IRAK-M in TLR9 signal pathway induced liver lymphocytes infiltration of mice

目的 探讨固有免疫信号通路分子IRAK-M在TLR9信号诱导肝组织淋巴细胞浸润过程中的作用.方法 应用野生型B6小鼠及IRAK-M基因敲除小鼠,腹腔注射TLR9配体CpG寡核苷酸激活肝内TLR9信号系统,提取小鼠肝内浸润淋巴细胞,并采用流式细胞术检测肝内浸润不同淋巴细胞群的比率及细胞因子的表达情况.结果 CpG ODN激活TLR9信号通路后,IRAK-M基因敲除小鼠肝内浸润CD4+和CD8+T细胞比率较野生型B6小鼠显著增加[CD4+:(22.50±0.73)％ vs.(20.03±0.75)％;CD8+:(17.83±0.67)％ vs.(15.55±0.75)％;P均＜0.05];肝内淋巴细胞细胞因子白细胞介素-6 (IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)合成增加[IL-6:(1.91±0.26)％ vs.(0.93±0.12)％;TNF-α:( 13.23±1.23)％ vs.(8.16±0.66)％;P均＜0.01].结论 IRAK-M具有负调节肝内TLR9信号系统的作用.     

心肌细胞来源NCoR1对小鼠心肌梗死损伤的保护作用

  目的  探究心肌细胞来源的核受体辅抑制因子1(NCoR1)对小鼠心肌梗死损伤发挥的作用。  方法  构建心肌细胞NCoR1特异性敲除小鼠并根据不同手术处理分为假手术野生型组、假手术基因敲除组、心肌梗死野生型组和心肌梗死基因敲除组,每组各50只小鼠。统计各组小鼠在心肌梗死28 d的生存率和心功能水平;通过病理染色判断梗死面积与纤维化程度;测定小鼠血清心肌酶[磷酸肌酸激酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)]及炎症指标[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)]水平。  结果  与野生型小鼠相比,基因敲除组小鼠存活率更低,左心室射血分数[(30.39±5.13)% vs. (9.46±2.10)%]和左心室缩短分数[(14.62±2.69)% vs. (4.26±0.96)%]均明显下降,而左室容积[(101.50±14.07)μL vs. (197.50±22.41)μL]明显升高(均P＜0.05);小动物PET/CT提示心肌梗死后野生型小鼠对18F-FDG的摄取量更高[(2.74±0.06)MBq vs. (1.60±0.03)MBq],梗死程度[(36.22±0.86)% vs. (47.17±1.27)%]和纤维化程度[(32.70±0.85)% vs. (46.38±1.31)%]更低(均P＜0.05);血清学指标显示敲除小鼠心肌损伤更重且炎症水平更高(均P＜0.05)。  结论  心肌细胞中NCoR1在小鼠心肌梗死中发挥重要的保护作用。      

