柔红霉素体外对HL-60细胞的凋亡作用

目的：了解柔红霉素（ＤＮＲ）体外作用于ＨＬ－６０　细胞时产生凋亡的规律及一些相关蛋白表达的变化。方法：应用光镜、ＤＮＡ电泳及ＦＣＭ检测ＨＬ－６０细胞发生的凋亡模式；用ＩＣ、ＦＣＭ观察相关蛋白的变化。结果：当ＤＮＲ浓度为０．２μＭ～２μＭ时，ＨＬ－６０细胞发生的凋亡率随浓度的增加与作用时间的延长而升高，可见典型的凋亡细胞及明显的ＤＮＡ梯度条带。１μＭ　ＤＮＲ作用２ｈ时，ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ的荧光强度指数（ＦＩ）降低，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３　的　ＦＩ　升高；而作用５ｈ时，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３的ＦＩ值反而降低。结论：一定浓度的ＤＮＲ在体外可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，它可抑制ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达，而激活ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白的表达。     

γ—射线诱导HL—60细胞凋亡的观察

目的 观察γ－射线诱导ＨＬ－６０细胞凋亡的时间和剂量效应,以探求辐射诱发肿瘤细胞凋亡分子机制。方法 分别以２．５、５、７．５、１０、１５Ｇｙ γ－射线照射ＨＬ－６０细胞,于照后继续培养３、６、９、１２、２４、２７、３０ｈ,分别收获细胞。电泳检测ＤＮＡ梯状带;流式细胞术（ＦＣＭ）细胞凋亡定量并观察细胞周期变化;Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８－ＰＩ复染荧光显微镜计数凋亡细胞及已死亡细胞百分率。结果 ＨＬ－     

Caspase-3与细胞凋亡的研究

细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)是基因控制的细胞的自然死亡。现在普遍认为细胞凋亡是一系列高度调控的半胱氨酸蛋白酶ｃａｓｐａｓｅ级联反应 (ｃａｓｃａｄｅ)事件的结果 ,ｃａｓｐａｓｅ 3(又称ＣＰＰ32 ,ａｐｏｐａｉｎ)被证实处于该级联反应的下游 ,它通过降解细胞内相应底物使细胞死亡 ,与其他下游的ｃａｓｐａｓｅ成员可能是凋亡事件的真正执行者。本文综述有关ｃａｓｐａｓｅ 3与细胞凋亡关系的研究进展。1　ｃａｓｐａｓｅ 3的分子生物学特点ｃａｓｐａｓｅ 3基因 (ＣＡＳＰ 3)最初在人类Ｊｕｒｋａｔ Ｔ淋巴细胞中被克隆出的 ,该…     

缺血性脑血管病中凋亡基因调控的新进展

凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ) ,又叫细胞程序性死亡 (ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ) ,是脑缺血后神经元死亡的一种重要形式。在脑缺血动物模型中 ,缺血中心区以坏死为主 ,而缺血半暗带则以神经元凋亡为主要形式[1 ] 。蛋白酶系统的级联反应和各种死亡基因及其产物的调节作用及线粒体的作用成为近年来凋亡发展研究的中心问题。在受到凋亡刺激时 ,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族 (ｃａｓｐａｓｅ)被激活 ,诱导细胞凋亡 ,特异性ｃａｓｐａｓｅ抑制剂可阻止凋亡进展 ,所以有研究认为ｃａｓｐａｓｅ对神经元凋亡起关键作用 ,凋亡的最后实施…     

半胱天冬酶与中枢神经系统疾病

对凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)的分子机制研究显示 ,凋亡是一个遗传性的程序性过程 ,涉及一系列基因的激活表达及调控。凋亡的失调与许多疾病 ,包括肿瘤、神经变性、自身免疫、心脏疾病和其他一些疾病的发病机制有关。本文介绍细胞凋亡的执行者———半胱天冬酶 (ｃｙｓｔｅｉｎｙｌａｓｐａｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ,ｃａｓｐａｓｅ)以及ｃａｓｐａｓｅ抑制剂在中枢神经系统 (ｃｅｎｔｒａｌｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍ ,ＣＮＳ)疾病中的研究进展。1　ｃａｓｐａｓｅ与细胞凋亡1.1　ｃａｓｐａｓｅ家族　对细胞凋亡所…     

