红景天苷和脑源性神经营养因子与神经干细胞共移植对致鼠神经干细胞定向分化的研究

目的：探讨红景天苷和脑源性神经营养因子（BDNF）、神经干细胞（NSCs）共移植对致鼠NSCs定向分化影响。方法：将戊四氮致大鼠分为模型组、NSCs组、NSCs＋BDNF组和NSCs＋BDNF＋红景天苷组。取新生大鼠海马组织,将培养的NSCs与BDNF＋红景天苷＋BDNF和基础培养基分别移植至致鼠海马组织中,苏木精-伊红染色及免疫组化检测不同时间点5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）、谷氨酸脱羧酶（GAD65）阳性细胞数,并观察大鼠行为学改变。结果：NSCs＋BDNF＋红景天苷共移植组与其他组比较,各时间点BrdU、GAD65阳性细胞数均增多（P〈0.05）。第3周开始,大鼠癫发作次数最少（P〈0.05）。结论：BDNF与红景天苷联合有利于神经干细胞向γ-氨基丁酸能神经元分化。两者联合移植至致鼠后能减少大鼠的癫发作次数。     

腺病毒载体Ad-BDNF-EGFP构建及其在神经干细胞中的表达

摘要 目的 研究腺病毒载体Ad-BDNF -EGFP的构建及在神经干细胞（NSCs）中的表达。方法 通过RT-PCR从在大鼠的海马中获得BDNF基因,通过基因克隆以及HEK293包装,获得了含增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组腺病毒表达载体pAd-BDNF-EGFP,将其感染原代培养的神经干细胞,观察EGFP及BDNF两种基因的表达,镜下测定转染率,并检测RT-PCR产物,证实BDNF的存在。转染后的神经干细胞经G418筛选,抗性细胞传代扩增后获得成功转染BDNF基因的NSCs克隆。结果 荧光显微镜下可见感染后的NSCs表达EGFP而发出绿色荧光;通过RT-PCR证明感染后的NSCs具有表达BDNF的能力;用ELISA鉴定细胞上清中分泌的BDNF, 72h的含量达到最高值,为12.78ng/ml;证明通过构建病毒的感染可以使神经干细胞获得分泌BDNF的能力,且EGFP基因可作为神经干细胞移植研究中良好的示踪剂。结论 腺病毒病毒介导EGFP基因及BDNF基因在大鼠胚胎神经干细胞中成功表达,为应用以神经干细胞直接作为基因靶细胞,介导基因治疗中枢神经系统疾病莫定了基础。     

大鼠脑损伤后经枕大池及立体定向脑内移植神经干细胞的对比研究

目的 探讨大鼠脑损伤后,将神经干细胞（neural stem cells,NSCs）经枕大池移植到蛛网膜下腔及立体定向移植到脑内,观察神经功能恢复情况。方法 体外培养的NSCs取自胎鼠皮层,采用Feeney自由落体脑创伤模型制成大鼠脑损伤模型,伤后24小时将NSCs经枕大池移植到蛛网膜下腔及经立体定向移植到脑内。伤前24小时、伤后24小时及1、2周行动物运动神经功能评分。结果 接受NSCs移植的两组大鼠神经运动功能评分均较损伤对照组明显提高（P〈0．05）,两移植组大鼠神经运动功能评分无明显差别。结论 经枕大池移植的NSCs具有远距离迁移能力,并能像脑内移植一样明显有助于大鼠神经运动功能的恢复。     

