人喉癌P_（53）、Rb基因突变的PCR－SSCP检测

应用聚合酶链式反应一单链构象多态分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析）技术，检测了喉癌中抗癌基因Ｐ５３第５～８和１１外显子及Ｒｂ基因第２０外显子的突变。结果表明：Ｐ５３、Ｒｂ基因突变与癌组织病理分化程度有关，中、低分化癌的突变例数明显多于高分化癌；Ｐ５３、Ｒｂ基因突变失活与喉癌发生、发展及恶性度有关。应用上述快速敏感的检测方法检测Ｐ５３、Ｒｂ基因突变，对判断喉癌恶性度及估计预后有一定的实用价值。     

肿瘤抑制基因p53及Rb在鼻咽癌中的表达

为观察ｐ５３基因和Ｒｂ基因与鼻咽癌发生的关系，应用聚合酶链反应－单链构型多态分析技术（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术），检测３３例鼻咽癌组织、４例鼻咽部炎悸组织及３例正常鼻咽部组织中ｐ５３基因第７，８外显子的突变。结果显示，在３３例鼻咽癌中有７例存在ｐ５３基因第８外显子的突变，突变率为２１．２％。在第７外显子中未检测出突变发生。应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，对Ｒｂ基因在鼻咽癌在存在状态基因突变及Ｒｂ基因的缺     

肿瘤抑制基因p53及Rb在鼻咽癌中的表达

为观察ｐ５３基因和Ｒｂ基因与鼻咽癌发生的关系，应用聚合酶链反应－单链构型多态分析技术（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术），检测３３例鼻咽癌组织、４例鼻咽部炎性组织及３例正常鼻咽部组织中ｐ５３基因第７，８外显子的突变。结果显示，在３３例鼻咽癌中有７例存在ｐ５３基因第８外显子的突变，突变率为２１．２％。在第７外显子中未检测出突变发生。应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，对Ｒｂ基因在鼻咽癌中存在状态进行研究。结果表明，在１３例鼻咽癌组织中有１１例鼻咽癌组织有Ｒｂ基因的缺失或明显减弱，提示ｐ５３基因突变及Ｒｂ基因的缺失而导致的基因失活与鼻咽癌的发生有密切关系。     

喉癌p53基因突变与人乳头状瘤病毒感染的关系

目的探讨喉癌细胞ｐ５３基因突变与人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）感染的关系及其临床意义。方法应用星普旋转离心柱Ｂ溶液系统,结合聚合酶反应链多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）及ＤＮＡ序列分析（ＰＣＲ－ＤＮＡＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇ）,对３６例喉癌组织新鲜标本进行ＨＰＶ定型、相对定量及ｐ５３基因第４至第８外显子突变检测。结果３６例喉癌标本中有１３例发生基因点突变或转码突变,其中１０例为ＨＰＶ１６／１８感染者,且与细胞内病毒含量呈正相关。２４例晚期喉癌（临床Ⅲ－Ⅳ期）有颈淋巴结转移者突变检出率明显高于无转移者（Ｐ＜０．０５）。结论喉癌ｐ５３基因突变与ＨＰＶ１６／１８感染有关,晚期喉癌颈淋巴结转移与ｐ５３基因突变有关。     

银染PCR—SSCP法检测食管癌P^53基因突变

目的：探索快速、有效、简便的检测食管癌Ｐ＾５３基因突变的方法,以利于食管癌的早期诊断和研究。方法：用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法检测本院６３例食管切除标本的Ｐ＾５３基因突变（选突变多发位点５、６、７、８外显子）。结果：食管癌Ｐ＾５３基因突变发生于第５、６、７、８外显子,总突变率６８％,鳞癌、腺癌、未分化癌中Ｐ＾５３突变率差异不显著;鳞状上皮不典型增生中Ｐ＾５３突变率为６１．８％。结论：Ｐ＾５３基因突变可     

贲门腺癌组织肿瘤抑制基因P53突变分析

采用ＰＣＲ－ＤＮＡ序列分析方法，对来自河南林州市３６例贲门癌组织进行肿瘤抑制基因Ｐ５３第４到９外显子突变分析。结果：３６例贲门癌组织中３例发生Ｐ５３基因突变（８％，３／３６）；突变分别发生在第５，６和８外显子上。对３例已知有Ｐ５３基因突变的癌组织大体标本，分别在４个不同部位（１２点、６点和９点和３点钟处）进行取材，进一步进行Ｐ５３突变结构分析，发现３例中第１例４个位点均发生Ｐ５３基因突一突变部位相     

PCR－SSCP法检测胃癌P53基因突变

应用多聚酶链反应和单链构象多态性分析法（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测１９例冰冻胃癌组织Ｐ５３基因第７外显子ＤＮＡ片段扩增及突变情况，同时应用免疫组化法（ＩＨＣ）检测相应胃癌石蜡包埋组织中Ｐ５３蛋白的表达。结果发现４例（２１．１％）胃癌组织Ｐ５３基因第７外显子发生突变。而Ｐ５３蛋白表达率达４７．４％（９／１９）。Ｐ５３基因突变及Ｐ５３蛋白表达与肿瘤发生部位、组织学类型、淋巴结转移及肿瘤分期无关（Ｐ＞０．０５）。提示在胃癌发生和演变过程中，Ｐ５３基因突变是重要事件，其中第７外显子是突变热区之一。     

