OmpW在鲍曼不动杆菌中的表达及致病机制

目的 分析外膜蛋白W (OmpW)在鲍曼不动杆菌临床株中的分布及其可能致病机制。方法：选取碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌31株(耐药组)及敏感株30株(敏感组)作为研究对象,Western Blot方法检测OmpW蛋白的表达特征差异；OmpW重组蛋白与Hep-2人喉癌上皮细胞株体外共孵育,检测其对Hep-2细胞增殖能力的影响；采用JC-1染色技术观察OmpW蛋白对Hep-2细胞的促凋亡作用,并采用western blot方法检测细胞凋亡相关通路蛋白表达情况。结果： OmpW蛋白在耐药株中的表达率(100%)明显高于敏感株(63.33%)(χ2^=12.359,P=0.000<0.01)。JC-1染料染色法检测中,OmpW蛋白与Hep-2细胞作用后,其凋亡细胞明显增多。40μg/mL和80μg/mL OmpW蛋白作用于细胞,其增殖能力明显减弱(均P＜0.05)；孵育12小时及24小时后,80μg/mL ompW组细胞增殖能力明显减弱(均P＜0.05)；在OmpW蛋白作用下, Hep-2细胞bcl-2蛋白相对表达量明显降低(P＜0.05),但无明显时间及浓度依赖特征；而DR4、Fas Ligand、Anti-IGF 1及Caspase 8蛋白表达量无明显变化。结论：耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌临床株高表达OmpW蛋白。OmpW重组蛋白可显著抑制Hep-2细胞增殖并呈浓度依赖性,并促进Hep-2细胞凋亡,促凋亡机制可能主要通过抑制Bcl-2家族蛋白相关信号通路来实现。     

泛耐药鲍曼不动杆菌的抗菌药物治疗策略

鲍曼不动杆菌广泛存在医院环境中,是医院感染的重要条件致病菌,鲍曼不动杆菌耐药率逐年升高,临床上已出现了多重耐药、泛耐药菌株,甚至全耐药菌株。泛耐药鲍曼不动杆菌株是指仅对1~2种对其感染治疗有效的抗菌药物(主要是替加环素和/或多黏菌素)敏感的菌株,其分离率逐年上升,临床上选择抗菌药物和治疗方案非常棘手。该文就泛耐药鲍曼不动杆菌感染治疗的相关问题进行综述。     

鲍曼不动杆菌206株的临床分布及耐药性分析

目的:了解鲍曼不动杆菌菌株分布及对常用抗菌药物的耐药性.方法:分析2008年11月～2010年12月常规细菌培养分离的鲍曼不动杆菌的分布情况及其耐药性,并采用Whonet5.4软件进行统计分析.结果:检出的206株鲍曼不动杆菌中,以痰液及咽拭子分离率较高(80.1%),临床分布以呼吸肿瘤和ICU为主(77.2%).鲍曼不动杆菌对17种常用抗菌药物的耐药率以舒普深最低,对其余抗菌药物的耐药率均在20%以上,甚至对亚胺培南的耐药率也达27.3%.206株鲍曼不动杆菌中,有23株为泛耐药菌株.结论:鲍曼不动杆菌对17种常用抗菌药物存在不同程度的耐药性,应加强鲍曼不动杆菌的耐药性监测,为临床合理选用抗菌药物提供依据.同时应对泛耐药鲍曼不动杆菌采取有效的预防措施,避免泛耐药菌株的暴发流行.     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的主要耐药机制研究

目的研究感染性鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶基因分布与耐药相关性。方法回顾性分析鲍曼不动杆菌在2010年1月~2015年12月期间的药物敏感性变迁,留取200株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌,检测青霉烯酶与外排泵表型,并统计比较200株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌与200株碳青霉烯类敏感组的差异。结果 2010年1月~2015年12月期间鲍曼不动杆菌耐药严峻,碳青霉烯类鲍曼不动杆菌检出率在35.8%~78.9%。其中在200株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌菌株中,检出携带OXA-51基因108株,携带OXA-23基因46株,同时携带OXA-51和OXA-23 26株,其余碳青霉烯酶基因均未检测到;外排泵表型在碳青霉烯类耐药菌阳性株为175株,碳青霉烯类敏感株阳性株为115株,χ~2检验碳青霉烯类敏感组的与耐药组比较,差异有统计学意义(χ~2=45.141,P=0.000)。结论近六年鲍曼不动杆菌耐药机制以OXA-51,OXA-23起主要作用,外排泵机制可能在碳青霉烯类耐药机制起作用。     

