细胞分化剂增强三氧化二砷诱导肝癌细胞的凋亡效应

【目的】探讨细胞分化剂 (CDA Ⅱ )在三氧化二砷 (As2 O3 )诱导肝癌细胞凋亡效应中的作用。【方法】应用CDA Ⅱ和As2 O3 共同处理肝癌细胞株BEL 74 0 2、HepG2 ,通过四唑蓝比色法检测细胞存活率 ;用活细胞荧光染色观测细胞凋亡及形态学变化、流式细胞术分析细胞周期变化及凋亡率。【结果】CDA Ⅱ毒性作用很低 ,但可以显著增强As2 O3 对肝癌细胞生长的抑制作用 ,1 0 g/LCDA Ⅱ便可使As2 O3 对两株细胞的半数抑制浓度由 5 0 μmol/L降低至 1 0 μmol/L(P <0 0 1)。形态学可观察到CDA Ⅱ明显加强了As2 O3 诱导的细胞凋亡 ,且与剂量有关 ;流式细胞术分析 ,低质量浓度的CDA Ⅱ (<2 0 g/L)细胞生长阻滞于G2 期较对照组多 ,而随着剂量的增加则凋亡细胞和滞留于G1期的细胞增多 ,低剂量CDA Ⅱ与As2 O3 共同处理肝癌细胞后 ,凋亡率明显高于单独用As2 O3 。【结论】CDA Ⅱ可增强As2 O3 诱导肝癌细胞的凋亡效应 ,两药具有协同作用。     

三氧化二砷诱导肠癌HT-29细胞周期阻滞及凋亡的研究

目的：探讨三氧化二砷（AsO3）对结肠癌细胞增殖的抑制作用及对细胞周期和凋亡的影响。方法：采用MTr法测定细胞增殖活力，通过细胞形态学观察细胞分裂及凋亡，应用流式细胞仪进行细胞周期解析、凋亡的检测。结果：As2O3呈剂量-时间依赖性抑制结肠癌HT-29细胞系的增殖，作用24、48及72h后抑制50％细胞生长的药物浓度（IC50）分别为40．03,13．76,4．53μmol/L，与对照组差异显著（P〈0．05）。2μmol/L与5μmol/L的As2O3作用24h后，细胞周期出现G2/M期阻滞及亚二倍体凋亡峰，随着作用时间的延长，凋亡细胞随岛，M期细胞减少而逐渐增多。细胞形态学观察分裂期细胞及凋亡细胞明显增加。结论：As12O3抑制结肠癌HT-29细胞的增殖，诱导G2/M期阻滞及细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导卵巢癌细胞株SKOV3和COC1凋亡

目的：对比研究三氧化二砷(As2O3)诱导卵巢癌细胞株SKOV3和COC1凋亡的作用．方法：用不同浓度的As2O3溶液作用人卵巢癌细胞株SKOV3及COC1,于不同时间点收集细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率及分析细胞周期的变化,原位末端标记法观察细胞凋亡形态学特征．结果：不同浓度的As2O3溶液对卵巢癌细胞株SKOV3及COC1均有不同程度的生长抑制作用．随着药物浓度的升高、作用时间的延长,As2O3对COC1细胞的生长抑制率升高．15．0μmol/L(10ppc)浓度组的As203对SKOV3的生长抑制效应最显．低于15．0μmol/L的浓度组对SKOV3细胞株的抑制率之间没有显性差异．As2O3对COC1细胞的生长抑制作用比SKOV3强．6．0μmol/L As2O3作用48 h SKOV3细胞出现凋亡形态学改变,COC1细胞在1．5μmol/L As2O3作用48h就出现了凋亡形态学改变,且随着作用时间的延长凋亡细胞增多．15．0和6．0μmol/L As2O3作用下SKOV3细胞周期的变化出现了随着药物作用时间的延长G1期细胞比例逐渐上升,S期、G2／M期细胞的比例同时降低的现象．在3．0和1．5μmoL／L As2O3作用下COC1细胞周期也出现了相同的改变．结论：As2O3可以诱导卵巢癌细胞株SKOV3和COC1发生凋亡,COC1比SKOV3对砷剂更敏感．诱导细胞发生G1期阻滞是As2O3抑制卵巢癌细胞生长作用的可能机制之一。     

