乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响

目的：探讨乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响．．方法：采用脂质体介导乙酰肝素酶反义寡核苷酸转染人胃癌细胞株SGC7901细胞,以逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后乙酰肝素酶mRNA、Fas mRNA和Bcl-2 mRNA表达的变化,采用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果：脂质体介导转染乙酰肝素酶反义寡核苷酸后,SGC7901胃癌细胞内乙酰肝素酶mRNA和Bcl-2 mRNA表达下降,FasmRNA表达上升,凋亡细胞比率由转染前的4．04％增加至转染后的16．00％。结论：转染后的乙酰肝素酶反义寡核苷酸可有效地诱导胃癌细胞发生凋亡。     

雷公藤甲素通过调节microRNA21的表达干预K562/A02细胞的化疗敏感性

目的: 研究雷公藤甲素对K562/A02细胞多药耐药性的逆转作用,并探讨其机制。方法: 四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测雷公藤甲素细胞毒性;采用非毒性浓度雷公藤甲素作用于K562/A02细胞,AnnexinV/PI双标法检测细胞凋亡;荧光定量PCR检测microRNA21表达水平;蛋白印迹法检测Bcl-2蛋白表达水平。microRNA21反义寡核苷酸转染K562/A02细胞,观察细胞增长率,凋亡率和Bcl-2表达的变化。结果: 非毒性浓度（5 nmol/L）雷公藤甲素明显增强K562/A02细胞对多柔比星的敏感性,并能增强多柔比星诱导细胞凋亡的作用,使K562/A02细胞平均凋亡率由4.3%明显上升到18.5%（P< 0.05）;雷公藤甲素作用后,microRNA21和Bcl-2蛋白水平降低;microRNA21反义寡核苷酸转染K562/A02细胞后,降低了Bcl-2表达,提高多柔比星敏感性和多柔比星诱导的细胞凋亡。 结论: 雷公藤甲素增强K562/A02细胞对多柔比星的敏感性,并诱导其凋亡,可能与下调microRNA21水平有关。     

Survivin在胃癌SGC7901顺铂耐药中的作用

目的:探讨Survivin在小剂量顺铂长期作用于SGC7901细胞导致细胞耐药中的作用机制.方法:体外诱导建立人胃癌顺铂耐药细胞株SGC7901/CDDP,显微镜下观察SGC7901/CDDP与正常SGC7901细胞株的形态差异,应用RT-PCR技术及Western blot技术分别检测SGC7901/CDDP与正常SGC7901细胞株中Survivin mRNA的表达和 Survivin蛋白的表达.结果:SGC7901/CDDP与正常SGC7901细胞株有明显的形态差异;SGC7901/CDDP 中Survivin mRNA的表达和Survivin蛋白的表达都高于SGC7901细胞.结论:SGC7901对顺铂耐药可能与顺铂诱导SGC7901/CDDP 中Survivin表达增加有关.     

miRNA-21-5p通过pdcd4靶向调控胃癌细胞对顺铂敏感性的机制研究

目的:探究微小RNA-21-5p（miRNA-21-5p）通过下调pdcd4基因表达调控胃癌耐药细胞系SGC-7901/DDP对顺铂敏感性机制的研究。方法:采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同浓度的顺铂（0、1、2、4、8、16、32 μmol/L）对胃癌细胞系SGC7901及胃癌耐药细胞系SGC7901/DDP增殖抑制的影响。通过实时荧光定量PCR检测SGC7901/DDP细胞中瞬时转染miRNA-21-5p inhibitors后miRNA-21-5p相对表达量的变化。采用Western blot及实时荧光定量PCR检测转染组、无关序列转染组（NC组）及空白转染组（CON组）分别转染miRNA-21-5p inhibitors及无关序列后对靶基因pdcd4蛋白及mRNA表达量的影响。结果:MTT实验结果显示耐药细胞SGC7901/DDP相对于亲本细胞SGC7901对顺铂不敏感（P<0.05）。实时荧光定量PCR结果表明,转染组miRNA-21-5p表达量均明显低于NC组和CON组（P<0.01）,转染组pdcd4 mRNA表达量均明显高于NC组和CON组（P<0.01）。Western blot检测结果示,转染组pdcd4蛋白表达量均明显高于NC组和CON组（P<0.01）。结论:miRNA-21-5p表达水平的升高在一定程度上有利于胃癌细胞增殖,并通过下调pdcd4的表达,降低胃癌细胞对顺铂的敏感性。     

