大肠杆菌DH5α及其耐乙酸突变株生长和产乙酸规律

大肠杆菌DH5α的耐乙酸突变株DA19在复合培养基中有生长优势，最大比生长速率提高，产乙酸减少，对乙酸的耐受力增加。在基本培养基中DA19生长优势更加明显，消耗葡萄糖速率加快，单位菌体产乙酸得率YA/X比DH5α低，以消耗葡萄糖为基准的菌体得率YX/G提高。在添加乙酸的基本培养基中，DA19细胞浓度高于DH5α，更快利用葡萄糖。DA19在高葡萄糖浓度下(102g／L)也能良好生长，菌体浓度达26g／L，YX/G为0．257g／g。在变速补料分批培养中，DA19可以有效地控制乙酸的生成，细胞浓度达到20g／L，YX/G为0．360g／g，为其在高密度培养中的应用奠定了基础。     

大肠杆菌乙酸代谢突变株的培养和外源基因表达

大肠杆菌JL3是JM101经诱变和连续培养所选育到的乙酸耐受性突变株，JL3在复合培养基中产生的乙酸比JM101少，菌体对葡萄糖的得率（YX／S）增加，在基本培养基M中连续培养，最大菌体得率（YG）增大，维持系数（m)降低，存在外源乙酸时，JL3对葡萄糖亲和性增加，显示较强的生长优势，在含有10g/L乙酸钠的复合培养基中，JL3／pUC19的β－半乳糖苷酶比活比JM101／PUC19提高30％。     

大肠杆菌乙酸耐受株的代谢流分布

通过在基本培养基中的连续培养，比较了大肠杆菌耐乙酸突变株JL3碳源基本代谢流量分布与出发株JM101的差异，发现随比生长速率的增大，两者进入磷酸戊糖途径的碳流增加，进入三碳羧环的碳流减少。在相同的比生长速率下，突变株JL3中分配于磷酸戊糖途径的碳流所占比例高于JM101，在比生长速率0．626h^-1时，JL3进入磷酸戊糖途径的 占摄入碳流的33．2％，而JM101只占9．0％。计算得到J3力JM101关于ATP的最大菌体得率为10．2g/mol和5．68g／mol，维持系数为64．5mmol/(g.h)和82．3mmol/(kg.h），表明JL3的能量代谢效率高于JM101。     

一株黑曲霉所产α-淀粉酶的提取及其特性研究

目的研究一株黑曲霉所产α-淀粉酶的提取方法及特性。方法 黑曲霉在米曲培养基中培养一段时间，粗提酶液经不同方法进行分离提取，并比较了各方法的得率。并对通过酶的干燥得到粗酶制剂成品的性质进行进一步的分析。结果 该黑曲霉α-淀粉酶最适反应温度为60℃，最适pH为5．0。Ca^2＋表现出明显促进作用，Fe^3＋、Zn^＋强烈抑制酶活力。结论 该菌株是一株具有应用价值的优良生产菌株。     

固体酸催化合成乙酸芳樟酯

研究了3种用于合成乙酸芳樟酯反应的SO4^2-/MxOy型固体酸催化剂，其中SO4^2-／ZrO2显示出较高的选择性，在载体ZrO2中添加适量的SiO2，可以明显提高催化剂的活性，降低反应温度。与高温反应相比，不使用夹带剂的低温反应更具有反应时间短、选择性高的特点。采用SO4^2-/ZrO2-SiO2固体酸催化剂，在温度50℃反应2h，芳樟醇转化率为71．9％，乙酸芳樟酯选择性达到92．3％。     

