肿瘤抑制基因p53及Rb在鼻咽癌中的表达

为观察ｐ５３基因和Ｒｂ基因与鼻咽癌发生的关系，应用聚合酶链反应－单链构型多态分析技术（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术），检测３３例鼻咽癌组织、４例鼻咽部炎悸组织及３例正常鼻咽部组织中ｐ５３基因第７，８外显子的突变。结果显示，在３３例鼻咽癌中有７例存在ｐ５３基因第８外显子的突变，突变率为２１．２％。在第７外显子中未检测出突变发生。应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，对Ｒｂ基因在鼻咽癌在存在状态基因突变及Ｒｂ基因的缺     

胸腔积液中脱落细胞p53基因突变的检测及其意义

探讨聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测胸胸液脱落细胞Ｐ５３基因突变在恶性胸腔积液（ＭＰＥ）诊断中的可行性及价值。方法用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分别检测了１９例ＭＰＥ及１２例结核性胸腔积液中新鲜脱落细胞标本的抑癌基因－Ｐ５３基因５－８外显子的突变情况,并与正常胸膜组织进行对照。结果７例ＭＰＥ有Ｐ５３基因突变,突变率为３６．８４％。其中５例发生在第５外显子,２例发生在第７外显子,第６、８     

肿瘤抑制基因p53及Rb在鼻咽癌中的表达

为观察ｐ５３基因和Ｒｂ基因与鼻咽癌发生的关系，应用聚合酶链反应－单链构型多态分析技术（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术），检测３３例鼻咽癌组织、４例鼻咽部炎性组织及３例正常鼻咽部组织中ｐ５３基因第７，８外显子的突变。结果显示，在３３例鼻咽癌中有７例存在ｐ５３基因第８外显子的突变，突变率为２１．２％。在第７外显子中未检测出突变发生。应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，对Ｒｂ基因在鼻咽癌中存在状态进行研究。结果表明，在１３例鼻咽癌组织中有１１例鼻咽癌组织有Ｒｂ基因的缺失或明显减弱，提示ｐ５３基因突变及Ｒｂ基因的缺失而导致的基因失活与鼻咽癌的发生有密切关系。     

应用PCR-SSCP银染法检测肺癌p53基因的突变

目的：探索并建立一套适用于临床检测的ｐ５３基因突变的分析方法，探讨肺癌发生发展与ｐ５３基因突变的关系，为临床诊断和治疗提供分子依据。方法：采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法对２２例肺癌患者ｐ５３基因的第６、第７外显子进行分析。结果：全部患者组织标本经ＰＣＲ扩增，均获得特异的ｐ５３基因扩增产物，进一步对第６第７外显子应用ＳＳＣＰ进行突变分析，不同组织类型肺癌的ｐ５３基因突变率各不相同，第７外显子的突变率（２７．３％）高于第６外显子（９．１％）。结论：ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法是适于肺癌患者ｐ５３基因突变分析的简捷、快速而可靠的检测方法，通过进一步研究，将为肺癌的早期诊断、鉴别诊断和预后判断提供有价值的分子指标。     

85例非小细胞肺癌中p53基因异常的预后价值

目的：探讨ｐ５３蛋白表达和基因突变在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中的预后价值。方法：利用免疫组化方法检测８５例ＮＳＣＬＣ的ｐ５３蛋白表达，聚合酶链式反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法检测３１例肺腺癌ｐ５３基因５、６、７、８外显子突变，研究结果进行单因素生存分析。结果：本组ＮＳＣＬＣ病人的平均年龄为５５．６±８．４岁（中位数５５岁），随访时间的中位数为４７个月，３年、５年总体生存率分别为６６％和６１％。ｐ５３蛋白表达与预后无关（χ２＝１．００，Ｐ＝０．８），而ｐ５３基因突变组病人的生存率显著低于无ｐ５３基因突变组（χ２＝４．８１，Ｐ＝０．０３）。同时，ｐ５３蛋白表达与ＰＣＲ－ＳＣＰ检测的ｐ５３基因突变的一致率仅为５２％。结论：在ＮＳＣＬＣ中ｐ５３蛋白表达和基因突变可能有不同的预后意义，ｐ５３基因突变可作为肺腺癌的辅助预后指标。     

