MARCH1通过PI3K/AKT信号通路对人胃癌细胞迁移和侵袭的促进作用

探讨膜相关环状蛋白1（MARCH1）对胃癌细胞迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的分子机制。     

5-Aza/TSA表观遗传处理诱导非霍奇金淋巴瘤B细胞表型丢失

目的:探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷/曲古抑菌素A(5-Aza/TSA)介导的DNA去甲基化/组蛋白乙酰化处理对B细胞来源的非霍奇金淋巴瘤B细胞表型的影响。方法:构建含有G418抗性的CD19特异性启动e GFP表达载体,转染霍奇金(阴性对照)和非霍奇金淋巴瘤细胞,并筛选目的序列稳定整合的克隆,比较CD19启动子在2组细胞中的活性。流式细胞术检测5-Aza/TSA处理对2组细胞GFP表达水平的影响。分离Eμ-myc转基因小鼠非霍奇金淋巴瘤原代细胞并鉴定其B细胞表型,通过流式细胞术检测5-Aza/TSA对其B细胞表面抗原CD19等表达水平的影响。结果:5-Aza/TSA表观遗传处理能够降低人非霍奇金淋巴瘤细胞中外源性CD19启动子的转录活性,并沉默小鼠原代非霍奇金淋巴瘤细胞表面B细胞特异性抗原的表达。结论:DNA甲基化和组蛋白去乙酰化对人类及小鼠B细胞来源的非霍奇金淋巴瘤B细胞表型稳定有重要作用。     

不孕症女性阴道菌群多样性研究

目的从菌群总体角度分析生育年龄不孕症和生育能力正常女性阴道菌群的差异。方法分别采集不孕症(不孕组,40例)和正常生育力女性(对照组,40例)阴道后穹隆分泌物;提取样本基因组总DNA,对16S r RNAV4~V5区基因进行扩增,所有扩增产物进行Ion Torrent PGM平台测序,并将获得分析序列与Ribosomal Database Project(RDP)数据库的序列比对,进行物种注释,最终得到样品的物种信息。结果在菌群结构上,不孕组和对照组女性阴道菌群主要分为6大菌门,分别为厚壁菌门、放线菌门、拟杆菌门、梭杆菌门、变形菌门和软壁菌门。两组中各个菌门的检出率比较,差异无统计学意义(P0.05)。不孕组的厚壁菌门和乳酸杆菌属的丰度(93.58%,75.21%)明显低于对照组(82.68%,60.29%)(P0.05)。不孕组和对照组阴道菌群的α、β多样性比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论不孕和生育力正常女性阴道菌群均以乳杆菌属为优势菌群,阴道菌群结构无显著差异。     

上调Mg2+/Mn2+依赖性蛋白磷酸酶1F表达对鼻咽癌HONE-1细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨上调Mg²⁺/Mn²⁺依赖性蛋白磷酸酶1F（PPM1F）对鼻咽癌HONE-1细胞增殖、迁移的影响,并阐明其作用机制。 方法 鼻咽癌HONE-1细胞分为pcDNA3.1组（转染pcDNA3.1质粒）和pcDNA3.1-Flag-PPM1F组（转染pcDNA3.1-Flag-PPM1F质粒）。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法和Western blotting法检测2组细胞中PPM1F和E-钙黏蛋白（E-cadherin）mRNA及蛋白表达水平,CCK-8法和克隆形成实验检测2组细胞增殖活性和克隆形成率,细胞划痕实验检测2组细胞划痕愈合率,Transwell实验检测2组细胞中迁移细胞数。 结果 与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-Flag-PPM1F 组细胞中PPM1F mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,且PPM1F蛋白表达量明显增加,细胞中E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,细胞增殖活性、克隆形成率和划痕愈合率明显降低（P<0.05或P<0.01）,迁移细胞数明显减少（P<0.05）。 结论 上调PPM1F表达能够抑制鼻咽癌HONE-1 细胞增殖和迁移,其机制可能与细胞间的黏附作用有关。     

下调ADAR1表达对人肺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化的影响

目的：探讨下调作用于RNA的腺苷酸脱氢酶1（ADAR1）对肺癌H1299和H520细胞增殖、迁移和上皮间质转化（EMT）的影响,并阐明其作用机制。方法：H1299和H520细胞系分为对照组（转染negative shRNA）和shADAR1组（转染shADAR1）。实时荧光定量PCR法和Western blotting法检测各组细胞中ADAR1 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法和克隆形成实验检测各组细胞增殖活性和克隆形成数,细胞划痕实验检测各组细胞划痕愈合率,Western blotting法检测各组细胞中E钙黏附蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（vimentin）蛋白表达水平。结果：与对照组比较,shADAR1组的H1299和H520细胞中ADAR1 mRNA及蛋白表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）。与对照组比较,shADAR1组H1299和H520细胞增殖活性、克隆形成数量和细胞划痕愈合率均明显降低（P<0.05或P<0.01）,H1299和H520细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,vimentin蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。结论：下调ADAR1表达能够抑制肺癌细胞的增殖、迁移及EMT。     

