人肝癌裸鼠移植瘤株HHC15的建立

来自厦门市同安肝癌高发区１５例肝癌病人肝癌组织移植到ＳＰＦ级ＢＡＬＢ／ｃＡ裸小鼠身上，其中１例已成功地建株。移植瘤株（ＨＨＣ＿１５）生长迅速，瘤体积倍增时间约１２０ｈＨＨＣ＿１５瘤株传代稳定，潜伏期短（１７．６±１．３０，至今已传２１代。肿瘤接种成功率达９３％，病理组织学观察，移植瘤和原发瘤相似，电镜检查发现移植瘤细胞具肝癌细胞特异的超微结构——发育不全毛细胆管。无论是皮下或常位（肝内）移植瘤都和原发瘤一样，持续分泌ＡＦＰ．在移植后的３～６周内，瘤细胞分泌ＡＦＰ量与瘤体大小呈正相关。细胞学研究表明ＨＨＣ１５细胞染色体组为非整倍体，染色体众数在１１０～１３４之间。应用特异的ＨＢＶＤＮＡ片段引物和ＰＣＲ扩增方法，提示了瘤细胞基因组有ＨＢＶＤＮＡ的整合。人肝癌ＨＨＣ１５移植瘤株建立有助于厦门市同安肝癌高发区肝癌病变发生的分子生物学研究和抗癌药物的筛选。     

全反式视黄酸体外处理胃癌细胞对其裸小鼠皮下移植瘤的影响

用全反式视黄酸（ＡＴＲＡ）处理３株胃癌细胞株ＭＧｃ８０３、ＢＧＣ８２３和ＳＧＣ７９０１（ＡＴＲＡ终浓度为１０－６ｍｏｌ／Ｌ）连续２０ｄ，再移植于６～８周龄的ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠后肢皮下，观察移植瘤生长情况，４周后处死裸小鼠，解剖肿瘤并行组织学检查。结果表明，ＡＴＲＡ体外处理胃癌细胞能延长其移植瘤的潜伏期和倍增时间，有效地抑制移植瘤的生长，抑制率分别为５１．４％、６６．０％和８８．６％，抑制作用的强弱次序与移植瘤的恶性程度正好相反。     

兔肝癌裸鼠移植模型的建立

目的 建立兔肝癌裸鼠模型，为兔肝癌可移植模型的建立奠定基础。方法 利用二乙基亚硝胺诱发日本大耳白兔肝癌，将获得的肝细胞癌接种于裸鼠皮下，并反复传代，将传代瘤块经体外培养后回植于裸鼠皮下，并继续在裸鼠体内传代。结果 肝细胞癌组织前5代对裸鼠致瘤率约40％；经体外传代后移植瘤成活率100％，潜伏期7～10d，无自然消退，无转移。病理检查证实该移植瘤保持着兔肝细胞癌特征，肝细胞抗原阳性，甲胎蛋白阳性。结论兔肝部细胞经传代和体外培养可增加移植成功率，并可缩短时间。     

新型Bcl-2反义寡核苷酸（F951）治疗人小细胞肺癌的药效学实验研究

目的 建立人小细胞肺癌NCI-H446细胞裸鼠异种移植瘤模型。方法 细胞悬液初代移植后，皮下埋块法连续传代移植，观察移植瘤的生物学特性。结果 潜伏期短、不易自行消退，呈进行性生长，并可出现肝转移．移植瘤细胞的组织形态与超微结构保留了NCI-H446细胞的特点．染色体检查证明为人类肿瘤细胞染色体核型。结论 皮下埋块法进行连续传代移植可缩短异种移植瘤的潜伏期，经过三次连续传代移植的NCI-H446细胞裸鼠移植瘤可作为人小细胞肺癌裸鼠异种移植瘤模型。     

人肝癌裸小鼠常位移植实验研究

采用硫贲妥钠（３０ｍｇ／ｋｇ、３０％乙醇配制）麻醉和蘸上立止血（２５０ｋＩＵ／ｍｌ）的明胶海棉止血措施确保了人肝癌裸小鼠常位移植术能安全、可靠地进行。本中心建立的两株人肝癌裸小鼠移植瘤株（ＨＨＣ４、ＨＨＣ１５）已成功地移植于裸小鼠（ＳＰＦ级）肝脏内，移植瘤生长良好、传代稳定和持续分泌ＡＦＰ。荷瘤（ＨＨＣ１５）３～６周裸小鼠血清ＡＦＰ含量与瘤体积的增加呈正相关。常位移植前（７ｄ）裸小鼠皮下注射０．１ｍｌ０．５％ＣＣ１（Ｖ／Ｖ。橄榄油配制）能明显提高ＨＨＣ４常位移植的成功率（Ｘ２检验、Ｐ＜０．０１）；在微量ＣＣｌ４作用下，裸小鼠肝细胞受损伤，发生肝硬化，在此基础上所移植和生长的人肝癌常位移植瘤与大多数人肝癌病变发生的肝脏病理生理学特点相似，本模型的建立更适用于抗肝癌药物的模拟治疗和筛选。     