大肠癌组织p53基因突变及其与临床病理关系的探讨

应用非同位素标记ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对３４例大肠癌组织ｐ５３基因第五外显子突变进行了检测。结果：５０％（１１／２２）结肠癌，８．３％（１／１２）直肠癌存在ｐ５３基因突变，低分化腺癌高于高、中分化腺癌（Ｐ＜０．０５），ＤｕｋｅｓＢ、Ｃ期高于ＤｕｋｅｓＡ期（Ｐ＜０．０５），ｐ５３基因第五外显子突变在已发生淋巴转移的大肠癌组织中呈现较强的趋势。提示：检测结肠癌原发灶ｐ５３基因第五外显子突变，对指导结肠癌的诊断、治疗及预后判断具有一定意义     

应用PCR-SSCP方法检测肺癌、肠癌中p53基因突变

目的　研究ＰＣＲ－ ＳＳＣＰ 检测肺癌、肠癌中ｐ５３ 基因突变的方法改进及突变率。方法　用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ,银染技术检测４ 例肺癌和７ 例大肠癌组织标本中ｐ５３ 基因外显子５ ～８ 。结果　肺癌ｐ５３ 基因突变率为７５％ （３／４ 例）,肠癌ｐ５３ 基因突变率为４２．９％ （３／７ 例） 。结论　ｐ５３ 基因突变与肺癌、肠癌的发生密切相关,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术简便快速、灵敏安全的基因突变检测方法,可应用于肿瘤的临床基因诊断。     

人大肠腺癌组织P^53基因突变与表达

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术和免疫组织化学方法检测１８例人大肠腺癌和腺瘤变组织Ｐ＾５３基因第５－８外显子的突变和Ｐ＾５３蛋白的表达，另对９７例大肠腺瘤和腺瘤癌变组织Ｐ５３蛋白表达进行了检测。１８例大肠腺癌中８例Ｐ＾５３基因，第５－６外显子中存在突变。１０例（５６％）Ｐ＾５３表达阳性。     

非小细胞肺癌P53基因突变的研究

采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对３５例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）肿瘤切除组织的Ｐ５３基因５￣８号外显子进行突变检测，对８号外显子同时采用ＰＣＲ－ＤＧＧＥ进行突变检测。发现ＮＳＣＬＣ中Ｐ５３突变率为６５．７％。Ｐ５３率在肿瘤细胞不同分化程度间有显著差异，低分化ＮＳＣＬＣ的Ｐ５３突变率（８９．５％）明显大于高、中分化的ＮＳＣＬＣ（３７．４），虽然有纵膈淋巴结转移的Ｐ５３突变率（７１．４％）高于无给膈转移者（５７     

喉鳞癌中p53基因的检测及其意义

为了探讨喉鳞癌中ｐ５３基因与肿瘤临床分期、病理分化程度及淋巴结转移的关系,应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染系统检测６０例喉鳞癌新鲜组织中抑癌基因ｐ５３基因第７外显子的突变情况。结果：ｐ５３基因第７外显子突变２５例,突变率为４１．７％。临床Ⅰ～Ⅱ期突变率为２６．９％（７／２６）,Ⅲ～Ⅳ期突变率为５２．９％（１８／３４）;高、中、低分程度分布为２３．５％（４／１７）、３７．５（９／２４）、６３．２％（１２／１９）;无淋巴结转移者为２８．１％（９／３２）,有淋巴结转移者为５７．１％（１６／２８）;差异均有显著意义（Ｐ〈０．０５）。结论：提示ｐ５３基因第７外显子突变与喉磷癌临床分期、病理分化程度及肿瘤颈淋巴结转移密切相关。     

