人尿路上皮细胞TLR2和TLR4分布情况研究

目的 探讨Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)2和4在人尿路上皮细胞中的表达情况.方法 体外培养人肾小管、肾盂、输尿管和膀胱上皮细胞,提取总RNA,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定不同部位的含量.结果 肾小管、肾盂、输尿管和膀胱上皮细胞TLR2的相对表达量分别为0.326、0.589、0.602、0.735,而TLR4的相对表达量分别为0.223、0.327、0.379、0.365,所有部位尿路上皮细胞中TLR2含量显著高于TLR4(P＜0.05),肾小管上皮细胞TLR2、TLR4含量显著低于其余各组(P＜0.05).结论 人尿路上皮细胞中TLR2和TLR4均有表达,尿路感染致病菌分布量可能与TLR亚型表达情况有关.     

TLR2和TLR4在人颈动脉硬化斑块中的表达

目的 探讨Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在人颈动脉硬化斑块中的表达及其与斑块形成的关系.方法 根据术后组织病理学报告选择性收集36例新鲜颈动脉硬化斑块,其中软斑组12例,硬斑组12例,混合斑组12例,以及12例正常脾动脉组织作为对照组,采用RT-PCR检测标本组织中TLR2及TLR4 mRNA的表达水平;应用免疫组化检测TLR2和TLR4蛋白在标本组织中的表达.比较不同性质颈动脉硬化斑块组织TLR2和TLR4的mRNA及蛋白表达水平.结果 RT-PCR结果显示颈动脉硬化斑块组织中TLR2和TLR4相对水平分别为(0.926±0.047)和(1.040±0.056).显著高于脾动脉组织的(0.646±0.033)和(0.691±0.031)(P＜0.05);免疫组化结果显示TLR2和TLR4在颈动脉硬化斑块中相对水平分别为(135.295±17.787)和(130.368±14.969),显著高于脾动脉组织的(82.396±6.668)和(98.898±9.089)(P＜0.05);且TLR2和TLR4mRNA及蛋白表达上调水平相关,TLR2和TLR4mRNA及蛋白表达水平与斑块性质有关,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TLR2及TLR4在颈动脉硬化斑块组织中高表达;TLRs信号通路可能促进了颈动脉硬化程度的进展.     

幽门螺杆菌感染患者胃黏膜组织中TLR2、TLR5的表达

目的:检测幽门螺杆菌(HP)感染患者胃黏膜组织中Toll样受体TLR2、TLR5的表达.方法:采用免疫组化SP法检测33例非HP感染患者(对照组)和35例HP感染患者(试验组)胃黏膜组织中TLR2和TLR5的表达.结果:TLR2在试验组和对照组均无表达.试验组胃黏膜组织中TLR5的阳性表达率(60.0%)明显低于对照组(84.8%)(λ2=5.209,P＜0.05).结论:TLR2在人胃黏膜组织中无表达,HP感染可下调胃黏膜组织中TLR5的表达.     

Toll样受体7,9在狼疮肾炎发病机制中作用的研究

目的:探讨Toll样受体7(TLR7)、Toll样受体9(TLR9)在狼疮肾炎(LN)发病机制中的作用。方法:选择混合骨髓干细胞移植实验后的MRL/lpr狼疮鼠36只,分为空白对照组30只(PBS代替)和阴性对照组6只(昆明小鼠)。观察MRL/lpr小鼠肾组织不同病变程度中TLR7、TLR9的表达情况。结果:MRL/lpr小鼠肾组织中均有TLR7、TLR9的表达,且随病变程度增加其表达增强,与肾组织病变程度呈正相关。MRL/lpr小鼠肾组织中TLR7、TLR9的表达与其血清肌酐、尿蛋白定量存在正相关(P<0.01)。结论:TLR7和TLR9是介导炎性反应细胞浸润和局部炎性反应的一个重要因素,其表达水平可能与LN肾脏损害程度呈正相关。     

Toll样受体3相关信号转导途径与病毒感染

哺乳动物的Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)是一种重要的模式识别受体,TLR3是Toll样受体家族中的一员,与病毒感染密切相关。本文就TLR3相关信号转导途径与病毒感染及凋亡作一综述。     

