血浆游离DNA的STR分型检测研究

目的：探讨利用血浆中游离DNA进行短串联重复序列（short tandem repeat,STR）分型检测,解决法医学个体识别和亲权鉴定问题的可行性。方法采集36例无关健康个体EDTA-Na2抗凝血样,分离血浆,采用经典酚-氯仿法分别处理血浆和血细胞,对提取的DNA进行15个STR基因座常规PCR扩增和荧光标记复合扩增,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳检测2种STR分型方法进行检测。结果常规PCR扩增银染检测和荧光标记复合扩增毛细管电泳检测两种STR分型方法的结果表明,同一个体的血浆游离DNA和血细胞DNA STR分型一致,且分型效果接近。结论血浆游离DNA可作为一种有效的生物学样本进行STR分型检测,应用于法医个体识别和亲权鉴定。     

口腔粘膜脱落细胞DNA多态性分型检测在法医学应用的初步研究

目的研究各类口腔粘膜脱落细胞的微量生物性捡材中DNA提取和检验的方法,初步论证牙刷等载体作为法医物证检材的可能性。方法分别采用Chelex-100法、有机萃取法、联合抽提法三种方法提取口腔粘膜脱落细胞载体的样本DNA,进行CTTv四个STR位点单步复合扩增和两步级联扩增两种STR-PCR方式的扩增及各位点的等位基因检测。结果实验样本中,除了1例牙刷和2例牙签未能STR位点的正确分型外,其余各无关个体口腔粘膜脱落细胞载体均可以得到与标准血痕阳性相同的STR基因型。结论根据检材的PCR相对模板DNA量,选择适宜的DNA多态性检测分型方法,各类常见的含有口腔粘膜脱落细胞检材可以进行DNA检测分型,这类检材在法医检案中具有应用价值。     

PCR-SSP法进行HLA分型的影响因素分析

日曲：探讨DNA模板质量、DNA聚合酶(Taq)用量对人类白细胞抗原(HLA)分型结果的影响，从而确定PCR一序列特异性引物(PCR-SSP)技术的更加优化的扩增体系。方法：采用PCR-序列特异性引物(PCR-SSP)的方法，对山西地区14400名骨髓供的血样进行了人类白细胞抗原(HLA)基因分型，回顾性分析DNA模板的纯度、DNA用量、DNA聚合酶(Taq)酶用量对HLA分型结果的影响。结果：每个PCR反应的DNA模板量在30ng～50ng之间时PCR扩增效果最优；每个PCR反应所用Taq酶为0．23U时PCR扩增效果最优。结论：DNA模板量和Taq酶用量是使用PCR-SSP技术进行HLA分型的主要影响因素；模板DNA的纯度对实验结果影响不大。     

应用巢式PCR方法对低模板量DNA的流脑病例标本进行MLST分型检测

目的应用巢式PCR方法对低模板量DNA的流脑样本进行MLST分型检测。方法根据脑膜炎奈瑟菌MLST分型检测所选择的管家基因序列选择巢式PCR所需要的引物,对低模板量DNA的流脑样本进行MLST分型检测。结果对6份血清、脑脊液标本进行MLST分型检测,其中3份标本检测成功。结论巢式PCR方法提高了低模板量DNA的流脑样本的MLST分型检测的敏感性。     

两种全基因组扩增技术对单根毛发DNA检验效能的研究

目的研究简并寡核苷酸引物PCR(degenerate oligonucleotide-primed PCR,DOP-PCR)和扩增前引物延伸PCR(primer extension pre-amplification PCR,PEP-PCR)对单根毛发检验的法医学价值。方法以三种方法对单根毛发样本进行STR分型,第一种方法直接对提取DNA用Profiler Plus试剂盒进行STR分型,第二种和第三种方法是先对提取的DNA样本分别进行DOP-PCR和PEP-PCR扩增处理,然后对其产物用Profiler Plus试剂盒进行STR分型,对两种方法的效能进行比较评价。结果 DOP-PCR和PEP-PCR技术增加了单根毛发STR分型的准确率和信息量。结论 DOP-PCR和PEP-PCR技术对单根自然脱落毛发的检验具有实用价值。     

混合斑的DNA鉴定

目的：探讨性犯罪中混合斑的PCR－STR分型鉴定技术，获得可靠的精子DNA分型，从而认定或排除作案嫌疑人，方法：用差异消化法分离混合斑提取精子DNA，多STR基因座同步PCR扩增，PAGE电泳分离，完成混合斑个人识别鉴定35例。结果：PCR－STR分型成功34例（97．143％），认定嫌疑人作案21例（60．00％），排除嫌疑人作案13例（37．143％），分型失败1例（2．857％），结论：差异消化法分离混合斑提取精子DNA进行PCR－STR分型结果满意，10个STR基因座分型相同，偶合概率小于10^-10，认定嫌疑人作案。     