胃癌组织中p53基因突变和p53蛋白表达

目的比较胃癌和癌旁组织中p53基因突变及p53蛋白的表达与淋巴结转移和预后的关系。方法采用PCR．SSCP技术和免疫组织化学S-P法，对石蜡包埋组织进行p53基因外显子6．7和8，9以及p53蛋白的检测。结果（1）p53蛋白的阳性表达在癌组织和癌旁组织中分别为47．6％和38．1％；有淋巴结转移的病例p53蛋白表达52．8％。（2）癌组织中p53外显子7的突变率为23．9％；癌旁组织中突变率为19．0％。癌组织中p53外显子6的突变率为10．5％；癌旁组织为8．6％。癌组织中p53外显子8，9的突变率为1．9％；癌旁组织为1．0％。结论有淋巴结转移的病例中，筇3外显子的突变率和蛋白的表达率均明显增高，提示p53外显子的突变在胃癌的发生发展中是一个重要因素，并促进肿瘤的转移。p53基因突变与p53蛋白高表达在癌组织和癌旁组织中无显著差异。     

喉鳞状细胞癌P53蛋白表达和基因突变

目的：探讨喉鳞癌P53蛋白表达和基因移码突变情况。方法：采用SP法检测31例喉鳞癌的P53蛋白表达；人工微切割—PCR—异源双链分析法检测ll例P53蛋白阴性标本第5、6、7、8外显子的移码突变。结果：免疫组织化学显示P53总阳性率为64．5％。T1、T2期阳性率43．8％，T3、T4期为86．7％；有和无淋巴结转移的分别为91．7％、47．4％(P＜0．05)；高分化、中分化及低分化鳞癌中P53蛋白阳性率分别为45．5％(5／11)、66、7％(8／12)、87．5％(7／8)。异源双链分析法分析1例第5外显子和1例第7外显子阳性。结论：在喉鳞癌中，P53蛋白阳性表达多见于T3及T4期肿瘤及有颈淋巴结转移者；p53基因突变率随肿瘤分化程度的降低而升高。     

PCR-SSCP检测胃癌中p53基因突变

目的　研究p5 3基因表达及突变在胃癌发生中的地位。方法　采用链霉菌抗生物素蛋白 -过氧化酶 (S -P)法与聚合酶链反应 -单链构象多态性 (PCR -SSCP)分析技术分别检测胃癌p5 3基因表达及突变。结果　p5 3蛋白表达在正常胃粘膜均为阴性 (0 / 2 0 ) ,在不典型增生为 18% (11/ 6 0 ) ,其中轻度全为阴性(0 / 2 0 ) ,中度 2 5 % (5 / 2 0 ) ,重度 30 % (6 / 2 0 ) ,明显低于胃癌的 5 8% (70 / 12 0 ) (P <0 .0 5 ) ,而中度、重度不典型增生高于正常胃粘膜及轻度不典型增生 (P <0 .0 5 )。胃癌中p5 3基因第 5外显子突变率高达 2 5 % (5 / 2 0 ) ,显著高于无突变的正常胃粘膜 0 % (0 / 2 0 ) (P <0 .0 5 )。结论　p5 3基因突变可出现于中度、重度不典型增生 ,是胃癌发生的一个早期事件。在胃癌发生中p5 3基因第 5外显子突变频繁     

原发性胃腺癌P53基因第7、8外显子突变研究

目的：探讨连云港地区原发性胃腺癌P53基因变异发性情况，方法：应用聚合酶链反应单链构象多态分析法（PCR－SSCP）对20例原发性胃腺癌的P53基因第7、8外显子突变进行了检测。结果：共发现突变5例（25％），其中第7外显子突变4例，第8外显子突变1例，在20例原发性胃腺癌组织分型中，高分化和中分化各3例，均未见P53基因第7、8外显子突变，低分化13例，发现P53基因第7外显子突变3例，第8外显子突变1例；低分一未分化1例，亦发现第7外显子突变。结论：P53基因突变与原发性胃腺癌发生有关；对原发性胃腺癌的治疗有指导意义。     