日本血吸虫感染可诱导共刺激分子配体基因敲除小鼠CD154和CD40动态变化及对Th1/Th2偏移的影响

目的:探讨可诱导共刺激分子( inducible costimulator,ICOS)-ICOS配体( ICOS ligand,ICOSL)信号通路对感染日本血吸虫小鼠的CD154、CD40表达及Th1/Th2偏移的影响. 方法:建立ICOSL基因敲除( ICOSL knockout, ICOSL-KO)小鼠及野生型C57BL/6J小鼠感染日本血吸虫疾病模型,于感染前和感染后4、7、12、16、20周,应用流式细胞术、免疫组织化学法分别检测小鼠脾细胞与肝虫卵肉芽肿周围炎性浸润细胞CD154、CD40的水平;应用酶联免疫吸附测定法( enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠脾细胞经可溶性虫卵抗原( soluble egg anti-gen,SEA)诱导72 h后培养的上清液中γ-干扰素(interferon gamma,IFN-γ)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)水平及小鼠血清中SEA特异性抗体IgG、IgG1、IgG2a的水平;应用HE染色观察小鼠肝虫卵肉芽肿病变动态变化. 结果:感染后4、7、12、16、20周,ICOSL-KO小鼠脾细胞CD154、CD40 水平与野生型小鼠相比,显著降低 [ CD154 为(18. 62 ± 4. 76)% vs. (27. 91 ± 3. 94)%、(22. 44 ± 4. 67)% vs. (40. 86 ± 5. 21)%、(25. 50 ± 6. 81)% vs. (43. 81 ± 8. 41)%、(20. 22 ± 5. 28)% vs. (40. 95 ± 7. 34)%、(17. 87 ± 4. 59)% vs. (33. 16 ± 6. 31)%,皆P<0. 01;CD40为(19. 43 ± 3. 26)% vs. (24. 37 ± 3. 59)%、(23. 00 ± 4. 47)% vs. (31. 80 ± 5. 86)%、(24. 46 ± 5. 01)% vs. (35. 85 ± 5. 32)%、(23. 42 ± 4. 69)% vs. (33. 30 ± 6. 14)%、(22. 85 ± 3. 78)% vs. (30. 88 ± 5. 94)%,皆P<0. 05 ]. 感染后7、12、16、20周,ICOSL-KO小鼠肝虫卵肉芽肿炎性浸润细胞 CD154、CD40 水平与野生型小鼠相比,亦显著降低[CD154为(0. 319 ± 0. 066) vs. (0. 488 ± 0. 086)、(0. 389 ± 0. 067) vs. (0. 596 ± 0. 082)、(0. 378 ± 0. 064) vs. (0.543 ±0.072)、(0.348 ± 0. 069) vs. (0. 523 ± 0. 076),皆 P <0. 01;CD40 为(0. 398 ± 0. 066) vs. (0. 546 ± 0. 079)、(0. 461 ± 0. 085) vs. (0. 618 ± 0. 076)、(0. 453 ± 0. 087) vs. (0. 587 ± 0. 074)、(0. 449 ± 0. 065) vs. (0. 565 ± 0.082),皆P<0.05 ]. 感染后,ICOSL-KO小鼠IFN-γ表达显著高于野生型小鼠(P<0.05),而IL-4表达水平则显著低于野生型小鼠(P<0. 05),其Th2分化指数亦显著低于野生型小鼠(P<0. 01). ICOSL-KO小鼠血清SEA特异性抗体IgG、IgG1、IgG2a的水平与IgG1/IgG2a的比值亦显著低于野生型小鼠(P<0. 01),且ICOSL-KO小鼠的肝虫卵肉芽肿体积显著小于野生型小鼠(P<0. 01). 结论:ICOS-ICOSL信号通路在血吸虫病免疫病理中起重要调控作用,其对Th1/Th2偏移的影响可能是通过调控CD154-CD40信号通路来实现的.     

pDC、TLR7、TLR9在原发性干燥综合征患者唇腺组织中的表达

目的 检测浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell,pDC),Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR 7),Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR 9)在原发性干燥综合征患者唇腺组织中的表达情况。 方法 采用免疫组织化学法检测2018年1月—2019年12月昆明医科大学第二附属医院风湿免疫科门诊及住院部25例确诊为原发性干燥综合征的女性患者唇腺组织中pDC特异性抗原CD123及TLR7、TLR9的表达,在低倍镜下(10×20)随机选取4个视野利用Image-Pro Plus 6.0软件和SPSS 17.0软件进行统计分析。 结果 pSS患者唇腺组织中可见pDC、TLR7、TLR9阳性细胞主要分布于主要分布于腺泡、腺导管上皮细胞、淋巴细胞浸润灶。CD123+ pDC表达(3.47±0.26)%高于正常对照组(2.36±0.15)%;TLR7(2.06±0.37)%高于正常对照组(0.14±0.05)%;TLR9(1.80±0.26)%高于正常对照组(0.84±0.08)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。 结论 pDC、TLR 7、TLR 9在pSS患者的唇腺组织(腺导管和腺泡的上皮细胞)及淋巴细胞浸润灶内高表达。      