三氧化二砷对HL-60细胞生长的影响

目的：观察不同浓度的三氧化二砷（As2O3）对HL－60细胞生长的作用。方法：采用瑞氏染色油镜观察细胞形态；四甲基噻唑氮蓝（MTT）比色法观察As2O3对HL－60细胞的生长抑制作用。结果：瑞氏染色显示低浓度的As2O3（0.1μmol/L,1.0μmol/L）诱导后，细胞呈现部分分化现象，而高浓度的As2O3（5．0μmol/L）诱导后细胞呈现凋亡特征，As2O3能明显抑制HL－60细胞的生长，第1天半数抑制率（IC50）约为20．0μmol/L，第2天、第3天IC50均约为5．0μmol/L。结论：As2O3能明显抑制HL－60细胞的生长；低浓度者可诱导HL－60细胞部分分化，高浓度者可诱导其凋亡。     

三氧化二砷对人卵巢癌细胞株体外作用的研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)对卵巢癌细胞株体外生长的影响。方法：以As2O3处理卵巢癌细胞株SKOV3，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法，测定As2O3对SKOV3生长的抑制作用，并绘制剂量－效应曲线；通过透射电镜观察细胞超微结构的变化；应用流式细胞仪分析DNA含量和细胞周期并测定凋亡特征酶caspase-3的活性变化。结果：0．5－4．0μmol/L三氧化二砷明显抑制SKOV3细胞的增殖，并呈剂量和时间依赖性；透射电镜观察可看到较为典型的细胞凋亡的形态学改变；细胞核固缩，染色质凝集，呈新月状紧贴于核膜周边，凋亡小体形成等；流式细胞仪检测出现DNA含量小于G1峰的亚二倍体凋亡峰，同时出现G2／M期阻滞；SKOV3在As2O3作用下，caspase-3是实现凋亡的效应因子，它的激活必然导致凋亡细胞最终的各种表型变化。结论：As2O3对卵巢癌细胞株SKOV3的生长有明显的抑制作用，诱导凋亡是其主要作用机制之一。     

三氧化二砷诱导肝癌细胞HepG2凋亡作用

目的 探讨三氧化二胂（As2O3)诱导肝癌细胞HepG2凋亡作用。方法 应用普通光学显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪观察As2O3对HepG2细胞株的形态学改变和诱导凋亡率。结果 As2O3作用于细胞后,可看到较典型的细胞凋亡形态学改变,细胞体积缩小、染色质固缩成斑块状、呈半月型紧贴于核膜周边、核碎裂、凋亡小体形成等。AO／EB荧光染色法显示,细胞凋亡率为3．1％－9．1％。As2O3诱导HepG2细胞凋亡作用呈时间依赖性,最佳浓度为2μmol／L。流式细胞仪DNA直方图上呈现典型的亚二倍体凋亡峰。As2O3主要作用于细胞周期的G2／M期。结论 As2O3具有诱导HepG2细胞凋亡作用,具有治疗肝癌的潜在价值。     

As2O3对HGC-27、HepG2细胞株增殖抑制作用及机制研究

目的探讨三氧化二砷（As2O3）抑制恶性肿瘤细胞生长及诱导凋亡的生物学效应。方法采用光学显微镜进行形态学观察。溴化二甲噻唑二苯四氮唑（MTT）还原法经浓度为1.25μmol/L、2.50μoml/L、5.00μoml/L、10.00μmol/L、20.00μmol/L As2O3处理后,分别培养48 h、72 h、96 h对胃癌细胞（HGC-27）、肝癌细胞（HepG2）生长的影响。用Hoeschst33258染色后在荧光显微镜下观察细胞凋亡形态。流式细胞仪检测不同浓度As2O3对胃癌细胞周期的影响。结果 HGC-27、HepG2细胞株经As2O3作用后,细胞增殖受到明显抑制;且随着药物浓度的升高及作用时间的延长,抑制率显著升高。经As2O3作用后,Hoechst33258染色可见凋亡细胞的核染色质凝聚且边缘化,并呈现DNA荧光碎片。流式细胞仪检测显示G1/G0细胞由正常对照组的68.55%上升到80.30%,而G2/M期细胞则从11.56%下降至2.53%,出现了明显的G1/G0期阻滞（P〈0.05）。结论 As2O3可以明显抑制胃癌细胞的增殖,对肝癌细胞的生长也有一定程度的抑制作用,并有明显的时-效关系和量-效关系,且能将细胞阻滞于G0/G1期;其抗肿瘤的作用机制可能与诱导肝癌细胞和胃癌细胞分化和凋亡、阻滞细胞周期等有关。     