神经干细胞移植于慢性癫痫鼠海马CA3区对其癫痫发作影响的研究

目的 研究神经干细胞(neural stem cells,NSCs)移植到慢性海人酸(kainic acid,KA)癫痫鼠海马CA3区后对大鼠癫痫发作的影响.方法 用KA脑审注射制作慢性癫痫模型.将原代培养的、EGFP标记的NSCs移植到慢件癫痫鼠的海马CA3区.分别在移植后第2周、第4周、第8周和第12周连续进行7天观察大鼠癫痫发作频率和程度,在移植后第10周进行发作间期右侧海屿深部脑电监测.然后取脑冰冻切片,在倒置荧光显微镜下直接观察移植细胞的存活和迁移,用免疫荧光染色观察移植细胞分化情况,Timm's染色观察海马齿状回异常苔状纤维发芽.结果 移植后12周仍有大量移植细胞存活(65,045.00±881.72).NSCs在移植区以胶质细胞分化为主,在齿状回和海马各区以神经元分化为主,γ-氨基丁酸(GABA)能神经元在齿状回门区和海马CA3区分化比率较高.NSCs移植后第4周移植组癫痫鼠的发作次数与对照组相比开始减少,Timm's染色计分和发作程度也有明显改善,两组发作问期脑电图尖、棘波在每个观察期的发放次数分别是3.83±4.96和27.16±21.08,,结论 将NSCs移植到慢性KA癫痫鼠的海马CA3区,移植细胞不仪能够长期存活、迁移到海马齿状回的各区,而且能够分化为神经元和神经胶质细胞,特别是GABA能神经元,同时还能够抑制齿状回颗粒细胞的苔状纤维发芽,从而减少癫痫发作次数,减轻癫痫发作程度.     

神经干细胞移植促进脑出血大鼠神经功能恢复的实验研究

目的探讨脑内定向移植神经干细胞(NSCs)治疗脑出血的可行性和机制。方法采用在成年大鼠中立体定向纹状体内注入新鲜自体血液制作实验性脑出血模型,术后1d采用立体定向将在体外扩增、纯化并经BrdU标记的神经干细胞移植入脑出血部位,通过神经功能缺损评分来观察移植后大鼠神经行为学改善情况,并通过双标GFAP、NeuN、BrdU免疫组化来检测移植入脑的NSCs。结果移植的NSCs迁移至血肿周围区,并分化为神经元(≈10%BrdU阳性细胞)和星形胶质细胞(≈75%);与对照组比较,NSCs移植组在移植后1周有更好的神经功能缺损评分,而且此疗效可维持长达8周。结论移植的NSCs可在脑出血的大鼠脑中存活、迁移,并促进功能恢复。立体定向移植神经干细胞可改善实验性脑出血大鼠的神经功能。     

神经干细胞移植治疗大鼠创伤性脑外伤的实验研究

目的 将神经干细胞(NSCs)移植于大鼠创伤性脑损伤部位,观察NSCs对创伤性脑损伤的治疗作用.方法 首先进行NSCs的体外培养,同时采用5-2-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记,脑外伤模型采用自由落体撞击大鼠左侧大脑皮质运动感觉区来制作,脑外伤后24h内移植NSCs,分别于脑外伤前、脑外伤后1、2、3周时行神经运动行为学评分(NMFE)和免疫组织化学染色检测BrdU、巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷酯(GalC)蛋白表达和TUNEL原位杂交染色,经计算机图像分析系统处理.结果 大鼠自由落体撞击伤后,右下肢神经运动功能障碍明显.神经运动行为学评分在第1周时,实验组与对照组无明显差异,而在第2、3周时,实验组的评分明显低于对照组,有统计学意义(P＜0.05).第2、3周时实验组NSE、GFAP和GalC染色阳性细胞数要多于对照组,nestin染色在第1周时表达最高,而后逐渐下降.BrdU阳性细胞在损伤灶中心区最多,在损伤灶的远隔部位也有少许发现,而TUNEL染色则对照组明显比NSCs组高,有统计学意义(P＜0.05).结论 脑外伤移植NSCs可以在损伤区存活、增殖及分化,并在损伤的远隔部位有少许NSCs迁移、分化.NSCs移植有利于大鼠脑自由落体撞击伤后期的功能恢复.     

