基因工程耐热碱性磷酸酯酶的表达与分离纯化

目的 获得可用于控针的非放射性标记的耐热碱性磷酸酯酶。方法 把耐热碱性磷酸酯酶的基因克隆入质粒ｐＪＬＡ５０３上，在Ｅ．ｃｏｌｉ Ｍｐｈ４４中表达。表达的酶用聚乙烯亚胺沉淀核酸，热变性，硫酸铵沉淀，层析等方法纯化。结果 经表达纯化后每克细菌可获得１．５ｍｇ的酶，酶的纯度为９０％，比活为７８．４Ｕ／ｍｇ。结论 耐热碱性磷酸酯酶可在Ｅ．ｃｏｌｉ Ｍｐｈ４４中表达，表达的酶可用热变性和其它蛋白质纯化方法来     

紫外分光光度法测定蜜丸中5—羟甲基糠醛的含量

采用紫外分光光度法测得六味地黄丸等４种蜜丸中５－羟甲基糠醛的含量为１０．１～１３．７％（ｍｇ／ｇ）。所用方法操作简便，重现性和准确度均较好，可用来评估蜜丸的内在质量。     

基因工程耐热碱性磷酸酯酶的表达与分离纯化

目的　获得可用于探针的非放射性标记的耐热碱性磷酸酯酶。方法　把耐热碱性磷酸酯酶的基因克隆入质粒pJLA5 0 3上 ,在E .coliMph44中表达。表达的酶用聚乙烯亚胺沉淀核酸 ,热变性 ,硫酸铵沉淀 ,层析等方法纯化。结果　经表达纯化后每克细菌可获得 1.5mg的酶 ,酶的纯度为 90 % ,比活为 78.4U/mg。结论　耐热碱性磷酸酯酶可在E .coliMph44中表达 ,表达的酶可用热变性和其它蛋白质纯化方法来纯化。     

先天性静止性夜盲症候选基因附近6个STR基因座在河南汉族人群中的遗传多态性分析

目的:对先天性静止性夜盲症(CSNB)候选基因附近的6个STR基因座在河南汉族人群中的遗传多态性分布进行群体遗传学研究。方法:取100名健康无关个体的河南汉族人群血样,提取DNA,应用PCR结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术,对CSNB候选致病基因RHO、PDE6B和GNAT1附近的D3R1、D3R2、D4P1、D4P2、D3G1及D3G2等6个STR基因座进行基因型分析。结果:6个STR基因座的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律,杂合度在0.660～0.800,多态性信息含量为0.550～0.730(≥0.5),个体识别率在0.761～0.891(>0.7),D3R1、D4P2、D3G2的非父排除率>0.5。结论:这6个基因座是一组良好的遗传标记,可用于CSNB致病基因的定位;D3R1、D4P2及D3G2在法医学方面具有一定的应用价值。     

一个先天性静止性夜盲症家系致病基因的突变分析

目的 检测和分析河南1个常染色体显性先天性静止性夜盲症( autosomal dominant congenital stationary night blindness,ADCSNB)家系相关基因的致病突变.方法 从该家系14名成员的外周血提取基因组DNA,根据已报道的ADCSNB的3个致病基因的6个相关位点设计引物.利用PCR扩增相关位点所在的外显子,纯化扩增产物后进行正反向测序.结果 在该家系患者的RHO基因中发现了1个c.281C＞T的杂合错义点突变,该突变在蛋白质水平将导致p.Thr94Ile的改变,而在该家系正常成员以及50名正常对照中未发现此突变.结论 RHO基因c.281C＞T突变(p.Thr94Ile)为该家系先天性静止性夜盲症发病的分子遗传学基础.     