亚砷酸体外对人肝癌细胞株BEL-7402影响的初步研究

目的 体外培养人肝癌细胞株BEL－7402,从多个角度探讨三氧化二砷（As2O3）的抗肿瘤作用及其机制。方法 应用倒置相差显微镜、电子显微镜、透谢电镜、流式细胞仪,分别对不同浓度加药组及对照组BEL－7402细胞的存活。形态学改变,细胞DNA含量的分布进行了观察和测定。结果 0.5、1、2μmol/L As2O3均能抑制人肝癌细胞株BEL－7402细胞的生长增殖。流式细胞仪分析显示,加药组在G1期细胞前均出现亚二倍体峰,且G0／G1期细胞减少,S期细胞增多;电镜下,对照组细胞核质比大、核大、核膜有明显切迹,0.5μmol/L As2O3组细胞核质比减少、核变圆、胞浆内出现分化良好的细胞器, 0.5、1、2μmol/L As2O3组均可见细胞膜完整、核固缩、凋亡小体形成。结论 三氧化二砷不仅抑制人肝癌细胞增殖,而且诱导细胞凋亡。     

三氧化二砷通过诱导结肠癌LoVo细胞凋亡和坏死抑制其生长

目的 探讨三氧化二砷（As2O3)对结肠癌细胞系LoVo细胞生长的影响及可能机制。方法 通过肿瘤细胞记数,观察As2O3对LoVo细胞生长的影响。应用光镜、电镜、流式细胞仪以及生化分析仪,观察细胞形态学、凋亡细胞峰并测定培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）含量。结果 As2O3明显抑制LoVo细胞生长,并呈时间和剂量依赖关系（P＜0．05或P＜0．01）。光镜及电镜下可见典型的细胞凋亡和坏死形态表现。流式细胞仪分析显示：在G1期前出现亚二倍体的凋亡细胞峰。生化分析测定发现：As2O3浓度为2．0μmol/L时,培养上清液中LDH含量增加（P＜0．05或P＜0．01）。结论 As2O3通过诱导LoVo细胞凋亡和坏死抑制其生长。     

三氧化二砷对人结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：观察三氧化二砷（As2O3）对人结肠腺癌LS－174T细胞增殖及凋亡的影响。方法：应用MTT法，细胞集落形成试验，流式细胞仪技术和TUNEL法观察不同浓度的As2O3（1．0、2．0、4．0、8．0、16．0μmol/L）对LS－174T细胞增殖和凋亡的影响，免疫组化技术观察As2O3对bcl-2基因表达的影响。结果：As2O3处理后，LS－174T细胞生长抑制率上升，集落形成率下降，细胞周期中G1期细胞比例上升，S期和G2／M期细胞比例下降，TUNEL法显示凋亡数增加，免疫组化结果显示bcl-2的表达明显减弱，结论：As2O3能抑制LS－174T细胞增殖并诱导该细胞株凋亡，其机理可能与下凋bcl-2的表达有关。     

三氧化二砷联合抗坏血酸对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究三氧化二砷(As2O3)联合抗坏血酸(AA)对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其细胞内谷胱甘肽(GSH)水平.方法:As2O3和AA不同组合孵育细胞HepG2,采用台盼蓝染色实验检测药物对细胞生长的影响,流式细胞仪检测亚二倍体凋亡峰,Annexin V染色检测细胞凋亡率,GSH实验检测细胞内GSH水平.结果:100 μmol/L的AA单独作用与对照组相比在细胞增殖和凋亡都无显著性差异;低剂量(2 μmol/L)和高剂量(5 μmol/L)的As2O3都能抑制细胞增殖活性和诱导细胞凋亡,联合AA作用后,比相应浓度的单独As2O3作用更为显著;AA和As2O3分别处理都能明显消减细胞GSH含量,两种药物联合作用后与相应单独As2O3作用相比GSH水平显著性降低.结论:GSH在As2O3对肝癌细胞抑制增殖和诱导凋亡作用机制中起到重要的作用,高低剂量的As2O3联合AA通过降低GSH水平均可以增强As2O3对肝癌细胞抑制生长及其诱导凋亡作用的敏感性.     