不同浓度Nocodazole对Hela细胞G2／M期同步化的调节作用

目的观察不同浓度有丝分裂阻滞剂Nocodazole对Hela细胞株G2／M期同步化的调节作用及其对纺锤体结构的影响。方法分别以3．0、1．0、0．3umoL／LNocodazole处理Hela细胞（Nocodazole3．0、1．0、0．3umoL／L处理组）18h。于Noeodazole撤除后0（处理18h）、3、6、9h时间点收集细胞,流式细胞仪检测G2／M期细胞百分比;间接免疫荧光染色激光共聚焦显微镜观察细胞有丝分裂器纺锤体α-微管蛋白（α—tubulin）排列。以不添加Nocodazole处理的Hela细胞作为对照组。结果Nocodazole处理18h,Nocodazole3．0、1．0、0．3umol／L处理组Hela细胞G2／M期细胞百分比分别为55．95％、51．09％和47．81％,均显著高于对照组的9．54％（P〈0．05）。在Nocodazole撤除后3、6、9h时间点,Nocodazole3．0umol/L和1．0umol／L处理组G2／M期细胞百分比无明显变化;而Nocodazole0．3umol／L处理组G2／M期细胞百分比下降明显（30.43％、12．91％、10．23％）,撤除后6h时间点的G2／M期细胞百分比与对照组比较差异已无统计学意义（P〉0．05）。α—tubulin荧光染色激光共聚焦显微镜观察显示,Noeodazole撤除后Nocodazole0．3umol/L处理组G2／M期细胞微管迅速再聚合形成两极纺锤体且纺锤丝结构清晰。结论Nocodazole对Hela细胞G2／M期同步化具有调节作用;药物撤离后,0．3umol／LNocodazole处理组细胞周期恢复迅速且对纺锤体结构影响最小。     

血小板源生长因子-α受体结构域切除对肺血管平滑肌细胞增殖和细胞周期的影响

目的：探讨从血小板源生长因子－α（PDGF－α）受体水平阻断对肺血管平滑肌增殖的影响。方法：将组织贴块法培养的肺动脉平滑肌细胞（VSMC）分别施加小、中、大剂量的受体结构域切除的PDGF－α受体腺病毒重组体Ad5CMV-PaRtr(ACP),通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察细胞不同时相的增殖曲线；采用流式细胞学技术观察不同干预条件下VSMC细胞周期的变化。结果：中、大浓度ACP对细胞增殖有明显抑制作用。中、大剂量ACP干预后，VSMC生长明显受抑，波峰减弱或消失，第7－9天生长曲线才呈现上升趋势。在中浓度的ACP作用下，加入PDGF－BB不能促进VSMC的增殖。ACP干预前后，VSMC增殖周期中各期细胞构成发生显著的变化，以G0＋G1期细胞增多，S＋G2＋M期细胞减少为特征。与对照组相比，各组的G0＋G1期细胞均有显著升高（P＜0．05）。小剂量与中剂量、中剂量与大剂量间G0＋G1期细胞有显著性差异（P＜0．05）。结论：ACP作为细胞增殖抑制剂，能在中、大剂量下明显抑制VSMC的增殖，可使G0／G1期细胞数明显增多，且与ACP有剂量依赖关系。     

肿瘤坏死因子联合足叶乙甙对肺癌细胞株A549的毒性作用及临床意义

目的：研究肿瘤坏死因子（TNFα）和足叶乙甙（VP16）联合抗肿瘤的作用及其机制。方法：用MTT法检测不同浓度的TNFα、VP16及TNFα/VP16对人肺癌细胞系A549的细胞毒作用及流式细胞仪观察TNFα、VP16及TNFα联合VP16分别对A549的细胞周期的影响。结果：TNFα、VP16对A549细胞的生长抑制作用有时相及剂量依赖关系，而TNFα联合VP16对A549抑制作用较TNFα、VP16单个作用显著（P＜0．01），对细胞周期用药后G2期明显下降（13．2％下降至3．0％，S期上升（27．3％上升至42．5％）（P＜0．05）。结论：VP16联合TNFα可增加对肺癌细胞A549的抑制率，对A549细胞的作用是通过抑制DNA合成及有丝分裂使G0＋G1＋S期不能及时转至G2、M期。     

黄芩苷对羟自由基致培养心肌细胞损伤的保护作用

目的研究中药黄芩苷（baicalin，Bai）对羟自由基致大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用。方法原代SD大鼠乳鼠心肌细胞培养，48小时后加入Fe^2＋和半胱氨酸产生羟自由基造成心肌细胞损伤，损伤前30分钟加入不同浓度的黄芩苷作为保护剂。24小时后甲基四唑兰（MTT）法测定心肌细胞活性；试剂盒测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活力、心肌细胞中脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性；并应用原位末端标记法（TUNEL）标记细胞后应用流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果Fe^2＋和半胱氨酸能明显造成心肌细胞损伤，表现为：细胞活性下降、LDH活性增加、MDA含量增加、SOD活力下降；流式细胞仪显示细胞凋亡率增高。黄芩苷4．5μmol／L、9μmol／L、18μmol／L对损伤心肌细胞有保护作用，使结果受损程度有所改善，并随浓度增加保护作用加强。结论黄芩苷能减轻羟自由基对心肌细胞的损伤作用，降低羟自由基导致培养心肌细胞损伤的凋亡率。     

