CDC25B蛋白S149/S321位点突变对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响

目的:研究小鼠CDC25B蛋白S149位点对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响及S149位点与S321位点的关系。方法:构建pBSK-CDC25B-S149A和pBSK-CDC25B-S149A/S321A突变体,体外转录成mRNA;采用小鼠超排卵技术取G1期受精卵,显微注射CDC25B-WT-mRNA和突变CDC25B-S149A-mRNA、CDC25B-S149A/S321A-mRNA,观察其对受精卵发育、M期促进因子(MPF)活性及CDC2-pTyr15磷酸化状态的影响。结果:CDC25B-S149A-mRNA注射组受精卵卵裂率明显高于CDC25B-WT-mRNA注射组,MPF活性提前1 h达到高峰;而联合突变体CDC25B-S149A/S321A-mRNA注射组卵裂率又显著高于CDC25B-S149A-mRNA注射组。结论:在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,蛋白激酶A(PKA)对小鼠CDC25B蛋白S149位点的磷酸化修饰是控制受精卵G2/M转换的重要方式,并且S149位点与S321位点可能具有协同作用。     

肌醇多磷酸5-磷酸酶(PIPP)在人下咽癌组织的表达及临床意义

目的研究肌醇多磷酸5-磷酸酶(PIPP)在人下咽癌中的表达,探讨其临床意义。方法对15例人下咽癌组织学标本和15例正常的癌旁组织进行免疫荧光和免疫印迹检测。结果 PIPP的表达量及荧光强度在下咽癌组织中明显低于正常组织。结论 PIPP在下咽癌组织中低表达可能为临床提供新的诊断指标。     

149位丝氨酸对cdc25b蛋白在小鼠卵母细胞中定位的影响

目的：探讨149位丝氨酸使cdc25b蛋白诱导减数分裂功能丧失的机制。方法：应用免疫荧光观察GV期、G2／M转换期卵母细胞中cdc25b蛋白的定位情况；应用显微注射将pEGFP-cdc25b-ut、pEGFP-cdc25b—s149a的融合质粒及空载体质粒显微注射到含有完整生发泡的小鼠卵母细胞中，观察不同显微注射组小鼠卵母细胞中蛋白亚细胞定位。结果：免疫组化结果显示GV期卵母细胞中础256蛋白主要分布在细胞浆中，这与显微注射野生型cdc25b结果一致，G2／M转换期卵母细胞中可以观察到蛋白的核聚集，cdc25b-s149a在细胞核与细胞浆中均有分布。结论：看似静止的卵母细胞中cdc25b蛋白处于核浆穿梭的动态平衡，149位丝氨酸的磷酸化影响蛋白的核输出速率，从而使蛋白的定位发生改变。     

蛋白激酶C亚型在涎腺腺样囊性癌中的表达

目的：探讨蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）与涎腺腺样囊性癌（ＳＡＣＣ）发生发展的关系。方法：采用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ技术对ＰＫＣ５种亚型α,βⅠ,βⅡ,ε,δ在该肿瘤亚细胞水平的表达进行研究。结果：（１）ＳＡＣＣ及临近正常组织胞浆中均可见ＰＫＣ－α、ＰＫＣ－βⅠ,ＰＫＣ－βⅡ的表达,与临近正常组织相比,肿瘤组织胞浆中上述３种ＰＫＣ亚型表达明显降低（Ｐ〈０．０１）;（２）临近正常组织胞膜中未见ＰＫＣ     

升主动脉缩窄心衰大鼠心肌PKC活性测定

目的：探讨升主动脉缩窄慢性压力后负荷心肌肥厚转变为心力衰竭过程中心肌蛋白激酶C（PKC）比活性的变化及意义。方法：用泰夫隆管环扎幼鼠升主动脉，制作慢性压力后负荷心肌肥厚－心力衰竭模型。据改良Takai放射性核素酶解测定法，应用γ－^32P-ATP测定不同病理时期心肌组织中PKC比活性。结果：与假手术组比较，肥厚组心肌胞膜、胞浆PKC比活性明显增高（P＜0．01）、PKC膜／浆比值明显增加（P＜0．01）；心力衰竭组心肌胞膜、胞浆PKC比活性差异均无显著性（P＞0．05），但PKC膜／浆比值明显增加（P＜0．01）。结论：PKC亚细胞水平的活性变化在慢性压力后负荷心肌肥厚－心力衰竭的转变中起重要的调控作用。     