人LncRNA MIR31HG基因稳定转染PC9细胞系的构建及其对细胞增殖和迁移的影响

目的：检测过表达人MIR31HG基因对PC9细胞增殖和迁移的影响,阐明促癌基因MIR31HG的作用机制。方法：通过RT-PCR法扩增长链非编码RNA（LncRNA）MIR31HG全长序列,分子克隆至pcDNA3.1（-）真核表达载体,将pcDNA3.1-MIR31HG过表达质粒和对照质粒pcDNA3.1分别转染人肺癌PC9细胞。采用酶切鉴定法检测MIR31HG过表达载体的构建情况。通过G418药物筛选建立稳定过表达MIR31HG的PC9细胞系（PC9-pcDNA3.1-MIR31HG,稳定转染组）和对照细胞系（PC9-pcDNA3.1,空载体组）。采用RT-PCR法检测稳定转染细胞系中MIR31HG基因表达水平,采用CCK-8法和划痕愈合实验检测PC9细胞增殖活性和迁移能力。结果：琼脂糖凝胶电泳,成功扩增得到了MIR31HG的特异基因片段;MIR31HG真核表达载体经双酶切后分别产生目的基因和载体2个片段。RT-PCR法检测,稳定转染组细胞中MIR31HG mRNA表达水平明显高于空载体组（P<0.05）。CCK-8检测,在培养24、36和48h时,稳定转染组细胞增殖活性明显高于空载体组（P<0.01）。划痕愈合实验,在培养48h时,稳定转染组细胞划痕愈合率明显高于空载体组（P<0.05）。结论：成功构建了人LncRNA MIR31HG基因的真核过表达载体和过表达MIR31HG的稳定转染PC9细胞系,且MIR31HG过表达能够促进肺癌PC9细胞增殖和迁移。     

YAP对非小细胞肺癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的：探讨长链非编码RNA （lncRNA） MALAT1在YAP调控的非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖和迁移中的作用,并阐明其作用机制。方法：选择A549和H1299细胞系分为Scramble siRNA组（转染Scramble siRNA）、siYAP-1组（转染siYAP-1）和siYAP-2组（转染siYAP-2）。RT-PCR和Western blotting法检测各组细胞中YAP和MALAT1mRNA及YAP蛋白表达水平;在A549和H1299细胞中分别转染pcDNA3.1-YAP质粒（pcDNA3.1-YAP组）、共转染pcDNA3.1-YAP质粒和siMALAT1-2（pcDNA3.1-YAP+siMALAT1-2组）及对照质粒（pcDNA3.1-YAP+Scramble siRNA组）,CCK-8法检测各组细胞增殖能力,细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。结果：siYAP-1组和siYAP-2组A549和H1299细胞中YAP mRNA及蛋白表达水平均明显低于Scramble siRNA组（P<0.05）,siYAP-1组和siYAP-2组A549和H1299细胞中MALAT1mRNA表达水平低于Scramble siRNA组（P<0.05）;与pcDNA3.1-YAP组比较,pcDNA3.1-YAP+siMALAT1-2组A549和H1299细胞增殖能力降低（P<0.05）,H1299细胞迁移能力降低（P<0.05）。结论：在NSCLC细胞中,YAP通过调控lncRNA MALAT1的表达促进细胞的增殖和迁移。     

尿石素B对胶质母细胞瘤U251细胞生物学行为的影响

目的 检测尿石素B(UB)对胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及细胞周期的影响和机制.方法 用不同剂量的UB处理胶质母细胞瘤U251细胞,运用CCK-8方法、克隆形成、划痕愈合、Transwell侵袭实验检测UB对U251细胞增殖、迁移、侵袭的影响;用流式细胞术检测UB对细胞周期和凋亡的调控作用;运用Western...     

脂联素受体AdipoR1对肺癌PC9细胞增殖和迁移的影响

目的 检测过表达或敲低人脂联素受体1（AdipoR1）基因对PC9细胞增殖和迁移的影响，阐明AdipoR1基因对肺癌的调控作用。方法 通过PCR检测AdipoR1在PC9细胞及对照细胞HBEC中的表达量；利用分子克隆的方法构建AdipoR1的过表达和shRNA干扰载体，并采用PCR和western blot方法检测转染AdipoR1过表达和干扰载体PC9细胞中AdipoR1的表达情况。运用CCK-8方法和划痕愈合实验检测AdipoR1激动剂AdipoRon、AdipoR1过表达及AdipoR1敲低对PC9细胞的增殖和迁移活性的调控作用。结果 PCR结果显示AdipoR1在PC9细胞中的表达量明显降低（P < 0.05）。PCR和western blot结果显示AdipoR1 mRNA和蛋白在其过表达的PC9细胞中的表达量明显高于空载体细胞系（P 均 < 0.05），在其干扰RNA处理组表达量明显低于空载体细胞系（P 均 <0.05）。CCK-8和划痕愈合实验结果显示：在24h和48h时，与溶剂对照组相比，AdipoRon能显著降低PC9细胞的吸光度值和划痕愈合百分比（P均 < 0.05）。过表达AdipoR1 PC9细胞的吸光度值和划痕愈合百分比明显低于空载体细胞（P均 < 0.05）。AdipoR1敲低能明显促进PC9细胞的吸光度值和划痕愈合百分比（P均 < 0.05）。结论 成功构建了人AdipoR1的真核过表达和shRNA干扰载体，AdipoR1激动剂AdipoRon或AdipoR1过表达能抑制肺癌PC9细胞增殖和迁移活性，而AdipoR1敲低则能明显促进肺癌PC9细胞增殖和迁移的活性。