高表达LINC00626通过JAKl/STAT3/KHSRP信号轴促进食管胃结合部腺癌转移的恶性进展

目的 探究LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴调控食管胃结合部腺癌的恶性进展及分子机制。方法 收集并比较食管胃结合部腺癌组织和癌旁组织LINC00626、KHSRP的表达水平。qRT-PCR法检测食管腺癌细胞系（OE-19、TE-7、BIC-1、FLO-1、SK-GT-4、BE-3）与正常食管上皮细胞系（Het-1A）中LINC00626、KHSRP的表达差异。利用慢病毒试剂,构建稳定敲降LINC00626的OE-19、TE-7细胞和稳定过表达LINC00626的FLO-1、SK-GT-4。取对数生长期OE-19细胞分为sh-NC组（转染LV3-NC慢病毒）、sh-LINC00626组（转染敲降LINC0062慢病毒）,TE-7细胞同上分组;取对数生长期FLO-1细胞分为Vector组（转染LV6-NC慢病毒）、INC00626组（转染过表达LINC0062慢病毒）,SK-GT-4细胞同上分组。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、Transwell迁移/侵袭实验检测敲降和过表达LINC00626后对食管腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力。裸鼠皮下成瘤实验、肺转移实验检测...     

LINC00626通过JAK1/STAT3信号通路对肺鳞状细胞癌增殖、侵袭和转移的影响

目的 探究LINC00626在肺鳞状细胞癌恶性进程中的作用及其分子机制。方法 采用聚合酶链式反应(PCR)和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测144对癌组织和癌旁组织、正常肺上皮细胞株和肺癌细胞株中LINC00626的表达量与肺鳞状细胞癌病理指标间的相关性，受试者工作特征(ROC)曲线分析LINC00626对肺鳞癌的诊断价值。将敲降的LINC00626及其敲降对照慢病毒转入H1437细胞中，命名为sh-NC组和sh-LINC00626组。将过表达LINC00626慢病毒及其过表达对照慢病毒转入A549细胞中，命名为Vetor组和LINC00626组。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验、菌落形成实验、细胞划痕实验和Transwell小室实验检测LINC00626体外细胞学功能。采用裸鼠皮下荷瘤和尾静脉注射肺转移模型检测LINC00626在活体动物体内对细胞增殖、侵袭和转移能力的影响。采用qPCR和蛋白免疫印迹(Western blot)实验检测LINC00626表达水平与JAK/STAT信号通路的相关性。结果 PCR和RT-qPCR结果显示，与癌旁组织相比，LINC0...     

长链非编码RNA-LINC00467调控代谢重编程对肺腺癌增殖及迁移的影响

目的:探讨敲降长链非编码RNA00467(LINC00467)调控代谢重编程对肺腺癌(LAD)增殖及迁移的影响。方法:qRT-PCR验证H1299、A549细胞和正常支气管上皮细胞(16HBE)中LINC00467的表达情况。H1299、A549细胞中使用慢病毒(shRNA)敲降LINC00467,通过平板克隆、Transwell、流式细胞术检测细胞增殖、迁移和凋亡率。使用慢病毒敲降的H1299、A549细胞验证己糖激酶2(Hexokinase2)和葡萄糖转运体1(Glucose transporter1)的表达含量。使用乳酸试剂盒和ATP试剂盒检测被慢病毒敲降LINC00467的H1299、A549细胞的乳酸含量和ATP含量。结果:LINC00467在H1299和A549细胞中的表达上调(P<0.001);在H1299和A549细胞中敲降LINC00467后能明显抑制细胞的增殖和迁移能力,并促进细胞的凋亡。Hexokinase2和Glucose transporter1在被敲降LINC00467的H1299和A549细胞中表达降低(P<0.001)。被敲降后的H1299和...     