心肌营养素1修饰的神经干细胞移植对癫(癎)持续状态大鼠海马损伤及苔藓纤维发芽的影响

目的 观察心肌营养素1(CT1)修饰的神经干细胞(NSCs)移植到癫(癎)持续状态(SE)大鼠海马后的存活、迁移和分化情况,探讨CT1-NSCs移植对海马神经元损伤及苔状纤维发芽(MFS)的影响.方法 建立氯化锂-匹罗卡品致SE大鼠模型,随机分为CTI-NSCs移植组、单纯NSCs移植组、模型组和正常对照组,每组18只.各组再分为移植后1、4、8周3个时间点,每个时间点6只.共聚焦免疫荧光显微镜下观察移植的NSCs在脑内存活、分化及迁移情况;Nissl染色观察海马神经元形态并计数CA1区神经细胞数;Timm染色检测海马齿状回MFS形成.结果 (1)移植后4周及8周,CT1-NSCs移植组双标阳性细胞数量明显多于单纯NSCs移植组,前者可见神经细胞向周围迁移,后者未见明显迁移现象.(2)SE后大鼠CA1区神经细胞数随时间推移进行性减少,CTI-NSCs移植组细胞数(移植后1、4,8周分别为68.85±11.49、60.89±12.17和51.51±13.34)多于单纯NSCs移植组(67.92±10.78、42.56±11.47和30.49±10.12),4、8周时差异有统计学意义(t=4.650、5.334,P<0.05).(3)SE后大鼠齿状回内分子层可见MFS形成,且MP3评分随时间推移进行性增高;移植后1、4,8周时CT1-NSCs移植组MFS分值(0.77±0.04、2.48±0.89和2.39±0.82)明显低于单纯NSCs移植组(1.12±0.62、3.17±0.64和3.88±0.51,t=6.059、9.511、9.728,P<0.05).结论 CT1能够促进NSCs在SE大鼠脑内存活、迁移和分化,CTI-NSCs移植对SE大鼠海马损伤有修复作用,并可抑制海马MFS形成.     

发育期癫大鼠移植骨髓源性神经干细胞对海马BDNF和bFGF表达的影响

目的将骨髓源性神经干细胞(BMSCs)移植到发育期癫大鼠海马区,观察大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)表达的变化。方法选择21日龄发育期大鼠,分离大鼠骨髓基质细胞,在特定条件下培养使其诱导分化为神经干细胞(NSC)。建立戊四氮(PTZ)点燃癫大鼠模型,将BMSCs经侧脑室注射移植至癫大鼠海马区;侧脑室注射磷酸缓冲液(PBS)作为对照。分为4组(均n=8):对照组(无癫发作),PTZ致组(癫造模,无治疗),假手术组(癫+PBS侧脑室注射),治疗组(癫+NSC侧脑室注射)。于3、7和14 d处理后用免疫组化法检测大鼠海马区BDNF和bFGF表达。结果致组大鼠海马区(齿状回、CA1区)BDNF和bFGF表达较对照组增加(P0.05),治疗组海马区(齿状回、CA1区)BDNF和bFGF表达较假手术组也有所增加(P0.05)。结论 BMSCs移植可以增加PTZ致大鼠海马BDNF和bFGF表达,从而发挥对癫后脑损伤的保护作用。     

脐血干细胞海马移植对VD大鼠脑内Ach及AchE活性的影响

目的观察海马移植脐血干细胞对血管性痴呆(VD)大鼠脑内Ach含量及AchE活性的影响。方法分离正常分娩胎儿的脐带血单个核细胞,以贴壁培养法得到间质干细胞(MSCs),采用RT-PCR方法检测Nestin及musashi-1。制作VD大鼠模型,8～10d后行脐血干细胞海马移植。移植4周后,检测大鼠的学习记忆能力,并检测其脑内乙酰胆碱(Ach)含量及乙酰胆碱脂酶(AchE)活性。结果脐血干细胞在分离后48h高表达Nestin及musashi-1;海马移植脐血干细胞4周后,治疗组与模型组比较,Ach含量及AchE活性明显升高(P<0.01),大鼠学习记忆能力增强。结论脐血中表达神经干细胞(NSCs)的标志物,海马移植脐血干细胞能明显改善VD大鼠胆碱能系统的功能,调节脑内Ach生理代谢,增强学习记忆能力,从而达到治疗VD的目的。     