双自杀基因CD+TK对胰腺癌BxPC-3细胞的影响

目的探讨逆转录病毒介导的双自杀基因对胰腺癌BxPC-3细胞的杀伤作用及胰腺癌的基因治疗方法。方法通过脂质体将含有双自杀基因的逆转录病毒载体MMLV—CD＋TK导入包装细胞PA317，经G418筛选后大量培养产病毒的阳性克隆PA317／CD＋TK细胞株，收集病毒上清液，浓缩后转染胰腺癌BxPG3细胞系，再次经G418筛选，获得稳定表达双自杀基因的BxPC-3／CD＋TK细胞株。用RT—PCR检测双自杀基因的表达。给予前体药物5-氟胞嘧啶（5-flourocytosine，5-FC）和（或）无环鸟苷（Ganciciovir，GCV）后，MTT法测定转基因组及未转基因组胰腺癌BxPC-3系细胞的存活率。结果双自杀基因在胰腺癌BxPC-3系细胞中可稳定表达，联合使用5-FC和GCV对细胞增殖的杀伤作用及旁杀伤效应效果明显。结论逆转录病毒介导自杀基因可有效杀死胰腺癌Bx-PC-3系细胞，双自杀基因具有更强的抗肿瘤作用。     

剖宫产术后51小时肺大面积栓塞死亡一例

患者，女，28岁。以“G2P2，妊足月39＋4周，头位待产入院。入院时隋况，一般状况良好，KT：36．5℃：180次／分，1t20次／分。BP：110／75mmHg，心肺无异常。腹部检查：妊娠足月腹型，腹围102em，宫高36cm，估计胎儿体重3872g，胎心144次／分。节律规整。耻骨联合上方可见——下腹横切口剖官产术疤痕（术后9年）     

大鼠骨髓细胞CD34+β2m-CD90+亚群肝内移植的研究

目的观察骨髓CD34^＋β2m-CD90^＋细胞在受体大鼠纤维化肝内的定居、生长以及对受体肝的影响。方法将雄性肝纤维化大鼠的骨髓CD34^＋β2m-CD90^＋细胞用PKH26-GL标记后，从门静脉注射到预先经放疗的同种模型雌性大鼠肝内；PCR检测雌鼠血清Y染色体的表达，荧光显微镜检测PKH26-GL标记的骨髓CD34^＋β2m-CD90^＋细胞在受体肝内的分布；病理学检查移植骨髓CD34^＋β2m-CD90^＋细胞后大鼠肝纤维化组织形态学改变；免疫组化检测肝内白蛋白、α-SMA的表达，放免法测定受体血清层粘连蛋白（LN）、透明质酸（HA）的水平，斑点杂交检测肝脏Ⅰ、Ⅲ型前肢原mRNA的表达。结果 在移植后2周内，雌性受体血清一直能检测到Y染色体特异的Sty基因表达，肝内有PKH26-GL红色荧光分布并有聚集成团趋势；受体肝纤维化减轻，间隔和胞周性纤维化较对照组改善；受体血清层粘连蛋白（LN）、透明质酸（HA）的水平下降（P〈0．05），肝组织α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达下降（P〈0．05），白蛋白的表达升高（P〈0.05）。结论 大鼠骨髓CD34^＋β2m-CD90^＋细胞自体移植入纤维化肝后，可能定居并有一定程度的增殖；大鼠移植CD34^＋β2m-CD90^＋细胞后，受体肝纤维化程度有减轻的趋势。     