lncRNA SMAD5-AS1在肺腺癌细胞中的表达及其通过Wnt/β-catenin通路对癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)SMAD家族成员5反义RNA1(SMAD5-AS1)在肺腺癌(LUAD)中的表达及其对LUAD细胞恶性生物学行为的影响,并分析其潜在机制。方法 通过生物信息学网站对LUAD组织中lncRNA SMAD5-AS1的表达进行分析;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测72例LUAD组织与邻近正常组织以及人正常支气管上皮细胞(BEAS-2B)与人LUAD细胞(SPC-A-1、A549、H1299、LTEP-a-2)中lncRNA SMAD5-AS1表达水平。体外培养对数生长期的SPC-A-1和H1299细胞,分为SPC-A-1对照组(SPC-A-1-Ctr组)、SPC-A-1+sh-NC组、SPC-A-1+sh-SMAD5-AS1组、H1299对照组(H1299-Ctr组)、H1299+LV5-NC组、H1299+LV5-SMAD5-AS1组。采用携带lncRNA SMAD5-AS1敲除的短发夹RNA(sh-SMAD5-AS1)和lncRNA SMAD5-AS1过表达的重组质粒(LV5-SMAD5-AS1)及相应空载体的重组慢病毒转染细胞,qR...     

人lncRNA-GACAT2过表达载体的构建及其对肺癌细胞增殖和干性的影响

目的：探讨长链非编码RNA(lncRNA)胃癌相关转录本2 (GACAT2)基因对肺癌A549和H1299细胞增殖和干性的影响,阐明lncRNA GACAT2基因在肺癌发生发展中的作用。方法：实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法扩增lncRNAGACAT2基因的全长序列,克隆至pc3.1 （+）真核表达载体,采用菌液PCR法和基因测序法检测GACAT2过表达载体的构建情况。将pc3.1-GACAT2过表达质粒和对照质粒pc3.1分别转入人肺癌A549和H1299细胞,采用G418筛选并建立稳定过表达GACAT2的A549和H1299细胞,分为空载体组（转染pc3.1空载体）和pc3.1-GACAT2组（转染pc3.1-GACAT2重组质粒）。采用RT-qPCR法检测2组A549和H1299细胞中GACAT2 mRNA表达水平,CCK-8法检测2组细胞增殖活性,细胞克隆形成实验检测各组细胞克隆形成数,干细胞成球实验观察2组细胞成球数。结果：成功构建GACAT2真核过表达载体。与空载体组比较,pc3.1-GACAT2组A549和H1299细胞中GACAT2 mRNA表达水平升高（P&l...     

AJUBA在食管鳞状细胞癌KYSE150细胞中的功能

目的 研究AJUBA对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞迁移与增殖的作用.方法 用慢病毒转染AJUBA的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)至KYSE150细胞系,实验分为对照组与敲降组,其中对照组包括KYSE150组(未转染的KYSE150细胞)和KYSE150shnon组(转染随机序列),敲降...     

YAP对非小细胞肺癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的：探讨长链非编码RNA （lncRNA） MALAT1在YAP调控的非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖和迁移中的作用,并阐明其作用机制。方法：选择A549和H1299细胞系分为Scramble siRNA组（转染Scramble siRNA）、siYAP-1组（转染siYAP-1）和siYAP-2组（转染siYAP-2）。RT-PCR和Western blotting法检测各组细胞中YAP和MALAT1mRNA及YAP蛋白表达水平;在A549和H1299细胞中分别转染pcDNA3.1-YAP质粒（pcDNA3.1-YAP组）、共转染pcDNA3.1-YAP质粒和siMALAT1-2（pcDNA3.1-YAP+siMALAT1-2组）及对照质粒（pcDNA3.1-YAP+Scramble siRNA组）,CCK-8法检测各组细胞增殖能力,细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。结果：siYAP-1组和siYAP-2组A549和H1299细胞中YAP mRNA及蛋白表达水平均明显低于Scramble siRNA组（P<0.05）,siYAP-1组和siYAP-2组A549和H1299细胞中MALAT1mRNA表达水平低于Scramble siRNA组（P<0.05）;与pcDNA3.1-YAP组比较,pcDNA3.1-YAP+siMALAT1-2组A549和H1299细胞增殖能力降低（P<0.05）,H1299细胞迁移能力降低（P<0.05）。结论：在NSCLC细胞中,YAP通过调控lncRNA MALAT1的表达促进细胞的增殖和迁移。     