HL—60细胞降钙素基因高甲基化的发生机制

目的：探讨ＨＬ－６０细胞降钙素基因高甲基化的发生机制。方法：采用ＨＬ－６０细胞，以正常骨髓单个核细胞为对照，应用甲基化敏感的限制性内切酶消化，结合设有内外参照的ＰＣＲ技术，检测ＣＴ基因甲基化状态；应用同位素激量分析法检测ＤＮＡ－胞嘧啶－甲基转移酶（ＤＮＡ－ｃｙｔｏｓｉｎ－ｍｅｔｈｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＭＴａｓｅ）活性；应用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测ＭＴａｓｅ基因表达水平。结果：ＨＬ－６０细胞经甲基化敏感的内切酶Ｈｐａ Ⅱ消化后仍可扩增出清晰的ＣＴ基因特异条带，提示ＣＴ基因５’端呈高甲基化状态；ＨＬ－６０细胞ＭＴａｓｅ活性平均测定值为５３９．９Ｂｑ，是正常骨髓单个核细胞（平均２１．８Ｂｑ）的２９．８倍；ＭＴａｓｅ基因的ｍＲＮＡ表达水平以ＭＴａｓｅ与β－ａｃｔｉｎ内参照ＲＴ－ＰＣＲ产物的比值表示，ＨＬ－６０细胞（０     

半胱氨酸—天冬氨酸蛋白酶（Caspase）及其在细胞凋亡中的作用

白细胞介素β转化酶,即ＩＣＥ,与线虫死亡基因产物Ｃｅｄ－３蛋白相似,目前已发现１４种ＩＣＥ类似物,Ａｌｎｅｍｒｉ将ＩＣＥ家族统一命名为Ｃａｓｐａｓｅ（Ｃｙｓｔｅｉｎ－ａｓｐａｒａｔｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ,半胱氨酸－天冬氨酸蛋白酶）,Ｃａｓｐａｓｅ以结构酶原形式广泛存在于细胞。Ｃａｓｐａｓｅ酶原主要经细胞色素Ｃ及死亡受体激活。Ｃａｓｐａｓｅ活性中心含半胱氨酸,其选择性裂解底物天冬氨酸后残基,通过对蛋白     

蛋白激酶C在维甲酸诱导人早幼粒白血病细胞成熟分化中的作用

为探究维甲酸（ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ，ＲＡ）诱导人早幼粒白血病细胞ＨＬ－６０分化的作用机理，作者以鱼精蛋白为底物，用［γ－￣（３２）Ｐ］ＡＴＰ同位素标记，动态检测诱导前后蛋白激酶Ｃ（ＰｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫＣ）的活性变化，并观察ＰＫＣ亚细胞分布。结果发现，ＲＡ诱导后细胞质ＰＫＣ活性显著升高，以ＰＫＣ抑制剂（Ｈ－７）处理后再进行诱导，ＨＬ－６０细胞分化受阻。表明细胞质ＰＫＣ活性增高在ＲＡ诱导ＨＬ－６０细胞分化中起重要作用；但未见ＰＫＣ向细胞膜转移，提示ＲＡ诱导ＨＬ－６０细胞分化可能还通过其它途径进行。     

Ｃａｓｐａｓｅ－３沉默对缺血缺氧大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响

【目的】 探讨沉默ｃａｓｐａｓｅ－３对大鼠骨髓间充质干细胞（ＭＳＣ）在体外缺血缺氧环境下凋亡的影响。【方法】 构建靶向ｃａｓｐａｓｅ－３的ｓｈＲＮＡ重组慢病毒并转染ＭＳＣ。建立缺血缺氧模型,流式细胞术和Ｈｏｅｃｈｓｔ荧光染色法检测细胞的凋亡情况。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ｃａｓｐａｓｅ－３的蛋白表达,Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ检测ｃａｓｐａｓｅ－３、Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ的ｍＲＮＡ表达。【结果】 重组慢病毒成功转染ＭＳＣ。缺血缺氧环境下,转染组的细胞凋亡率为（１３．６６ ± ０．２０）％,低于空载体组的（２１．８６ ± ０．４３）％和空白对照组的（２２．２８ ± ０．４８）％（Ｐ ＜ ０．０１）。沉默ｃａｓｐａｓｅ－３后ｃａｓｐａｓｅ－３表达下调,Ｂｃｌ－２表达上调,Ｂａｘ表达下调,Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ比值升高（Ｐ ＜ ０．０５）。【结论】 沉默ｃａｓｐａｓｅ－３能显著提高ＭＳＣ在缺血缺氧环境下的存活能力。     

