C—myc反义寡聚脱氧核苷酸抑制人脑胶质瘤细胞系BT325Myc蛋…

探讨在体外ｃ－ｍｙｃ反义核酸是否可通过阻断人脑胶质瘤细胞中ｃ－ｍｙｃ基因的表达而抑制细胞增殖并诱导分化，方法：人工合成与ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ起始码及其后四个密码子互补的寡聚脱氧核苷酸（简称反义核酸）片段，用它处理培养的ＢＴ３２５细胞，观察它以细胞增殖的影响，同时用免疫细胞化学方法检测细胞中Ｍｙｃ蛋白的水平以及能反映胶质瘤细胞分化的Ｓ－１００和ＧＦＡＰ两种蛋白的水平，分析这些指标的变化，结果：发现４μ     

反义核酸对人白血病HL—60细胞中c—myc基因表达的抑制

研究两个反义核酸（１８ｍｅｒ，２１ｍｅｒ）对人白血病ＨＬ－６０细胞中ｃ－ｍｙｃ基因表达的抑制作用。用ＨＬ－６０活细胞计数，ＲＮＡ含量的ＲＴ－ＰＣＲ测定和ｃ－ｍｙｃ基因蛋白的免疫组化染色检查，结果：两个反义核苷酸都以抑制ＨＬ－６０细胞的增殖，增殖抑制率为１１－７５％。反义核酸还抑制ｃ－ｍｙｃＲＮＡ和Ｍｙｃ蛋白的表达，而对ｃ－ｍｙｃ基因正常表达的红白血病细胞Ｋ５６２的增殖和ＰＨＡ刺激的人淋巴细胞的增殖     

人c—myc反义真核表达载体的构建及其对BT325细胞c—Myc蛋白？…

目的：构建人ｃ－ｍｙｃ第三外显子及３‘非翻译区反义真核表达载体。用脂质体介质法转染人胶质瘤ＢＴ３２５细胞，以期降低其ｃ－Ｍｙｃ表达水平。     

c—Ha—ras和c—myc反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞生长增殖…

作观察了人工合成的反义ｃ－Ｈａ－ｒａｓ和ｃ－ｍｙｃ寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｒ，ＡＳＯ－ｍ）对两株胃癌细胞中Ｈａ－ｒａｓ癌基因表达和细胞生长增殖的影响，观察至ＡＳＯ－ｒ能显抑制ＭＧｃ－８０３细胞Ｐ２１蛋白合成（作用１２ｈ抑制率达４８．１０％，Ｐ＜０．０１），同时对其ＤＮＡ合成和细胞增殖也有较显的抑制作用（抑制率分别为７６．７９％，５５．６１％，Ｐ＜０．０５）。ＡＳＯ－ｒ对ＳＧｃ－７９０１细...     

C-myc反义寡脱氧核苷酸抑制人乳腺癌细胞系生长的研究

采用胎盼蓝染色法，３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验和流式细胞计数分析技术研究了ｃ－ｍｙｃｍＲ－ＮＡ帽区反义寡脱氧核苷酸对人乳腺癌ＭＣＦ－７细胞系增殖及其ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的影响，结果表明：ｃ－ｍｙｃ反义寡脱氧核苷酸能抑制人乳腺癌ＭＣＦ－７细胞系生长和增殖，这种抑制作用有明显的剂量依赖性，同时也能抑制ＭＣＦ－７细胞ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达。此外，本文对ｃ－ｍｙｃ基因调控细胞增殖及反义核苷酸的可能机制进行了探讨。     

急性白血病c—myc反义核酸基因治疗的实验研究

ｃ－ｍｙｃ基因是调控细胞增殖与分化的癌基因,在急性白血病细胞株及急性白血病、恶性淋巴瘤患者细胞中出现高表达,是影响这些恶性肿瘤发生、发展的重要基因之一。反义核酸治疗恶性肿瘤在技术上具有高效、简便、不需载体等特点,原理是根据碱基互补,将具有特异序列的反义寡核苷酸导入肿瘤细胞与靶基因上的相应部位结合,抑制和阻断相应基因的转录表达。　目的　应用针对ｃ－ｍｙｃ基因的两个反义核酸１５ｍ ｅｒ和１８ｍ ｅｒ作用于急性白血病细胞株和原代细胞,研究反义核酸对白血病细胞的生长、增殖,ｃ－ｍｙｃ ｍ ＲＮＡ 表达以及Ｐ６５ ｃ－ｍｙｃ蛋白表达率的改变,以及对细胞凋亡、分化方面的影响。　方法　采用锥虫蓝染色法测定细胞的拒染率,绘制细胞的生长曲线,用０．８％ 甲基纤维素半固体培养法进行克隆形成试验;用流式细胞仪检测在反义核酸作用前后的Ｐ６５ ｃ－ｍｙｃ 蛋白及凋亡率;用ＲＴ－ＰＣＲ 法检测ｃ－ｍｙｃｍ ＲＮＡ 的表达相对水平;电镜观察凋亡细胞的超微结构;ＤＮＡ 电泳分析凋亡片段;光镜下瑞特染色、ＮＢＴ染色观察细胞分化水平,流式细胞仪检测分化抗原表达,同时ＲＴ－ＰＣＲ检测分化细胞的ｍ ＲＮＡ 表达;ＭＴＴ 法检测反义核酸与化疗药物对细胞联合作用后对     