miR-145通过IGF1R 与 IRS1逆转胃癌SGC7901/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的:研究miR-145对胃癌耐顺铂细胞株SGC7901/DDP顺铂耐药的影响?方法:应用QRT-PCR检测miR-145在胃癌组织?细胞中的表达水平;MTT法和细胞克隆形成实验检测细胞活性与增殖能力;荧光素酶实验验证miR-145的靶基因;Western blot?免疫组化和免疫荧光实验检测相关蛋白表达;流式细胞术检测耐药细胞对顺铂诱导凋亡的影响?结果:miR-145在胃癌组织?各种胃癌细胞株中呈低表达;在胃癌耐顺铂细胞株SGC7901/DDP中,miR-145呈低表达,IGF1R 与 IRS1呈高表达;上调miR-145增强SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性;荧光素酶报告实验证实IGF1R 与 IRS1为miR-145的靶基因;上调miR-145显著降低靶蛋白表达,抑制SGC7901/DDP细胞增殖,促进顺铂诱导的凋亡?结论:上调miR-145通过靶向IGF1R 与 IRS1逆转胃癌细胞对顺铂的耐药性?     

核仁素调控多药耐药基因MDR1参与胃癌顺铂耐药

目的:探讨核仁素(Nucleolin,NCL)与胃癌顺铂耐药的关系,为胃癌的耐药机制研究和治疗提供新的基因靶点。方法:通过Western blot检测胃癌细胞SGC7901和胃癌顺铂耐药细胞SGC7901/DDP中NCL的表达量;通过转染siRNA干扰NCL的表达量,MTT实验检测敲低NCL表达对胃癌细胞耐药性的影响;通过转染GFP-NCL真核表达质粒,过表达NCL并检测多药耐药基因MDR1的表达变化。结果:Western blot结果表明NCL在耐药细胞SGC7901/DDP中表达量明显升高;MTT实验结果表明,干扰NCL的表达后,胃癌细胞对顺铂DDP的敏感性明显增高;荧光显微镜显示GFP-NCL定位在核仁区域,Western blot显示,NCL过表达能够明显促进MDR1的表达。结论:核仁素NCL通过调控多药耐药基因MDR1的表达参与胃癌细胞顺铂耐药。     

应用siRNA技术下调survivin基因表达以增强SGC7901胃癌细胞对顺铂的敏感性

目的利用小干扰RNA（siRNA）技术特异性下调survivin基因的表达,检测SGC7901胃癌细胞转染前后对顺铂敏感性的变化。方法实验分为空白对照组（control组）、单用顺铂组（CDDP组）、脂质体组（Lip组）、单用survivin siRNA组（siRNA组）、转染survivin siRNA（转染组）及转染survivin siRNA联合顺铂作用组（联合作用组）。人工合成survivin siRNA,通过Lip包裹将siRNA转染胃癌细胞SGC7901,荧光显微镜下观察转染情况。MTT法检测各组细胞的增殖抑制率,Western blot及免疫细胞化学法检测survivin蛋白的表达,Hoechst染色观察细胞凋亡的形态改变。结果Hoechst染色荧光显微镜下control组、Lip组及siRNA组细胞核呈正常的蓝色,而CDDP组、转染组及联合作用组细胞核染色增强、核质浓缩、核碎裂,呈凋亡改变;联合作用组细胞增殖抑制率（63.93±4.22）%明显高于其余各组（P〈0.05）;转染组及联合作用组survivin蛋白表达明显低于其他各组（P〈0.05）。结论应用siRNA技术下调SGC7901胃癌细胞中survivin基因的表达,能够增加其对顺铂的药物敏感性。     