LncRNA LINC00987通过靶向miR-375抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移

【摘要】 目的 探讨lncRNA LINC00987对肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。 方法 以正常肺泡上皮细胞HPAEPIC为对照,qRT-PCR检测肺癌细胞株A549、HCC827和H1299中LINC00987表达量,选择表达差异较大的A549细胞进行后续实验。将A549细胞分为pcDNA-control组、pcDNA-LINC00987组、LINC00987（WT）+miR-control组、LINC00987（WT）+miR-375组、LINC00987（MUT）+miR-control组、LINC00987（MUT）+miR-375组、si-control组、si-LINC00987组、miR-control组、miR-375组、anti-miR-control组、anti-miR-375组、pcDNA-LINC00987+miR-control组和pcDNA-LINC00987+miR-375组。CCK8法和Transwell实验分别检测细胞增殖、侵袭和迁移能力,双荧光素酶报告系统验证LINC00987和miR-375的调控关系。 结果 与正常肺泡上皮细胞HPAEPIC相比,在肺癌A549、HCC827和H1299细胞中LINC00987表达量均显著降低（P＜0.05）;pcDNA LINC00987组可抑制A549细胞增殖、侵袭和迁移;LINC00987靶向抑制miR-375的表达;miR-375组可促进A549细胞增殖、侵袭和迁移,anti-miR-375组结果反之;pcDNA-LINC00987+miR-375组提高A549细胞增殖、侵袭和迁移。 结论 LncRNA LINC00987靶向miR-375抑制肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移。LINC00987可能是肺癌的潜在分子靶点。     

长链非编码RNA MUC5B-AS1在人肺腺癌细胞系中的功能研究

目的 研究lncRNA MUC5B-AS1基因在肺腺癌中的表达情况及对肺腺癌细胞系生物学行为的影响.方法 利用RT-PCR、qRT-PCR检测肺腺癌细胞系中MUC5B-AS1基因的表达情况;构建MUC5B-AS1过表达载体,通过转染构建MUC5B-ASI过表达细胞系;采用CCK-8检测肺腺癌细胞的增殖情况;应用Transwell小室检测MUC5B-AS1过表达对肺腺癌细胞系迁移和侵袭的影响.结果 检测了MUC5B-AS1在4株肺腺癌细胞系(A549、SPCA1、H1975和H1299)和1株肺正常上皮细胞系(HBE)中的表达情况,发现MUC5 B-AS1在H1299细胞系中表达最低,同时A549细胞系表达最高;通过转染构建MUC5B-AS1过表达H1299、A549细胞系,利用qRT-PCR检测细胞系中MUC5B-AS1基因的表达,与对照组比较,MUC5B-AS1基因在H1299、A549细胞系均升高,且有统计学差异(P ＜0.05);CCK-8检测细胞增殖,与对照组比较过表达MUC5B-AS1对H1299、A549细胞生长并无影响(P＞0.05);应用Transwell小室检测MUC5B-AS1过表达对肺腺癌细胞系迁移和侵袭,过表达MUC5B-AS1促进H1299、A549细胞的迁移和侵袭,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 MUC5B-AS1可能在肺癌的迁移和侵袭发挥重要作用,但对肺腺癌细胞的增殖能力没有显著影响.     

GPD2基因敲减对肺癌细胞H1299生物学功能的影响

目的沉默甘油-3-磷酸脱氢酶2（GPD2）基因表达,验证对肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭等生物功能及行为学的影响。方法构建GPD2基因的RNA干扰慢病毒载体（shGPD2）和对应的对照载体（shCtrl）,并感染H1299细胞,实时荧光定量（PCR）检测GPD2基因在癌细胞中的mRNA变化情况,Western blotting检测GPD2基因在癌细胞中蛋白质变化情况,验证敲减效率;CCK8法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况;Transwell实验检测细胞侵袭情况。结果成功构建慢病毒干扰载体shGPD2并感染H1299细胞,mRNA及蛋白质含量均减少,其敲减效率达到73.5%（P < 0.05）;GPD2基因敲减后的H1299细胞增殖明显减缓,细胞凋亡显著增多,细胞侵袭能力明显下降（P < 0.01）。结论GPD2基因敲减能够有效抑制肺癌细胞H1299的增殖。     