神经干细胞移植治疗缺氧缺血性脑损伤的实验研究

目的 研究神经干细胞移植治疗缺氧缺血性脑损伤的可行性。方法 取孕龄为12－16天的母鼠，从胎脑中分离神经细胞，进行培养、鉴定。用出生7天的SD大鼠的新生鼠制作缺氧缺血性脑损伤的动物模型，7天后接受神经干细胞移植（移植组，n＝16只），同时设置对照组，只注射磷酸缓冲液（对照组，n=8只），8－10周后，作Y迷宫实验检测大鼠的学习能力和记忆能力。取脑组织作免疫组织化学检查。结果 从大鼠胎脑中成功培养出神经干细胞，培养条件下呈悬浮状态生长，形成神经球，绝大多数的细胞表达神经干细胞的标志物神经巢蛋白（nestin）。接爱神经干细胞移植组大鼠的学习能力、记忆能力和对照组相比，有明显提高，差异具有显著性（P＜0.05）。接受神经干细胞移植大鼠组织中可见存活的移植细胞，并和宿主脑组织融合在一起。结论 在体外培养条件下，可从胎脑组织中培养出神经干细胞，移植到缺氧缺血性脑损伤大鼠脑内后，细胞与宿主的脑组织融合在一起，动物的学习、记忆能力有改善。移植神经干细胞是治疗缺氧缺知性脑损伤的有效方法之一。     

Proton magnetic resonance spectroscopy and intracranial tumours: Clinical perspectives

Proton magnetic resonance spectroscopy (1H-MRS) was applied to characterize intracranial tumours of different hystological types. Seventy patients with intracranial neoplasms were studied before receiving surgery, radiotherapy or chemotherapy. All tumours were characterized by reduced or absentN-acetylaspartate and increased signal from choline-containing compounds. Distinctive patterns were observed only for primitive brain neoplasms; high-grade gliomas were differentiated from low-grade ones by higher levels of choline-containing compounds. The metabolic aspects of metastatic lesions were similar to high-grade gliomas. These results, together with the limitations of¹HMRS and future applications are reviewed.     

金尔伦(盐酸纳洛酮)治疗急性重型脑外伤的临床研究

目的：探讨金尔伦（盐酸纳洛酮）在急性重颅脑外伤中的运用效果及其机制,方法:146列急性重型颅脑损伤病人随机分成金洋伦治疗组（n=75)和对照组（n=71),观察治疗早期病人生命体征,颅内压,头颅CT变化和远期疗效,以及治疗前后血,脑脊液中β－内肽变化情况,结果,金尔伦治疗组早期病人呼吸循环较快恢复稳定,呼吸异异常（29．3％）,心律异常（30．7％）,及伤后1周颅内压显著升高（20％）和重度脑水肿者（20％）均较对照组明显减少（P＜0．01）,金尔伦组1周后意识;转清醒率（54．7％）及伤后3个月恢复良好率（42．7％）,显著高于对照组（P＜0．05）,重残及死亡率（37．3％）明显减少（P＜0．05）,金尔伦组病人β－内啡肽下降程度及速度较对照组显著加快（P＜0．01）,结论：金尔伦可以降低急性重型颅脑外伤病人颅内压的升高幅度,缩短昏迷时间,降低伤残率,促进病人神经功能恢复,改善预后,其机制可能是拮工抑制伤后β－内啡肽的释放。     