人子宫内膜癌裸鼠移植瘤株的建立及其生物学特性

目的：建立人子宫内膜癌裸鼠移植瘤株,为开展子宫内膜癌的实验性研究奠定基础。方法：将３例了 内膜癌手术标本移植于裸鼠皮下,生长后行鼠间连续传代,对移植瘤进行相关的生物学。结果：３例标本１全获得生长并行鼠间传代,房时２４个月建成子宫内膜癌裸鼠移植瘤株ＥｎＣａ－９５Ｖ,瘤株生长稳定,已传代２１代,移植成瘤率１００％,光镜、电镜、免疫级化、流式细胞术检测移植与患者原始肿瘤特征基本一致;染色体分析显示人类肿     

SW-480裸鼠移植瘤模型的建立及其生物学特性

目的：建立生物学特性稳定的结肠高分化腺 裸小鼠移植瘤模型。方法：建立人结肠高化化腺瘤细胞株ＳＷ－４８０裸小鼠移植瘤模型，并确定移植瘤生长情况、组织学变化及细胞动力学改变等生物学特性。结果：移植瘤体内传代稳定，潜伏期７～８ｄ；保留了结肠腺癌的组织学特征；细胞动力学检测显示以四倍体细胞为主；移植瘤细胞具有分泌ＣＥＡ的功能。结论：本移植瘤模型地一个生物学特性较稳定的人结肠高分化腺癌裸小鼠移植瘤模型。     

津白Ⅱ小鼠自发乳癌（ⅥTA_2MA－891）高自发肺转移模型

本模型获自我组１只３４８日龄雌性津白Ⅱ小鼠右侧第五乳腺处一肿物。病理切片检查为乳腺腺癌，属于Ｄｕｎｎ（１９５９）分类之Ｂ型。用本组同源小鼠（ｉｓｏｇｅｎｅｉｃｍｉｃｅ）皮下移植已传到２７代。连续皮下移植成瘤率为１００％，未见自然消退；潜伏期４～７ｄ；肺转移瘤结多发而密集；最早转移时间，肉眼观察为接种后第３５天，镜检为第１０天。肺自发转移率，１１～２０代为１００％。皮下移植瘤、肺转移瘤之病理组织结构及其癌细胞形态与其原发瘤近似。带瘤鼠濒死时其皮下移植瘤体积平均值为４．９３ｃｍ３。７种抗癌药对皮下移植瘤抑制率，氟尿嘧啶为２９．７５％（Ｐ＜０．０５）、塞替派为４４．８８％（Ｐ＜０．０１）、环磷酰胺９５．３１％（Ｐ＜０．０１）、平阳霉素９６．７５％（Ｐ＜０．０１），其它三药抑制率均不足３０％。对肺转移瘤抑制率，平阳霉素为４２．５４％（Ｐ＜０．０１），余不足３０％。     

人鼻咽癌肝转移灶裸小鼠移植瘤模型（CNT—1）的建立及特性研究

从１例鼻咽癌肝转移患尸检时取出肝组织接种于裸小鼠，成功地建立了１株鼻咽移植瘤动物模型，命名为中国鼻咽移植瘤株１号，简称ＣＮＴ－１，该移植瘤株选用鼠均为Ｔ淋巴细胞免疫缺陷型的黑皮（ＮＣ）品系及白皮（ＮＭＲＩ）品系裸小鼠，雌雄兼用，具有潜伏期短，生长稳定，传递成功率为１００％之特点。至今已保存３年余，传递２３代，病理检查，原代为典型的低分化鳞状细胞癌，经裸鼠传代１～１８代后部分癌细胞向未分化癌类型转     