三氧化二砷对胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察三氧化二砷(As2O3)对胆管癌癌细胞株QBC939的增殖抑制作用并初步探讨其机制。方法 胆管癌细胞株QBC939用不同浓度As2O3处理，活细胞计数和细胞克隆试验观察As2O3对细胞动力学的影响；丫啶橙荧光染色、透射电镜，TUNEL观察细胞凋亡；流式细胞仪测定细胞凋亡和细胞周期变化；增殖细胞核抗原(PCNA)、bcl-2单抗SABC免疫组化染色。结果 在0．75-6μmol/L范围内，As2O3明显抑制QBC939细胞增殖和诱导细胞凋亡，其作用随As2O3浓度增加和作用时间延长而增强；相应地PCNA和bcl-2表达减弱。流式细胞仪检测可见明显的凋亡峰，并阻滞细胞周期的G2-M期。结论 As2O3可明显抑制胆管癌细胞株QBC939的生长、诱导癌细胞凋亡，有临床治疗胆管癌的潜在价值。     

三氧化二砷对肝癌细胞株的体外抑制作用

目的研究三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402的抑制作用。方法用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测用As2O3对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402生长及抑制率的影响;凋亡电泳检测电泳条带,流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和凋亡率变化。结果在0.1~50.0μmol/L的浓度范围内As2O3对BEL-7402、HepG2细胞的生长均有明显的抑制作用,且有时间和浓度的依赖性;凋亡电泳显示5μmol/L As2O3对肝癌细胞株HepG2,BEL-7402凋亡率分别是46.7%和53.1%;流式细胞仪DNA组方图上可见细胞G1前期出现亚二倍峰。结论As2O3可抑制肝癌细胞株HepG2,BEL-7402的生长,且在一定的范围内,抑制率具有一定的浓度和时间依赖性;As2O3对BEL-7402细胞株的生长抑制作用大于HepG2;As2O3抑制肝癌细胞株HepG2,BEL-7402生长的作用与细胞凋亡有关。     

As2O3诱导人胃癌细胞凋亡的研究

目的：观察As2O3对人胃癌细胞 株 的作用,并探讨其抗胃癌作用的机制。方法： 不同浓度进口分析纯A s2O3 0.1-2.0 μmol/L与人胃癌细胞株共育一定时间后,观察细胞的 存活、形态学改变及细胞DNA含量的分布,并以NIH3T3细胞作对照。结果：1.0-2.0 μmol/L As2O3处理的胃癌细胞呈典型的凋亡特征性改变：在形态上 表现为胞膜完整、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成;流式细胞术分析显示在G1期细胞 前出现亚二倍体峰,与As2O3作用的时间及浓度呈正相关趋势。结论：As2O3抗胃癌作用机制之一可能是诱导胃癌细胞凋亡。     

三氧化二砷纳米粒体外诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的：研究三氧化二砷(As2O3）新剂型纳米粒的制备方法及体外诱导肝癌细胞凋亡的作用，并与传统的As2O3溶液进行比较。方法：①采用溶胶-凝胶法制备As2O3纳米粒；②用光镜、电镜、MTT、流式细胞仪法研究As2O3纳米粒诱导人肝癌细胞凋亡的效柴。结果：①制备了大小约为80nm和40nm两种粒径的As2O3纳米粒子，电镜下呈圆形或椭圆形，分散性好；②细胞培养发现，5、10μmoL／L浓度的As2O3纳米粒可对人肝癌细胞生长产生明显的抑制作用，并诱导癌细胞凋亡，细胞凋亡率明显高于相同浓度的As2O3溶液组。结论：通过溶胶-凝胶法可将As2O3制备成纳米粒子，体外细胞实验证实其抗肝癌细胞的效应强于传统的As2O3溶液。     

厌氧加强三氧化二砷对A549细胞G1期的阻滞作用

[摘要]目的观察低浓度三氧化二砷(As2O3)在不同氧环境下对肺癌A549细胞增殖抑制、细胞周期阻滞、细胞凋亡的诱导作用。方法分别在常氧(21% O2)、低氧(5% O2)、厌氧(0% O2)环境利用0 μmol/L As2O3(空白对照组)、1 μmol/L As2O3、1 μmol/L VP-16体外诱导培养肺癌A549细胞24 h,通过甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)法测细胞增殖抑制率,通过碘化丙啶(propidium iodide, PI)染色、流式细胞仪检测细胞周期,通过Annexin Ⅴ/PI双染色法检测细胞凋亡。结果1 μmol/L As2O3组A549细胞增殖抑制率及G0/G1期细胞比例随缺氧加重而增加;厌氧环境下该组细胞增殖抑制率及G0/G1期细胞比例均高于空白对照组(P<0.05),但其细胞凋亡率较空白对照组降低(P<0.05);与3种相应氧环境下VP-16组相比较,As2O3组A549细胞增殖抑制率、G0/G1期细胞比例、G2/M期细胞比例、细胞凋亡率均减少(P<0.05)。结论1 μmol/L As2O3对A549细胞无明显诱导凋亡作用,厌氧环境下该剂量As2O3可以通过G1期阻滞抑制A549细胞增殖。     