免疫蛋白酶体亚基在干燥综合征唇腺中的表达

目的 观察免疫蛋白酶体亚基人低分子质量多肽(LMP)2、LMP7 在干燥综合征(pSS)患者唇腺中的表达情况,探讨其在 pSS 诊断、鉴别诊断和发病机制中的作用.方法 收集40例pSS患者、15 例非 pSS 的结缔组织病患者和9例正常人的下唇唇腺组织标本,通过免疫组织化学方法,观察 LMP2 和 LMP7 在3组唇腺组织中的表达情况;计算腺泡阳性率,半定量分析LMP2和LMP7在各组唇腺组织中的表达强度.对数据进行平方根反正弦转换后,采用单因素方差分析比较 3 组间的 LMP2 和 LMP7 的腺泡阳性率差异,用Spearman进行pSS组的腺泡阳性率与各临床检查结果的相关性分析.结果 LMP2 和 LMP7 表达在腺泡细胞和导管上皮细胞.LMP2 的腺泡阳性率3组间差异无统计学意义(P＝0.369),LMP7 的腺泡阳件率 3 组间差异均有统计学意义(P<0.01),pSS组高于结缔组织病组,结缔组织病组高于正常组;仅pSS组内的LMP7的腺泡阳性率高于LMP2(P<0.01).pSS组内LMP2和LMP7腺泡阳性率与临床各检验结果无相关性(P>0.05).结论 pSS 患者唇腺中LMP7的表达明显增强,LMP2 无明显上调,提示LMP7和LMP2两亚基的个体基因调节机制不同.     

结直肠癌中TLR4的表达及其与FasL、EGFR的关系

目的观察Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)在结直肠癌和正常大肠组织中的表达情况,并且分析其表达与Fas配体(fas ligand,FasL)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的关系。方法采用免疫组化SP三步法检测58例结直肠癌和25例正常大肠组织TLR4、FasL和EGFR的表达。通过Spearman’s相关分析,探讨TLR4与FasL或EGFR表达的关系。结果 58例结直肠癌中TLR4、FasL和EGFR表达的阳性率分别为59%、71%和83%,均显著高于其在正常大肠组织中的表达阳性率20%、22%和31%(P<0.05)。TLR4的表达与结直肠癌的远处转移具有相关性(χ2=4.063,P<0.05)。TLR4和FasL表达具有正相关性(r=0.249,P<0.01),TLR4表达强的部位多伴有FasL的强表达,TLR4表达弱的部位也常伴随FasL的弱表达。TLR4与EGFR的表达不具有相关性(r=0.345,P>0.05)。结论 TLR4的表达与结直肠癌远处转移有关,TLR4可能通过调控FasL的表达而参与结直肠癌的免疫反击。     

白芍总苷对原发性干燥综合征浆细胞样树突状细胞影响的研究

目的 探讨白芍总苷( TGP)治疗对原发性干燥综合征( pSS)患者外周血浆细胞样树突状细胞( pDC)的影响. 方法 收集新发pSS患者17例作为疾病组,每日予以TGP 1. 8 g治疗3个月,对照组17例. 采用流式细胞术检测疾病组治疗前、后及对照组pDC及其表面CD32、CD86、CXCR4和Blys表达;ELISA法检测血浆干扰素-α( IFN-α)、白细胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫组化法检测25例pSS患者唇腺pDC浸润. 结果 ① pSS患者外周血pDC比例较对照组下降,pDC表达CXCR4比例较对照组增加,血浆IL-6、TNF-α、IFN-α水平较对照组上升,25 例pSS患者唇腺中19例有pDC浸润;②TGP治疗后,pSS患者外周血pDC比例较治疗前上升;pDC表达CXCR4、Blys比例较治疗前下降;TGP治疗后血沉下降;血浆 IL-6、TNF-α 水平治疗后下降. 结论 新发pSS患者较正常者外周血pDC比例降低,表达CXCR4增加,唇腺组织中有pDC浸润;TGP可能抑制pSS患者pDC活化.     

