实时荧光定量检测人血浆中RASSF1A基因启动子甲基化

目的 建立检测人血浆DNA中RASSF1A基因甲基化的方法.方法 以肺癌细胞株NCI-H460作为RAssF1A基因启动子区甲基化阳性样本,传统酚/氯仿法提取细胞DNA,经紫外分光光度计定量后以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200 μl健康人血浆中,制备得到模拟肺癌患者血浆.用磁珠法从模拟血浆样本和15例早期肺癌患者血浆中提取总DNA.对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰,并以TaqMan技术的实时荧光定量甲基化特异性PCR(MSP)进行检测.以模拟血浆样品作为标准品,用外标准曲线法对肺癌患者血浆中的甲基化RASSF1A进行定量.结果 实时荧光定量MSP对模拟肺癌患者血浆的检测最低限为150拷贝(甲基化的肿瘤DNA)/ml(血浆).15例肺癌患者5例RASSF1A甲基化阳性(33.3%).5例肺癌患者血浆中甲基化的RASSF1A基因的浓度分别为2.56×103,8.20×104,1.45×104,3.31×104和4.24×104拷贝/ml.结论 实时荧光定量MSP法检测肺癌患者血浆DNA中RASSF1A基因甲基化,灵敏度高,特异性强.     

三种含铂化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的 观察三种抗癌药(长春瑞滨、吉西他滨和多西紫杉醇)联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的近期疗效及毒性反应.方法 经病理组织学或细胞学证实的70例晚期NSCLC患者,随机按治疗方法 分为3组化疗,长春瑞滨联合顺铂(NP)组24例,吉西他滨联合顺铂(GP)组25例,多西紫杉醇联合顺铂(TP)组21例,3组患者资料具备可比性,3组患者采用对应药物进行治疗,均以21d为一周期,连续应用两周期后评价疗效及不良反应.结果 NP组总有效率29.2%(7/24),GP组总有效率40.0%(10/25),TP组总有效率33.3%(7/21),3组方案总有效率比较无统计学差异(P＞0.05);毒性反应方面,3组均以骨髓抑制为主,白细胞下降及贫血发生率相近.NP组Ⅰ～Ⅱ度静脉炎(14.6%)较其他两组多,GP组Ⅲ～Ⅳ度血小板降低(16%)较其他两组严重,TP组Ⅰ～Ⅱ度外周神经毒性(38.1%)较其他两组多.结论 用于晚期NSCLC一线化疗,NP、GP、TP三种方案近期疗效相似,但毒性存在差异,故应根据患者个体情况进行选择.     

497例子宫内膜癌的临床诊断治疗以及预后因素分析

目的评价国际大样本数据库子宫内膜癌的临床诊治和预后因素分析。方法选取1995年6月—2013年12月国际TCGA组织诊断治疗的子宫内膜癌患者连续病例,分析临床诊疗的特征,评价临床客观疗效和生存时间。结合lncRNA RP11-350N15.6基因的表达和相关性分析,评价患者的预后指标。结果共497例子宫内膜癌入选。71.6%的患者为Ⅰ~Ⅱ期,白种人为72.6%,子宫内膜腺癌为75.9%,81.1%患者为绝经后患者。RP11-350N15.6基因表达与肿瘤组织病理和分级以及7个重要的肿瘤驱动基因具有明显相关性,高表达组总生存时间明显延长。结论国际TCGA子宫内膜癌研究的诊断治疗符合临床规范,高表达RP11-350N15.6是患者具有良好预后的重要指标。     

重组人血管内皮抑制素的抗肿瘤活性研究

目的观察重组人内皮抑素的抗肿瘤活性及对血管内皮细胞增殖的抑制作用。方法以重组人内皮抑素作用于小鼠移植性肿瘤模型及人癌裸鼠移植性肿瘤，观察其对肿瘤生长的抑制效果，并与传统细胞毒性药物进行比较；同时，以MTT法观察其对血管内皮细胞ECV细胞和结缔组织类成纤维细胞L929细胞的生长抑制作用。结果重组人内皮抑素对小鼠移植性肿瘤Lewis肺癌及人癌裸鼠移植性肿瘤QGY肝癌、A549肺癌、Bcap37乳腺癌均有明显的肿瘤抑制作用；MIT实验显示重组人内皮抑素对血管内皮细胞及结缔组织类成纤维细胞具有生长抑制作用。结论重组人内皮抑素具有一定的抗肿瘤效果。其作用机理可能在于抑制肿瘤血管内皮细胞的增殖。     

高能聚焦超声热疗合并奥曲肽治疗晚期胰腺癌的随机临床对照研究

目的评价HIFU联合奥曲肽治疗晚期胰腺癌的近期疗效与不良反应的观察。方法病理确诊的晚期胰腺癌患者46例(有可测量病灶者),随机分为热疗组和联合组,联合组采用FBY01北大研制的高强度聚焦超声联合奥曲肽治疗,两组均至少治疗2周期后评价疗效。结果全组均可评价疗效。联合组临床受益反应率为75.0%(18/24),热疗组为36.4%(8/22),2组比较有非常显著差异(P<0.01)。联合组治疗前后及两对照组治疗后比较,都有非常显著差异(P<0.01)。热疗组中位生存期约8.8月,联合组中位生存期达到10.8个月,P>0.05。两组的近期有效率,中位生存时间无显著差异(P>0.05)。毒副作用轻微,二者无显著性差异。结论HIFU联合奥曲肽治疗晚期胰腺癌临床受益反应率改善明显,VEGF水平下降明显,且毒副反应轻,病人能耐受,值得临床推广应用。     