脂质体介导c—myc反义核酸对HL—60细胞作用的研究

原癌基因ｃ－ｍｙｃ参与调控细胞的增殖、分化和凋亡过程,在白血病细胞株ＨＬ－６０ 中有很高的表达。ｃ－ｍｙｃ通过扩增活化或基因重排而异常激活,在白血病的发生和发展中可能起着重要的作用。　目的　通过脂质体介导ｃ－ｍｙｃ反义核酸转染ＨＬ－６０ 细胞,观察其抑制细胞生长增殖、促进分化、诱导凋亡,降低ｃ－ｍｙｃｍ ＲＮＡ 和蛋白表达水平,探讨反义核酸的抗肿瘤作用机制。　方法　ＨＬ－６０ 细胞在３７℃、５％ＣＯ２ 条件下,培养于１０％ 小牛血清１６４０ 培养液中,细胞接种密度为４×１０７／Ｌ,反义核酸终浓度为１μｍ ｏｌ／Ｌ,反义核酸与脂质体比例为１ μｍ ｏｌ（６．５ μｇ）∶１０ μｇ,无血清转染６ ｈ。实验同时设置空白组、无义组、反义组、脂质体组、脂质体无义组等对照组。连续培养４ 天。通过锥虫蓝拒染实验测定细胞的生长能力;ＮＢＴ还原实验和瑞特－姬姆萨染色测定细胞的分化能力;免疫细胞化学染色检测ｃ－ｍｙｃ蛋白表达;ＲＴ－ＰＣＲ法检测ｃ－ｍｙｃ ｍ ＲＮＡ 水平;吖啶橙／溴化乙锭染色观察凋亡细胞形态;流式细胞仪检测凋亡率;ＤＮＡ抽提及电泳观察凋亡细胞ＤＮＡ降解片段的形成。　结果　脂质体转染ｃ－ｍｙｃ反义核酸的作用：（１）抑制ＨＬ－６０     

C—myc反义寡脱氧核苷酸抑制人乳腺癌细胞系生长的研究

采用胎盼蓝染色法，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验和流式细胞计数分析技术研究了ｃ－ｍｙｃ，ｍＲ－ＮＡ帽区反义寡脱氧核苷酸对人乳腺癌ＭＣＦ－７细胞系增殖及其ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的影响，结果表明：ｃ－ｍｙｃ反义寡脱氧核苷酸能抑制人乳腺癌ＭＣＦ－７细胞系生长和增殖，这种抑制作用有明显的剂量依赖性，同时也能抑帛ＭＣＦ－７细胞ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达。     

bcl-2反义寡聚脱氧核苷酸抑制人喉癌细胞系增殖的研究

目的：探讨bcl-2反义寡聚脱氧核苷酸在喉癌基因治疗中的可能作用及机理．方法：采用人工合成与bcl-2mRNA起始码及其后4个密码子互补的寡聚脱氧核苷酸（简称反义核酸）片段，处理培养的人喉癌细胞系Hep-2细胞，观察其对细胞增殖的影响．同时采用原位分子杂交及免疫组化技术，检测细胞内bcl-2mRNA及Bcl-2蛋白水平，分析其变化规律．结果：bcl-2反义核酸片段对细胞内bcl-2mRNA无明显影响，但可以显著抑制Bcl-2蛋白合成，抑制率与反义核酸浓度及作用时间呈正相关．20．0μmol／Lbcl-2反义核酸可以有效地抑制细胞增殖．结论：提示bcl-2反义核酸可以在翻译水平特异性地抑制Hep-2细胞中Bcl-2蛋白的合成与细胞增殖．进一步证明bcl-2基因在喉癌的发生发展中具有十分重要的作用．     

能抑制乳腺癌细胞生长的基因被发现

衡阳医学院生理学教研室研究人员经过研究发现，ｃ－ｍｙｃ反义寡脱氧核苷酸能抑制人乳腺癌ＭＣＦ－７细胞系生长和增殖。肿瘤的发生是细胞增殖和凋亡失调的结果，ｃ－ｍｙｃ基因是调控细胞增殖和凋亡的一个重要基因。为了探讨研究反义寡脱氧核苷酸对人乳腺癌细胞生长及其...     

