毛木耳多糖的分离,分析及免疫药理活性的研究

毛木耳子实体经热水提取,Sevag法去蛋白,乙醇沉淀,得到毛木耳多糖(APP)。APP经Sephadex G-100柱层析,得到APP-A和APP-B两种多糖,经电泳鉴定均为单一区带,分子量分别为12万和7万,糖含量分别为68.33%和66.74%,糖醛酸含量分别为15.96%和15.58%。APP-A单糖组成摩尔比,岩藻糖:木糖:甘露糖:葡萄糖为0.05:0.18:3.20:1.00,APP-B为0.06:0.16:4.01:1.00。200～400 nm紫外扫描,无核酸和蛋白质吸收峰。4000～650 cm~(-1)红外扫描,呈多糖类特征吸收峰。原子吸收光谱分析表明,APP含多种对机体有益的微量元素。APP可增加小鼠脾指数,小鼠碳粒廓清率,增加巨噬细胞的吞噬功能,促进小鼠血清溶血素的形成,对大鼠红细胞有明显的凝集作用。     

毛木耳多糖的抗凝血和降血脂作用

从毛木耳Auricularia polytricha中提取得毛木耳多糖(APP)。APP po 150和37 mg/kg能分别延长小鼠凝血时间和家兔白陶土部分凝血活酶时间;APP能延长体外凝血时间,但对凝血酶元时间无明显影响;APP po 150,300 mg/kg对正常小鼠血清胆固醇水平无影响;APP po 100,150 mg/kg可预防实验性高胆固醇血症的形成;APP po 50 mg/kg×10 d,可降低高脂血症大鼠血清总胆固醇(TC)、血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯,升高血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)/TC;APP的LD_(50)为1165±275 mg/kg。     

毛木耳多糖诱导血小板聚集作用研究

目的：研究毛木耳多糖具有诱导血小板聚集作用。方法：体外试验采用家兔颈动脉采血，体内试验用大白鼠，记录不同条件下的血小板聚集曲线，并比较其差异性。结果与结论：体外试验呈明显的剂量反应关系，该作用受毛木耳另一提取物Ap-f和阿斯匹林抑制，体内试验促进ADP诱导的血小板聚集，增加血小板血栓的重量。     

人参根多糖对受照小鼠保护作用和免疫功能影响的研究

人参根多糖对受7.5～8.5Gy X线一次全身照射小鼠预防给药,有明显的抗辐射损伤作用,提高了照射动物30天存活率,保护指数平均为1.36。采用T淋巴细胞酶标记染色法检测受照动物外周血中ANAE阳性淋巴细胞百分率,给药组明显高于对照组,表明人参根多糖对机体细胞免疫功能具有增强作用。     

枸杞多糖对异丙肾上腺素致心力衰竭大鼠的保护作用及其机制

目的探讨枸杞多糖对异丙肾上腺素致心力衰竭大鼠的保护作用及其机制。方法 SD大鼠皮下注射异丙肾上腺素5mg.kg-1.d-1,连续给药7d,建立心力衰竭模型,观察枸杞多糖灌胃给予大鼠30d,对心力衰竭大鼠心功能、心肌损伤标志酶和抗氧化酶的影响。结果枸杞多糖（50、100和200mg.kg-1）可降低心力衰竭大鼠血清心肌损伤标志酶心肌肌钙蛋白（cTn-I）,改善心率;升高收缩压、左心室收缩压（LVSP）和左心室内压最大上升速率（＋LVdP/dtmax）,改善左心室收缩功能;升高左心室内压最大下降速率（!LVdP/dtmax）,改善左心室舒张功能;提高血清和心肌超氧化物歧化酶（SOD）水平,并相应降低脂质过氧化物丙二醛（MDA）的含量。结论枸杞多糖对心力衰竭大鼠具有保护作用,其机制与其提高机体抗氧化酶的作用有关。     

云芝多糖的抗伤害作用

从真菌中提取的多糖具有广泛的生物活性。云芝多糖(Polysaccharides ofCoriolusversicolor,PS-K)是从担子菌纲云芝(Coriolus ersicolor)菌丝体中提取的一种蛋白多糖,过去     

芦荟多糖对小鼠抗肿瘤作用的实验研究

目的 研究中华芦荟多糖(AP)对小鼠的抗肿瘤作用.方法 观察不同浓度中华芦荟多糖对移植性S180肿瘤小鼠和EAC荷瘤小鼠的抑瘤率,对EAC荷瘤小鼠肿瘤坏死因子(TNF)含量的影响,并以脾系数为指标,观察中华芦荟多糖对环磷酰胺(CTX)的增效减毒作用.结果 不同浓度的中华芦荟多糖对S180荷瘤小鼠和EAC荷瘤小鼠的肿瘤均具有不同程度的抑制作用.结论 中年芦荟多糖可量著改善CTX引起的机体生理机能紊乱,提高其抑瘤作用.     