蛋白激酶C活性及δ亚型在肾透明细胞癌的表达

目的　探讨蛋白激酶C(PKC)、PKC δ在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义。方法　采用PKC比活性测定和WesternBlotting方法检测 38例肾透明细胞癌和 5例正常肾组织中PKC比活性和PKC δ的表达。结果　癌组织和正常组织胞浆PKC比活性值分别为 ( 6 .97± 2 .6 5 )10 - 2 pmol·ml- 1 ·min- 1 和 ( 14 .16± 5 .6 7) 10 - 2 pmol·ml- 1 ·min- 1 ;而胞膜中的比活性值分别为( 2 7.90± 7.5 8) 10 - 2 pmol·ml- 1 ·min- 1 和 ( 5 7.0 6± 18.13) 10 - 2 pmol·ml- 1 ·min- 1 ;PKC δ在癌组织细胞胞浆中的相对灰度值小于 1,在胞膜中则大于 1,各病理分期和细胞分级间差异均有显著性 (P<0 .0 5 )。结论　PKC活性在肾透明细胞癌中下降 ,PKC δ表达与病理分期、细胞分级相关 ,是判断肾细胞癌预后的指标。     

蛋白激酶CK2-β在SACC-83及SACC-LM细胞中的活性变化

目的：探讨蛋白激酶CK2—β在涎腺腺样囊性癌(SACC)及肺转移涎腺腺样囊性癌(SACC-LM)中的活性变化。方法：利用激酶活性测定方法进行活性测定分析。结果：与未转移SACC(SACC-83)细胞相比。SACC-LM细胞中蛋白激酶CK2-B具有较高的活性；在两种细胞中，细胞核中的活性都高于在细胞质中的活性。结论：蛋白激酶CK2—13的活性与SACC的肺转移呈正相关。     

mTOR/P70 S6激酶信号通路在腮腺腺癌发生中和作用

目的:研究mTOR/P70 S6激酶信号通路激活在腮腺腺癌发生中的作用.方法:用免疫组织化学方法及Western印迹分析测定腮腺腺癌中mTOR和P70 S6激酶的表达.结果:免疫组化与Western印迹分析的结果一致,与正常组织相比,腮腺腺癌中mTOR和P70 S6激酶的表达明显增加.结论:口腔腮腺腺癌mTOR和P70 S6激酶的表达增加可能是介导腮腺腺癌发生的主要机制之一.     

猪胆酸钠对人早幼粒白血病细胞系(HL-60)作用机理的初步探讨

观察了猪胆酸钠和维甲酸对人早幼粒白血病细胞系(HL-60)体外诱导分化过程中细胞膜脂肪酸的组成、细胞蛋白激酶C(PKC)活性及c-myc癌基因表达的变化,初步探讨猪胆酸钠对HL-60细胞作用的分子机理,结果表明,经100～400μg·ml~(-1)猪胆酸钠处理3d的HL-60细胞,其PKC活性和c-myc表达与对照组比较均明显下调;1μmol·L~(-1)维甲酸诱导3 d的细胞,PKC活性未见明显变化,而癌基因c-myc表达则降至对照组的17％;无论是猪胆酸钠(400 μg·L~(-1))还是维甲酸(1μmol·L~(-1))诱导3d的HL-60细胞,其细胞膜脂肪酸组成均无明显改变。     

生物化学与细胞生物学课程整合的探讨

为了适应新世纪教学内容和课程体系改革的要求,我校借鉴美国哈佛大学医学院的经验,将生物化学与细胞生物学两门课程整合为“细胞的化学与生物学”。整合后在减少两个学科间重复内容、增加学科间联系、减少学时、早期接触临床、培养学生分析解决问题的能力、创新能力等方面有了很大改进,为这两门课程的改革开辟了新途径。