用STR分型技术作亲权鉴定时判断标准的研究

【目的】 探讨STR分型技术作亲权鉴定时,判断是否存在亲生关系的标准｡ 【方法】 采用二项式分布定律P(m) = (1-π)n-m πm计算亲权鉴定时理论上应该检测的STR基因座数量,并用实际检案检验｡【结果】 确定以下的判断标准｡三联体案:在累积PI值超过10 000的前提下,①最少检测15个STR基因座(单个基因座非父排除率≥0.571 4),若争议父子之间没有发现不符合遗传规律基因座(简称为矛盾基因座,下同);或②检测19个基因座只出现1个矛盾基因座;或③检测28个基因座,只发现2个矛盾基因座;或④检测35个或更多基因座,只发现3个矛盾基因座,作出“肯定亲生关系”的结论;若出现4个矛盾STR基因座,则作出“否定亲生关系”的结论｡单亲案:在累计PI值≥10 000前提下,① 至少检测18个基因座(单个基因座非父排除率≥0.411),没有发现矛盾;或②检测29个以上,只发现1个矛盾基因座;或③检测41个或更多基因座,只有2个矛盾基因座,作出 “不排除亲生关系”的结论;如果出现3个或3个以上矛盾STR基因座,则作出“否定亲生关系”的结论｡本实验室实际检案表明合理｡ 【结论】 上述判断是否存在亲生关系标准符合科学､公正原则,值得推广应用｡     

河南汉族人群6q24-25.1区域STR基因座的遗传多态性

目的：在6q24-25.1区域重新查找高密度的短串联重复序列(STR)基因座并分析其群体遗传学参数。方法：在河南汉族120例无关个体的6Q24-25.1区域查找STR基因座,应用PCR和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术进行分型,调查其在河南汉族群体内的遗传多态性。结果：在6q24-25.1区域共11 Mb范围内新查找...     

HLA与自身免疫性疾病关联性的研究进展

人的白细胞抗原（ＨｕｍａｎＬｅｕｃｏｃｙｔｅＡｎｔｉｇｅｎＨＬＡ）是人类主要组织相窝性复合物，有关ＨＬＡ的研究涉及到遗传学，免疫学和医学，基保ＨＬＡ与自身免疫性疾病的关联是非常重要且引人注目的领域。本文就近年有关这一方面的研究作一综述。     

用 STR进行亲权鉴定时结果的判定及其理论根据

[目的] 探讨亲权鉴定中应该应用的 STR基因座的数量及出现矛盾基因座时下结论的标准.[方法] 根据基因频率和遗传规律,用计算机模拟 1万例亲权鉴定,统计父权指数.根据平均非父排除率和突变率,用二项分布公式计算真父和随机男人出现不同数目矛盾基因座的概率和似然比.[结果] 在 1万例模拟亲权鉴定中,当检测 9个和 13个 STR基因座时,分别有 2%和 0.06%的 PI小于 999.检测 17个 STR基因座,真父和随机男人出现 1个矛盾基因座的似然比为 2.3× 103.检测 24个 STR基因座,真父和随机男人出现 2个, 3个和 4个矛盾基因座的似然比分别为 1 087, 1.408和 0.002.[结论] 亲权鉴定中应该检测 13个以上的 STR基因座.出现 1个和 2个矛盾基因座时,应该分别增加检测到 17和 24个基因座 , 才能下肯定的结论.检测到 3个矛盾基因座时,应该用其它方法作进一步的分析.出现 4个矛盾基因座时,可排除父权关系.     

Y染色体MSY区域内DNA分子重组

长期以来认为Y染色体的大部分区域不会发生重组，称这部分Y染色体为非重组区(NRY)。近来的研究表明这部分Y染色体可以进行重组，因此改称之为男性特异区(MSY)。重组的方式有：在回文序列的两个翼上发生的基因转变，在重复顺序之间进行重组从而导致缺失和倒位，带来一些多态性状甚至引起疾病。还可能存在其他方式的重组。对Y染色体上发生的重组的研究将推动医学、遗传学、基因组学、生物进化、分子生物学和法医学等学科的发展。