脑梗死患者脑白质病变及其危险因素

目的 探讨脑梗死患者脑白质病变(white matter lesions,WML)患病情况及其危险因素.方法 采用多中心横断面研究和病例-病例对照研究.收集全国12家医院2004年5月至12月连续就诊的1～6个月内脑梗死患者720例的临床资料.分别对头MRI显示的脑梗死部位、大小、血管分布、血管类型做出判断,用年龄相关性白质改变评分法(Age-Related White Matter Changes Scales,ARWMC)测量脑白质病变,阅片者不了解患者的临床资料.采用Logistic回归检验独立危险因素.结果 MRI图像质量完好700例[平均年龄(59.93±9.86)岁,男/女为481/219],WML患病率77.4%,随年龄增长患病率和病变严重程度增加.额叶病变最多,程度最重.Logistic回归显示高龄(OR 1.09,95% CI 1.067～1.114)、舒张压升高(OR 1.039,95% CI 1.018～1.06)、基底节梗死(OR2.244,95% CI 1.609～3.708)与WML存在独立相关.结论 脑梗死患者WML普遍存在.病变以额叶最明显.高龄、舒张压升高、基底节梗死是发生WML的独立危险因素.     

The distribution of normal brain water content in Wistar rats and its increase due to ischemia

The aim of this study was to describe the normal distribution of the water content in several regions of the rat brain and furthermore to determine if global ischemia results in a variable increase in water content in these regions. Water content was determined in 40 regions: in 8 unaffected brains by gravimetry and in 9 unaffected brains by estimation of the wet/dry weight ratio. In addition, 6 rats underwent 6 h of moderate global brain ischemia in order to evaluate the sensitivity of the investigated brain areas to develop a cytotoxic brain edema. The impermeability of the blood-brain barriers to proteins was evaluated by staining with Evans blue. Physiological differences in water content between the several brain regions ranged from 72.57 ±0.77% (mean ± S.D.) in the medulla oblongata to 84.83 ± 0.52% in the hypothalamus. Generally, the water content of the grey matter was higher than that of the white matter and increased from the frontal to the occipital and from the parietal to the basal cortex. Even adjacent cortical regions showed differences in the amount of brain water of up to 3.41%. In the ischemic animals, the impermeability of the blood-brain barrier to proteins was not compromised, but an increase in the amount of brain water was found in the frontoparietal cortex of 1.17 ± 0.37% and hippocampus of 1.49 ± 0.39% (P < 0.05). This ischemic increase in the brain water content was small in comparison to the normal variance in regional brain water content. Similar results were obtained by determining the wet/dry weight ratio and by gravimetry. Gravimetry led to more consistent results. In conclusion, the study shows great differences in normal water content between the several brain areas in comparison to an only slight increase of water content due to the development of cytotoxic brain edema. The determination of an early state of an increased brain water content requires an adequate and differentiated measurement of different brain areas. The gravimetry fulfills this demand.     

早期应用纳络酮治疗急性重型颅脑外伤对照观察

目的　探讨早期应用纳络酮对急性重型颅脑外伤的影响。方法　对 95例重型颅脑损伤病人随机分成纳络酮 (NLX)治疗组 (n =48)和对照组 (n =47) ,观察治疗早期病人生命体征、颅内压、头颅CT征变化和远期疗效 ,进行统计学分析。结果　纳络酮治疗组病人呼吸循环较快恢复稳定 ,呼吸异常 ( 2 9 2 % )和心律异常 ( 3 1 3 % )明显减少 (P <0 0 1)。伤后 1周内NLX组病人颅内压显著升高和重度脑水肿者较对照组明显减少 (P <0 0 1)。NLX组治疗 1周后意识转清醒率( 5 4 2 % )高于对照组的 40 4% (P <0 0 5 ) ,伤后 3个月恢复良好率显著高于对照组 ,重残率明显减少 (P <0 0 5 )。结论　早期大剂量运用纳络酮可以降低重型颅脑外伤病人颅内压的升高幅度 ,缩短昏迷时间 ,降低伤残率 ,促进病人神经功能恢复。     

Alterations in cat cerebrocortical capillary morphometrical parameters following K+-induced cerebrocortical swelling