Toll样受体4抑制剂联合雷帕霉素对小鼠移植心脏存活的影响

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK-242对小鼠心脏移植后移植物存活的影响.方法 采用小鼠腹部异位心脏移植模型,供者为BALB/C小鼠,受者为C57BL/6小鼠.受者分为4组:对照组、雷帕霉素(Rapa)组、TAK-242组及Rapa+TAK-242组,术后移植后观察移植物存活情况;部分受者于术后7 d或15 d获取移植心脏用于组织病理学检测.结果 TAK组移植心脏平均生存时间稍延长但未达到统计学意义[(8.2±0.2)d vs(7.6±0.2)d,P=0.086].Rapa+TAK-242组移植心脏平均生存时间较对照组显著延长[(56.1±3.7)d vs(7.6±0.2)d,P<0.001],并且优于Rapa组[(56.1±3.7)d vs(19.2±1.5)d,P<0.001].组织病理学结果 提示Rapa+TAK-242组移植物排斥反应最轻,组织中CD11c阳性树突状细胞减少,CD3阳性淋巴细胞浸润减少,C4d沉积减轻.结论 TAK联合Rapa能够减少移植心脏组织内炎症细胞浸润,减轻排斥反应,延长移植心脏存活.     

柯里拉京对小鼠单纯疱疹病毒性脑炎脑组织TLR9/MyD88通路影响

目的:研究小鼠模型脑组织感染后柯里拉京对HSV-1TLR9、My D88蛋白的表达影响。方法:通过注射的办法使得HSV-1侵入到小鼠脑组织内制造小鼠单纯疱疹病毒性脑炎的模型,40只小鼠随机分成正常组和单纯疱疹病毒组,每组20只。单纯疱疹病毒组中随机分为4组:空白对照组、柯里拉京组、HSV-1+生理盐水组、HSV-1+柯里拉京组,每组5只。Western Blotting检测各组小鼠脑组织TLR9、My D88蛋白的表达。各组小鼠脑组织TNF-α分泌的变化通过ELISA法分析检测。H-E染色切片观察脑组织病理变化。结果:(1)在小鼠发病高峰(通常是HSV-1病毒入侵脑组织后第5天),HSV-1+柯里拉京组与空白对照组相比,脑组织神经变性坏死程度轻,细胞水肿消退,变性坏死组织周围淋巴细胞浸润减少。(2)HSV-1+柯里拉京组与HSV-1+生理盐水组相比,TLR9、My D88 m RNA的表达降低有统计学差异[(9.36±1.02)Kb vs(14.84±1.83)Kb,(7.5±1.04)Kb vs(11.7±2.63)Kb,P0.05]。(3)ELISE法检测各脑组织TNF-α分泌均有增加,HSV-1+柯里拉京组、HSV-1+生理盐水组TNF-α的分泌[(543.97±18.07)pg/m L、(1036.62±38.84)pg/m L]高于空白对照组和柯里拉京组,差异有统计学意义(P0.05)。HSV-1+柯里拉京组与HSV-1+生理盐水组相比TNF-α降低有统计学差异(P0.05)。结论:柯里拉京可通过TLR9/My D88通路的作用,降低TLR9、My D88 m RNA的表达,减少TNF-α的分泌,一定程度减轻HSE的炎性因子的产生。     

SRC-1蛋白缺失对严重烧伤小鼠肝脏NF-κB表达及核转位的影响

目的 研究类固醇受体辅活化子-1(SRC-1)基因敲除小鼠严重烧伤早期肝脏核因子-κB(NF-κB)表达及核转位的变化.方法 以SRC-1基因敲除小鼠为实验组,以野生型小鼠为对照组,以小鼠15%～20%TBSAⅢ度烧伤为实验模型,观察两组在严重烧伤前及烧伤后1、6、12h肝脏总蛋白NF-κB表达及伤后核转位的变化,同时提取致伤前、致伤后1、6h血清标本,观察炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的变化.结果 与野生型小鼠相比,SRC-1基因敲除小鼠严重烧伤后肝脏总蛋白NF-κB出水平有所增加,而野生型小鼠有所下降.从核转位的情况来看,SRC-1基因敲除小鼠致伤后NF-κB的入核能力明显强于野生型小鼠,6h差别最大.两组致伤后炎性细胞因子TNF-α、IL-1βIL-6均升高,但SRC-1基因敲除小鼠升高更为显著.结论 SRC-1蛋白对严重烧伤具应激性保护作用,缺失SRC-1蛋白使NF-κB功能增强更显著,致炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6更大量产生,使整体伤情征象更重. -1β、IL-6的变化.结果 与野生型小鼠相比,SRC-1基因敲除小鼠严重烧伤后肝脏总蛋白NF-κB出水平有所增加,而野生型 鼠有所下降.从核转位的情况来看,SRC-1基因敲除小鼠致伤后NF-κB的入核能力明显强于野生型小鼠,6h差别最大.两组致伤后炎性细胞因子TNF-α、IL-1βIL-6均升高,但SRC-1基因敲除小鼠升高更为显著.结论 SRC-1蛋白对严重烧伤具应激性保护作用,缺失SRC-1蛋白使NF-κB功能增强更显著,致炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6更大量产生,使整体伤情征象更重. -1β、IL-6的变化.结果 与野生型小鼠相比,SRC-1基因敲除小鼠严重烧伤后肝脏总蛋白NF-κB     