人c-myc反义真核表达载体的构建及其对BT325细胞c-Myc蛋白表达的抑制作用

目的：构建人c-myc第三外显子及3’非翻译区反义真核表达载体,用脂质体介导法转染人胶质瘤BT325细胞,以期降低其c-Myc表达水平．方法：采用基因重组方法构建真核表达载体;用G418筛选抗性细胞克隆;用免疫细胞化学ABC法检测细胞蛋白质的表达;用MTT法测定顺铂作用下,未转染及转染组细胞的存活率．结果：c-myc反义真核表达载体在BT325细胞中稳定表达,转染细胞c-Myc表达水平显著降低;c-Myc表达减弱细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性．结论：抑制c-mycDNA第三外显子及其3’端非翻译区反义表达载体能够显著抑制。c-myc基因的表达;c-Myc在化疗药物诱导肿瘤细胞凋亡的过程中有重要作用．     

三种反义c-myc RNA的瞬时表达对血管平滑肌细胞的体外生物学效应的影响

目的 了解癌基因c-myc分子中各个区域的作用,找出最佳的反义封闭靶区,为c-myc表达增高相关疾病的基因治疗提供依据。方法 系统地构建了人类3种反义c-myc重组逆转录病毒表达载体（aM1、aM2和aM3）,分别载有c-myc第1、2和3外显子的反义片段,经脂质体转染大鼠主动脉平滑肌细胞,并于转染后48 h采用流式细胞仪对细胞进行瞬时表达检测。结果 与对照组相比,aM2使c-myc表达量减少了37.6%,aM1为对照组的98.8%,而aM3却使c-myc表达增高21.7%;与此同时,aM1和aM2组增殖细胞核抗原（PCNA）表达分别下降了36.0%和30.9%,而aM3组PCNA表达增高。DNA分析则表明3种载体均使处于G0/G1期的细胞比例略为增高（aM2>aM1>aM3）,S 期比例略下降（aM1>aM2>aM3）,但尚未有DNA合成量的明显改变。结论 反义基因的导入在瞬时表达时可影响细胞中靶蛋白及其他生长相关蛋白的表达,但对细胞周期和DNA合成的影响尚小。     

Survivin在2株人脑胶质瘤细胞系中的表达

目的:探讨凋亡蛋白抑制因子(IAP)Survivin mRNA及蛋白在人脑胶质瘤细胞系BT325和SHG-44中的表达水平及意义. 方法:采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法分别检测Survivin mRNA及蛋白在BT325和SHG-44细胞系中的表达水平. 结果:BT325细胞高表达Survivin mRNA及蛋白,并表达少量的Survivin剪接变异体Survivin-2B,Survivin蛋白定位于瘤细胞的胞质. Survivin mRNA及蛋白在SHG-44细胞中均无表达. 结论:Survivin对于维持BT325细胞株的生物学特性具有重要作用;BT325和SHG-44细胞株可分别作为Survivin基因抑制和基因转移研究的良好细胞模型.     

三种反义c-myc RNA稳定表达对血管平滑肌细胞生长、增殖的影响

目的 研究反义基因在细胞中持续、稳定表达对平滑肌细胞生长增殖的影响。方法 将分别载有c(myc第1、2和3外显子反义片段的三种重组逆转录病毒表达载体aM1、aM2和aM3导入大鼠主动脉平滑肌细胞（SMC）,并于持续筛选后1个月进行稳定表达检测。结果 aM1和aM2能持续抑制靶细胞Myc蛋白表达（分别为对照表达量的59.7%和81.3%）、增殖细胞核抗原（PCNA）表达（分别为对照表达量的52.4%和51.9%）,抑制靶细胞的生长增殖活性并以aM2作用最强（抑制率达到30%）,同时,aM2还有一定的延长细胞周期和减少DNA合成的作用,而aM3作用相反。另外,与瞬时表达相比,外源基因在靶细胞中的作用并非一成不变,而基因转染操作对细胞的影响会随着细胞的代偿逐渐减少并在短期内消失。结论 对c(myc中不同区域进行反义封闭会产生不同的效应,对其转录活性区进行封闭可取得最强的细胞生长抑制。而靶细胞对对外源基因导入可能具有“纠正作用”。     