Summary Histochemical, electron microscopic, and morphometrical techniques were employed in the determination of the effects attributed to K⁺-induced cerebrocortical swelling on cat cerebrocortical capillary diameter, length, surface area, volume, and minimal intercapillary distance.Bilaterally exposed and intact temporoparietal cerebral cortices of 4 conditioned adult cats were simultaneously superfused with isotonic, artificial CSF containing 3.5 mM K⁺ (control) and 54 mM K⁺ (experimental) for 1 h at 37°C with monitoring of systemic vital function, hematocrit, arterial blood gases, and determination of cerebrocortical tissue water content.The mean values for cerebrocapillary diameter were 5% (P<0.05) greater in swollen tissues when compared with comparable mean values determined for controls. The values for minimal intercapillary distance determined from control and experimental animals plotted as relative frequency histograms represented two distinct populations (P<0.0005). The significance of altered capillary morphometric parameters are discussed in relation to K⁺-induced cerebrocortical swelling.     

颅脑损伤术后并发脑梗死的临床分析

目的探讨颅脑损伤术后脑梗死的发生机制及治疗方法。方法回顾分析24例颅脑损伤术后病人发生脑梗死的临床资料。结果保守治疗19例,开颅减压5例,死亡7例。结论颅脑损伤后如手术指征明确则须及时手术。术后注意病情变化采取综合治疗措施。应积极保持脑灌注压、维持血压及血氧,降低颅内压,改善脑血管痉挛,早期扩管改善微循环,有利于降低死残率,改善预后。     

亚低温治疗大鼠缺血性脑水肿研究

目的研究亚低温对延迟时间窗再灌注的局灶脑缺血大鼠缺血性脑水肿的治疗作用。方法 SD雄性大鼠96只,线栓法制作大脑中动脉闭塞模型后随机分为缺血3 h组、缺血6 h组、缺血9 h组(每组各30只),分别在造模3 h、6 h和9 h后拔出线栓,使大脑中动脉再灌注。各缺血组按照再灌注后是否给予亚低温治疗及亚低温持续时间分为常温、亚低温3 h和亚低温5 h三个亚组,每个亚组有10只大鼠。另设假手术组6只。缺血组大鼠在再灌注24 h后处死取脑,假手术组在术后24 h处死取脑,干-湿重法测定各组缺血侧脑组织含水量并进行比较。结果与假手术组比较,缺血组缺血侧脑组织含水量明显增高。缺血3 h组中3 h亚低温和5 h亚低温亚组的缺血侧脑组织含水量与缺血3 h常温组比较,差异有统计学意义(79.39%±2.44%vs82.16%±1.50%,P0.05;79.20%±1.55%vs 82.16%±1.50%,P0.05)。其余各缺血组中经过亚低温治疗的大鼠与常温亚组的脑组织含水量无统计学差异。结论亚低温可减轻缺血早期(3 h)再灌注的脑组织水肿,保护缺血脑组织,而对晚期(6 h和9 h)再灌注的缺血性脑水肿无论亚低温时间长短均无明显保护作用。     

急性脑出血后灶周脑组织水通道蛋白-4的表达

目的 了解急性脑出血后灶周脑组织水通道蛋白-4（AQP-4）的表达.方法 56例急性脑出血患者采用外科手术治疗,病理标本均为手术过程中破损的脑组织,经AQP-4免疫组化染色,测定AQP-4表达量.结果 急性脑出血早期灶周脑组织 AQP-4含量明显升高.结论 AQP-4参与了人类急性脑出血脑水肿的形成.     

颅脑损伤后AQP-4在脑组织中表达与脑水肿的关系

目的探讨水通道蛋白-4（AQP-4）在急性颅脑损伤早期脑水肿发生中的作用。方法应用免疫组织化学方法检测人脑组织中AQP-4的表达。创伤组标本取自28例急性颅脑损伤患者急诊开颅血肿清除时所获挫伤灶周围脑组织；对照组取自8例原发性癫痫患者手术切除的相对正常脑组织。结果急性颅脑损伤后早期挫伤灶周围脑组织有明显的脑水肿发生，AQP-4的表达水平明显高于对照组（P〈0．01），且其表达主要见于小血管及神经胶质细胞。结论AQP-4表达的早期上调与急性颅脑损伤后脑水肿的发生有密切的关系。