灵芝多糖的抑瘤作用及对小鼠免疫系统影响的实验研究

目的:探究分析灵芝多糖的抑制作用及其对小鼠免疫系统的影响. 方法:随机选取95只小鼠并采用瘤细胞建立免疫抑制动物模型,将所选小鼠随机分为48例实验组和47例对照组,实验组小鼠采用灵芝多糖口服液灌注,对照组小鼠给予生理盐水灌注,观察并分析灵芝多糖对小鼠的存活期、抑瘤作用及免疫系统的影响作用. 结果:实验组肿瘤小鼠的生存期明显高于对照组肿瘤小鼠(P<0.05) ,并且实验组小鼠血清中TNF-α、IL-2水平显著提高,其肿瘤细胞NK活性及淋巴细胞增生率也显著高于对照组( P<0.05). 结论:灵芝多糖对小鼠肿瘤无直接抑制作用,其抗肿瘤功效主要是通过机体的免疫系统介导,并且灵芝多糖能够有效延长机体生存期.     

灌服芦荟多糖对小鼠抗羊红细胞抗体生成的影响

[目的 ]探讨芦荟多糖对小鼠免疫反应的影响及作用机理。 [方法 ]以羊红细胞 (SRBC)为抗原给小鼠注射后 ,应用芦荟多糖灌胃 ,检测对照组和实验组的抗体生成水平。 [结果 ]实验组SRBC抗体生成水平显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。 [结论 ]芦荟多糖对正常小鼠机体免疫有增强作用     

枸杞多糖对小鼠有机磷中毒的疗效研究

目的枸杞多糖对机体细胞有较强的保护和修复作用,观察枸杞多糖对小鼠有机磷中毒的疗效。方法观察分析阿托品-枸杞多糖合用组、阿托品组和中毒对照组（无治疗）三组中小鼠中毒情况及死亡时间的差异。结果阿托品-枸杞多糖合用组中毒症状出现时间明显延后,小鼠死亡数目也明显减少,而且这种差异具有统计学意义（P〈0.05）,说明枸杞多糖可较明显的改善小鼠的中毒症状,延长小鼠的寿命。结论枸杞多糖与阿托品合用可以明显减轻有机磷对机体的损伤。     

rhKD/APP对急性肝损伤小鼠的保护作用

目的：观察rhKD/APP对四氯化碳（CCl₄）所致急性肝损伤的保护作用，探讨其可能的作用机制。方法：采用CCl₄建立小鼠急性肝损伤模型，取小鼠60只随机分为6组(每组10只)，分别设为空白对照组、模型组、阳性药对照组及rhKD/APP小中大剂量（4.5、9.0、18.0 mg•kg^-1）组。测定实验小鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）及肝组织丙二醛（MDA）、肝重系数并观察肝脏组织病理学变化。结果： rhKD/APP小、中、大剂量组血清ALT、AST活性和肝组织中MDA低于模型组（P<0.05或P<0.01）；肝脏组织病理切片显示，模型组有炎细胞浸润,肝细胞坏死，与模型组相比，rhKD/APP小、中、大剂量组肝组织损伤程度较轻，且随着rhKD/APP剂量增加肝组织损伤程度逐渐减轻。结论：rhKD/APP对CCl₄所致急性肝损伤小鼠具有明显的保护作用。     

TRB3在APP/PS1转基因小鼠脑内的表达及其意义

目的 探讨内质网应激因子TRB3在不同月龄APP/PS1转基因小鼠脑内的表达情况,阐明TRB3与阿尔茨海默病(AD)病情进展的关系。 方法 将APP/PS1转基因小鼠分为3月龄WT组、3月龄APP/PS1组、7月龄WT组、7月龄APP/PS1组,每组各10只。分别以3月龄、7月龄野生型(WT)C57/BL6J小鼠为对照组,每组10只。采用Morris水迷宫实验检测小鼠行为学改变,采用免疫组织化学及Western blotting方法检测TRB3在小鼠脑内的表达。 结果 与同月龄WT组比较,3月龄APP/PS1组未出现明显行为学改变(P>0.05),而7月龄APP/PS1组学习记忆能力下降,差异有统计学意义(P<0.05);TRB3主要在大脑皮层表达,与同月龄WT组比较,TRB3在3月龄及7月龄APP/PS1组脑内的表达均明显增多(P<0.05),且7月龄APP/PS1组脑内TRB3的表达水平明显高于3月龄APP/PS1组(P<0.05)。 结论 TRB3在APP/PS1转基因小鼠脑内表达增多,且TRB3表达水平的增多可能与AD的病情进展有关。     