miR-125b靶向抑制BCL2?MCL1表达对胃癌SGC7901/VCR细胞多药耐药性的影响

目的:研究miR-125b在胃癌SGC7901/VCR细胞多药耐药形成中的作用。方法:运用miRNA实时定量PCR方法检测miR-125b在SGC7901/VCR细胞与母代SGC7901细胞中的表达差异,运用Western blot检测SGC7901/VCR细胞与母代SGC7901细胞抗凋亡蛋白BCL2、MCL1的表达差异,分别构建BCL2、MCL1 3’UTR荧光素酶报告质粒验证miR-125b的靶基因,在耐药细胞株中瞬时转染miR-125b模拟物以检测上调miR-125b对SGC7901/VCR细胞BCL2、MCL1蛋白表达及多药耐药性的影响,并运用流式细胞术检测转染后耐药细胞对长春新碱诱导凋亡的影响。结果:miR-125b在SGC7901/VCR细胞中呈低表达,抗凋亡蛋白BCL2、MCL1在SGC7901/VCR细胞中呈高表达,荧光素酶报告实验证实BCL2、MCL1是直接受miR-125b调控的靶基因,在耐药株中上调miR-125b显著抑制BCL2、MCL1蛋白表达水平,显著增加细胞对长春新碱、顺铂、阿霉素、依托泊苷的敏感性,并显著增加细胞对长春新碱诱导的凋亡。结论:miR-125b靶向抑制BCL2、M...     

依维莫司联合顺铂对人胃癌SGC7901细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨依维莫司(RAD001)联合顺铂对人胃癌SGC7901细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响。方法体外培养SGC7901细胞,将其分为对照组,顺铂组(顺铂2.50 mg/L),RAD001低浓度组(RAD001 5.00nmol/L)、RAD001中浓度组(RAD001 10.00nmol/L)、RAD001高浓度组(RAD001 20.00nmol/L)及联合组(顺铂1.25mg/L+RAD001 5.00nmol/L),采用流式细胞术检测SGC7901细胞的凋亡率,采用免疫细胞化学、Western blot检测SGC7901细胞Bcl-2和Bax的表达情况。结果 RAD001、顺铂作用SGC7901细胞48h后,对照组,顺铂组,RAD001低、中、高浓度组及联合组的细胞凋亡率分别为(8.04±0.48)%、(18.94±0.75)%、(10.47±1.05)%、(13.93±2.45)%、(17.20±0.65)%及(23.18±1.05)%。除RAD001低浓度组细胞凋亡率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),其他各组细胞凋亡率均较对照组显著增加(P<0.05)。与对照组比较,顺铂组、RAD001组及联合组SGC7901细胞Bcl-2蛋白表达下降,而Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05),联合组改变最明显。结论 RAD001联合顺铂可通过上调Bax和下调Bcl-2蛋白的表达诱导SGC7901细胞凋亡。     

c-myc反义寡核苷酸对胃癌SGC7901增殖及凋亡的影响

目的 通过脂质体将c-myc正反义寡核苷酸转入人胃癌细胞SGC7901,测定c-myc正反义寡核苷酸对SGC7901细胞的增殖和凋亡的影响.方法 通过脂质体将c-myc正反义寡核苷酸转入人胃癌细胞SGC7901,western blot检测c-myc蛋白的表达变化,MTT法检测增殖,流式细胞术检测凋亡.结果 c-myc反义寡核苷酸可以抑制SGC7901细胞c-myc蛋白的表达,并在72小时达到高峰,MTT检测到c-myc的反义寡核苷酸使细胞生长受到了明显的抑制.流式细胞仪监测c-myc反义寡核苷酸可明显的使得凋亡率上升其作用的高峰在第72小时达到高峰.结论 c-myc反义寡核苷酸可以明显得使得癌基因c-myc的表达受到抑制,从而发挥促进胃癌细胞SGC7901的凋亡并抑制细胞增殖的作用,而这些作用是与c-myc表达的抑制水平相平行的.     