严重烧伤早期SRC-3基因敲除小鼠肝脏糖皮质激素受体表达变化的实验研究

目的 研究严重烧伤早期SRC-3基因敲除小鼠肝脏糖皮质激素受体表达及核转位的变化.方法 以SRC-3基因敲除小鼠为实验组,以野生型小鼠为对照组,以小鼠15%～20%TBSAⅢ度烧伤为实验模型,观察两组在严重烧伤前、烧伤后1、6、12 h肝脏GR表达及核转位的变化,同时提取致伤前、致伤后1 h以及6 h血清标本,观察炎性细胞因子TNF-α及抗炎细胞因子IL-10的变化.结果 野生型小鼠致伤后肝脏总蛋白中GR 1 h即显著下降,6 h仍明显低于正常,12 h有所恢复.而SRC-3基因敲除小鼠致伤后肝脏总蛋白中GR无明显变化,野生型小鼠和SRC-3基因敲除小鼠致伤后肝脏GR核转位均增加,但SRC-3基因敲除小鼠GR核转位增加更为显著;两组致伤后炎性细胞因子TNF-α均升高,但野生型小鼠升高更为显著,而实验组抗炎细胞因子IL-10的升幅大于对照组.结论 严重烧伤对野生型小鼠和SRC-3基因敲除小鼠肝脏GR的影响具有明显的差异,SRC-3的缺失可能减轻了严重创伤早期对GR功能的抑制作用.     

炎症诱导性早产小鼠血淋巴细胞CD86和CD69分析

目的 分析小鼠血共刺激分子CD86和各淋巴细胞亚群活化分子CD69的表达,探讨Toll样受体4(TLR4)在脂多糖(LPS)诱发的早产中的作用。方法 在预先阻断TLR4或不阻断TLR4的条件下,腹腔注射LPS建立小鼠炎症诱导性早产模型,计算各组(LPS组、抗TLR4组和对照组)的早产率和死胎率。应用流式细胞仪检测血CD45+CD86+、CD3+CD69+、CD19+CD69+和CD49b+CD69+细胞的百分率。结果 LPS组的早产率\[50.0%(8/16)\]和死胎率\[11.0%(9/82)\]均高于对照组\[0(0/16),3.1%(5/163),P<0.01或P<0.05\],抗TLR4组的早产率\[6.3%(1/16)\]和死胎率\[3.9%(6/154)\]均低于LPS组(P<0.01或P<0.05)。预先阻断TLR4明显抑制LPS所致的血CD45+CD86+、CD3+CD69+和CD49b+CD69+细胞水平的升高(P均<0.01)。结论 LPS与其特异性受体TLR4作用,触发CD86+树突状细胞的活化和动员,导致T细胞和NK细胞等淋巴细胞亚群的激活,在早产的发生中具有重要作用。     