40株泛耐药鲍曼不动杆菌替加环素药敏分析

目的:总结培养的40株泛耐药鲍曼不动杆菌对替加环素的药敏情况。方法:22例住院患者一共分离出40株对目前临床常用药物不敏感的耐药鲍曼不动杆菌,分析菌株来源的病区、部位、患者的呼吸道情况和预后等。培养出来的鲍曼不动杆菌菌株采用K-B纸片扩散法进行药敏试验,选用15种抗菌药物和替加环素进行药敏试验。结果:25株菌株来自中心ICU(62.5%),8株来自急诊ICU(20%),5株来自呼吸ICU(12.5%),2株来自老干部病区(5%)。从取标本部位看,32株来自痰液(80%),来自腹腔引流液和伤口分泌物各2株(各5%),血流、深静脉导管、胸水、腹水各1株(2.5%)。这22例患者均有肺部感染(100%),有创机械通气20例(90.9%),需气管切开术12例(54.5%),死亡9例(40.9%)。药敏试验显示,对15种常用抗生素均不敏感,对头孢哌酮/舒巴坦和米诺环素的耐药率分别高达,82.5%、87.5%。对替加环素的耐药率为15%。结论:体外药敏试验显示鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦和米诺环素的耐药性已相当严重,替加环素耐药率较低,可以作为泛耐药鲍曼不动杆菌感染治疗的首选药物。     

重症监护病房鲍曼不动杆菌感染调查及泛耐药情况分析

目的 了解该市某医院近3年来重症监护病房(ICU)鲍曼不动杆菌感染现状,分析其耐药谱变迁及泛耐药情况,金属酶产生情况,为临床了解及防治院内感染提供依据.方法 对该院ICU2005～2007年分离的鲍曼不动杆菌分布及耐药情况进行回顾性分析.细菌鉴定采用法国生物梅里埃公司VITEK-32细菌鉴定仅,常规药敏试验采用K-B纸片法,采用头孢他啶和2-巯基丙酸的双纸片琼脂扩散表型协同试验筛选产金属酶菌株.结果 3年间共分离到鲍曼不动杆菌358株,其中2005年87株,2006年102株,2007年169株,其中通过呼吸道感染占82.12%.泛耐药菌株感染率呈现出逐年上升趋势,2005年3株(占3.45%),2006年8株(占7.84%),2007年有21株(占12.43%),且泛耐药菌株感染的发生率与住院时间相关.金属酶表型阳性株共检测出5株,阳性率为15.63%,其中2006年2株,2007年3株.结论 鲍曼不动杆菌感染呈逐年上升趋势,以呼吸道感染方式为主,其泛耐药菌株感染率呈上升趋势,金属酶产生率低,不是主要耐药机制.患者住院时间越长感染泛耐药菌株的几率越高.应加强ICU病房环境和人员消毒,加强抗生素的合理使用,控制鲍曼不动杆菌在医院内的定值和播散,重视泛耐药鲍曼不动杆菌监测.     