多柔比星对乳鼠心肌细胞TLR2、TLR4表达的影响

目的:观察Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)、Toll样受体4(TLR4)在多柔比星(doxorubicin,DOX)损伤乳鼠心肌细胞中的表达,探讨多柔比星在心肌损伤中的可能发病机制。方法:体外培养乳鼠心肌细胞,将培养的乳鼠心肌细胞随机分为2组,对照组将心肌细胞悬液换用无血清培养基继续培养,未加任何药物;多柔比星组在培养液中加入多柔比星1 mg/L。作用6 h后免疫组织化学法检测心肌细胞TLR2、TLR4蛋白表达;分别作用2,6 h后用蛋白质印迹法对TLR2、TLR4在心肌细胞的表达水平进行半定量分析。结果:多柔比星组心肌细胞TLR2、TLR4的表达较对照组明显增加(P<0.01)。结论:TLR2、TLR4作为模式识别受体可能介导了多柔比星心肌细胞损伤的固有免疫反应,是多柔比星心肌细胞损伤的机制之一。     

TLR2、TLR4在实验性末端回肠炎发病过程中的变化及意义

目的 探讨Toll样受体(Toll-like receptor,TLRs) TLR2、TLR4在实验性末端回肠炎发病过程中的变化及意义.方法 60只雄性SD大鼠,随机均分为造模组、缝线组、对照组.造模组行末端回肠-盲肠侧侧吻合术,缝线组只在末端回肠作手术缝线,对照组只给予麻醉,不作手术.分别于2周及8周时处死大鼠,收集...     

高脂饮食诱导的肥胖大鼠下丘脑及肝脏组织中Toll样受体4的表达

目的 探讨在高脂饮食诱导下Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)在肥胖大鼠下丘脑及肝脏组织中的表达.方法 建立高脂饮食诱导的肥胖(DIO)大鼠模型,应用免疫组化染色和Real Time PCR方法检测下丘脑及肝脏组织中TLR4的蛋白及mRNA的表达.结果 喂养8周后,DIO组平均体重为(456.38±19.20)g,高于正常饮食对照组平均体重(372.10±22.47)g,两组间比较差异有显著性意义(P＜0.01);DIO组饮食量为(1229.23±57.29)g,高于正常饮食对照组饮食量(905.50±52.17)g,两组大鼠饮食量比较差异有显著性意义(P＜0.01).Real Time PCR方法显示,DIO组大鼠下丘脑组织TLR4 mRNA含量(0.56±0.16),高于正常饮食对照组TLR4 mRNA (0.39±0.10),P＜0.05; DIO组大鼠肝脏组织TLR4 mRNA含量(0.87±0.24),高于正常饮食对照组TLR4 mRNA(0.54±0.16),两组间差异也有显著性意义(P＜0.01).免疫组化染色肥胖组大鼠下丘脑及肝脏TLR4表达呈强阳性.结论 Toll样受体4在肥胖大鼠下丘脑及肝脏中的表达增多,提示下丘脑及肝脏的炎症反应参与了高脂饮食诱导肥胖的发生.     

Toll样受体9和CD_(123)在寻常型银屑病患者皮损中的表达

目的探讨Toll样受体9(TLR9)和CD123在寻常型银屑病患者皮损中的表达及意义。方法选择2012年6月至2013年4月兖州市人民医院收治的26例寻常型银屑病患者为试验组,另选23例健康体检者为对照组,分别按照常规皮肤手术采集躯干部皮损样本进行活检,并采用免疫组织化学S-P法及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测其组织中的CD123及TLR9表达情况,分析其过表达与寻常型银屑病患者发病的机制。结果试验组免疫组织化学S-P法CD123及TLR9阳性表达率均为100%,其表达水平分别为(10.1±2.3)个/mm3和(14.4±2.0)个/mm3,而对照组表达水平分别为(1.5±0.6)个/mm3,(2.2±1.0)个/mm3,但无阳性表达;试验组RT-PCR法TLR mRNA表达水平高于对照组[(1.32±0.08)比(0.87±0.04)],差异有统计学意义(P<0.01)。结论浆细胞样树突状细胞可能参与激发自身免疫T细胞活化和增殖,是寻常型银屑病发病的一个重要机制之一。     

IRAK-M在TLR9信号通路诱导小鼠肝组织淋巴细胞浸润中的作用

目的探讨固有免疫信号通路分子IRAK-M在TLR9信号诱导肝组织淋巴细胞浸润过程中的作用。方法应用野生型B6小鼠及IRAK-M基因敲除小鼠,腹腔注射TLR9配体CpG寡核苷酸激活肝内TLR9信号系统,提取小鼠肝内浸润淋巴细胞,并采用流式细胞术检测肝内浸润不同淋巴细胞群的比率及细胞因子的表达情况。结果 CpG ODN激活TLR9信号通路后,IRAK-M基因敲除小鼠肝内浸润CD4+和CD8+T细胞比率较野生型B6小鼠显著增加[CD4+:(22.50±0.73)% vs. (20.03±0.75)%;CD8+:(17.83±0.67)%vs.(15.55±0.75)%;P均0.05];肝内淋巴细胞细胞因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)合成增加[IL-6:(1.91±0.26)% vs. (0.93±0.12)%;TNF-α:(13.23±1.23)% vs. (8.16±0.66)%;P均0.01]。结论 IRAK-M具有负调节肝内TLR9信号系统的作用。     