大肠癌患者粪便p53基因检测及其临床意义

目的: 研究大肠癌患者p53基因突变及蛋白表达之间关系,并探讨从粪便中检测p53基因突变在大肠癌早期诊断中的临床意义。方法: 采用聚合酶链反应单链构象多态性分析(PCR-SSCP)法,检测大肠癌患者癌组织和粪便标本中p53基因第5~8外显子突变情况;同时运用免疫组化法分析癌组织中p53表达情况。结果: 34例大肠癌患者癌组织标本中,p53基因第5~8外显子突变及蛋白表达阳性率分别为52.9%和55.9%,正常黏膜未见p53表达(P<0.01)。p53表达与基因突变呈正相关关系(P<0.05)。p53表达阳性率与肿瘤组织大小有关,肿瘤≤ 5cm者阳性率高于>5 cm者(P<0.05),但与其它临床病理因素无关。12例癌组织中有p53基因突变的患者其粪便中基因突变阳性率为41.7%,正常人未检测出突变。结论: p53基因突变是参与和影响p53表达和生物学功能的主要因素;大肠癌患者粪便中可检测出p53基因突变,粪便中p53基因检测可成为一种新的肿瘤标志物用于大肠癌的诊断及高危人群的筛检普查。     

宫颈癌P53基因突变的检测

探讨抑癌基因Ｐ５３突变与宫颈癌发生发展之间的关系，并为该病的临床检测提供一种分子生物学方法。方法应用多边反应－单链构象多态性分析方法对宫颈癌及慢性宫颈炎组织中Ｐ５３基因５－６外显子的突变进行了检测。     

胶质瘤中p53基因突变p16基因缺失细胞增殖和凋亡及与临床病理特征的相关性研究

目的探讨P53基因突变、p16基因缺失、肿瘤细胞增殖活性(PCMNA)和凋亡在胶质瘤发生发展中的作用、相互关系及其与临床病理特征的相关性。方法应用LSAB免疫组化法检测96例不同类型胶质瘤中P53,P16蛋白表达及其肿瘤细胞增殖活性(PCNA);应用非同位素PCR-SSCP技术检测p53基因5-8外显子突变。应用PCR-DNA测序技术检测SSCP阳性标本中p53基因5-8外显子碱基突变谱和氨基酸顺序改变。应用TUNEL技术检测肿瘤细胞中凋亡的改变。结果结果显示96例不同类型胶质瘤中P53蛋白阳性表达率为41.7%(40/96),其中Ⅱ级肿瘤阳性率为27.3%(13/53),Ⅲ、Ⅳ级肿瘤阳性率分别为62.5%(20/32)、63.6%(7/11),低分级与高分级胶质瘤中P53蛋白阳性表达率有显著性差异(χ2=4.88,P<0.05)。SSCP检测结果显示34/96(35.4%)例胶质瘤出现p53基因异常移动的单链DNA电泳带,主要分布在5,7,8外显子。在40例P53蛋白阳性的病例中有32例呈现该基因的单链构象多态性改变,两种方法检测的符合率基本一致。DNA序列分析显示,17例SSCP有异常电泳带的标本中均存在p53基因突变,而且主要发生在5-8外显子,突变类型多数为点突变或碱基缺失,突变位点多分布在第5外显子130-175号密码子之间,第8外显子270-291密码子之间,突变类型主要为错义突变,且多为单碱基的改变,碱基突变以G→A或A→G最多。p16蛋白的表达缺失率为60.4%(58/96),其中Ⅱ级肿瘤为39.6%(21/53),Ⅲ、Ⅳ级肿瘤为81.2%(26/32)、100%(11/11),在高级别胶质瘤中P16表达缺失率均显著高于低级别的肿瘤。复合表达研究显示,p53蛋白的表达与p16缺失之间存在负相关性(P<0.05)。96例胶质瘤细胞增殖活性及凋亡检测显示,PCNA标记指数(PCNALabelIndex,PCNALI)随着肿瘤分级的升高而递增,而凋亡指数(Apoptosis Index,AI)随着肿瘤分级的升高而递减,PCNALI/AI之比随着肿瘤分级的升高而递增。结论p53异常表达和突变是胶质瘤中最常见的基因改变,与胶质瘤的组织学分级呈显著正相关;p53突变更常位于5、7、8外显子,突变类型主要为错义突变,且多为单碱基的改变,碱基突变以G→A或A→G最多。p53基因突变可以通过p53蛋白的表达来间接反映,p53基因的异常表达及突变与胶质瘤的发生和进展密切相关。p16的缺失更多见于高级别的胶质瘤,与胶质瘤的发生和进展密切相关。胶质瘤发生、发展与PCNA的高表达和细胞凋亡的抑制密切相关,PCNALI/AI比PCNALI或AI单独检测更能反映胶质瘤的病理特征及恶性行为。p53基因突变、p16基因表达的缺失及PCNALI的增高和细胞凋亡的抑制在胶质瘤发生、发展中可能起着重要协同作用并与肿瘤的分化和异常增生显著相关,而胶质瘤细胞凋亡的发生受p53、p16基因的调控,p53及p16抑癌基因的失活,是胶质瘤逃逸凋亡的重要原因之一。     