APP转基因小鼠脑组织中4.1B蛋白的表达研究

目的检测4.1B蛋白在阿尔茨海默病模型APP转基因小鼠脑组织中的表达。方法 PCR鉴定APP转基因阳性[APP（＋）]小鼠和APP转基因阴性[APP（﹣）]小鼠,分别取不同脑区用免疫组织化学法和免疫印迹法检测4.1B蛋白的表达。结果免疫组织化学法显示在APP（＋）鼠和APP（-）鼠的大脑皮层和海马均可见4.1B阳性细胞,APP（＋）组小鼠的4.1B蛋白表达明显高于APP（-）组小鼠。免疫印迹法检测APP（＋）组和APP（-）组小鼠脑组织海马、皮层和小脑中均有4.1B蛋白的表达,APP（＋）组各脑区4.1B蛋白表达均明显高于APP（-）组。结论 APP高表达引起脑组织内4.1B蛋白的表达增高。     

快速老化小鼠P10海马PI3K信号转导通路的变化及APP17肽的影响

目的探讨APP17肽对快速老化小鼠P10（SAMP10）学习记忆、海马组织抗氧化酶活性和PI3K信号转导通路蛋白质变化的影响。方法采用通道式水迷宫实验观察SAMP10行为学改变,采用羟胺法和硫代巴比妥酸（TBA）比色法、黄嘌呤氧化酶法及免疫组织化学染色技术,测定过氧化脂质降解产物中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、PI3K信号转导通路蛋白质的变化。结果①模型组小鼠存在明显的学习记忆功能障碍,APP17肽治疗组小鼠的行为学障碍明显轻于模型组与正常对照组无明显差异;②模型组海马神经细胞线粒体SOD活性明显降低（P<0.01）,MDA含量显著升高（P<0.01）;APP17肽组SOD活性高于模型组（P<0.05）,而MDA含量低于模型组（P<0.01）;③模型组PI3K信号转导通路相关蛋白TrkA、Akt/PKB、bcl 2阳性染色细胞数较对照组分别减少63%、50%和45%(P<0.01),经APP17肽治疗后,各种蛋白的表达明显上调(P<0.05);而神经生长因子（NGF）和结合元件蛋白（CREB）的表达无明显差异（P>0.05）。结论SAMP10存在学习记忆障碍,海马组织抗氧化酶活性降低、自由基代谢产物含量增加、PI3K信号转导通路蛋白表达异常,APP17肽能部分纠正这些异常变化。     

SORL1基因敲除小鼠可作为散发性阿尔茨海默病模型

目的通过与正常小鼠、淀粉样前体蛋白（APP）/PSE1双转基因小鼠行为学和病理学的比较,证明SORL1敲除小鼠可作为 1 种散发性阿尔茨海默病模型。方法Crispr/Case9 技术对小鼠受精卵SORL1 基因进行编辑,通过检测小鼠DNA序列和 Western blot检测SORL1等方法筛选和鉴定SORL1-/-小鼠。实验分为对照组、SORL1-/-组、APP/PSE1组。Morris水迷宫检测小 鼠的学习记忆能力、免疫组化和Western blot分别检测小鼠脑组织中APP、β淀粉样蛋白的表达。结果SORL1-/-小鼠的DNA测 序结果是两条染色体SORL1基因CAAT碱基缺失,而正常小鼠SORL1基因无CAAT碱基的缺失;Western blot检测SORL1-/-组 小鼠脑组织无SOLR1表达。在Morris水迷宫的定位航行实验中,与对照组比较,SORL1-/-组和APP/PSE1组小鼠平均逃避潜伏 期均明显延长（P<0.05）,SORL1-/-组和APP/PSE1组比较,小鼠的平均逃避潜伏期差异无统计学意义（P>0.05）;在Morris水迷宫 的空间探索实验中,与对照组比较,SORL1-/-组和APP/PSE1组小鼠平均穿越平台次数均减少（P<0.05）,SORL1-/-组和APP/PSE1 组比较,小鼠平均穿越平台次数差异无统计学意义（P>0.05）。免疫组化和Western blot检测结果均显示SORL1-/-组小鼠脑组织 中APP和Aβ表达明显较对照组多,SORL1-/-组与APP/PSE1 组脑组织的APP和β淀粉样蛋白表达差异无统计学意义。结论 SORL1-/-小鼠可出现APP/PSE1小鼠相似的行为学和病理学的改变,可作为一种散发性阿尔茨海默病模型。     