LINC01518对IL-17诱导非小细胞肺癌细胞增殖的影响

目的：探讨长链非编码RNA01518(long intergenic non-protein coding RNA 01518,LINC01518)基因过表达或沉默对白介素(interleukin,IL)-17诱导非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖的影响。方法：Western blot检测NSCLC细胞系(PC9、H1299和H1975)IL-17受体A(IL-17 receptor A,IL-17RA)的表达后,用IL-17刺激H1299和PC9细胞不同时间,利用CCK-8实验测定细胞的增殖水平。LncRNA芯片筛查IL-17刺激H1299和PC9细胞3 h后LncRNA上调的结果,从中选取某些上调的LncRNA进行RT-PCR和Real-time PCR验证。此外,将构建的pcDNA3.1/LINC01518或shLINC01518质粒转染H1299细胞,用CCK-8、EdU和克隆形成实验检查细胞的增殖情况。结果：3种NSCLC细胞系均有IL-17RA的表达。实验发现,IL-17刺激H1299和PC9细胞后能提高其增殖水平,同时...     

人AURKA基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其对A549细胞增殖的影响

目的:针对AURKA基因构建RNA干扰重组慢病毒质粒并进行慢病毒包装,初步探讨AURKA基因的功能。方法:应用pGCLV-GFP慢病毒载体构建针对AURKA的shRNA载体,转染包装293T细胞,收集病毒上清液,转染肺腺癌细胞株A549。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况确定转染效率,应用Western blot技术检测AURKA基因在蛋白水平表达的变化,以明确RNAi的抑制率。应用BrdU法分析干扰AURKA前后A549细胞增殖情况的变化,运用克隆形成实验检测干扰AURKA后A549细胞株对长春新碱敏感性的变化。结果:针对AURKA基因的RNAi慢病毒表达载体构建成功,PCR和DNA测序鉴定实验表明插入位点与干扰片断的碱基序列完全正确。在293T细胞中进行慢病毒包装,获得高滴度病毒上清液。通过重组慢病毒载体将AURKA shRNA转导入A549细胞中,转染效率为100%。Western blot检测证实LV-AURKA慢病毒显著抑制AURKA的表达,BrdU检测显示AURKA基因表达下调抑制了A549细胞的增殖。克隆形成实验表明AURKA基因表达增强A549细胞对长春新碱的敏感性。结论:慢病毒载体介导的靶向AURKA的RNA干扰可有效抑制AURKA表达,降低肺腺癌A549细胞的增殖能力,并且增强A549细胞对长春新碱的敏感性。     

GPC5基因在肺腺癌细胞系中的功能研究

目的 研究GPC5基因在肺腺癌细胞系中的表达情况及其对肺腺癌细胞系生物学行为的影响.方法 采用逆转录PCR (RT-PCR)、实时定量PCR (qRT-PCR)以及Western blot分析肺腺癌细胞系中GPC5基因mRNA及蛋白表达情况;构建GPC5过表达载体及干扰载体,通过转染构建GPC5过表达细胞系及GPC5沉默细胞系;利用CCK-8法分析肺腺癌细胞系生长情况;通过流式细胞术检测肺腺癌细胞系的周期及凋亡变化.结果 检测了GPC5基因在4株肺腺癌细胞系(A549、H1299、H358和H1975)和1株肺正常上皮细胞系(HBE)中的mRNA表达情况,发现与HBE细胞系相比,GPC5基因在A549细胞系中呈低表达,在H1299细胞系中高表达,同时蛋白检测结果与mRNA水平一致;A549细胞中过表达GPC5基因可抑制细胞生长,引起细胞周期阻滞;在H1299细胞中干扰GPC5基因表达促进细胞生长,促进细胞周期;在过表达和干扰细胞模型中均未发现GPC5基因对细胞凋亡的显著影响.结论 GPC5基因可以对肺腺癌细胞系的生物学行为产生影响,可能是肺腺癌的抑癌基因.     