复合扩增STR位点的DNA分型技术在异基因造血干细胞移植植活证据的研究进展及其应用

异基因造血干细胞移植植活证据研究近年已取得了重要进展，从免疫分型到DNA分型均有长足的发展。分型方法包括红细胞血型、HLA抗原、性别鉴定、人类DNA指纹图和复合扩增STR位点的DNA分型等。本综述了复合扩增STR位点的DNA分型方法的特点及近年来研究进展及临床应用情况。     

用Chelex-100方法提取肋软骨DNA105例

目的研究尸体所处环境、死亡时间的条件下,用Chelex-100方法提取肋软骨DNA。方法对案件中不同条件腐败尸体，采用Chelex-100方法提取肋软骨DNA，进行PCR扩增及STR分型。结果提取肋软骨均可获得STR分型。结论肋软骨是法医检案中的一类具有实用价值的检材。     

复合扩增云南明朝古尸DNA分析

目的对距今475a的古代遗骸进行DNA分析,为考古人类学DNA分析完善资料和积累经验．方法以经典的酚／氯仿法和chelex-100法提取DNA,以Qiaquick PCR Purification Kit对DNA进行纯化,以Powerplex 16 Kit进行PCR复合扩增并对结果进行检测分型．结果STR位点图谱清晰．结论复合扩增法可用于古尸DNA分析．     

实验模型下两种全基因组扩增技术对指纹DNA检验的效能

目的对简并寡核苷酸引物PCR（Begenerate oligonucleotide-primed PCR,DOP-PCR）和扩增前引物延伸PCR（Primer extension pre-amplification PCR,PEP-PCR）用于指纹检材DNA检验的价值进行研究。方法建立2种指纹检材DNA模型,分别用普通PCR、DOP技术和PEP技术三种方法对指纹DNA样本进行STR分型,对三种方法的效能进行比较评价。结果实验模型1条件下,三种方法均不能获得满意分型结果;模型2条件下,DOP和PEP两种方法可以增加STR分型的成功率和信息量。结论 DOP和PEP技术必须结合高效的DNA提取技术才能最大程度发挥其检验效能。     

混合斑的DNA鉴定

目的 探讨性犯罪中混合斑的PCR-STR分型鉴定技术,获得可靠的精子DNA分型,从而认定或排除作案嫌疑人。方法 用差异消化法分离混合斑提取精子DNA,多STR基因座同步PCR扩增,PAGE电泳分离,完成混合斑个人识别鉴定35例。结果 PCR-STR分型成功34例(97.143％),认定嫌疑人作案21例(60.00％),排除嫌疑人作案13例(37.143％),分型失败1例(2.857％)。结论 差异消化法分离混合斑提取精子DNA进行PCR-STR分型结果满意,10个STR基因座分型相同,偶合概率小于10~(-10),认定嫌疑人作案。     

人类白细胞抗原—I类抗原的DNA分型与临床应用

目的 采用顺序特异引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ－ＳＳＰ）建立汉族人群白细胞抗原－Ｉ（ＨＬＡ－Ｉ）类抗原Ａ、Ｂ位点ＤＮＡ分型方法。方法 设计合成８１个特异性引物和１对阳性对照引物,组成２０个ＰＣＲ反应用于Ａ位点分型、４１个ＰＣＲ反应用于Ｂ位点分型。结果 所有样本ＰＣＲ－ＳＳＰ基因分型均获得成功,无假阳性和假阴性出现,４０份样本的重复率１００％,总耗时５小时。分型结果经双盲验证完全符合。可准确分辨出Ａ     

结核分枝杆菌ERIC—PCR分型技术的建立

目的建立结核分枝杆菌ERIC—PCR分子生物学分型技术，并应用于临床分离菌株的流行病学调查。方法以肠杆菌科基因间重复序列（Enterbacterial repetitive interemc consensus，ERIC）为引物，对临床分离的结核分枝杆菌DNA进行PCR扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后得到指纹图并进行分析。结果122株临床分离株产生42种不同的指纹图，密切接触者指纹图相同或相似，指纹图谱与患者年龄、菌株的耐药性及耐药种类有关。结论ERIC—PCR是结核分枝杆菌分子流行病学调查的有效技术。     

