硫芥对大鼠淋巴细胞毒性作用的研究

目的 探讨硫芥中毒对淋巴细胞的作用机制,为寻找硫芥中毒早期改变的敏感指标和提高中毒的防护水平奠定其础。方法 建立硫芥中毒淋巴细胞模型,分别用单细胞凝胶电泳法检测淋巴细胞DNA损伤;用镀铜镉还原法和一氧化氮合成酶试剂盒检测中毒后淋巴细胞培养上清液一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）的变化;用流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳支检测细胞凋亡。结果 硫芥中毒后4h淋巴细胞DNA明显损伤,72h最明显,5d开始恢复;中毒后NO、NOS的变化相似,4h明显升高,1d达到峰值并于3d开始恢复。NOS的抑制剂（L-NAME）可明显降低NO的含量,但对实验组NOS的活性无明显影响。流式细胞仪检测结果显示4h淋巴细胞凋亡明显,而1、3d几乎无凋亡产生。琼脂糖凝胶电泳结果表明4h出现典型的细胞凋亡的征象,而1、3d则表现为细胞死亡。结论（1）SCG法敏感、经济、简便、可用于硫芥中毒细胞毒性、中毒程度的评价,在早期诊断上有良好的应用前景;（2）中毒后因NOS的活性升高导致NO的升高而产生细胞毒作用可能是硫芥的中毒机制之一;（3）细胞凋亡参与了硫芥的中毒过程,亦可能是其中毒机制之一。     

硫芥中毒犬外周血IL-2、IL-6含量变化和淋巴细胞DNA损伤

目的 研究硫芥中毒犬外周血IL-2、IL-6变化和淋巴细胞DNA损伤的规律。方法 重庆家犬硫芥中毒(16mg/kg，sc)。中毒后不同时相点取血，分离血清和淋巴细胞。采用放射免疫方法测定血清中IL-2、IL-6含量，以单细胞凝胶电泳技术测淋巴细胞DNA损伤程度。结果 中毒后4h血清IL-2、IL-6含量开始下降，72h达最低值，120h开始恢复。单细胞电泳检测结果提示，硫芥导致明显的淋巴细胞彗星现象。受损细胞率、淋巴细胞DNA片段迁徙度于中毒4h即开始升高，24～72h持续升高。结论 硫芥中毒导致发生早且持续时间较长的犬外周血IL-2、IL-6含量下降和淋巴细胞DNA损伤。     

氧自由基在大鼠硫芥中毒复合烧伤小肠损伤中的影响

目的 探讨氧自由基在硫芥中毒复合烧伤对大鼠小肠损伤中的作用.方法 SD大鼠随机分为对照组、单纯硫芥中毒组、30%TBSAⅢ度烧伤组、中毒复合烧伤组,观察动物致伤后2、6、12、24、48、72 h血浆二胺氧化酶(DAO)活性、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、回肠组织病理学的改变情况.结果 单纯及复合伤均导致动物外周血中SOD活力明显下降(P＜0.01),MDA含量、DAO活性显著上升(P＜0.01),复合致伤组与单纯烧伤以及单纯中毒组有明显差异(P＜0.01);致伤后小肠组织结构损伤明显,损伤程度与损伤时间呈正相关,复合伤组的改变较相同时相点单纯损伤组明显.结论 硫芥全身中毒早期,小肠即受到损伤,在复合烧伤的情况下所导致的该损伤更为严重,氧化应激反应也更为剧烈.提示自由基与硫芥中毒复合烧伤对大鼠小肠的损伤关系密切.     

硫芥对大鼠淋巴细胞谷胱甘肽含量的影响

目的探讨硫芥中毒后淋巴细胞谷胱甘肽含量变化.方法用密度梯度离心法分离大鼠脾淋巴细胞,与硫芥共同进行体外培养.用MTT法测定细胞活力.以荧光分光光度计法测定细胞还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、氧化型谷胱甘肽(oxidizedglutathione,GSSG)含量变化,结果淋巴细胞活力在硫芥中毒后降低水平与细胞内GSH含量呈直线相关关系.硫芥中毒8 hGSH含量开始下降,8～12 h维持在低水平,24～48hGSH进一步下降;GSSG含量24～48h显著低于对照水平;GSH/GSSG比值在8 h后显著降低.结论硫芥中毒淋巴细胞活力与谷胱甘肽含量的变化存在显著相关性.     