CpG寡核苷酸促进Toll样受体9的表达增强乳腺癌细胞侵袭

目的:探讨Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)在乳腺癌细胞中的表达对其侵袭能力的影响。方法:应用West-ern blot检测乳腺癌细胞系TLR9的表达状况,以CpG寡核苷酸刺激不同乳腺癌细胞株后,检测TLR9表达的变化、体外侵袭能力的变化以及细胞活性的影响。结果:人乳腺癌细胞株MDA-MB-231表达TLR9而MCF-7不表达。CpG寡核苷酸处理后MDA-MB-231的TLR9表达增高,且侵袭能力进一步增强;MCF-7的该受体表达情况和侵袭能力均无明显变化。侵袭能力的增加不是源自于细胞活性的增强。结论:TLR9在高侵袭的乳腺癌细胞系中表达,其表达的增加可以促进乳腺癌细胞的侵袭能力。     

TLR3c.1377, TLR9-1486)和TLR9 2848基因多态性与多发性硬化易感性的关系

目的:探讨中国南方汉族人群Toll样受体(Toll like receptor, TLR)3和9单核苷酸多态性与多发性硬化(multiple sclerosis, MS)遗传易感的相关性.方法:以123名临床及实验室确诊的中国南方汉族MS患者和126名与入组病人种族、年龄、性别相匹配健康志愿者为研究对象,利用聚合酶链-限制性长度多态性分析(PCR-RFLP)技术检测TLR3和TLR9基因多态性.结果:TLR3c.1377基因型、等位基因频率MS组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),携带T等位基因可降低MS患病危险性((OR=0.532, P=0.014).TLR9-1486基因型、等位基因频率在MS组与对照组间分布差异无统计学意义;TLR9 2848 A等位基因频率MS组较对照组增高(39.8% vs. 30.6%,P=0.037),A+等位基因携带者明显高于A-携带者患病危险性 (OR=1.837,P=0.020).关联分析未发现TLR3c.1377与(TLR9-1486)和TLR9 2848有联合作用.TLR9-1486和TLR9 2848处于强连锁不平衡状态;MS组与对照组间单倍体型频率分布差异无统计学意义.结论:TLR3c.1377基因型频率、等位基因频率及TLR9 2848等位基因频率可能与中国南方汉族人群MS发病相关,两基因位点可能均是MS的易感基因或与易感基因相(连锁.)     

外周血TLR2及TLR4表达与血管性痴呆的相关性

目的探讨中国汉族人群Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)外周血表达水平及其与血管性痴呆(VaD)的相互关系。方法采用病例-对照研究的方法,选择性别、年龄等相关因素相匹配的中国汉族VaD病人和健康人(对照组)各200例,应用聚合酶链反应(PCR)技术和流式细胞仪定量检测外周血单核细胞表面TLR2和TLR4蛋白和mRNA的表达水平。结果 VaD组TLR2和TLR4的mRNA与蛋白表达水平均明显高于对照组(t=12.30~63.50,P<0.05)。多元线性回归分析显示,两组TLR2蛋白表达水平及TLR4的mRNA和蛋白表达水平与VaD之间存在显著相关(P<0.05)。结论外周血中TLR2和TLR4的表达水平与VaD的发病之间存在相关关系。     

基质金属蛋白酶9、上皮型钙粘附蛋白在原发性干燥综合征患者唇腺组织中的表达及超微结构观察

目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、上皮型钙粘附蛋白(E-cad)在原发性干燥综合征(PSS)发病过程中的作用及意义。方法:采用免疫组化链霉素抗生物素-过氧化酶法(SP)法检测52例pSS患者、30例正常对照组唇腺中MMP-9、E-cad表达及分布情况,并电镜观察超微结构的改变。结果:52例PSS患者唇腺组织中MMP-9均阳性高表达,导管区平均表达水平高于正常对照组,腺泡区平均表达水平高于正常对照组,MMP-9表达随着淋巴细胞浸润灶数的增加而增强。52例PSS组E-cad均低表达,导管区平均表达水平低于正常对照组,腺泡区平均表达水平低于正常对照组,E-cad表达随着淋巴细胞浸润灶数的增加而降低。PSS患者唇腺组织中MMP-9与E-cad的表达呈负相关,,超微结构的改变可见细胞连接疏松,桥粒明显减少或消失。结论MMP-9、E-cad在PSS患者唇腺组织中存在异常表达,二者的表达情况与病理分级相关,MMP-9、E-cad参与了原发性干燥综合征的发病过程。     