c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的：观察c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用．探讨ASODN作为药物进行白血病基因治疗的可行性、方法：应用c-myc反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c-myc基因、RTPCR方法检测该基因表达抑制情况．流式细胞仪进行细胞周期分析,倒置显微镜观察细胞形态变化．绘制细胞生长曲线,MTT法检测细胞增殖状态。结果：c-myc基因反义寡核苷酸转染HL-60细胞后,c-myc基因表达明显受抑;S期细胞比值由55.6％降至16．7％;细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及剂量依赖性。结论c-myc基因反义寡核苷酸对HKL-60细胞增殖及c-myc基因的表达具有明显的抑制作用,有望成为抑制白血病细胞增殖的核酸药物。     

胶质瘤细胞BT325和U251凋亡相关因子的表达差异

目的比较BT325和U2512种胶质瘤细胞中凋亡相关因子的表达差异及其在凋亡中的作用。方法应用Western blot方法检测细胞中Fas、Caspase-3、Caspase-7、Survivin和Livin的表达情况。结果U251与BT325均有Fas、Caspase-3和Livin蛋白表达,BT325的Caspase-3含量高于U251,U251的Livin含量高于BT325;Survivin仅表达于U251;Caspase-7仅表达于BT325。结论BT325胶质瘤细胞中凋亡效应因子呈高表达,U251胶质瘤细胞中凋亡抑制因子呈高表达。     

反义c-myc重组腺病毒载体的构建及其对大鼠气道平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:观察反义c-myc重组腺病毒载体对大鼠气道平滑肌细胞增殖的抑制作用. 方法:构建大鼠反义及正义c-myc细菌质粒,并将所得细菌质粒及腺病毒E1缺失质粒导入293细胞系,经共转染得到正义及反义重组腺病毒载体. MTT法检测重组腺病毒载体对大鼠气道平滑肌细胞增殖的抑制作用,免疫组织化学染色检测重组腺病毒载体对c-Myc蛋白的表达. 结果:反义c-myc重组腺病毒载体可抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖,降低气道平滑肌细胞c-Myc蛋白的表达. 结论:反义c-myc重组腺病毒载体可抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖.     

脑出血患者血浆神经元特异性烯醇化酶、S-100蛋白含量动态变化的研究

目的探讨脑出血患者血浆神经元特异性烯醇化酶(NSE)和S-100蛋白含量变化及其临床意义。方法测定32例脑出血患者发病后24小时内、第3天、第7天和第14天血浆内NSE和S-100蛋白含量,并对二者含量的变化及其与脑组织水肿体积、神经功能缺损评分进行相关分析。结果NSE和S-100蛋白在发病后24小时内、第3天、第7天、第14天明显高于正常对照值(P<0.01);第14天时NSE、S-100蛋白含量与脑水肿体积呈明显的正相关(P<0.01)。NSE、S-100蛋白含量与病后24小时内神经功能缺损评分并无明显的相关性(P>0.05);与第3天、第7天和第14天神经功能缺损评分具有正相关性(P<0.01,P<0.05)。结论脑出血患者血浆内NSE、S-100蛋白含量的变化可以反映脑组织损伤和脑组织水肿的情况;血浆内NSE、S-100蛋白含量在一定程度上能够反映神经功能缺损的程度;动态监测NSE、S-100蛋白含量可以作为判断脑组织水肿和评估神经功能缺损程度的临床指标。     

紫杉醇抗人脑多形性胶质母细胞瘤BT325株实验研究

目的：通过体外实验探讨紫杉醇有否抗人脑恶性胶质瘤作用。方法：首先用ＭＴＴ法检测紫杉醇对胶质母细胞瘤ＢＴ３２５株具有明显的细胞毒作用。进一步通过形态学观察及流式细胞仪来证实紫杉醇可诱导ＢＴ３２５细胞凋亡。结果：ＢＴ３２５细胞在紫杉醇作用下,细胞生长被明显抑制;细胞分裂阻滞在Ｇ０／Ｇ１期,出现凋亡峰;具有典型的凋亡细胞形态学特征。结论：紫杉醇具有明显的抗人脑胶质瘤作用,其作用机制与诱导细胞凋亡有关。