传染性单核细胞增多症患儿外周血淋巴细胞亚群、 细胞因子、TLRs 的表达变化及其临床意义

目的 检测Epstein-Barr 病毒（EBV）感染的传染性单核细胞增多症（IM）患儿外周血淋巴细胞亚群、 细胞因子及Toll 样受体7（TLR7）、TLR9 的表达变化及其临床意义。方法 选取2019 年1 月—2019 年 12 月杭州市儿童医院收治的98 例感染EBV 致IM 急性期患儿作为研究对象,另外选择50 例EBV 感染阴性 儿童作为对照组。采用流式细胞术和酶联免疫吸附试验分别检测IM 患儿急性期、恢复期（病程满1 个月后 复查）外周血淋巴细胞亚群和细胞因子水平。另外分离外周全血单个核细胞（PBMC）,采用qRT-PCR 检测 TLR7 和TLR9 mRNA。结果 与对照组比较,IM 急性期患儿外周血CD3+、CD8+、白细胞介素-1β（IL- 1β）、IL-6、IL-8、IL-10、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、γ 干扰素（IFN-γ）、TLR7 和TLR9 mRNA 相 对表达量升高（P <0.05）;CD4+、CD19+、CD16+56+ 降低（P <0.05）。IM 急性期患儿EBV DNA 载量与血清 IL-1β、TLR9 mRNA 呈正相关（r s =0.247 和0.348,P <0.05）,与其他指标无关（P >0.05）。IM 患儿在恢复 期时,外周血CD3+、CD8+、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-γ、TLR7 和TLR9 mRNA 相对 表达量降低（P <0.05）;CD4+、CD19+、CD16+56+ 升高（P <0.05）。结论 监测IM 患儿外周血淋巴细胞亚群、 细胞因子及TLR7、TLR9 的表达变化,尤其是重点关注血清IL-1β 和TLR9 mRNA 的表达,有助于了解病 情进展和转归。     

酒精性肝衰竭患者能量代谢与临床特点

目的 探讨酒精性慢加亚急性肝衰竭患者(酒精肝衰竭组)的能量代谢与临床特点.方法 选择28例酒精肝衰竭患者为研究组,48例乙肝慢加亚急性肝衰竭患者(乙肝肝衰竭组)为对照组,根据疾病程度分早期和中期,根据预后分恢复和死亡.应用间接能量代谢测定仪及24h尿素氮测定患者静息能量消耗(resting energy expendi...     

过氧化物酶体增殖物PGC-1α对肝缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的 探讨过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)对肝缺血再灌注损伤的保护作用.方法 构建大鼠肝缺血再灌注损伤模型,恢复灌注后12 h,以蛋白免疫印迹(Western blot)检测PGC-1α表达情况,并检测肝脏活性氧、三磷酸腺苷(ATP)水平及血丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性变化,评估肝功能情况.另一方面,构建PGC-1α慢病毒过表达载体,并在大鼠缺血再灌注前转染,于缺血再灌注后,再以Western blot检测PGC-1α表达,肝脏活性氧、ATP水平和血肝酶活性变化,评估PGC-1α表达对肝缺血再灌注损伤的保护作用.结果 缺血再灌注肝脏PGC-1α表达较假手术组及对照组(未手术)明显降低(均P<0.05),同时肝脏活性氧族水平及ALT活性显著升高,而肝ATP产生减少(均P<0.05).PGC-1α慢病毒过表达载体转染显著上调缺血再灌注肝脏PGC-1α表达,同时肝脏活性氧族水平及ALT活性较未转染组显著降低,而肝ATP产生增加(均P<0.05).结论 PGC-1α表达有利于保护肝缺血再灌注损伤.     

TLR9在非小细胞肺癌患者外周血单个核细胞抗肿瘤免疫中的调控作用

目的 研究TLR9激动剂--含非甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸序列的寡脱氧核苷酸(CpG ODN)对非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血单个核细胞(PBMC)抗肿瘤免疫的影响.方法 分离36例NSCLC患者PBMC和肺癌细胞,RT-PCR检测TLR9 mRNA表达.PBMC分别经空白培养、不含非甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸序列的寡脱氧核苷酸(non-CpG ODN)和CpG ODN共培养72 h.3H-TdR掺入法测定PBMC增殖变化.流式细胞仪检测T细胞表面CD69分子变化、T细胞亚群比例以及CD8+T胞内IFN-γ和IL-4的表达.ELISA法测定PBMC上清液IFN-α的浓度,并评价抑制性ODN和氯喹对IFN-α产生的影响.分别以自体肿瘤细胞和K562细胞为靶细胞(T),以PBMC为效应细胞(E)流式细胞仪检测不同E/T时PBMC的细胞毒活性.结果 NSCLC患者PBMC表达TLR9 mRNA,其表达强度(0.76±0.09)与健康者(0.77±0.09)差异无统计学意义(t=0.00,P=1.00).CpG ODN诱导肺癌患者PBMC增殖(P<0.01),上调CD3+T细胞表面CD69分子表达(P<0.01),增加CD4+T/CD8+T比值(P<0.01),增强CD8+T产生IFN-γ的能力(P<0.01).CpG ODN促进PBMC分泌IFN-α(P<0.01),抑制性ODN和氯喹抑制CpG ODN诱导产生的IFN-α.CpG ODN增强PBMC对K562和自体肿瘤细胞的细胞毒活性(均P<0.01).结论 TLR9参与调控NSCLC患者的抗肿瘤免疫,TLR9的激活效应主要包括促进PBMC活化、增殖并诱导产生IFN-α,增加PBMC中CD4+T的比例并促进CD8+T分泌IFN-γ,增强PBMC对肿瘤细胞的细胞毒活性.     