Toll样受体7和NF-κB在食管鳞癌中的表达及其临床意义

目的探讨Toll样受体7(TLR7)和NF-κB在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测20例食管鳞癌及相应癌旁正常组织中TLR7和NF-κB mRNA的表达;采用免疫组织化学方法检测90例食管鳞癌及相应癌旁正常组织中TLR7和NF-κB蛋白的表达。结果 (1)食管鳞癌组织中TLR7和NF-κB mRNA的表达量为(0.72±0.59)、(0.69±0.32),显著高于癌旁正常组织的(0.45±0.36)、(0.47±0.16),其表达差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)食管鳞癌组织中TLR7和NF-κB蛋白的阳性表达率为77.6%(68/90)、75.4%(67/90),明显高于癌旁正常组织的18.9%(17/90)、33.3%(30/90),其表达差异均有统计学意义(P<0.05);TLR7蛋白表达与肿瘤的分化程度和肿瘤浸润深度密切相关,表达差异均有统计学意义(P<0.05);NF-κB蛋白(p65)表达与肿瘤的分化程度和淋巴结转移密切相关,表达差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)食管癌组织中TLR7和NF-κB蛋白的表达呈正相关(r=0.259,P=0.014)。结论 TLR7可能通过上调NF-κB mRNA和蛋白的表达,促进食管鳞癌的发生与发展。     

高糖对肾小管上皮细胞Toll样受体4表达及其信号通路的影响

目的:通过研究高糖对肾小管上皮细胞Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达及其信号通路的影响,初步探讨TLR4与高糖促进肾脏细胞分泌炎症因子的关系.方法:小鼠近曲肾小管上皮细胞(MCT细胞)在高糖环境下培养后,用Westrn Blot分析TLR4蛋白的表达,Western Blot和免疫沉淀法分析TLR4与髓样细胞分化因子88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)的相互作用,以了解TLR4信号通路是否被激活.结果:高糖可使MCT细胞TLR4蛋白的表达上调,高糖环境下MyD88依赖的TLR4信号通路被激活.结论:TLR4与高糖促进肾脏细胞分泌炎症因子有关,TLR4参与糖尿病肾病的发病.     

腹膜透析液对腹膜间皮细胞TLR2和TLR4表达的影响

目的：观察不同浓度葡萄糖（dextrose）腹膜透析液、艾考糊精（icodextrin）腹膜透析液对人腹膜间皮细胞 Toll 样受体2（TLR2）和 TLR4表达的影响。方法体外培养人腹膜间皮细胞株第5～10代（HMrSV5,DMEM ／F12培养基含10％胎牛血清）用于实验研究。 M TT 检测细胞活力,实验分为5组：阴性对照组、1．50％ dextrose 组、2．50％ dextrose 组、4．25％ dextrose 组、7．5％ icodextrin 组,应用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 TLR2和 TLR4的表达水平。结果不同浓度 dextrose 腹膜透析液作用24 h 对腹膜间皮细胞 TLR2和 TLR4的表达无明显影响。作用48 h ,1．50％ dextrose 组、2．50％ dextrose 组、4．25％ dex-trose 组 TLR2分别降低（5．5±2．8）％、（31．4±7．5）％、（54．9±1．9）％,TLR4分别降低（32．9±17．6）％、（47．7±13．5）％、（66．4±13．5）％;作用72 h ,1．50％ dextrose 组、2．50％ dextrose 组、4．25％ dextrose 组 TLR2表达分别降低（29．4±14．7）％、（38．9±9．9）％、（63．5±16．5）％,TLR4表达分别降低（59．5±16．8）％、（63．1±9．5）％、（79．2±14．0）％;7．5％ icodextrin 组TLR2和 TLR4表达与阴性对照组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 dextrose 透析液下调 HM rSV5 TLR2和 TLR4的表达;icodextrin 透析液对 TLR2和 TLR4的表达无显著影响。