饮酒与颅内动脉瘤关联的孟德尔随机化研究

目的探讨饮酒与颅内动脉瘤(intracranial aneurysm,IA)发病的关系。方法选取本院接诊的421例未破裂IA(unruptured intracranial aneurysm,UIA)患者为观察组和425例非IA患者作为对照组。收集研究对象的一般人口学情况、病史、行为因素和体格检查,并采集外周血3ml进行遗传易感性检测。采用孟德尔随机化方法(mendelian randomization,MR),以乙醇脱氢酶-1B基因(alcohol dehydrogenase-1B,ADH1B)的功能性突变点rs1229984作为工具变量,分析饮酒与UIA的关系。结果 ADH1B(rs1229984)的基因型在不同的年龄、性别、体型、糖尿病史、高血压史、吸烟的人群中的分布差异无统计学意义(P0.05);基因型变异与UIA的发生比较差异无统计学意义(P0.05);是否饮酒、不同饮酒量人群中基因型的分布差异有统计学意义(P0.05)。因而rs1229984符合作为工具变量的条件。应用Logistic回归模型分析,结果显示是否饮酒、适量饮酒及过度饮酒与UIA无相关关系(OR=0.95~1.18,P0.05);MR法分析结果显示与不饮酒相比,饮酒、适度饮酒、过度饮酒与IA也无相关关系(OR=0.26~4.01,P0.05)。结论饮酒与IA的发生之间不存在具有统计学意义的关联。     

自体脂肪干细胞移植脑冻伤大鼠脑内的作用

目的:脂肪干细胞来源于成脂细胞,取材容易,已经成为干细胞研究一个新的方向.观察脂肪干细胞移植脑冻伤大鼠的脑组织局部组织学变化以及神经行为学变化.方法:实验于2006-01/2007-08在中南大学湘雅医院神经病学实验室完成.①实验材料:SD大鼠,雌雄不限,体质量300 g左右,由中南大学湘雅医学院动物学部提供.实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:体外培养并传代SD大鼠脂肪干细胞,并用BrdU标记.制作大鼠的脑冷冻伤模型,实验组在冷冻伤动物脑内移植脂肪干细胞,对照组在冷冻伤动物脑内移植培养基,假手术组仅行颅骨开窗,每组15只.③实验评估:分别在移植细胞后1,3,5,7,14,30 d对实验动物进行NSS神经行为学评分,并制作脑组织切片,行免疫荧光染色检测BrdU阳性细胞.采用Tunel染色检测凋亡细胞,脑组织RT-PCR检测血管内皮生长因子、脑源性神经营养因子等因子mRNA表达.结果:①与对照组相比,实验组大鼠在3～14 d NSS神经行为学评分降低(P < 0.05).②免疫荧光检测显示,Brdu标记的脂肪干细胞在大鼠脑组织内存活并且迁移.③Tunel法检测显示,3 d后实验组凋亡细胞数目明显少于其他组.④RT-PCR检测显示,与其他两组比较,移植脂肪干细胞的大鼠脑组织中血管内皮生长因子、脑源性神经营养因子表达更高.结论:脂肪干细胞可以在中枢神经系统中存活,并分化为神经元样细胞,它可以引起血管内皮生长因子、脑源性神经营养因子等因子的高表达从而减少细胞凋亡,加速神经功能修复过程并达到保护脑组织的目的.     