ISCOM 型白血病瘤苗联合1-甲基色氨酸免疫治疗荷瘤小鼠疗效观察

目的：探讨免疫刺激复合物（ISCOM ）型白血病肿瘤疫苗（简称瘤苗）联合1-甲基色氨酸对荷瘤小鼠的治疗作用。方法皂苷溶液中加入脂肪酶蛋白（1 mg／mL ）7℃反应12 h ,加入80μL 脂类混合物溶液和5 mL 皂苷溶液（1 mg／mL ）制备ISCOM 型白血病瘤苗。 C57BL／6小鼠分为模型组、ISCOM 型白血病瘤苗组、1-甲基色氨酸组和联用组（ISCOM 型白血病瘤苗＋1-甲基色氨酸）,小鼠注射 FBL-3细胞建立白血病荷瘤小鼠模型,模型组给予等量生理盐水,其余各组接受对应药物治疗4周后,记录体质量,NK 细胞、Mφ细胞和细胞毒 T 淋巴细胞（CTL）细胞杀伤活性、血清 IL-10和 IL-12表达水平。结果联用组瘤质量低于1-甲基色氨酸组和 ISCOM 型白血病瘤苗组[（0．64±0．26）g vs ．（2．49±0．91）g ,P＜0．01;（0．64±0．26）g vs ．（1．28±0．73） g ,P＜0．05）];联用组 M φ细胞杀伤活性显著高于1-甲基色氨酸组[（55．69±13．69）％ vs ．（69．47±14．79）％,P＜0．01）];联用组NK 细胞杀伤活性显著高于1-甲基色氨酸组[（38．41±8．27）％ vs ．（67．22±12．74）％,P＜0．01];联用组 CTL 细胞杀伤活性高于1-甲基色氨酸组和 ISCOM 型白血病瘤苗组[（43．77±8．89）％ vs ．（69．68±11．44）％,P ＜0．01;（58．87±9．45）％ vs ．（69．68±11．44）％,P＜0．05）];联用组 IL-10均显著低于1-甲基色氨酸组、ISCOM 型白血病瘤苗组[（76．2±6．82）pg／L vs ．（98．3±13．4） pg／L ,P＜0．01;（76．2±6．82）pg／L vs ．（202．3±44．5）pg／L ,P＜0．01）];联用组 IL-12高于1-甲基色氨酸组、ISCOM 型白血病瘤苗组[（381．2±47．3）pg／L vs ．（332．1±30．2）pg／L ,P ＜0．05;（381．2±47．3）pg／L vs ．（291．2±17．3）pg ／L ,P＜0．01）。结论ISCOM 白血病瘤苗联合1-甲基色氨酸具有较佳的抗瘤活性,其机制可能是通过介导 IL-10和 IL-12的表达。     