NR2C2介导的长链非编码RNA LINC00675靶向miR-665调控肝癌细胞生物学行为的机制研究

目的 探讨研究长链非编码RNA LINC00675对肝癌细胞生物学行为的影响及其分子机制.方法 通过qRT-PCR检测LINC00675在肝癌组织以及细胞中表达量,并检测LINC00675在肝癌细胞HepG3与Huh7细胞质及细胞核中的表达分布.通过在HepG3与Huh7中稳定转染慢病毒过表达LINC00675建立细胞...     

长链非编码RNA LINC00261在Barrett食管、食管腺癌组织中的表达及其作用

目的 探讨长链非编码RNA LINC00261在Barrett食管、食管腺癌组织中的表达及其可能作用机制.方法 利用qRT-PCR检测LINC00261在中国人群正常食管鳞状上皮、Barrett食管及食管腺癌组织标本中的表达水平变化.并建立了以人胚胎干细胞为细胞模型.结果 在Barrett食管及食管腺癌组织标本中,LINC00261表达较正常食管鳞状上皮组织均显著上调(P＜0.01);酸暴露及胆酸可诱导人胚胎干细胞LINC00261表达显著上调并抑制FOXA2蛋白表达水平(P＜0.05),而LINC00261慢病毒载体转染亦可诱导FOXA2蛋白表达水平下调;上调FOXA2表达可阻断人胚胎干细胞在酸暴露及胆酸诱导下CDX2表达及细胞分化表型(柱状上皮标志物MUC2表达)的变化.结论 LINC00261在Barrett食管的发生过程中发挥关键作用,其可能通过抑制FOXA2表达参与相关调控.     

敲减miR-9抑制肺非小细胞癌细胞侵袭和迁移

目的研究敲减miR-9对肺非小细胞癌（NSCLC）细胞侵袭和迁移的影响及其机制。方法收集46例NSCLC患者（包含15例T1期、15例T2期和16例T3+T4期）,用RT-qPCR法检测NSCLC组织和和癌旁组织中miR-9的表达水平。用RT-qPCR法检测人正常肺上皮细胞（BEAS-2B）以及NSCLC细胞株A549和NCI-H1299中miR-9的表达水平。将miR-9-inhibitor转染入A549和NCI-H1299细胞,用CCK-8法检测细胞增殖,用Transwell法检测细胞迁移与侵袭。用生物信息法、双荧光素酶法和功能法研究miR-9的靶基因。结果与癌旁组织比较,miR-9在NSCLC组织中表达明显升高（P<0.001）,且其表达随T分期递增（P<0.01）。与BEAS-2B比较,miR-9在A549和NCI-H1299细胞中表达明显升高（P<0.001）。敲减miR-9可显著降低A549和NCI-H1299细胞的增殖、侵袭和迁移（P<0.01或P<0.001）。TET2是miR-9的靶基因。转染si-TET2可逆转miR-9敲减对A549细胞迁移与侵袭的抑制作用（P<0.01）。结论敲减miR-9通过TET2抑制NSCLC细胞增殖、迁移与侵袭。     

慢病毒介导NIS和TPO基因转染肺癌细胞125I摄入及流出的研究

目的：研究NIS和TPO基因对肺癌细胞放射性碘摄取及流出时间的影响。方法：通过基因亚克隆建立携带NIS和TPO基因的慢病毒载体重组质粒,利用293T细胞包装获得慢病毒液,感染肺癌A549和H1299细胞,用125I观察肺癌细胞摄碘和碘流出时间变化。结果：转染NIS的A549和H1299细胞摄碘时间较原始细胞增加：A549和H1299细胞在含有125I的培养液中随着培养时间的增加,细胞摄碘的量增加,分别在培养30min、60min时细胞摄碘达高峰,A、B组与C组比较差异具有统计学意义（P<0.05）;共转染NIS/TPO的A549和H1299细胞碘流出时间延长：A组125I外流速度较B组减慢,两组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：体外肺癌细胞转染NIS基因能明显增加细胞摄取碘能力,转染TPO基因有助于细胞内碘有机化,延长细胞内碘流出时间。     