人类室管膜瘤中肿瘤干细胞的实验研究

【目的】探讨人类室管膜肿瘤中肿瘤干细胞的存在及意义。【方法】术中取室管膜肿瘤组织,接种于含生长因子的无血清培养基中培养,使其中的脑肿瘤干细胞增殖,并进行有限稀释实验确定肿瘤干细胞比例及增值能力;将所得脑肿瘤干细胞接种于含血清培养基,观察其分化。利用细胞免疫荧光及组织免疫组化法检测脑肿瘤干细胞CD133的表达。【结果】在脑室管膜肿瘤中,只有大约0.82%的细胞能在无血清培养基中存活并悬浮生长,增殖形成克隆性脑肿瘤干细胞球;接种于含血清培养基中后可贴壁分化。体外培养中脑肿瘤干细胞表达神经干细胞的特异性标志物CD133。【结论】室管膜肿瘤组织中存在极少数的脑肿瘤干细胞（大约为0.82%）。     

三种神经细胞黏附分子在人脑星形细胞瘤中表达的差异

目的了解三种神经细胞黏附分子（120kD、140kD、180kD）在不同级别人脑星形细胞瘤中表达的差异及相关性。方法针对三种神经细胞黏附分子分别设计引物，对54例标本进行了PT-PCR、免疫组织化学和病理分级，寻找三种分子在RNA和蛋白质水平上的表达规律。结果三种mRNA中仅140kD在星形细胞瘤中存在表达下调，但在不同病理分级的组间无统计学差异；神经细胞黏附分子主要分布在胞质和胞膜，随着肿瘤恶性程度的增加，神经细胞黏附分子的合成量亦明显下降。结论在三种mRNA中140kD的作用最为关键，神经细胞黏附分子的表达程度可以作为星形细胞瘤病理分级的一个重要指标。     

Willis环前部重要穿通支的显微解剖学观察

目的 对Willis环前部动脉的重要穿通支进行显微解剖观察,为临床手术提供依据.方法 在手术显微镜下模拟翼点入路,通过鞍区手术间隙对15具成人尸头Willis环前部动脉的重要穿通支进行观测.结果 垂体上动脉起源于颈内动脉的眼动脉段,有单支型和多支型,主要分布至漏斗、视交叉和视神经.Heubner回返动脉为大脑前动脉发出的穿通动脉中最粗大的血管,起源部位、行程及数量变异大.Heubner回返动脉起点范围依次为:大脑前动脉A2段、前交通动脉段、A1近1/3段,A1段的中1/3段未见回返动脉.乳头体前动脉是后交通动脉最大最恒定的分支,分布于乳头体、大脑脚、动眼神经包绕的三角区域.脉络膜前动脉和后交通动脉的穿通支之间存在共同分布范围,且二者之间有着一定的互补性.结论 熟悉Willis环前部动脉穿通支的显微解剖,保护好穿通支是避免该区域临床手术严重并发症的关键.     

颅脑损伤合并颈椎损伤的诊治

目的总结对颅脑损伤合并颈椎损伤病人的诊治经验。方法回顾性分析46例颅脑损伤合并颈椎损伤病人的临床资料。结果术后生存42例，死亡4例。颈椎损伤病人早期漏诊5例，因未及时行颈椎X-线平片或CT检查，致死亡1例。截瘫1例。颅骨牵引继发硬膜外血肿或原血肿加大者4例，新增血肿多在颅骨骨折处，而颅骨骨折多因入院未行CT骨窗扫描漏诊或被忽略，致死亡1例。吸取上述经验后，对5例颅颈复合伤病人一经确诊即与骨科同台早期手术。结论对颅颈复合伤病人，早期行颈椎CT、X-线平片检查及头颅CT骨窗扫描可减少颈椎损伤及颅骨骨折漏诊率。早期脑外科与骨科同台手术，可减少并发症。     