小鼠AFP/DC疫苗体外免疫活性检测及对小鼠皮下移植瘤抑制作用

目的将已构建的Balb/c小鼠具有分泌性信号肽的AFP1cDNA和去掉信号肽的AFP2cDNA真核表达载体,分别在小鼠树突状细胞(DCs)中表达,并观察其在体外抗肝癌免疫中的作用和对小鼠皮下移植瘤的抑制作用。方法脂质体转染PcDNA3.1( )/AFP1、PcDNA3.1( )/AFP2至DCs细胞进行表达、鉴定,将DCs疫苗与同源小鼠脾淋巴细胞混合培养,MTT比色法测定脾淋巴细胞的特异性杀伤肝癌细胞的活性。随后建立小鼠肝癌皮下移植瘤模型,用AFP1/DCs和AFP2/DCs进行皮下注射,观察其对Balb/c小鼠皮下移植瘤的抑制作用;观察各组治疗后皮下移植瘤的体积的大小,治疗组小鼠的存活期,取瘤组织行免疫组化观察Bax凋亡基因的表达情况,观察另一半荷瘤小鼠的生存时间。结果所构建的真核表达质粒pcDNA3.1( /-)/AFP1和pcD-NA3.1( /-)/AFP2在小鼠树突状细胞中获得稳定高效表达,AFP2/DCs明显刺激T淋巴细胞的增殖及提高CTL的特异性杀伤作用,AFP1/DCs和AFP2/DCs皮下注射可显著抑制肝癌H22细胞移植瘤的生长,以AFP2/DCs的效果更明显,治疗2周后AFP2/DCs组小鼠的肿瘤体积(726.7±298.2)mm3明显小于AFP1/DCs组的肿瘤体积(1486.2±457.2)mm3和空质粒对照组的肿瘤体积(2137±547.2)mm3,两组间有统计学差异(P<0.05),AFP2/DCs治疗组、AFP1/DCs治疗组的抑瘤率可达79.2%和39.7%,空质粒对照组和生理盐水对照组的抑瘤率为0;AFP2/DCs治疗组、AFP1/DCs治疗组的小鼠存活期分别为(54.5±4.2)d、(40.2±4.8)d,较空质粒对照组(30.6±6.2)d显著延长。AFP2/DCs治疗组移植瘤组织中Bax阳性细胞的百分率为92%,显著高于AFP1/DCs组(64%)和pcDNA/DCs(21%)和生理盐水组(23%),两组间差异有显著性(P<0.05)。结论成功地构建了真核表达载体PcDNA3.1( )/AFP1和PcDNA3.1( )/AFP2,编码去掉分泌性信号肽的AFP2cDNA真核表达载体转染的小鼠树突状细胞,能够诱导较强的特异性抗肝癌免疫效应。其机制可能与诱导肝癌细胞凋亡有关。     

Akt-eNOS信号通路介导去甲肾上腺素调节内皮祖细胞动员

目的：探讨去甲肾上腺素（NE）对小鼠内皮祖细胞（EPCs）增殖能力、迁移能力及从骨髓动员的影响,并分析其分子机制。方法取8周大C57小鼠随机分为3组,各5只,分别为：空白对照组（皮下注射生理盐水,无手术）,模型组（皮下注射生理盐水,左下肢肢体缺血）,NE组（皮下注射NE 100μmol／100μL ,左下肢肢体缺血）。采用小鼠左下肢股动脉结扎术制备肢体缺血模型,微渗泵持续泵入NE ,流式细胞仪检测小鼠骨髓、外周血和脾脏中EPCs ;培养人外周血EPCs ,用 NE刺激,检测 EPCs的增殖和迁移能力,以及Akt‐eNOS信号通路的激活情况。结果 NE能够促进肢体缺血小鼠骨髓EPCs的动员,增加外周血和脾脏的EPCs ,NE组与模型组比较,骨髓[（3．271±0．772）％ vs ．（1．320±0．256）％]、外周血[（0．261±0．041）％ vs ．（0．110±0．028）％]和脾脏[（4．671±0．345）％ vs ．（1．880±0．0．381）％]EPCs均增加,差异均有统计学意义（P＜0．01）。NE能促进EPCs的增殖和迁移能力,且能够呈浓度依赖性地激活EPCs内的Akt‐eNOS信号通路。结论 NE通过Akt‐eNOS促进EPCs的迁移和增殖,以及在小鼠骨髓中的动员。     

主动脉瓣钙化对冠心病预测价值的探讨

目的 探讨主动脉瓣钙化的形成因素和对冠心病的预测价值.方法 回顾性分析北京协和医院2009年11月至2010年4月590例行冠脉造影并同期行超声心动图检查的患者的临床资料.结果 590例患者中有285例(48.3％)经超声心动图检查诊断为主动脉瓣钙化,与非主动脉瓣钙化患者相比年龄更高[(68.3±9.4)岁vs.(59...     