丙戊酸钠对雌雄APP/PS1双重转基因小鼠行为学及老年斑的影响

目的 探讨丙戊酸钠(VPA)对不同性别APP/PS1双重转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠的空间学习记忆能力及脑内老年斑(SP)的沉积的影响.方法 3月龄APP/PS1双重转基因AD模型小鼠20只,雌雄各半,随机分为VPA治疗组和生理盐水对照组(每组10只).VPA(30mg·kg-1·d-1)腹腔注射4周后进行Morris水迷宫实验,以检测各组小鼠的空间学习记忆能力;行为学实验结束后,取脑组织进行免疫组化染色以观察老年斑的沉积.结果 行为学实验结果显示:可视平台下,两组小鼠找到平台的时间、搜索的平均路程以及雌雄小鼠的游泳速度均差异无显著性(P＞0.05);隐蔽平台下,VPA治疗组小鼠找到平台的时间及搜索的平均路程较对照组明显缩短(P＜0.01),雄性AD模型鼠无论是治疗组还是对照组找到平台时间和路径均短于雌鼠(P＜0.05);免疫组化结果显示,VPA治疗组雄性小鼠大脑皮质及海马区域的老年斑数量[(11.23±3.78)个]较同性别对照组[(28.17±3.46)个]明显减少(t=14.67,P＜0.01),且比雌性VPA治疗组老年斑[(20.36±4.21)个]也有明显减少(P＜0.05).结论 VPA能显著改善雌性和雄性AD模型小鼠空间学习记忆障碍,减少脑内老年斑的沉积,该改变具有性别差异.

Abstract：

Objective To investigate whether valproic acid (VPA) affect spatial learning memory and senile plaques in the APP/PS1 double transgenic AD mouse model of different gender. Methods Twenty 3-month old APP/PS1 double transgenic AD mice,male and female mouse evenly,were randomly divided into VPA-treated and saline-treated groups ( 10 for each group). 30 mg· kg-1 · d-1 of VPA and the same amount of saline were peritoneally injected into mice for 4 weeks. Morris water maze was conducted to check the effect of VPA on the capability of spatial learning and memory of AD mouse model. Immunohistochemical staining was used to examine the effect of VPA on the morphological changes in the brains of mice. Results Visible platform test showed that VPA-treated and saline-treated mice had similar escape latency (P＞0.05) and path length (P＞0.05) ,the swimming speed between male and female mice had no difference (P＞0.05). Hidden platform test showed that VPA treated mice had a significantly shorter latency (P＜0.01) and path length (P＜0.01) to reach the platform compared with saline-treated mice. Meanwhile, both in VPA-treated and control groups, the male mice had a shorter correlation escape latency and path-length than female mice had(P＜0.05 ). Immuohistochemical staining showed that the number (11.23±3.78) of senile plaques (SP) in the cerebral cortex and hippocampus of VPA-treated male mice were notably decreased than that(28.17 ±3.46) in the control group ( t= 14.67, P＜0.01 ),furthermore,the number of SP in the cerebral cortex and hippocampus of VPA-treated male mice was significantly reduced,as compared with which (20.36 ±4.21)in the VPA-treated female mice(P＜0.05). Conclusion VPA can significantly lower formation of SP, and remarkably improve the capability of spatial learning and memory of APP/PS1 transgenic mice,which have gender difference.     

脑胰岛素信号在阿尔兹海默症模型小鼠渐进过程中的改变

目的：探讨阿尔兹海默症（Alzheimer’s disease,AD）形成过程中脑胰岛素信号及葡萄糖转运体（glucose transporters,GLUTs）表达的改变,为AD早期诊断提供依据。方法：借助APP/PS1转基因AD模型小鼠,运用Western blot检测该模型鼠皮层和海马区域胰岛素信号通路相关蛋白的表达。结果：与对照组相比,AD模型鼠在3月龄时,表现为脑胰岛素信号应激性激活,下游AKT/GSK3β等胰岛素信号分子磷酸化水平升高,而GLUTs此时表达变化不明显;5月龄时,该模型表现为脑胰岛素信号磷酸化水平显著下降,其下游AKT/GSK3β等信号分子磷酸化水平表达下调,同时观察到海马中GLUT3、GLUT4表达下调,AD病理性蛋白（APP）、Tau蛋白磷酸化水平显著增加。结论：胰岛素信号紊乱和葡萄糖转运体在AD形成过程中发生紊乱,且随年龄增长,具有紊乱加剧的趋势。     