人类白细胞Ⅰ、Ⅱ类抗原的中分辨度基因芯片分型技术研究

目的 应用基因芯片技术进行北方汉族人群人类白细胞抗原（HLA）Ⅰ、Ⅱ类中分辨度分型研究.方法 根据中国北方汉族人群HLA-Ⅰ、Ⅱ类常见的基因位点以及临床应用中对分型分辨度的实际需要,设计特异性寡核苷酸中分辨度分型探针,制成基因分型芯片.采用带荧光标记的引物,用合适的PCR方法扩增HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原上的多态性区域,产物与芯片上探针杂交.杂交结果经荧光扫描并用特定软件分析判断阳性探针,以此确定样品基因型.共检测30份临床样本.结果 所有样本的HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原基因分型均获成功.此中分辨度探针可分辨出598个Ⅰ类抗原等位基因,511个Ⅱ类抗原等位基因,可捡出Ⅰ抗原特异性57个,Ⅱ抗原特异性30个.结论 基因芯片用于HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原分型可行.     

多重PCR 系统的建立及其在社区型甲氧西林耐药性金黄色葡萄球菌中PVL噬菌体分型中的应用

 目的从基因组型和表型两方面解析从医院环境中分离出的社区型甲氧西林耐药性金黄色葡萄球菌（MRSA）,对携带杀白细胞素（ PVL）基因的MRSA 中的PVL 溶原噬菌体进行分型。方法聚合酶链式反应（PCR）解析菌株所携带的SCC_mec 基因岛型及PVL毒素基因;凝固酶试验测定菌株的凝固酶型;设计8 组PCR 反应组合检测PVL溶原噬菌体型。结果36株菌株所携带的SCC_mec 基因岛分型多样化。携带郁c 型SCCmec 的菌株占多数,为16 株（44.4%）,其次为携带域型SCC_mec 的菌株,为10 株（27.8%）。各菌株所携带的SCC_mec 型别与菌株的凝固酶分型高度一致。经多重PCR 检测,6 株PLV阳性菌株所携带的PVL 噬菌体型分别为ψ108PVL型（3 株）,_ψ 2958PVL 型（1株）和_ψ Sa2mw 型（2 株）。结论院内分离的社区型MRSA的基因型和表型多样化,PVL噬菌体分型的多重PCR系统具有可应用性,应用此系统对鉴别具有异构六角形头部和伸长形头部的PVL 溶原噬菌体有意义。     

多重等位基因特异性PCR-HLA-Ⅱ DNA分型

【目的】对人类组织相容性抗原 (HumanLeucocyteAntigenSystem)Ⅱ类进行高分辨基因分析。【方法】用多重PCR和等位基因特异性PCR技术相结合[1,2 ] ,建立多重等位基因特异性PCR方法。【结果】 2 4对引物成功地分辨 43份DNA的HLA DRB1、B3、B4、B5 5 1个等位基因和DQB1 15个等位基因的 4位数特异性 ,识别基因片段长度为 2 81bp。【结论】多重等位基因特异性PCR技术敏感、微量、节省和分辨能力高 ,是进行复杂的HLA多态性研究中有价值的佐证试验。     

二联体亲子鉴定中常染色体STR基因座检测

目的：探讨常染色体STR基因座检测在二联体亲子鉴定中的应用价值。方法：应用PCR同步扩增24个常染色体STR基因座,PAGE电泳分型,完成二联体亲子鉴定66例。结果：认定亲生关系38例(57．58％),排除亲生关系28例(42．42％)。结论：经24个常染色体STR基因座检测,能确切地认定或排除亲生关系,得出正确的鉴定结论。     

PCR直接测序法检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒DNA

目的 探索检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒(HPV)DNA的有效手段。方法 采用HPV通用引物对宫颈癌标本中的HPVL1区基因序列进行PCR扩增,根据PCR产物序列分析对HPV分型。结果 50例宫颈癌组织HPVDNA检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染最多见。检测出1例HPV58型,其L1区基因序列与德国标准株58型比对,未发现碱基变异。结论 PCR直接测序法是对宫颈癌组织中HPV检测和分型的一种有效方法,并可检测到HPV少见的特殊类型,同时也能提供已知的HPV型别的突变信息。     

PCR直接测序法检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒DNA

目的 探索检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒(HPV)DNA的有效手段。方法 采用HPV通用引物对宫颈癌标本巾的HPVL1区基因序列进行PCR扩增，根据PCR产物序列分析对HPV分型。结果 50例宫颈癌组织HPVDNA检出率为78％，其中HPV16和HPV18型混合感染最多见。检测出1例HPV58型，其LI区基因序列与德国标准株58型比对，未发现碱基变异。结论 PCR直接测序法是对宫颈癌组织中HPV检测和分型的一种有效方法，并可检测到HPV少见的特殊类型，同时也能提供已知的HPV型别的突变信息。