白木香根外植体愈伤组织诱导研究

【目的】研究以白木香[Aquilaria sinensis （Lour．） Gilg]根为外植体的愈伤组织诱导条件。【方法】选择白木香2种来源的根,考察不同灭菌条件、不同激素浓度组合对愈伤组织诱导的影响。【结果】实生苗根以0．01 mg／mL的HgCl2溶液灭菌3 min最佳,适合诱导愈伤组织的培养基为MS＋0．1 mg／L 2,4-二氯苯氧乙酸（2,4－D）＋0．1 mg／L 6－苄氨基嘌呤（6－BA）;无菌苗根在添加1．0 mg／L萘乙酸（NAA）和0．8 mg／L 6－BA的MS培养基上可达到最高的愈伤组织诱导率。【结论】获得了2种来源白木香根的愈伤组织;单独使用生长素2,4－D时诱导率较低,添加6－BA后可显著提高愈伤组织的诱导率和生长势。     

卵巢癌细胞诱导的CD8+T细胞凋亡与Caspase-3活性及细胞内钙的关系

目的 探讨卵巢癌细胞诱导CD8^＋T细胞发生凋亡，及Caspase-3与细胞内游离钙离子在CD8^＋T细胞凋亡过程中的作用。方法分别采用透射电镜、流式细胞术观察3株卵巢癌细胞（OVCAR3、CAOV3和SKOV3）的培养上清液诱导的CD8^＋T细胞凋亡和细胞周期变化；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法和比色法检测CD8^＋T细胞Caspase-3mRNA的表达和Caspase-3活性；Fura-2荧光负荷技术检测细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）。结果 经3株卵巢癌细胞的培养上清液分别作用后，CD8^＋T细胞被阻滞在G1／G0期，电镜下出现典型的凋亡改变，流式细胞仪检测见凋亡峰，细胞凋亡率增高；CD8^＋T细胞凋亡过程中Caspase-3mRNA的表达水平、Caspase-3的活性和[Ca^2＋]，均明显升高。结论 卵巢癌细胞能诱导CD8^＋T细胞凋亡，CasDase-3激活及细胞内钙超载在此过程中起雷要作用。     

骨质疏松大鼠晚期糖化终末产物含量及胍乙酸的防治效果

目的:以去势大鼠建立的绝经后骨质疏松模型,检测骨组织中晚期糖化终末产物(AGEs)含量,探讨其特异性抑制剂胍乙酸的防治效果。方法:54只SD大鼠随机分为三组:去势后给药(胍乙酸)实验组(groups1,G1),单纯去势组(G2)和假去势组(G3),并将术后第4,10和16周定为实验周。检测骨胶原组织中AGEs和骨形成指标:骨钙素(BGP),骨特异性碱性磷酸酶(骨AKP),骨吸收指标:尿吡啶醚(PYD)和脱氧吡啶醚(DPD),同步用IBAS计算机全自动图像分析系统对不脱钙骨组织动态观测骨形态计量学参数。结果:单纯去势后4～16周骨胶原AGEs含量明显高于假去势组;给予胍乙酸组明显低于去势组,而BGP和骨AKP胍乙酸组明显高于去势组。骨吸收指标:尿PYD和DPD两组之间无显著差异。骨形成表面(FS)和骨小梁体积(TBV),骨小梁平均厚度(MTT)较去势组明显升高,尤其TBV和FS,这种差异在第10周最为显著。随着给药时间的延长(第16周)MAR逐渐增加。骨吸收表面(RS)与单纯去势组比较在所有实验周均无差异。结论:去势后雌激素降低可致骨中AGEs增多,引发骨质疏松,而胍乙酸可通过降低AGEs刺激成骨细胞活跃增生,促进骨形成,改善骨组织形态。     

先兆子痫并发低蛋白血症致大量腹水2例报告

1临床资料 例1患者，24岁，孕1产0，因妊娠34周，双下肢浮肿半个月，头晕、眼花1d于1998年4月16日入院。体检：神志清，血压180／110mmHg，双下肢浮肿（＋＋），宫高26cm，腹围85cm，子宫软，无压痛，ROA，胎心音150min-1，宫口未开。实验室检查：尿常规，PRO（＋2）；肝功能，TP46．4G／L，ALB21．3G／L。入院诊断：初产头位待产，先兆子痫，低蛋白血症。入院后给予复方降压素片、心痛定口服，静滴硫酸镁，静推安定，血压波动在180／110—160／100mmHg之间，头晕、眼花症状反复出现。每日尿量约2000mL。     