食管癌前病变P53肿瘤抑制基因突变分析

利用聚合酶链反应－单链构型－ＤＮＡ序列测定技术对食管癌高发区河南辉县和林县居民食管癌前病变和癌组织进行Ｐ５３肿瘤抑制基因第５，６，７和８外显子突变分析。在３７例非癌患者活检组织中共发现８例突变。其中１例发生在正常上皮，３例发生在基底细胞增生，４例发生在间变。突变均发生在第５外显子。３例在１７５密码子，２例在１７６密码子，其余３例分别在１５９，１３２和１３５密码子，２９例鳞癌组织检查发现１６例Ｐ５３基因突变（５５％）。突变多分布在第５和７外显子。点突变中，７５％为碱基转换，２５％为碱基颠换。结果提示Ｐ５３基因突变在食管癌的早期阶段已发生。     

P^535—8外显子在喉癌中的表达

采用改良玛尼亚法从喉癌患者术后新鲜组织标本中分别抽提全ＤＮＡ，用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法进行扩增和电泳，然后行硝酸银染色，判断喉癌的中心组织，癌旁组织，转移淋巴结中的Ｐ＾５３５－８外显子的突变。结果表明：３５例喉癌组织标本中Ｐ＾５３５－８外显子的突变率为６０％，Ｐ＾５３突变与淋巴结转移存在相关关系，Ｐ＾５３５－８外显     

食管鳞癌组织中抑癌基因p16突变的检测

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测了４０例食管鳞状细胞癌及癌旁组织中Ｐ１６莽原突变情况。结果：１１例（２７．５％）癌组织中有Ｐ１６基因突变，其中９例发生在第２外显子，突变率随癌分化程度减低及浆膜浸润和淋巴转移有增高趋势。癌旁粘膜中未发现Ｐ１６基因突变。提示：食管鳞癌中存在Ｐ１６基因突变，是食管癌发生中的晚期事件，并可能与食管癌的进展与转移有关。     

食管癌多中心起源理论的分子学基础研究

采用免疫组化选择性ＤＮＡ序列分析方法，对来自河南省林州市２１例原发性食管鳞癌患者食管癌组织和癌旁基底细胞增生、间变和原位癌病灶的肿瘤抑制基因Ｐ５３进行比较研究。结果：２１例原发食管癌病灶中发现１４例Ｐ５３基因突变（６７％）。突变部位分别为第５外显子（４例，占２９％）、第６外显子（１例，占７％）、第７外显子（２例，占１４％）和第８外显子（６例，占４２％）。１例突变发生在第４内显子（７％）。对１４例癌旁上皮基底细胞增生、间变和原位癌病灶的Ｐ５３基因分析发现均有不同数量的基因突变。间变及原位癌组织的Ｐ５３基因突变与癌组织极为相似，但是基底细胞增生病变的Ｐ５３基因突变与癌组织不同，其突变部位均发生在第５外显子。提示：食管上皮不同部位的孤立病灶出现相似的分子学改变，支持食管癌多中心起源的理论，随着病变从基底细胞增生到间变到原位癌和早期浸润癌的发展，这些分子学变化可能在癌变的不同阶段起重要作用。     

食管癌p53基因突变的研究

应用非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法分析了３０例食管癌患者癌组织及相应癌旁组织Ｐ５３基因第５－９外显子，结果发现８例癌组织存在Ｐ５３基因突变。其中的４例为Ｐ５３基因杂合性丢失。部分癌旁组织检测到Ｐ５３基因突变，实验结果表明，Ｐ５３基因突变可能是分管癌癌变的早期遗传学损害，对食管癌的发生起重要作用。     

P53基因突变与泌尿系肿瘤关系的初步研究

采用ＤＮＡ聚合酶链式反应－单股构型多态分析及ＤＮＡ直接测序法对２０例膀胱移行上皮癌、１０例肾细胞癌和１７例睾九精原细胞瘤组织的Ｐ５３基因突变进行研究，有７例（３５％）膀胱癌和４例（２３．５％）睾丸精原细胞瘤有Ｐ５３基因突变，另外研究了抗癌基因Ｒｂ失活和癌基因ｒａｓ和ｃ－ｅｒｂＢ－２激活。结果提示泌尿系肿瘤的发生和Ｐ５３基因突变有关，也涉及Ｒｂ和ｒａｓ、ｃ－ｅｒｂＢ－２的异常改变。     