ICE/CED3蛋白酶家族在中枢神经系统损伤中的作用

ＩＣＥ ＣＥＤ 3蛋白酶家族 (以下简称ＩＣＥ ＣＥＤ 3或ｃａｓｐａｓｅ)也叫ｃａｓｐａｓｅ家族 ,它们在细胞凋亡过程中发挥着重要作用。中枢神经系统 (ＣＮＳ)损伤如创伤和缺血 ,以及某些神经变性性疾病 ,如阿尔茨海默病都与ＩＣＥ ＣＥＤ 3介导的细胞凋亡过程有关。深入研究ＩＣＥ ＣＥＤ 3在ＣＮＳ损伤中的作用机制 ,可能有助于指导对ＣＮＳ疾患的临床治疗。1　ＩＣＥ ＣＥＤ 3的一般特性1.1　ＩＣＥ ＣＥＤ 3的概念和构成　ＩＣＥ ＣＥＤ 3家族也叫“ｃａｓｐａｓｅ”家族 ,该词源于“人类ＩＣＥ ＣＥＤ 3蛋白酶命名法则” ,实际上是“…     

反义bcr／abl寡核苷酸诱导K562细胞凋亡时Caspase3表达及？…

用反义ｂｃｒ／ａｂｌ寡核苷酸片段诱导Ｋ５６２细胞凋亡,观察Ｃａｓｐａｓｅ３表达及活性变化,以阐明Ｃａｓｐａｓｅ在慢性髓性白血病（ＣＭＬ）发病机制中的作用。方法：用反义ｂｃｒ／ａｂｌ寡核苷酸片段ＡＳ和对照无义片段ＮＳ自理５６２,ＳＷＩＭＸＬＥＱＵＭＦ ＹＮＶ ＥＹ display status     

电磁辐射对γ射线诱导HL60细胞凋亡影响的初步研究

研究了脉冲磁场与γ射线联合作用对ＨＬ６０细胞凋亡的影响。采用１３７Ｃｓ照射源剂量为４Ｇｙ，磁场强度为２０ＭＴ，频率为２５０Ｈｚ照射人早幼粒白血病细胞。结果表明，ＨＬ６０细胞经电磁场作用后，可以提高γ射线对它的杀伤效果，增加γ射线诱发ＨＬ６０细胞凋亡明显高于单独γ射线照射。     

caspase-3与脑卒中

凋亡 (ａｐｏｐｓｉｓ)即程序化细胞死亡 ,除在神经系统发育和维持免疫系统的正常功能中具有重要作用外 ,还参与了脑卒中后神经元损伤的病理过程。细胞凋亡过程大致经历启动期、效应期、降解期 3个阶段。半胱氨酸蛋白酶 (ｃｙｓｔｅｉｎｙｌａｓｐａｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆ ｉｃｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ,ｃａｓｐａｓｅ)的激活是凋亡效应期的一个十分重要的生化事件 ,其中ｃａｓｐａｓｅ 3在脑卒中后神经元损伤中的作用最引人注目。研究ｃａｓｐａｓｅ 3的激活与调控对于深入了解脑卒中的病理机制、并开辟新的治疗途径具有十分重要的作用。1　…     

caspase3蛋白在胃癌及非典型增生中的表达及其与细胞凋亡的关系

转化生长因子 β(ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ β ,ＴＧＦ β)是一个具有多种生物学活性的细胞因子 ,可抑制正常上皮细胞和部分肿瘤细胞的生长 ,但肿瘤细胞常常逃避ＴＧＦ β的生长控制而无限增殖而促进肿瘤的发展 ;ＴＧＦ - β还可以诱导肿瘤细胞发生凋亡。目前 ,具体的凋亡诱导机制尚不清楚。Ｃａｓｐａｓｅ 3是介导细胞凋亡的一类蛋白水解酶 ,即ｃａｓｐａｓｅ中的关键效应酶。研究发现 ,ＴＧＦ β诱导部分肿瘤细胞调亡时常伴有ｃａｓｐａｓｅ3的激活[1 ,2 ] ,ＴＧＦ - β通过诱导胃癌细胞的ＴＳＣ 2 2基因表达并产生细胞凋亡也与ｃａｓｐａｓｅ3的激活密切相关[3] 。     

Ca^2＋螯合剂对三尖杉酯碱诱导HL60细胞凋亡的影响

目的 了解细胞内Ｃａ＾２＋在三尖杉酯碱诱导ＨＬ６０细胞凋亡中的作用。方法 以三尖极酯碱单独或与Ｃａ＾２＋螯合剂ＥＧＴＡ共同处理ＨＬ６０细胞后，用流式细胞仪和ＤＮＡ凝胶电泳检测细胞凋亡的发生。结果 Ｃａ＾２＋螯合剂ＥＧＴＡ抑制了细胞凋亡，结论三尖杉脂碱诱导的ＨＬ６０细胞凋亡需要Ｃａ＾２＋参与。     