鲍曼不动杆菌对替加环素的耐药性及其稳定性研究

【摘要】 目的 了解长期抗菌药物压力及常用紫外线消毒对鲍曼不动杆菌耐药性的影响及替加环素（TGC）耐药鲍曼不动杆菌耐药性在群体中存续的能力。方法 选取临床分离TGC敏感鲍曼不动杆菌3株,分别采用多步法及紫外线照射体外诱导耐药,微量肉汤稀释法检测诱导前后鲍曼不动杆菌对TGC的最低抑菌浓度（MIC）变化。选取临床分离TGC耐药鲍曼不动杆菌2株,在空白MHA平板中反复传代,测定其MIC值。最后选取TGC敏感株及TGC诱导同源耐药株进行TGC耐药株适应度代价研究。结果 应用多步法成功诱导出TGC耐药株;紫外线照射虽然对TGC耐药性未发生影响,但其MIC值有上升趋势。TGC耐药鲍曼不动杆菌传代40代后菌株MIC值无明显变化。TGC敏感株及TGC诱导同源耐药株进行相同条件下培养,体外单独培养时耐药株达到对数生长期及平台期的时间均较敏感株长;混合培养时,随着连续传代,耐药株菌落数量较敏感株迅速减少,甚至耐药株被清除。结论 TGC可诱导鲍曼不动杆菌产生获得性耐药。鲍曼不动杆菌对TGC的耐药可能具有遗传稳定性。TGC耐药株较敏感株适应性下降。     

鲍曼不动杆菌临床分离株耐药分析

目的 本研究旨在了解本地区临床分离的A.Baumannii的耐药情况.方法 用全自动细菌鉴定与药敏分析仪,对临床分离出的37株鲍曼不动杆菌进行21种抗菌药物的敏感性研究.结果 37株临床分离鲍曼不动杆菌中有10株对21种抗菌药物全部耐药,占27.03%,仅有2株对所有药物敏感,占5.41%.35株发生了多重耐药,比例为94.59%.对20种抗菌药物的耐药率均超过50%,有16株菌株对IMP耐药,其耐药率为44.4%.结论 临床分离的鲍曼不动杆菌在本研究中已经呈现出对多种抗菌药物的高比例耐药,甚至出现多个"全耐药"菌株.     

2008-2013年鲍曼不动杆菌的分布及耐药分析

目的监测临床标本中鲍曼不动杆菌的分离率、分布特点及耐药情况,为临床抗菌药物的使用提供依据。方法对2008-2013年临床分离的1 210株鲍曼不动杆菌分布科室、感染特点及15种常用抗生素耐药率进行统计分析。结果分离的鲍曼不动杆菌以呼吸道感染为主,重症监护病房(ICU)为主要检出科室,标本来源以痰最多占84.6%,其次为分泌物。鲍曼不动杆菌检出率呈逐年增高趋势,从2008年的7.1%上升至2013年的11.9%,并有季节性差异,以二、三季度分离菌株数较多。鲍曼不动杆菌对15种常用抗生素耐药率呈不同程度的增加,全耐药菌株明显增多,从2008年的0株上升至2013年的50株。结论鲍曼不动杆菌的分离率逐年增加,以二、三季度感染率较高,泛耐药性愈加严重,全耐药菌株明显增加。合理使用抗生素、控制医院感染的发生乃当务之急。     

鲍曼不动杆菌产β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的 分析鲍曼不动杆菌对抗菌药物的耐药性及产β-内酰胺酶情况.方法 应用VITEK-32全自动细菌鉴定仪对临床标本进行细菌鉴定和药物敏感试验,用改良三维试验检测产β-内酰胺酶情况.结果 分离到69株鲍曼不动杆菌菌株,对抗菌药物的敏感性以头孢哌酮/舒巴坦最高(46.38%),对亚胺培南和美洛培南敏感率43.48%,头孢他啶30.43%、头孢吡肟33.33%、哌拉西林/他唑巴坦34.78%.三维试验结果54株(78.3%)产β-内酰胺酶,其中9株单产AmpC酶(头孢菌素酶),8株单产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),17株同时产AmpC酶和ESBLs,20株不能被氯唑西林和克拉维酸联合抑制.结论 鲍曼不动杆菌的耐药率高,特别是出现了泛耐药的菌株(同时产AmpC酶和ESBLs).应加强鲍曼不动杆菌的β-内酰胺酶检测.     