常压高氧处理对APP/PS1转基因小鼠空间学习记忆能力的影响

目的 探讨常压高氧(NH)处理是否改善APP/PS1双重转基因AD模型小鼠的空间学习和记忆能力.方法 对APP/PS1双重转基因AD模型种鼠交配后产下的子代小鼠进行基因分型,待子代达10周时,取双重转基因小鼠20只,随机分成A、B2组(每组10只).A组小鼠给予常压高氧(40%O_2, 60%空气)处理,8h/d,持续8周;B组常规喂养,作为对照.高氧处理后进行Morris水迷宫实验,分别检测各组小鼠在可视平台、隐蔽平台及空间探索实验中找到平台的时间及搜索的平均路程;行为学实验结束后,采用ELISA定量检测小鼠脑内Aβ水平.结果 行为学实验结果:(1)可视平台下,2组小鼠找到平台的时间及搜索的平均路程差异尤显著性(P>0.05);(2)隐蔽平台下,高氧处理组小鼠找到平台的时间及搜索的平均路程较对照组明显缩短(P<0.01);(3)空间探索实验中,高氧处理组小鼠经过平台的次数[(6.31±2.55)次]显著高丁对照组[(3.13±1.59)7欠](P<0.01).ELISA结果显示,高氧处理组小鼠大脑皮质及海马内Aβ40[(783.64±97.21)pg/ml和Aβ42(175.30±17.09)pg/ml]水平显著低于对照组[Aβ40(1251.59±42.29)pg/ml、Aβ42(286.83±12.96)pg/ml](P<0.01).结论 常压高氧处理能显著改善AD模型小鼠空间学习记忆障碍;常压高氧可能通过减少Aβ生成或/和促进血管内皮细胞清除Aβ而发挥作用.     

APPswe/PS1dE9转基因小鼠的剖腹产净化技术研究

目的 研究感染肠道鞭毛虫转基因小鼠的生物净化技术.剖腹产方法对感染的小鼠进行净化,使其达到SPF级标准,为建立基因工程小鼠肠道鞭毛虫净化技术提供依据.方法 取感染肠道鞭毛虫的APPswe/PS1dE9阿尔茨海默病（Alzheimer＇s disease,AD）转基因小鼠（APP小鼠）,在超净工作台内行剖腹产取胎手术,用SPF级帕金森病转基因鼠代乳,术后1、4、7、10月进行微生物和寄生虫检测;PCR技术鉴定剖腹所得APP仔鼠及其繁殖群（F1代）APPswe基因型,计算F1代每窝仔鼠APPswe基因阳性率及平均阳性率,用单样本t检验分析APPswe基因阳性率是否符合孟德尔遗传规律.结果 实施剖腹产手术10例,获仔鼠75只,7日龄仔鼠存活率及离乳存活率分别为90.67%（68/75）和73.33%（55/75）;净化前APP小鼠肠道鞭毛虫感染率均为100%（5/5）,净化后的4次检测,APP小鼠SPF级所要求的病原菌及寄生虫结果均为阴性.净化后的APP仔鼠共繁殖42窝F1代,平均每窝APPswe基因阳性率为48.3%,与孟德尔遗传规律50%的理论阳性值相比无统计学差异（P＞0.05）.结论 剖腹产净化技术可成功去除该APP小鼠的肠道鞭毛虫,且对APPswe基因遗传性状未产生明显影响.     

视神经损伤后JNK3、APP蛋白的表达变化对视网膜神经节细胞存活的影响

目的 探讨视神经损伤后小鼠视网膜神经节细胞 (RGCs) 中JNK3、APP蛋白的表达变化及其对RGCs存活的影响.方法 取成年APP野生型小鼠, 采用钳夹法建立视神经损伤模型, 应用免疫组织化学、Western blot法检测造模后视网膜神经节细胞中JNK3、APP蛋白的定位和定量表达变化, 比较损伤7 d后APP基因敲除组及其同窝野生型小鼠RGCs的存活数变化.结果 视神经损伤后, 视网膜神经节细胞中JNK3定位于细胞浆, p-JNK则从细胞浆进入到细胞核中表达, APP定位于细胞膜、p-APP在轴突及细胞浆中均表达.同时, Western结果表明上述4种蛋白表达量在损伤1 d组比假手术组均升高 (P<0.01) .与APP野生型小鼠视网膜神经节细胞存活数 (127.7±7.0) 相比, APP基因敲除组小鼠视网膜神经节细胞存活数 (147±7.0) 明显增多 (P<0.05) .结论 视神经损伤后, JNK3、APP蛋白的表达增多在视网膜神经节细胞的存活中发挥了一定的作用.