维甲酸联合三氧化二砷对NB4细胞NF-κB、ROS表达的影响

目的探讨全反式维甲酸（ATRA）联合三氧化二砷（As2O3）对NB4细胞的生长以及核因子-kB（NF-kB）、活性氧（ROS）表达的影响。方法选择NB4细胞，加入ATRA和不同剂量的As2O3，观察细胞生长曲线，流式细胞仪检测CD11 b、ROS、NF—kB的变化，DNA片段梯度观察细胞凋亡。结果0．5μmol／L As2O3下调了1μmol／L ATRA诱导的NB4细胞的分化凋亡发生，同时抑制了NF-kB的激活，提高了ROS水平。2μmol／L As2O3联合同浓度ATRA对增殖抑制、诱导凋亡更明显。结论ATRA联合As2O3对NB4细胞具有分化和凋亡的双重效应。     

三氧化二砷诱导慢性髓细胞性白血病K562细胞株凋亡与c-myc的表达

目的：观察三氧化二砷(As2O3)诱导慢性髓细胞性白血病K562细胞株凋亡和c-myc mRNA表达的作用，并探讨其作用机制。方法：应用MTT法、苔盼蓝拒染法、DNA凝胶电泳和细胞周期凋亡检测，观察0μmol／L、0．5μmol／L、lμmol／L、2μmol／L、4μmol／L、8μmol／LAs2O3分别作用24h、48h、72h后，对K562细胞增殖及活力的影响。应用RT-PCR和免疫组织化学法检测As2O3处理后K562细胞c-myc mRNA和蛋白表达的变化。结果：As2O3诱导后K562细胞核DNA凝缩，核片段化，最后形成凋亡小体。在一定范围内，随着As2O3浓度的增加和As2O3处理时间的延长，细胞存活率明显下降；流式细胞仪检测可见As2O3诱导K562细胞凋亡，影响细胞周期，细胞阻滞于G2／M期；As2O3处理后c-myc mRNA和c-myc蛋白表达均有先上调后回落的趋势。结论：As2O3可以抑制K562细胞增殖并诱导凋亡，其作用机制可能是使细胞受阻于G2／M期而进入凋亡程序，c-myc基因参与了As2O3诱导细胞凋亡的基因调控。     

三氧化二砷对肝癌细胞增殖的影响

目的：研究三氧化二砷（As2O2）对肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用。方法：应用台盼蓝拒染法、MTT比色法及细胞克隆形成试验，研究As2O2对肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制和细胞毒作用。结果：AS：0，能显著抑制肝癌细胞的生长，5μmol／L As2O2抑制程度明显强于1μmol／L。1．5μmol／L和1μmol／L As2O2作用后细胞克隆形成率分别为（1．5±1．2）％和（12．3±2．2）％，明显低于对照组的（30．0±4．2）％，（P〈0．01）。As2O2对肝癌细胞有较强的细胞毒作用，且呈明显剂量和时间依赖性，其对肝癌细胞的杀伤率高于5-氟脲嘧啶（5-Fu）和丝裂霉素（MMC），但差异无统计学意义。As2O2与5-Fu及MMC存在协同效应，联合应用杀伤率明显升高。结论：As2O2具有明显的抑制肝癌细胞增殖作用，有必要进一步探讨其对肝癌的治疗价值。     

细胞内Ca2+变化在砷剂诱导胰腺癌细胞株凋亡中的作用

目的：探讨细胞内游离Ca^2 在As2O3诱导的胰腺癌细胞株凋亡过程中的作用及Fas,Fas配体（FasL)的变化和意义。方法：2μmol/L的As2O3与胰腺癌细胞株SW－1990共同孵育后,H－E染色、光镜观察,抽提细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳,上流式细胞仪检测细胞凋亡特征; 用Fura-2荧光负荷技术测细胞内游离Ca^2 浓度（[Ca^2 ]i),流式细胞仪检测Fas,FasL的表达情况。结果：2μmol/LAsO3作用于胰腺癌细胞48h后,胰腺癌细胞出现典型的凋亡特性改变,且凋亡过程中[Ca^2 ]i明显升高,Fas,FasL表达呈先升后降,结论：As2O3在诱导胰腺细胞凋亡过程中,肿瘤细胞凋亡与[Ca^2 ]i升高和Fas、FasL表达有关。