非程控降温,—80℃冻存自体外周血干细胞的研究

目的：观察非程控降温、－80℃冻存的方法对自体外周血十细胞（APBSC）的保存效果。方法：以6％羟乙基淀粉（HES）、5％二甲基亚砜（DMSO）及4％人血白蛋白（ALB）的混合物为冷冻防护剂，将APBSC直接置于－80℃下保存，冻存前反复苏后测定APBSC的CFU－GM、BFU－E；观察移植后造血功能重建情况。结果：13例患者白细胞在十3～＋7天下降至（0．0～0．1）×10／L，白细胞（0．0～0．2）×109／L持续时间3～6天，于＋9～＋11天恢复至1．0X109／L以上．中性粒细胞绝对值（ANC）于＋9～＋11天达到0．5X109／L。血小板在＋3～＋7天下降至（2．0～21）×109／L，于＋8～＋15天恢复至20×109／L以上。CFU－GM、BFU－E回大率分别为76．5％、78．4％。结论：非程控降温、－80℃冻存是一简便、经济、有效的自体外周血于细胞保存方法。     

侧脑室内注射五肽胃泌素对大鼠血压和心率的影响

以动脉血压和心率作为指标．在氨基甲酸乙酯麻醉．三碘季胺酚制动，呼吸机控制呼吸的SD大鼠上，观察到侧脑室注射五肽胃泌素(G5，4μg)后动脉血压升高，3min时达峰值。由给药前的12．2±1．5kPa，增至14．1±1．6kPa；心率增加，其最大值由给药前的435±53．9次/min，增至417．6±53．2次／min．而侧脑室注射生理盐水(pH和容积与G5相同)或静脉注射同样剂量的G2，对上述指标均无影响．侧脑室预先注射α受体阻断剂酚妥拉明(10μg)，可部分拮抗G5对血压和心率的增加效应．结果表明G5具有中枢性升高动脉血压和心率的作用，此作用可能部分由脑内α受体介导．     

HIV-1 SF2株env基因C1与C3区的嵌合表达

①目的 构建HIV-1SF2株env基因C1与C3区嵌合片段的克隆并在大肠杆菌中表达。②方法 用DNAstar软件辅助设计引物，以含有HIV-1SF2株前病毒基因组的9B1R6质粒为模板，PCR法分别扩增出env基因C1和C3段；两个片段经KpnⅠ酶切、T4连接酶连接和扩增后，再将经EcoRⅠ、SalⅠ双酶切的嵌合片段插入表达载体pGEX-4T-2中，构建重组表达质粒pGEX-4T-2／ClC3；重组质粒经酶切、测序鉴定后，以TSS法转入大肠杆菌DH5α，IPTG诱导表达融合蛋白和SDS—PAGE电泳分析表达蛋白图谱。③结果 经酶切和测序分析，插入片段大小、方向和读码框架正确，无碱基错配，表明成功构建pGEX-4T-2／ClC3克隆；重组克隆在大肠杆菌DH5α中经IPTG诱导，高效表达出相对分子质量为4．3万的融合蛋白。④结论 重组质粒pGEX-4T-2／C1C3的构建和表达成功，为进一步研究该表达蛋白的活性和HIV疫苗的研制奠定了基础。     

宫颈妊娠1例报告

患者38岁，因停经42天，不规则阴道出血20天就诊。婚育情况：孕4产2，一向月经规则。本次起病后曾在门诊拟“先兆流产”给予止血，抗感染等治疗无好转。妇检：子宫颈增大但不规则，上唇l－3点钟见一赘生物突起，约3X2X1cm，基底与宫颈相连接，质软，呈紫红色，子宫后倾，大个正常，无压痛，双侧附件正常。检查过程赘生物自然脱落，创面出血，即行纱布创面填压止血，将脱落物送病理检查，并收入院观察治疗。入院体检：生命体征正常，轻度贫血貌，辅助检查：WBC10.5X109／L，RBC3．05X1012／L，Hb8．28／L，尿HCG（＋）。入院后主要进…