ICU鲍曼不动杆菌感染分布及耐药性分析

目的分析我院重症监护病房(ICU)内鲍曼不动杆菌(AB)标本分布、耐药情况、感染的危险因素及临床抗菌药物使用情况,为预防与治疗AB感染提供依据。方法对2011年我院ICU分离的41株AB标本(主要来源于痰标本85.37%)的分布、耐药情况及易感AB的危险因素和临床抗菌药物使用情况进行回顾性分析。结果 AB敏感率较高的是头孢哌酮舒巴坦(100%)、亚胺培南(92.5%),对其他抗菌药物的耐药率严重。结论鲍曼不动杆菌对各种抗菌药物的耐药性逐渐增强,多重耐药和泛耐药鲍曼不动杆菌分离率高;应警惕并高度重视该菌感染及耐药监测,以减少耐药菌株的产生和播散。     

ICU病区泛耐药的鲍曼不动杆菌碳青霉烯类药物耐药基因分析

目的研究ICU区病区分离的泛耐药(pandrug-resistant,PDR)鲍曼不动杆菌的耐药机制,检测菌株所含的主要基因型别及其流行情况,指导临床合理用药。方法收集2009～2010年两年分离自ICU病区的PDR鲍曼不动杆菌20株,用浓度梯度法(E-试条法)检测15种抗菌药物的耐药率,用PCR法检测blaOXA-23、blaOXA-24、blaOXA-51、blaOXA-58、blaVIM、blaNDM-1和blaIMP 7种基因型别。结果 20株PDR鲍曼不动杆菌,对常规的14种抗菌药物耐药率阿米卡星55%,米诺环素70%,复方新诺明80%,其他药物均100%;对多黏菌素B的耐药率为0;PCR检测结果显示,检测到3种耐药基因,blaOXA-23、blaVIM和blaIMP;其中14株细菌blaOXA-23阳性,2株blaVIM阳性,1株blaIMP阳性,总阳性率85.5%。结论 PDR-AB对绝大多数常规药物均有较高的耐药性,其耐药机制复杂,对碳青霉烯类耐药的耐药基因主要为blaOXA-23,亟待我们积极深入地探索研究。     

幽门螺杆菌粘附作用的体外研究

置幽门螺杆菌(HP)悬液于含人喉癌上皮细胞(Hep-2)或人胃癌上皮细胞(MKN-28)的培养瓶内,经2h或3.5h培养后观察HP对细胞的粘附情况。结果发现HP能成丛地粘附在上皮细胞表面,少数侵入胞浆内。HP对MKN-28粘附率明显高于对Hep-2细胞者。随菌龄的延长或菌株的变异,HP的粘附作用明显减弱。1%D-甘露糖对HP的粘附性有部分阻抑作用。     

肿瘤抑素诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的实验研究

目的探讨肿瘤抑素对体外培养的人喉癌Hep-2细胞系凋亡的影响。方法用MTT法和台盼蓝染色法观察肿瘤抑素对喉癌Hep-2细胞生长的抑制作用。实验分为对照组和治疗组．光镜、电镜观察细胞形态及超微结构变化，采用DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡的梯形条带，TUNEL标记法检测细胞凋亡情况。结果随着肿瘤抑素浓度的增加喉癌Hep-2细胞的存活率下降。在相同浓度下。随着时间延长存活细胞逐渐减少。电镜观察治疗组细胞出现明显凋亡，琼脂糖电泳结果可见治疗组产生了特征性的DNA梯形条带，TUNEL标记法也证实治疗组可见明显的棕黄色凋亡细胞。结论肿瘤抑素通过诱导凋亡对体外培养的人喉癌Hep-2细胞系产生杀伤作用。     

蜂胶体外诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的实验研究

目的:探讨蜂胶对喉癌细胞珠Hep-2凋亡的影响及作用机制。方法:应用MTT、透射电镜、原位末端标记法观察药物对细胞的抑制率及凋亡形态、凋亡率变化。结果:MTT测得细胞抑制率随时间、剂量而增大,透射电镜下见到凋亡细胞及凋亡小体形成,原位末端标记检测出细胞凋亡率亦有时间、剂量依赖性。结论:蜂胶能够抑制喉癌细胞生长,其抑制作用是通过诱导喉癌细胞凋亡而起作用的。     