硫芥对大鼠淋巴细胞DNA及白细胞介素的影响

目的　探讨硫芥中毒动物淋巴细胞的损伤特点及中毒早期白细胞介素的浓度变化作为硫芥毒性损伤诊断的可能性 .方法　分离大鼠脾淋巴细胞培养 ,经 10～ 10 0 0 μmol·L- 1 芥子气染毒 30 min,以单细胞凝胶电泳法 (SCG )检测DNA损伤 ;同时测定硫芥中毒大鼠血液 IL- 2和 IL- 6浓度 .结果　中毒后淋巴细胞 DNA迁移率和受损细胞百分率呈时间和剂量依赖关系 (r=0 .6 3,P<0 .0 1) ;培养液中 IL- 2和IL- 6浓度明显降低 ,IL- 6含量为 (46 8± 16 ) μg· L- 1 ,4 h开始下降 ,72 h降至 (177± 16 )μg· L- 1 (P<0 .0 1) ,12 0 h有所回升 ,但仍然明显低与对照 (P<0 .0 1) .其中 IL- 2几乎难以检出 .结论　硫芥中毒早期机体免疫系统受到明显抑制 ,SCG检测 DNA损伤用作评价硫芥细胞毒性指标在诊断方面具有一定价值     

硫芥对大鼠止血和凝血功能的影响

目的：研究硫芥中毒对大鼠的止、凝血功能的影响机制。方法：建立大鼠硫芥中毒模型,注射1／4LD50硫芥7d后测定血红蛋白(Hb)、血小板计数(PLC)、有核细胞计数(NC)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维结合蛋白(FN)、纤溶酶(Plm)等指标。结果：硫芥组及各治疗组大鼠Hb、PLC、NC明显低于对照组。硫芥中毒组大鼠血清FN低于对照组,EPO加用四药治疗组FN明显高于硫芥中毒组和其他治疗组。硫芥中毒组APTT、PT均比其他各组延长。结论：硫芥中毒可导致大鼠PLC、Hb、FN减少及内、外源凝血功能降低;促红细胞生成素(EPO)对FN合成有促进作用。     

硫芥诱导大鼠小肠上皮细胞凋亡的研究

目的：观察硫茶对大鼠小肠上皮细胞（IEC－6）生长的影响及其引起的细胞死亡的方式。方法：透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳定性硫芥中毒的IEC－6细胞形态变化及DNA的改变。采用Cell Death DetectionELISA试剂盒研究IEC－6细胞凋亡与硫芥浓度之间的关系。结果：0．1－1000μmol/L硫芥对IEC－6细胞的毒性作用与硫芥的深度和作用时间呈正相关。电镜观察到细胞凋亡的形态学改变。细胞膜完整,染色质固缩并聚集于核膜边缘,凋亡小体形态;DNA电泳有“DNA Ladder”出现,0．1－100μmol/L硫芥处理的细胞的凋亡量随硫芥 度的升高而增加,超过100μmol/L测凋亡量反降低。结论：硫芥可诱导大鼠小肠上皮IEC－6细胞凋亡,在低浓度时以凋亡为主,高浓度时则出现坏死。     

硫芥对大鼠脾脏淋巴细胞线粒体的损伤作用

目的观察硫芥对大鼠脾脏淋巴细胞线粒体的损伤作用.方法用密度梯度离心法分离大鼠脾淋巴细胞,与硫芥共同进行体外培养.用琼脂糖DNA凝胶电泳观察细胞凋亡的发生;用Western blot观察Cyt-c释放.用MTT法检测线粒体功能状态,以罗丹明123标记的荧光探针检测线粒体跨膜电位.结果 100 μmol/L硫芥作用4 h线粒体功能就有降低,线粒体跨膜电位降低,二者间呈直线相关.硫芥中毒早期即可引起淋巴细胞线粒体细胞色素C释放和细胞凋亡(DNA ladder).结论硫芥可引起大鼠脾淋巴细胞线粒体明显损伤,线粒体参与了硫芥的细胞毒性作用过程.     

硫芥中毒小鼠骨髓粒细胞微核率与剂量的关系

硫芥的致突变与致癌的作用,早为实验和人类的实践所证实。本文对小鼠(ICR种)硫芥不同剂量中毒诱发骨髓粒细胞微核形成以及在不同剂量条件下,剂量与致突变的相关性进行了研究。硫芥纯度91.1％,按需要配成丙二醇液溶,皮下注射,24h后剪取小鼠后腿骨约1cm,用Hany’s液冲洗髓腔。将骨髓在玻片上推开,自然干燥,常规瑞氏染色,油镜下计数     

不同剂量硫芥对雄性小鼠生殖细胞的毒性作用

硫芥(sulfur mustard,SM),又名芥子气,是重要的化学战剂,也可用于某些过度增生性疾病的治疗。硫芥中毒可造成全身多器官的损伤,生殖系统对硫芥较为敏感,但关于硫芥生殖毒性的研究较少。本实验以不同剂量的硫芥染毒实验动物,观察实验动物的精子形态,以检测硫芥对受试动物雄性生殖细胞的遗传毒性,为进一步阐明硫芥的遗传毒理学机制提供实验依据。     

硫芥诱导小鼠染色体畸变和微核形成作用的研究

目的　研究硫芥对中国仓鼠肺成纤维细胞 (chinesehamsterfibroblastcellline ,CHL)染色体的诱变作用及对小鼠骨髓微核率的影响。方法　培养CHL细胞 (±S9) ,以不同浓度硫芥处理 2 4h后常规方法制备染色体 ,观察畸变类型并计算畸变率。KM小白鼠皮下注射硫芥染毒 ,2 4h后处死动物 ,取双侧股骨 ,行骨髓涂片和姬姆萨染色 ,计数含微核嗜多染红细胞(polychromaticerythrocyte ,PCE)数。结果　硫芥处理的CHL细胞染色体畸变率显著增加 ,出现裂隙、断裂、缺失、多倍体等多种类型畸变 ,并呈量效依赖趋势。S9不影响硫芥诱导的CHL细胞染色体畸变形式和畸变率。与对照组比较 ,注射硫芥小鼠骨髓PCE微核率显著增加 (P <0 .0 1) ,硫芥剂量越大 ,微核形成率越高。结论　硫芥能直接诱发细胞染色体损伤。     