鼻咽癌P53基因突变的研究

目的：探讨鼻咽癌Ｐ５３基因突变问题。方法：用聚合酶逻反应－－单链构象多态分析法对４０例鼻咽癌患者的Ｐ５３基因突变进行了分析探讨。结果：检测５．６．７．８四个外显子,发现３例突变,其中第６外显子１例,第７外显子１例,第８外显子１例,仅第５外显子无突变发生。结论：鼻咽癌Ｐ５３基因突变在四个保守区均有可能发生。     

广西地区胃癌与P53基因突变关系的初步研究

用聚合酶链式反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）技术检测８例胃癌及１例正常胃组织Ｐ５３基因有２４９密码子点突变，结果未发现异常，提示Ｐ５３基因第７外显子第２４９密码子点突变不是本地区胃癌Ｐ５３基因突变的常见类型。     

贲门腺癌组织肿瘤抑制基因P53突变分析

采用ＰＣＲＤＮＡ序列分析方法，对来自河南林州市３６例贲门癌组织进行肿瘤抑制基因Ｐ５３第４到９外显子突变分析。结果：３６例贲门癌组织中３例发生Ｐ５３基因突变（８％，３／３６）；突变分别发生在第５，６和８外显子上。对３例已知有Ｐ５３基因突变的癌组织大体标本，分别在４个不同部位（１２点、６点、９点和３点钟处）进行取材，进一步进行Ｐ５３突变结果分析，发现３例中第１例４个位点均发生Ｐ５３基因突变，且突变部位相同，第２例只有３个位点出现一致性改变，第３例仅在一个位点发现Ｐ５３基因突变，而其他３个部位未检测出Ｐ５３基因突变。提示：尽管这一地区食管癌和贲门癌发病率均较高，但两者发病的分子学基础及机理可能存在不同的途径。同一肿瘤不同部位Ｐ５３基因突变情况不一致，贲门癌变可能还有其它癌基因或肿瘤抑制基因参与。     

胸腔积液中脱落细胞p53基因突变的检测及其意义

探讨聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测胸胸液脱落细胞Ｐ５３基因突变在恶性胸腔积液（ＭＰＥ）诊断中的可行性及价值。方法用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分别检测了１９例ＭＰＥ及１２例结核性胸腔积液中新鲜脱落细胞标本的抑癌基因－Ｐ５３基因５－８外显子的突变情况,并与正常胸膜组织进行对照。结果７例ＭＰＥ有Ｐ５３基因突变,突变率为３６．８４％。其中５例发生在第５外显子,２例发生在第７外显子,第６、８     

NMBzA对猴食管上皮癌基因和多种抑癌基因的作用

应用ＰＣＲ扩增和直接测序方法，分析致癌物甲基苄基亚硝胺（ＮＭＢｚＡ）对猴食管上皮细胞中癌基因Ｈａ－ｒａｓ和多种抑癌基因ｐ５３、Ｒｂ、ＡＰＣ的作用。结果未发现Ｈａ－ｒａｓ第１２密码子突变；给猴灌喂食管上皮ＮＭＢｚＡ２４和４８ｈ，食管上皮有ｐ５３基因突变指纹；灌喂ＮＭＢｚＡ４８ｈ，存在Ｒｂ与ＡＰＣ基因突变指纹；灌喂ＮＭＢｚＡ第５天的猴食管上皮细胞中，ｐ５３、Ｒｂ、ＡＰＣ基因突变指纹消失。实验证实：化学致癌物ＮＭＢｚＡ能引起多种抑癌基因改变，ＮＭＢｚＡ对细胞中抑癌基因的遗传性突变影响可能需要多次作用。这些基因突变指纹与过去报道的部分原发性食管癌中的ｐ５３、Ｒｂ和ＡＰＣＮＭＢｚＡ突变相同。     

肺癌组织 p53 基因突变的研究

目的：探讨肺癌发生的分子遗传学机理，了解肺癌中ｐ５３基因突变的情况。方法：采取聚合酶链反应（ＰＣＲ）及聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）结合银染技术，对２０例肺癌组织中ｐ５３基因外显子５～８进行了突变分析。结果：ｐ５３基因突变１２例，占总人数６０％（１２／２０），分布于外显子５～８。其中第７外显子６例，第８外显子４例，第５、６外显子各１例。鳞癌突变率５０％（３／６），腺癌突变率６０％（６／１０），小细胞肺癌突变率７５％（３／４）。结论：ｐ５３基因突变与肺癌的发生发展有关。     

前列腺癌p53基因的点突变

目的 检测前列腺癌组织中Ｐ５３基因突变的发生率,探讨共与前列腺癌发生的。方法 多聚酶链反应－限制性片段长度多态性方法,检测前列腺癌组织中Ｐ５３基因第４号外显子７２位密码子的点突变。结果 前列腺癌ＤＮＡ样本中检出４号外显子Ｐ５３基因点突变４％,其中杂合性估变３６％,纯合性突变８％,对照组前列腺良笥增生未见Ｐ５３基因变化。结论 前列腺癌发生与５３基因突变有一定关系,应用Ｐ矣Ｂｓｔｕ１酶切多态性分析,对