人层粘连蛋白受体调节胃癌细胞多药耐药性的实验研究

目的：探讨相对分子质量为67000的人层粘连蛋白受体（LR）对胃癌细胞多药耐药性（MDR）的调节作用及其机制。方法：应用DNA重组技术构建LR前体蛋白（LRP）的反义RNA表达载体,并借助脂质体将其导入胃癌MDR细胞SGC7901／VCR中。用Western印迹法检测ＬＲ在胃癌细胞中的表达,ＭＴＴ法测定细胞对化疗药物的敏感性,流式细胞仪测定细胞周期以及阿霉素在细胞内的蓄积和潴留。结果：转染LRP反义RNA表达载体显著降低了LR在SGC7901／VCR细胞中的表达。转染细胞（SGC7901／VCR－anLRP)对长春新碱、阿霉素、5－氟尿嘧啶和顺铂的敏感性明显升高,细胞内蓄积和潴留的阿霉素也明显增多。细胞周期分析表明,SGC7901／VCR－anLRP细胞发生了G1期阻滞,并出现了自发性凋亡。结论：LR可能通过影响药物蓄积和细胞凋亡参与对胃癌细胞MDR的调节。     

β-榄香烯对SGC7901 胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨β-榄香烯对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制。方法通过四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）、流式
细胞术检测细胞凋亡、周期分布和平板克隆形成实验检测β-榄香烯对SGC7901胃癌细胞的影响,同时评价β-榄香烯对正常胃黏
膜上皮细胞GES-1的毒性作用;通过Western blots检测β-榄香烯对SGC7901胃癌细胞的蛋白表达影响。结果β-榄香烯显著抑
制SGC7901胃癌细胞的活性并诱导细胞凋亡,两种作用在正常胃黏膜上皮细胞GES-1中明显减弱。β-榄香烯降低SGC7901胃
癌细胞克隆形成率,诱导SGC7901 细胞发生G2/M期阻滞。β-榄香烯降低了SGC7901 胃癌细胞Bcl-2 蛋白表达水平,增加了
Bax和活化的Caspase-3（17Kd）表达水平。β-榄香烯对SGC7901胃癌细胞Pak1（p21-activated protein kinase 1）的总蛋白表达无
明显影响,但降低了Pak1（Thr423）和ERK1/2（Extracellular signal-Regulated Kinase 1/2）的磷酸化水平。结论β-榄香烯抑制胃
癌细胞增殖,诱导胃癌细胞凋亡,其可能的分子机制为抑制Pak1/ERK信号通路的活化、调控Bcl-2和Bax等凋亡相关蛋白表达。
     

survivin反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡及对多西他赛的增敏作用

目的探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide,ASODN）对人胃癌细胞株SGC7901的凋亡诱导、对多西他赛的化疗增敏作用。方法设计合成特异性靶向survivin ASODN。将胃癌细胞株分为空白对照组（Sham组）、单纯脂质体对照组（Lip组）、正义寡核苷酸转染对照组（Lip-SODN组）、ASODN转染组（Lip-ASODN组）。转染48 h后,Western blot法检测各组细胞survivin表达情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,MTT法检测转染细胞对多西他赛的敏感性。结果脂质体介导survivin ASODN转染后的胃癌细胞survivin蛋白表达明显下降,细胞凋亡率明显高于各对照组（P〈0.05）,对多西他赛的IC50值明显低于各对照组（P〈0.05）,细胞生长抑制率明显高于各对照组（P〈0.05）。结论survivin ASODN转染胃癌细胞能下调survivin蛋白表达,诱导胃癌细胞凋亡,抑制细胞增殖,增强多西他赛化疗敏感性。     

Upregulation of drug sensitivity of multidrug-resistant SGC79 01/VCR human gastric cancer cells by bax gene transduction

Objective To investigate the role of bax in a vincristine （VCR）-induced multidrug-resi stant （MDR） human gastric cancer cell line, SGC7901/VCR, in which the Bax prot ein expression level was significantly lower compared with that in parent cells .Methods A bax eukaryotic expression vector was constructed and transfected into SGC7901/ VCR cells by lipofectamine, and resistant clones were selected by G418. Western blotting detected Bax expression in transfectants. Tetrazolium blue (MTT) assa y evaluated the differences in drug sensitivity and cell cycle changes of transf ectants were analyzed using flowcytometry (FCM). Results The bax eukaryotic expression vector was constructed and transfected into SGC790 1/VCR cells. Through G418 selection, resistant clones were obtained. Western b lotting demonstrated that the expression of Bax protein was markedly increased i n bax transduced cells. These cells were more sensitive to adriamycin (ADR) and VCR than mock vector transducted cells. Moreover, bax transfection enhanced AD R-induced apoptosis and VCR-induced G(2)/M phase arrest of SGC7901/VCR cells. Conclusion Bax was involved in the MDR of SGC7901/VCR cells.     