Histomorphological and histochemical alterations following short-term inhalation exposure to sulfur mustard on visceral organs of mice

INTRODUCnONSuifurmustard[SM;bis(2-chloroethyl)sultide],achendcalwaIfreagent,producespainfulblisters0nexp0sedskin(S0maniandBabu,l989;Sasseretat.,l996).Thera-diondmeticproPeniesofSMledtoitsclinicaluseasachemoheraPeuticagentagalnsttumors(WarthinandWelled,l919).SMcancauseseverecutaneousinjurytohumanskin.SMnot0nlyaffectstheskinbutalsootherorganssuchaseyesandrespiratorytract(Papirmeis-teretal.,199l;DraceandGOdman,l996).Inhalati0n0fSMvaP0urrnainlythectsthelaryngealandtracheobronchialmuc0…     

小鼠小肠缺血再灌注损伤后FGFR3基因的变化

目的通过检测成纤维细胞生长因子受体3（fibroblast growth factor receptor 3,FGFR3）在小鼠缺血再灌注（I／R）损伤后肠上皮基因表达变化,为进一步研究FGFR3对缺血再灌注损伤的修复作用及机制奠定基础。方法采用小鼠肠系膜上动脉夹闭法制备缺血1h后再灌注动物模型。分为正常组、野生鼠I／R组和FGFR3增强小鼠I／R组。检测再灌注1、3、6h和1、3d时肠上皮损伤程度和血浆D-乳酸水平,用实时逆转录-聚合酶联反应（Realtime-PCR）检测小肠中FGFR3 mRNA表达。结果肠缺血再灌注1、3、6h,肠粘膜损害明显,肠粘膜再生1、3h,肠粘膜结构逐渐恢复至正常。FGFR3增强小鼠在各时间点肠粘膜损害程度均轻于野生小鼠。两组小鼠缺血再灌注损伤后D-乳酸水平在各时相点均明显高于正常对照组小鼠,并且均在再灌注1h后达到峰值,然后逐渐下降。但FGFR3增强小鼠在再灌注1、3、6h,均显著低于野生小鼠。两组小鼠缺血再灌注损伤后FGFR3mRNA表达明显增高,均在再灌注1h后达到第一个峰值,然后迅速下降,于3h达到低谷,再迅速升高达到第二个峰值后逐渐下降,3d仍处于较高水平。结论缺血再灌注损伤后小鼠小肠中FGFR3 mRNA表达量显著增加。     

芥子气全身中毒对小鼠脏器细胞DNA生物合成的影响及抗毒剂的防护作用

应用[~3H]—TdR参入示踪方法,观察芥子气全身中毒对小鼠脏器细胞DNA合成的影响及抗毒剂的防护作用。结果表明,芥子气对脏器细胞DNA合成具有强烈的抑制作用(P<0.01),其抑制作用的规律相似,而程度、时相有显著差异(P<0.05)。抑制作用特点:迅速、严重、恢复迅速,且有超常水平,提示动物机体对DNA烃化损伤具有较强的代偿、再生和修复能力。抗毒剂硫代硫酸钠及其与二巯基丙磺酸钠合用对芥子气吸收中毒引起的脏器细胞DNA合成抑制作用有明显的防护作用。     

颈交感神经阻滞对烧伤早期小鼠肝脏干扰素诱导蛋白IFIT1表达的影响

目的检测干扰素诱导蛋白IFIT1(interferon-induced protein with tetratricopetide repeats1)在小鼠各器官组织的表达状况,并在此基础上探讨颈交感神经阻滞(SB)对烧伤后早期小鼠肝脏IFIT1表达的影响。方法雄性C57/129小鼠50只,分为对照组和SB治疗组,TBSA15%～20%Ⅲ度小鼠烧伤模型,分别于烧伤前、烧伤后1、6、12h和24h取肝组织,采用免疫印迹法(Western blot)观察IFIT1的蛋白表达情况,同时提取正常小鼠心、肝、脾、肺、肾、小肠、淋巴细胞和骨骼肌组织RNA,以RT-PCR检测IFIT1表达情况。结果RT-PCR结果显示IFIT1在正常小鼠各组织均有表达,但组织间的表达量存在差异。Western blot结果表明对照组烧伤后肝组织IFIT1表达显著增高(P<0.01),烧伤后SB治疗组IFIT1表达量较对照组相应时相点降低非常显著(P<0.01)。结论IFIT1在小鼠体内广泛表达。SB对严重创伤的治疗作用可能是通过抑制肝内IFIT1表达来实现的。