人源性前列腺癌动物模型的初步建立

目的 建立中国人同一起源肿瘤不同恶性潜能前列腺癌动物模型,为研究前列腺癌转移进展机制及激素抵抗的发生机制提供理想的动物模型.方法 采用组织块外科原位移植法将人前列腺癌组织分别移植到虚拟去势组及去势组雄性裸小鼠前列腺部,成瘤后进行鼠间传代移植,选取虚拟去势组原位移植瘤、移植淋巴结转移瘤、去势组第4代淋巴结转移瘤体外培养建立细胞系,应用Boyden Chamber细胞运动实验检测细胞迁徙转移能力,描绘细胞生长曲线分析细胞增殖及激素依赖性,裸小鼠皮下异种移植瘤模型检测成瘤率、肿瘤湿重及浸润范围验证不同代移植瘤细胞在裸小鼠异种移植的生长状态.结果 第1代虚拟去势组成瘤率30％,无淋巴结转移,取移植瘤反复原位传代移植第3代成瘤率50％,盆腔淋巴结转移率40％.去势组原代移植以及来自虚拟去势组的原位移植瘤反复原位移植均未见移植瘤,源自虚拟去势组淋巴结转移瘤组织反复原位传代移植至第4代,成瘤率33％,其中一只可见盆腔淋巴结转移.三种细胞系细胞生长、迁徙以及体外裸小鼠成瘤率均有显著差别（P＜0.05）.结论 裸小鼠前列腺癌原位移植反复传代可增强肿瘤成瘤率、转移力等恶性指标.以裸小鼠淋巴结转移瘤接种去势裸小鼠可筛选出激素非依赖性异种移植瘤及转移瘤.     

造血干细胞移植后免疫重建及其意义的研究进展

本文对造血干细胞移植后的免疫重建及其意义的研究进展作一综述,着重介绍移植后宿主体内T细胞、自然杀伤(NK)细胞及树突细胞(DC)数量和功能的变化。     

细胞培养技术的研究进展

随着现代科学的发展,体外细胞培养技术已成为多个领域必不可少的研究工具,并且其新技术和方法也在不断涌现。本文就细胞培养技术的发展、支架材料以及细胞培养的影响因素作一综述。     

人成纤维细胞产生的抑制因子对肿瘤和转化细胞增殖与分化的影响

对人成纤维细胞产生的抑制因子(HFDI)的细胞生长抑制效应进行研究,发现HFDI对肿瘤细胞~3H—TdR掺入抑制是由于使细胞变性坏死或促使细胞有限分化所致;并证明HFDI对PHA刺激的淋巴细胞转化的抑制,也是由于使转化细胞变性坏死或促使细胞向成熟方向发展所致。     

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定

利用无血清培养和细胞克隆技术从孕鼠(14d)胚胎中分离出神经干细胞，并进行传代培养，采用免疫细胞化学技术检测神经巢蛋白和成熟脑细胞特异性抗原神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表达，同时采用H-E染色法鉴定神经细胞类型。证实从大鼠胚胎大脑皮质分离出的细胞具有连续的克隆能力，并表达神经巢蛋白，分化的细胞表达神经元和神经胶质细胞的特异性抗原，为中枢神经系统的干细胞。     

EPCs在MSCs向肝样细胞转化中作用的初步探讨

目的：探讨内皮前体细胞(endothelial precursor cells, EPCs)在间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)向肝样细胞转化中的作用。方法：分离培养SD大鼠MSCs和EPCs,取第3代MSCs向肝样细胞转化培养,培养过EPCs的无血清及因子的培养基(endothelial progenitor cell-conditioned medium, EPCs-CM)、无血清的α-最低必需培养基(alpha minimal essential medium, α-MEM)分别与肝细胞转化培养基按1∶1比例配置,作为实验组和模型对照组,正常α-MEM培养基为空白对照组,分别观察细胞形态及数量变化;在培养3、5、7、9 d时应用免疫荧光检测甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)、清蛋白(albumin, ALB)的表达。结果：空白对照组MSCs形态无明显变化;实验组与模型对照组细胞均出现肝样细胞形态。空白对照组未见AFP、ALB表达,模型对照组和实验组在3、5、7、9 d AFP、ALB表达水平均增高,其中实验组比模型对照组AFP、ALB水平增高明显。结论：EPCs在MSCs向肝样细胞转化中可能起一定的促进作用。     

Culture and Identification of Human Amniotic Mesenchymal Stem Cells

Objective To establish the method of isolation, purification, and identification of human amniotic mesenchymal stem cells （hAMSCs）. Methods hAMSCs were isolated from human amniotic membrane by trypsin-collagenase digestion, and cultured in Dulbecco＇s modified Eagle＇s medinm/F12 medium supplemented with 10% fetal bovine serum. Phenotypic characteristics of these cells were analyzed by means of immunocytochemistry and flow cytometry. Results The cells successfully isolated from human amniotic membrane expressed representative mesenchymal cell surface markers CD44, CD90, and vimentin, but not CD45. Conclusions This study establishes a potential method for isolation of hAMSCs from human amnion, in vitro culture, and identification. The isolated cells show phenotypic characteristics of mesenchymal stem cells.     

