分泌（P〈0.01或P〈0.05）,明显下调TGF-β1mRNA表达（P〈0.05）;300μg/m L的三七总皂苷可显著抑制LPS诱导巨噬细胞NO、TGF-β1、MMP-9的分泌（P〈0.01或P〈0.05）,明显下调MMP-9 mRNA表达（P〈0.05）。结论三七总皂苷在10～300μg/m L范围内对巨噬细胞无毒性作用,且可抑制巨噬细胞NO、TGF-β1、MMP-9的分泌,下调TGF-β1、MMP-9 mRNA的表达。     

浅论“辛甘化阳”——临床中药学名词术语规范化研究

本文对“辛甘化阳”的概念及其内涵从药物功效、传统临床应用、现代临床应用以及现代基础研究等几方面进行探讨，对临床中药学名词术语规范化研究进行一些探索。     

荜茇醇提物对胰岛素抵抗综合征大鼠模型的防治作用研究

目的 观察荜茇醇提物 (AEPL) 对实验性胰岛素抵抗综合征 (IRS) 大鼠模型的防治作用,探讨其可能的作用机制。方法 采用高脂、高糖、高盐膳食制备 IRS 大鼠模型,喂养4周后预防性给予 AEPL,12周后测定空腹血糖 (FBG)、胰岛素水平 (FINS)、口服葡萄糖耐量、游离脂肪酸 (FFA) 水平、甘油三酯 (TG) 和肿瘤坏死因子-α (TNF-α) 水平,并计算胰岛素敏感指数 (ISI)。结果 AEPL 明显增加 IRS 模型大鼠胰岛素敏感指数,改善糖耐量,降低 TNF-α 水平 (P＜0.05,0.01),防止 FFA、TG 水平的上升 (P＜0.05,0.01)。结论 AEPL 具有改善实验性 IRS 的作用,其机制可能与抑制 TNF-α 水平有关。     

黄芪皂苷Ⅲ通过IFN-γ介导体外免疫调节作用的研究

目的:黄芪皂苷类单体组分免疫调节作用研究主要集中在黄芪甲苷,而其他单体组分研究相对较少,本研究旨在探讨黄芪皂苷Ⅲ(Astragaloside Ⅲ,As Ⅲ)体外免疫调节活性及初步的作用机制.方法:采用丝裂原ConA(刀豆蛋白)、LPS(脂多糖)分别诱导T、B淋巴细胞增殖为细胞模型,3H-TdR掺入法检测黄芪皂苷Ⅲ对T、B淋巴细胞增殖的影响.酶联免疫吸附法(ELISA)测定黄芪皂苷Ⅲ对ConA诱导的小鼠脾脏淋巴细胞产生Th型细胞因子(IL-2,IFN一γ)的作用.结果:黄芪皂苷Ⅲ在10 nM时对ConA诱导的正常小鼠脾脏T淋巴细胞增殖反应具有显著的促进作用(P＜0.01);黄芪皂苷Ⅲ(10nM,100nM)对LPS诱导的正常小鼠B淋巴细胞增殖反应亦有一定的促进作用(P＜0.05);黄芪皂苷Ⅲ在10 nM时显著促进ConA诱导的小鼠脾脏淋巴细胞IFN-γ的产生(P＜0.05),然而对IL-2的分泌无明显的影响.结论:黄芪皂苷Ⅲ可能通过IFN-γ介导免疫调节活性,这一作用机制可能与黄芪临床应用于抗肿瘤免疫、扶正祛邪、缓解化疗药物副作用密切相关.     

五味清浊散对3T3-L1细胞TNF-α浓度和基因表达的影响

目的:观察五味清浊散(WQS)对脂肪细胞血糖浓度和TNF-α水平及其mRNA其表达的影响。方法:药物处理48h后,采用GOD-POD法检测3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)模型培养液中葡萄糖浓度,ELISA法检测TNF-α浓度,RT-PCR法检测TNF-α基因mRNA的表达。结果:WQS使脂肪细胞IR模型培养液葡萄糖、TNF-α浓度降低,并下调TNF-α基因mRNA的表达。结论:WQS有显著的降糖作用,并下调TNF-α水平。     

五味清浊散乙醇提取物镇痛镇静作用研究

目的:研究五味清浊散乙醇提取物(WWQZSAE)的镇痛、镇静作用。方法:采用小鼠热板刺激法、光热尾痛法、醋酸扭体法进行镇痛作用研究;采用小鼠自主活动计数法观察镇静作用。结果:WWQZSAE ig能提高热板法和光热尾痛法试验小鼠痛阈值;减少由醋酸引起的试验小鼠扭体反应次数;能明显减少小鼠自主活动次数。结论:WWQZSAE有明显的镇痛镇静作用。     

蠲痹颗粒抗炎作用及机制的研究

目的:研究蠲痹颗粒抗炎作用的药效学,揭示其抗炎作用的机制,阐明吴氏学派应用扶阳理论治疗痹证(风寒湿痹)临床中药优效的科学基础。方法:建立角叉菜胶致大鼠急性足跖肿胀炎症模型和棉球异物植入诱导大鼠肉芽组织增生慢性炎症模型,随机分为模型对照组、阳性药地塞米松组(2.5 mg·kg-1)、蠲痹颗粒低、中、高剂量组(5.85,11.70,23.40 g·kg-1)。药物干预后,检测蠲痹颗粒灌胃给药对急、慢性炎症反应的影响;建立牛Ⅱ型胶原诱导的DBA/1小鼠胶原关节炎(collagen induced arthritis,CIA)模型,石蜡切片HE染色分析CIA小鼠关节炎病理损伤程度,采用流式微珠阵列法(Cytometric Bead Array,CBA)检测胶原诱导的脾淋巴细胞炎症因子白介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-17A(IL-17A)表达水平。结果:与模型组比较,阳性药组、蠲痹颗粒高剂量组对大鼠角叉菜胶所致足跖肿胀和棉球异物植入引起的大鼠慢性炎症性肉芽组织增生均有显著抑制作用,差异有显著性意义(P<0.05),同时明显改善CIA小鼠局部关节炎的症状,减轻炎症细胞浸润。与正常对照组比较,CIA模型脾淋巴细胞IL-6,TNF-α,IL-17A表达水平显著增加(P<0.01),蠲痹颗粒药物干预后,IL-17A的产生水平显著下调(P<0.05),对炎症因子IL-6,TNF-α无明显影响。结论:蠲痹颗粒具有显著的抗炎作用,其作用机制与抑制促炎因子IL-17A产生有关。