肺癌中结肠多发性腺瘤样息肉基因启动子1A序列甲基化模式的研究

目的 探寻结肠多发性腺瘤样息肉（APC）基因启动子1A序列中肺癌甲基化位点及其存在模式。方法 用甲基化序列特异性引物，对阳性控制样品（CB＋）、阴性控制样品（CB-）、13份正常肺组织及19份肺癌组织进行APC基因启动子1A序列甲基化特异性扩增（MSP），其扩增产物直接测序和进行克隆测序分析。结果 在19份肺癌组织中，APC基因启动子1A序列的707、714、719和726位点发生高甲基化，甲基化率分别为95％（18／19）、74％（14／19）、74％（14／19）和74％（14／19），与正常肺组织比较，差异均有统计学意义（P〈0．001）。而679和687位点甲基化发生率均为11％（2／19），与正常肺组织甲基化发生率（0／13）接近（P〉0．05）。结论 在APC基因启动子1A序列中存在CpG胞嘧啶二核苷酸特定甲基化模式，其对肺癌早期诊断可能有重要意义。     

粒细胞集落刺激因子受体在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 研究粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)在qP4,细胞肺癌(NSCLC)中的表达及在NSCLC发生、发展中的作用.方法 应用免疫组化SP法检测35例NSCLC及9例肺良性病变组织中G-CSFR的表达;PI单标流式细胞术检测肺腺癌细胞株A549上G42SFR的表达;BRDU标记法检测rhG-CSF对A549细胞的增殖影响及Annexin V-FITC/PI法检测细胞的凋亡.结果 NSCLC中有明显的G-CsFR蛋白表达,并高于肺良性病变组织(P<0.05);G-CSFR 阴性表达与年龄、性别及肿瘤病理分期无关,而与肿瘤大小有关(P<0.05).A549细胞高表达G-CSFR;rhG-CSF对A549细胞的增殖无明显影响,但可抑制其凋亡.结论 G-CSFR在NSCLC中的表达较肺良性病变组织明显上调,G-CSFR的阳性表达与肿瘤大小有关,其表达可能对肿瘤细胞的凋亡有抑制作用,进而促进肿瘤的发生发展.     

血清微小RNA在肿瘤中的标志作用

动植物中广泛存在着一类非编码小分子RNA,长度大约为20～25个核苷酸,它们被名为微小RNA(micro RNA).研究表明micro RNA在肿瘤发生发展过程中,具有与癌基因或抑癌基因相似的作用,因此,micro RNA可能成为肿瘤治疗、预后和判定疗效的牛物学标记,这有可能改变以往有创伤且昂贵繁杂的肿瘤标记物检测.本文综述血清micro RNA的基础研究、检测手段以其作为标志物在临床的应用.     

肝癌患者的维甲酸治疗价值和维甲酸核受体免疫组化的相关性研究

目的　了解维甲酸核受体（ＲＡＲ－α）在肝细胞癌（ＨＣＣ）的表达分布和它的临床意义。方法　使用免疫组织化学法，对９２例ＨＣＣ的石蜡切片行ＲＡＲ－α免疫组化染色。结果　①在９２ 例ＨＣＣ石蜡切片中，ＲＡＲ－α蛋白表达阳性率为６７％ 。②ＲＡＲ－α蛋白仅见肿瘤细胞核中。③ＲＡＲ－α阳性率的表达与维甲酸治疗疗效密切相关。结论　①ＲＡＲ－α蛋白可以在ＨＣＣ中被检出。②ＲＡＲ－α蛋白阳性率表达与ＨＣＣ的分化程度相关。③ＲＡＲ－α蛋白表达水平可作为判断维甲酸治疗病人疗效的指标     

三苯氧胺逆转过表达BCRP的JAR/VP16细胞对VP16的耐药性

目的 探讨三苯氧胺(TAM)对过表达乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的JAR/VP16细胞的逆转耐药作用.方法 在人绒癌细胞株JAR和对VP16耐药的JAR/VP16细胞株中以MTT法比较单药VP16组、TAM组及两药联合组的药物毒性,并运用流式细胞术以hochest 33342和PI双染观察两株细胞在加与不加TAM时的胞内荧光值强度.以RT-PCR和Western blot方法在mRNA水平和蛋白水平观察TAM、VP16及两药联用时BCRP表达水平.结果 JAR/VP16细胞株与JAR细胞相比,BCRP的表达量上调;TAM能显著增加VP16的抗肿瘤作用,与VP16单药组相比,联合用药组的细胞抑制率增加(P＜0.05);TAM可下调BCRP的表达.结论 BCRP的过表达可能导致了JAR/VP16细胞对VP16的耐药,而TAM可通过下调BCRP的表达及抑制BCRP的功能,从而逆转这种耐药.