C5aR在金黄色葡萄球菌LukS-PV诱导非小细胞肺癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨金黄色葡萄球菌杀白细胞素S组分(LukS-PV)通过活化补体5受体(C5aR)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞A549和H460凋亡的影响。方法:将敲低C5aR表达的慢病毒载体转染至A549和H460细胞中,qRT-PCR和Western blot检测C5aR敲低率,Annexin V/PI染色法检测敲低C5aR对细胞凋亡的影响。对敲低C5aR的细胞再加入LukS-PV,通过Annexin V/PI染色法和凋亡相关蛋白检测细胞凋亡情况。结果:与PBS对照组相比,LukS-PV可促进A549和H460细胞凋亡(P<0.05)。慢病毒载体转染A549和H460细胞敲低C5aR后,细胞C5aR表达水平降低(P<0.05)。在敲低C5aR基础上再加入LukS-PV,细胞凋亡受到抑制(P<0.05)。结论:敲低C5aR可抑制LukS-PV诱导NSCLC细胞的凋亡。     

STAT3 siRNA对肺腺癌A549细胞STAT3及其下游基因表达的影响

目的：观察RNA干扰沉默STAT3基因对人肺腺癌A549细胞STAT3、CyclinD1、Bcl-2、BAX、Caspase-9蛋白表达的影响及其相关性及对细胞生长的影响,探讨肺癌基因治疗的新途径。方法：采用化学合成法,合成针对STAT3基因不同位点设计的3条小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）序列（siRNA1-3）和1条带有荧光标记的应用STAT3-siRNA转染处理人肺腺癌细胞系A549,转染16h后荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR检测STAT3基因表达的变化,蛋白免疫印迹法检测转染后A549细胞STAT3,CyclinD1,BAX,Bcl-2,Caspase-9蛋白表达,AM-BLUE检测A549细胞生长情况。结果：经RNA干扰能有效减低A549细胞STAT3mRNA表达水平（P〈0.05）,转染后A549细胞STAT3、CyclinD1、Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低（P〈0.05）,而BAX、Caspase-9蛋白的表达水平升高（P〈0.05）。STAT3蛋白表达分别与CyclinD1、Bcl-2蛋白表达呈正相关（r=0.854,0.910,P〈0.05）;与BAX蛋白表达程负相关性（r=-0.848,P〈0.05）;与Caspase-9蛋白表达程无相关性（r=-0.787,P〉0.05）。RNA干扰法沉默STAT3基因后,A549细胞增殖受到明显抑制。结论：STAT3-siRNA可有效抑制STAT3、CyclinD1、Bcl-2在人肺腺癌A549细胞中的表达,升高BAX、Caspase-9在人肺腺癌A549细胞中的表达,抑制A549细胞生长。     

Rap2c基因真核表达质粒的构建与表达

目的：为了探讨Rap2c基因与肺癌发生的关系,克隆人Ras家族小G蛋白Rap2c的cDNA,构建其真核表达质粒并在人肺癌细胞株A549和H1299中表达。方法人骨肉瘤细胞株U2OS提取细胞总RNA,经逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）逆转录成cDNA,PCR扩增Rap2c,酶切后插入pcDNA3．1（＋）构建真核表达质粒 pcD-NA3．1（＋）-Rap2c,采用酶切及测序鉴定。重组质粒转染A 549和H 1299细胞,Western blot 检测其目的基因表达。结果双酶切及测序结果显示重组质粒pcDNA3．1（＋）-Rap2c成功构建,Werstern blot 检测到 A549和H 1299细胞有相应蛋白表达。结论成功构建人Rap2c基因真核表达质粒,为后续研究奠定了基础。