盐酸青藤碱介导Hedgehog信号通路治疗小鼠溃疡性结肠炎分子机制的研究

  目的  研究盐酸青藤碱(SH)对小鼠溃疡性结肠炎(UC)的保护作用及可能机制。   方法  将24只小鼠采用随机数字表法分为正常组、模型组、SH低、高剂量组(SH 20 mg/kg、60 mg/kg)4组,每组6只;记录疾病活动指数(DAI)和结肠组织病理学评分,检测Shh mRNA及相关蛋白和细胞因子的表达。   结果  与正常组相比,模型组DAI评分[(3.44±0.27)分vs. 0分, P＜0.001]升高,组织病理学评分升高[(7.67±0.52)分vs. 0分,P＜0.001],Shh mRNA降低(P＜0.05),Shh、Smo、Ptch1、Gli1蛋白表达水平降低(均P＜0.01),TNF-α、IL-1β、IL-6升高(均P＜0.001);与模型组相比, SH低、高剂量组DAI评分[(2.50±0.18)分、(1.89±0.17)分vs. (3.44±0.27)分, P < 0.001]降低, 组织病理学评分降低[(5.17±0.75)分、(3.33±0.52)分vs. (7.67±0.52)分, P < 0.001],Shh、Smo、Ptch1、Gli1蛋白升高(均P＜0.001),TNF-α、IL-1β、IL-6降低(均P＜0.01)。   结论  SH可治疗小鼠UC,其机制可能是SH上调了Hedgehog信号通路活性,从而降低了TNF-α、IL-1β、IL-6含量。      

生脉注射液对创伤失血性休克大鼠免疫功能的影响

目的探讨生脉注射液对创伤失血性休克大鼠T淋巴细胞及其亚群的影响,为揭示生脉注射液调理创伤后免疫功能紊乱机制提供依据。方法制作创伤失血性休克大鼠模型。将30只SD大鼠随机分为3组,分别为正常对照组（A组）、创伤失血性休克组（B组）、生脉注射液治疗组（C组）,每组各10只。3组大鼠分别于实验开始后第3天处死。全自动血液生化仪检测大鼠血常规,流式细胞仪检测T淋巴细胞及其亚群（CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋）含量。结果大鼠创伤失血性休克后,机体出现过度的炎症反应和免疫功能低下状态,B组与A组比较,白细胞含量显著升高[（8.890±0.387）×10^9/L vs（4.230±0.856）×10^9/L,P=0],中性粒细胞比例显著升高[（26.15±2.97）%vs（16.00±4.53）%,P=0],淋巴细胞比例显著下降[（68.57±5.23）%vs（76.617±4.9）%,P=0.001]。应用生脉注射液治疗后,C组与B组比较,白细胞明显下降[（6.29±0.758）×10^9/L vs（8.89±0.387）×109/L,P=0],中性粒细胞比例显著下降[（20.29±3.09）%vs（26.15±2.97）%,P=0.001],同时,淋巴细胞比例显著上升[（74.85±4.12）%vs（68.57±5.23）%,P=0.007]。创伤失血性休克后,B组与A组相比,大鼠CD3^＋、CD4^＋T淋巴细胞数量显著降低[CD3＋：（31.17±4.00）vs（41.97±2.50）,P=0;CD4^＋：（10.49±1.42）vs（15.51±3.48）,P=0.003],CD4^＋/CD8^＋比值降低[（0.97±0.09）vs（1.19±0.07）,P=0],CD8＋含量变化差异无统计学意义[（17.75±5.94）vs（17.34±3.77）,P=0.997]。大鼠处于免疫功能抑制状态,在生脉注射液治疗后,C组与B组比较,CD3^＋、CD4^＋T细胞数量显著升高[CD3^＋：（36.64±5.73）vs（31.17±4.00）,P=0.001;CD4^＋：（10.49±1.42）vs（13.94±2.02）,P=0.008],CD4^＋/CD8^＋比值有所升高[（1.12±0.03）vs（0.97±0.09）,P=0.001]。结论创伤失血性休克大鼠出现炎症反应和T淋巴细胞免疫功能下降,应用生脉注射液能明显提高创伤失血性休克大鼠T淋巴细胞的免疫功能,降低炎症反应。