人类脑胶质瘤P53基因突变与预后的关系

目的　探讨P5 3突变在胶质瘤发生发展中的作用及其与临床病理特征和预后的关系。方法　利用聚合酶链反应 -单链构象多态性分析 (PCR -SSCP)及LSAB免疫组化法对已明确诊断的 4 8例脑胶质瘤进行P5 3基因突变以及蛋白表达的检测。结果　 4 8例胶质瘤中 2 0例P5 3蛋白呈阳性表达 (4 1.7% )。在高级别的肿瘤 (Ⅲ、Ⅳ级 )中P5 3表达率明显高于低级别 (Ⅰ、Ⅱ级 )的肿瘤 (分别是 6 3.2 %、2 7.6 % ) (P <0 .0 5 )。PCR -SSCP检测发现 17例 (35 .4 % )呈现P5 3基因的单链构象多态性改变 ,均位于 5 - 8外显子 ,突变例数依次为 7(4 1.2 % )、1(5 .9% )、4 (2 3.5 % )、5 (2 9.4 % )。两种方法检测的符合率为 89.6 % (4 3/4 8)。在单因素分析中P5 3突变与预后相关 ,而在多因素分析中P5 3突变与预后无关 ,肿瘤的组织学分级与预后相关性显著。该基因的突变与患者年龄、肿瘤大小、性别无关 ,但与胶质瘤的恶性程度相关性显著。结论　胶质瘤中P5 3突变多发于第 5、7、8外显子 ,该基因的突变与胶质瘤的发生及恶性进展相关 ,与预后无关。     

胃癌患者静脉血及肿瘤组织p53基因突变检测的临床意义

目的探讨胃癌患者外周血、门静脉血及癌组织标本p53基因突变或异常表达的临床意义。方法应用PCR-SSCP法检测73例手术治疗的胃癌患者外周血和门静脉血中p53基因的突变,并用免疫组织化学法检测胃癌组织中p53蛋白的异常表达。结果73例胃癌患者中有7例检测到外周静脉血p53基因突变,有29例检测到门静脉血p53基因突变,有51例检测到胃癌组织中p53蛋白的异常表达;胃癌组织中的p53蛋白阳性表达率（69.86%）和门静脉血中p53基因突变检出率（39.73%）均显著高于外周血的检出率（9.59%）。经中位24个月随访,其中有16例出现术后异时性肝转移,这些患者外周静脉血、门静脉血以及胃癌组织中的p53基因突变检出率或p53蛋白阳性表达率均显著高于无肝转移者,而且7例外周静脉血、门静脉血及胃癌组织中同时检测出p53基因突变或p53蛋白阳性表达的患者均发生肝转移。结论胃癌患者外周血中p53基因突变者术后发生异时性肝转移的可能性显著增加,外周静脉血联合门静脉血以及胃癌组织中p53基因突变检测有助于判定胃癌患者的预后。