大鼠脂肪干细胞的培养及向神经细胞的定向分化

目的 从大鼠脂肪组织中分离出脂肪干细胞(Adsc),并通过体外培养观察其在形态、生长方式以及贴壁率、生长曲线等方面的生物学特征,以及其向神经细胞方向分化的能力.方法 取SD大鼠的腹股沟和腹膜后脂肪.分离体外培养ADSC,观察形态并进行传代.取第3代细胞测定其贴壁率、MTT比色法描绘生长曲线.免疫荧光法鉴定干细胞标志物CD44.通过两步诱导法诱导ADSC向神经细胞方向分化,免疫荧光法检测分化后细胞NSE、GFAP的表达情况.在分化过程中,用免疫组化检测Nestin的动态变化,验证ADSC分化与神经干细胞的关系.结果 从大鼠的脂肪组织中可成功提取ADSC,在含血清培养中能够连续传代并稳定增殖.而且ADSCs强烈表达CD44.经诱导剂诱导后,大部分ADSC分化表达NSE,而未见GFAP的表达.分化过程中,Nestin 表达水平经统计学分析后呈逐渐下降趋势.结论 ADSC具有强大的扩增能力和定向分化为神经元的生物学特性,分化后在形态、表型同时体现出了显著变化,可以成为治疗神经系统损伤、退行性疾病的较为理想的成体干细胞.     

半椎板入路显微治疗椎管肿瘤

【目的】探讨单侧半椎板入路在显微手术治疗椎管内髓外硬膜下肿瘤中的应用。【方法】经单侧半椎板入路显微手术切除52例椎管内髓外硬膜下肿瘤,其中神经鞘瘤39例,脊膜瘤9例,神经纤维瘤4例。肿瘤位于颈段11例,胸段26例,腰段15例,其中哑铃型肿瘤6例。【结果]52例肿瘤均全切除,患者术后早期下床活动,恢复快。术后均未出现新的神经功能损害症状,长期随访症状和体征明显好转或消失,未出现手术并发症和脊柱畸形。【结论】经单侧半椎板入路结合显微神经外科技术,手术创伤小,对脊椎后柱结构破坏少,有利于脊柱的稳定性,对椎管髓外硬膜下肿瘤的治疗是良好的适应证。     

人脑星型细胞瘤神经细胞黏附分子基因突变分析

目的：了解神经细胞黏附分子（neural cell adhesion molecule,NCAM) 基因突变在人脑星型细胞瘤发生中的作用。方法：对NCAM基因的外显子进行聚合酶链反应-单链构象多态性分析（polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP）,找出可疑突变,回收PCR产物纯化测序及序列分析,ORF finder 软件分析蛋白质序列。结果：43例星型细胞瘤中有1例胶质母细胞瘤NCAM 7号外显子1 126号核苷酸由A颠换为C, 导致369号氨基酸由赖氨酸变为谷氨酰胺,该病人1年后死于复发。结论：NCAM基因点突变导致的蛋白质结构改变在星型细胞瘤的发生中可能有重要意义。     

U251细胞系中脑肿瘤干细胞耐药性的初步研究

目的 探讨脑肿瘤干细胞对抗肿瘤药物的耐药性及其机制.方法 通过磁珠分选(MACS)将U251细胞中的CD133+与CD133-细胞进行分选,用MTT法和流式细胞技术比较CD133+与CD133-细胞对抗肿瘤药物替尼泊苷(Vm-26)、卡莫司汀(BCNU)和顺铂(DDP)的敏感性、细胞凋亡率及细胞内药物蓄积的差异性,通过RT-PCR检测CD133+与CD133-细胞耐药基因谱的差异.结果 U251细胞系中,CD133+细胞约占5.4%.分选后的CD133+细胞的阳性率可达92.4%,CD133-细胞对抗肿瘤药物替尼泊苷、卡莫司汀和顺铂的敏感性明显高于CD133+细胞;流式细胞仪试验显示,在中等浓度的替尼泊苷作用下,CD133-细胞的凋亡明显,并出现明显的"亚G1峰",而CD133+细胞并未受到明显抑制和杀灭;流式细胞仪检测显示CD133+细胞内的药物蓄积明显低于CD133-细胞;RT-PCR实验显示MDR1、BCRP、MRP、MGMT和Bcl-2表达在CD133+明显高于CD133-细胞.结论 CD133+是U251细胞系中的耐药细胞亚群,高表达ABC转运体,DNA修复和抗凋亡基因可能是CD133+细胞耐药的重要机制.