大鼠胃壁细胞的分离及培养

目的　完成胃壁细胞分离及纯化 ,建立原代培养胃壁细胞的方法 .方法　制备大鼠翻转的胃囊用含链霉蛋白酶E的消化液注入胃囊内孵育 ,并用磁力搅拌器轻轻搅拌而制备单个的胃底腺细胞 ,Percoll梯度离心富集胃壁细胞 ,用含10 0 m L· L- 1 血清的 PBS或培养液 ,时差贴壁去除成纤维细胞 ,然后 ,将壁细胞接种于培养板中 ,培养液用无血清的 1∶ 1Harm's F- 12 / DMEM培养 ,内含胰岛素 5 mg· L- 1 ,氢化可地松 4μg· L- 1 ,转铁蛋白 5 mg· L- 1 ,硒酸钠 5μg· L- 1 ,牛血清白蛋白 2 g· L- 1 ,表皮生长因子 2 5 μg· L- 1 ,葡萄糖 1.98g· L- 1持续培养可达 1wk以上 .结果　获得的壁细胞经吖啶橙 (acridine orange,AO)鉴定纯度达 80 %以上 ,原代培养经HE染色可见壁细胞呈分散小组式生长 ,且生长状态良好 .结论　此方法适宜于大鼠胃壁细胞的分离及体外培养 ,为体外进一步研究壁细胞的功能打下基础 .     

新生豚鼠神经干细胞的分离培养、鉴定及标记

目的 从新生豚鼠海马中分离培养神经干细胞，为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋的实验研究创造条件。方法 分离新生豚鼠海马组织，用含碱性成纤维生长因子（bFGF）和表皮生长因子（EGF）无血清培养技术培养神经干细胞，免疫组化技术检测其巢蛋白（Nestin）的表达。采用荧光染料DAPI标记神经干细胞。结果 从新生豚鼠海马组织分离出的细胞中可获得呈集落样生长的神经干细胞团，并能表达Nestin；荧光染料的标记效率可达93．4％，细胞传代8次后荧光亮度仍无明显衰减。结论 从新生豚鼠海马分离的细胞具有明显的增殖能力，荧光染料的标记可获得较高的标记效率，可作为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋实验研究的供体细胞。     

睾丸支持细胞与骨髓间充质干细胞共培养的初步研究

目的 观察睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)与骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)共培养时SCs对MSCs扩增的影响. 方法 取雄性SD大鼠睾丸,分离出SCs,取SD大鼠,分离出骨髓MSCs,将两种细胞用"三明治"式的方法共培养7 d. 结果 共培养组的MSCs前四天生长较对照组快,第5天无明显差异,第6和第7天细胞数量迅速减少. 结论 在体外共培养的早期,SCs可以显著促进MSCs的生长,但在后期则反而抑制MSCs的生长,具体原因有待进一步研究.     

成人血源性间充质干细胞的分离和鉴定

目的建立一种分离、培养扩增成人血源性间充质干细胞(MSCs)的方法进行鉴定,并与骨髓源性MSCs比较生物学特性。方法30名成年志愿者随机平分为二组,一组直接抽静脉血,并细分为全血细胞法组和外周血密度梯度离心法组,同时抽骨髓为骨髓密度梯度离心法组;另一组为血细胞分离机法组。各组进行细胞存活率、集落形成率、形态学、流式表型分析、胶原染色等研究。结果外周血密度梯度离心法分离成人静脉血后培养,贴壁细胞呈梭形,集落形成率为(0.12±0.08)/106单个核细胞,传代扩增到第5代时每份平均细胞数达51.4674×106,表达CD44、CD54、CD105和CD166,不表达CD14、CD34、CD45和CD31,细胞分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原。全血细胞法和血细胞分离机法获得的细胞不能连续多次传代。结论外周血密度梯度离心法比全血细胞法和血细胞分离机法简单,贴壁细胞培养扩增容易,获得的血源性MSCs与骨髓源性MSCs的生物学特性相似。