死亡蛋白酶与细胞凋亡调控及机制

细胞凋亡 (Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)又称程序性死亡 (Ｐｒｏ ｇｒａｍｍｅｄＣｅｌｌＤｅａｔｈ ,ＰＣＤ)。ＰＣＤ由Ａｓｐ特异性半胱氨酸蛋白酶 (Ｃａｓｐａｒｔａｔｅ -ｓｐｅｃｉｆｉｃｃｙｓｔｅｉｎｙｌ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ,Ｃａｓｐａｓｅ或Ｃａｓｐ)家族介导 ,活化的Ｃａｓｐ触发酶级联效应 ,引起染色体ＤＮＡ的降解及细胞解体[1] 。Ｃａｓｐ家族是ＰＣＤ过程的关键元件 ,它的激活与超常表达均引起细胞凋亡 ,因此又称死亡蛋白酶 ,他们通过与众多蛋白质因子的相互作用调控ＰＣＤ[1] 。1　Ｃａｓｐ家族及生物学特性Ｃａｓｐ最初表达为蛋…     

γ射线诱导HL—60细胞凋亡与G2期阻滞的研究

用形态学，琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪等方法观察了γ射线诱导ＨＬ－６０细胞凋亡和细胞周期改变的关系。结果：γ射线照后６ｈ，细胞开始出现Ｇ２期阻滞，１２ｈ阻滞达高峰，细胞凋亡比例随作用时间和照射剂量的增加而增加，凋亡特有的梯状图谱分别在１，５，１０，Ｇｙ照后７２，２４，１２ｈ出现。     

放射诱导HL-60细胞凋亡及其与克隆存活率的关系

目的研究放射诱导的ＨＬ－６０细胞凋亡及其与放射后细胞克隆存活率的关系。方法应用电子显微镜、琼脂糖电泳、流式细胞术和ＴｄＴ介导的缺口和末端标记法（ＴＵＮＥＬ）等方法分析放射诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，应用有限稀释法测定放射后细胞克隆形成率。结果放射后ＨＬ－６０细胞表现出细胞体积缩小、染色质固缩致密化、边缘化、染色体断裂、出现凋亡小体、细胞膜保持完整和电泳时ＤＮＡ“梯谱”等典型的细胞凋亡特征。放射诱导ＨＬ－６０细胞凋亡有明显的时间、剂量效应，照射后４ｈ细胞凋亡已比较明显，放射诱导ＨＬ－６０细胞凋亡随着照射剂量增加而增加。但是，放射引起ＨＬ－６０细胞克隆存活率的减少比放射诱导ＨＬ－６０细胞凋亡更敏感，如８Ｇｙ照射后克隆存活率减少到０．００１６，而此剂量时的细胞凋亡水平几乎与对照组水平相同。结论放射能诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，并有明显的时间、剂量效应关系。但是，放射诱导ＨＬ－６０细胞凋亡并不能解释ＨＬ－６０细胞克隆存活率的减少。     

足叶乙甙诱导HL—60细胞凋亡及其bcl—2基因表达

目的：研究ＨＬ－６０细胞在足叶乙甙诱导的细胞凋亡中ｂｃｌ－２基因表达，以说明药物致凋亡的分子机制。方法：采用细胞存活率，形态改变，ＤＮＡ梯形片段分析和原位缺口标记法，分析药物引起的细胞凋亡，以细胞原位杂交和免疫组化分析ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ及其蛋白的表达水平。     

8—Br—cAMP和^60Co照射诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及相 …

应用８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ和＾６０Ｃｏ照射体外诱导Ｈｅｌａ细胞凋亡。探讨ｂｘＬ－２,ｗｐ５３,ｍｐ５３,ｃ－ｍｙｃｉＮｏｓ的基因表达和ｉＮｏｓ,Ｆａｓ蛋白表达之间的关系、为探讨无毒性８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对宫颈癌治疗的新途径 提供依据。采用ＴＵＮＥＬ法和Ｆｅｕｌｇｅｎ法进行细胞凋亡实验;采用本实验室创新的完整细胞原位ＲＮＡ斑点印迹技术检测Ｆａｓ和ｉＮｏｓ蛋白,应用高速薄层色谱扫描仪对斑点印迹信号进行定量测