生存素反义寡核苷酸对人胃癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨生存素（survivin）反义寡核苷酸（ASODN）对人胃癌细胞SGC7901增殖的抑制作用。方法 设计合成特异性靶向生存素的反义寡核苷酸。胃癌细胞株SGC7901分为4组：空白对照组、单纯脂质体对照组、正义链转染对照组、ASODN转染组。作用48h后收获各组细胞。Westernblot法检测各组细胞生存素表达情况，流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，MTT法检测各组细胞的生长抑制率。结果 脂质体介导生存素反义寡核苷酸转染后的胃癌细胞出现生存素蛋白表达明显下降；ASODN转染组细胞凋亡率明显高于各对照组（P〈0．05），而各对照组问差异无显著性（P〉0．05）；ASODN转染组细胞的抑制率明显高于各对照组（P〈0．05），而各对照组问差异无显著性（P〉0．05）。结论 生存素反义寡核苷酸转染胃癌细胞能下凋生存素蛋白表达，诱导胃癌细胞凋亡，抑制细胞增殖，具有明显的抗癌作用。     

蚓激酶对胃癌SGC7901细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的：探讨蚓激酶（LBK）对胃癌SGC7901细胞的调控作用,并阐明其作用机制。方法：取对数生长期SGC7901细胞,将细胞分为对照组和2、4、8 U·mL^-1LBK组。采用MTT法检测不同时间段（24、48和72 h）各组SGC7901细胞增殖抑制率,采用细胞划痕实验检测各组SGC7901细胞体外迁移能力,采用流式细胞术检测各组SGC7901细胞凋亡率和不同细胞周期细胞百分率,采用Western blotting法检测各组SGC7901细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达水平。结果：MTT检测,与对照组比较,作用24、48和72h后不同剂量LBK组SGC7901细胞增殖抑制率明显升高（P<0.01）。细胞划痕实验,与对照组比较,4和8 U·mL^-1LBK组SGC7901细胞划痕距离明显增加（P<0.01）。流式细胞术检测,与对照组比较,4和8 U·mL^-1LBK组SGC7901细胞凋亡率明显升高（P<0.01）,G₁期和S期细胞百分率明显降低（P<0.01）,G₂期细胞百分率明显升高（P<0.01）。Western blotting法检测,与对照组比较,8U·mL^-1LBK组SGC7901细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Bax和caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：LBK可抑制胃癌细胞株SGC7901增殖和迁移能力,且能够诱导细胞凋亡,其可能的机制是通过调节Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达水平来实现的。     

miR-16通过调节Bcl-2的表达活性影响胃癌细胞的生物学行为

目的 探讨miR-16调节Bcl-2的表达活性影响胃癌细胞生物学行为的机制。 方法 qPCR检测miR-16在胃癌SGC7901细胞中的转染效率,CCK-8检测miR-16对SGC7901细胞活性的影响,划痕实验检测miR-16对SGC7901细胞迁移能力的影响,流式细胞仪检测miR-16对SGC7901细胞凋亡的影响,Western blotting检测miR-16对Bcl-2蛋白表达的影响以及对凋亡相关蛋白表达的影响。结果 通过miR-16 mimic使miR-16在胃癌SGC7901细胞中过表达后,其细胞活性、迁移能力明显下降,而细胞凋亡率显著上升,同时相关凋亡蛋白表达也增高;Bcl-2 siRNA与miR-16 inhibitor共转染后,能改变miR-16对SGC7901细胞迁移能力、细胞活性和凋亡的影响。结论 miR-16通过调节Bcl-2的表达,抑制细胞活性和迁移能力,诱导胃癌SGC7901细胞凋亡。