亚硫酸氢盐测序法DNA甲基化标记筛查技术的改进研究

目的 改进DNA亚硫酸氢盐测序法(bisulfite genomic sequencing,BGS),建立一种简便快速的甲基化标记筛查技术.方法 基因组DNA在亚硫酸氢盐处理、脱盐纯化后直接进入碱性的PCR体系,通过延长预变性时间完成修饰过程,然后进行常规亚硫酸氢盐PCR(bisulfite-PCR,BSP)扩增;首轮扩增产物再用5'端加有高GC标签序列的引物进行2次扩增,达到调整GC含量和直接测序的目的 .同时用传统和改进BGS法检测3T3-L1细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因和Hela细胞雄激素受体基因启动子的甲基化情况,以评估改进方案的可行性.并用Alu序列实时定量BSP技术比较传统和改进BGS法的灵敏度.结果 无论是高甲基化还是低甲基化片段,改进的BGS法均可实现BSP产物的直接测序,结果与传统法一致.改进法修饰的DNA转化率达到100%,特异度＞93.75%,灵敏度显著高于传统方法(t=2.978 2,P＜0.05),并有良好的重复性.结论 改进后的BGS方法简单灵敏,可用于甲基化标记的快速筛查.     

混合斑的DNA鉴定

目的：探讨性犯罪中混合斑的PCR－STR分型鉴定技术，获得可靠的精子DNA分型，从而认定或排除作案嫌疑人，方法：用差异消化法分离混合斑提取精子DNA，多STR基因座同步PCR扩增，PAGE电泳分离，完成混合斑个人识别鉴定35例。结果：PCR－STR分型成功34例（97．143％），认定嫌疑人作案21例（60．00％），排除嫌疑人作案13例（37．143％），分型失败1例（2．857％），结论：差异消化法分离混合斑提取精子DNA进行PCR－STR分型结果满意，10个STR基因座分型相同，偶合概率小于10^-10，认定嫌疑人作案。     

二联体亲子鉴定中常染色体STR基因座检测

目的：探讨常染色体STR基因座检测在二联体亲子鉴定中的应用价值。方法：应用PCR同步扩增24个常染色体STR基因座,PAGE电泳分型,完成二联体亲子鉴定66例。结果：认定亲生关系38例(57．58％),排除亲生关系28例(42．42％)。结论：经24个常染色体STR基因座检测,能确切地认定或排除亲生关系,得出正确的鉴定结论。     

浅谈血痕确证试验教学的体会

血痕检验占法医物证检验的80％左右，能够把握好血痕检验的每一步，是至关重要的。首先，血痕确证试验有两大特点：其一，灵敏度低，即阳性率低；其二，特异性好，即种属特异性好。如血色原结晶试验，只要得到阳性结果，就可以断言是血痕。因为至今未发现任何一种物质经过同样处理后，能形成同样的结晶。因此，设法提高确证试验的阳性率是该试验的关键所在。在实验操作中，摸索出提高结晶试验阳性率的技术要点，使学生们亲自动手检出血痕的阳性率从30％提高到96％。下面就血痕确证试验——血色原结晶及氯化血红素结晶的操作要领简述如下。剪…     

腐败及角化组织的DNA提取及mtDNA(CA)n重复子分型

目的建立腐败及角化组织的mtDNA（CA）n重复子分型方法。方法收集腐败肌肉、指（趾）甲及毛干各10份，采用Chelex-100法、含有DTT的Chelex-100处理法及PCR缓冲液处理法三种方法提取DNA。经PCR扩增，PAG电泳分离、银染技术进行mtDNA（CA）n重复子分型。结果10份腐败肌肉用3种方法提取DNA均获得分型成功；10份指（趾）甲及毛干，用Chelex-100法提取DNA，只有1份指甲分型成功，用含有DTT的Chelex—100处理法及PCR缓冲液处理法提取DNA均获得分型成功。结论用本文建立的方法提取DNA适用于腐败及角化组织的mtDNA（CA）n重复子分型检验，在法医学上具有一定的应用价值。     

用差异消化二氧化硅膜纯化技术提取和纯化疑难混合斑DNA效果观察

目的:建立疑难混合斑DNA提取和纯化的新方法.方法:从日常司法鉴定检案中收集现场严重污染的疑难混合斑12份,分别采用差异消化Chelex-100法、差异消化酚/氯仿法和差异消化二氧化硅膜纯化法提取DNA,对D19S253、FGA和CSF1PO 3个STR基因座进行PCR-STR分型.结果:用差异消化Chelex-100法提取模板DNA,12份分型均失败;用差异消化酚/氯仿法提取模板DNA,5份分型成功,1份FGA和CSF1PO基因座分型成功,2份CSF1PO基因座分型成功,4份分型失败;差异消化二氧化硅膜纯化法提取的模板DNA,12份分型均成功.结论:差异消化二氧化硅膜纯化法提取DNA 可有效用于疑难混合斑的个体识别.     

Hela细胞雄激素受体基因外显子1的甲基化检测

目的:检测Hela细胞雄激素受体(AR)基因外显子1的甲基化水平.方法:用亚硫酸氢盐克隆测序法和联合亚硫酸氢盐的限制酶法(COBRA)检测不同来源Hela细胞AR基因外显子1的甲基化水平,BiQ Analyzer软件分析测序结果.结果:在非CpG胞嘧啶转化率＞98％的前提下,Hela细胞AR基因外显子1片段的总甲基化率...