GFP共表达的重构型Caspase-3基因对Hep-2细胞的作用

目的:探讨GFP共表达的Caspase-3基因的表达对人喉癌细胞Hep-2的凋亡诱导作用. 方法:应用DNA重组技术将重构型 Caspase-3基因亚克隆至带有GFP报告基因的真核表达载体pEGFP-C1中,脂质体介导转染人喉癌细胞Hep-2,通过RT-PCR方法检测转染后Caspase-3基因的表达;荧光显微镜、电镜观察细胞形态学变化; MTT法检测转染Caspase-3基因对Hep-2细胞生长的影响. 结果:RT-PCR方法证实重构型Caspase-3基因可在Hep-2细胞内表达,形态学观察显示转染组细胞较对照组出现明显细胞凋亡特征,MTT法结果表明Caspase-3对Hep-2的细胞生长有抑制作用. 结论:重构型caspase-3对喉癌细胞Hep-2的生长有抑制作用,并可诱导成骨肉瘤细胞凋亡.     

下调PI3K/Akt信号通路对抑制喉癌细胞生长的影响

目的 探讨钾通道阻断剂四乙胺(TEA)通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路对人喉癌上皮细胞(Hep-2)增殖与凋亡的影响.方法 将TEA作用于Hep-2,用噻唑蓝(MTT)法测定Hep-2细胞活性,计算出TEA对Hep-2的增殖抑制率;采用Hoechest33258染色检测细胞凋亡,用流式细胞仪(FCM)法测定Hep-2凋亡率.结果 5、10、20 mmol/L TEA接种后,Hep-2细胞增殖抑制率分别达到12.573%、31.385%和56.132%,Hep-2作用96 h后细胞凋亡率分别为(41.64±2.67)%、(58.76±4.32)%和(72.65±6.54)%,TEA处理组抑制率和凋亡率都高于未用TEA处理的对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 TEA可抑制Hep-2的增殖及体内生长,促进Hep-2的凋亡.     

中药艾迪诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的研究

目的 研究中药艾迪对人喉癌细胞Hep-2的生长抑制作用及凋亡诱导作用.方法 四亚基噻唑蓝(MTT)法测定中药艾迪对人喉癌细胞Hep-2生长的抑制作用,荧光显微镜观察人喉癌细胞Hep-2的凋亡状况,流式细胞仪技术(FCM)观察人喉癌Hep-2细胞周期及凋亡,荧光定量PCR法测定人喉癌细胞Hep-2环氧化酶(COX-2)的表达量.结果 不同浓度的中药艾迪对人喉癌细胞Hep-2生长均有抑制作用,并有明显的时间和剂量依赖性,与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪分析显示中药艾迪能减少G1期的比例,增加G2和S期的比例,并能诱导细胞凋亡.中药艾迪作用人喉癌细胞Hep-2 24h后其环氧化物酶-2的表达量升高,与空白对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 中药艾迪在体外能明显抑制人喉癌细胞Hep-2生长,其机制可能是诱导细胞凋亡.     

洛伐他汀对喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨阿伐他汀对喉鳞状细胞癌（LSCC）细胞系Hep-2细胞增殖和凋亡的影响。方法给予体外培养Hep-2细胞阿伐他汀处理,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,并分析超氧化物生成情况。结果阿伐他汀降低了Hep-2细胞活力,引起了Hep-2细胞凋亡,超氧化物水平升高。结论阿伐他汀对LSCC具有潜在的治疗作用。     

高能X线诱导喉癌Hep-2细胞凋亡及相关基因的表达研究

目的：研究高能X线诱导人喉癌细胞株Hep-2凋亡的作用及其分子机制。方法：采用不同剂量的高能X线作用于Hep-2细胞株，流式细胞仪检测其凋亡率。Western blot和RT-PCR方法检测细胞的BCL-2和BAX蛋白及mRNA转录水平。结果：在一定范围内，随着剂量的增加和时间的延长，细胞凋亡率基本呈增加趋势。Western blot和RT-PCR结果显示辐射后BCL-2表达下调。而BAX无明显改变，BCL-2／BAX的比值明显降低。结论：高能X线诱导的Hep-2细胞凋亡具有时间剂量依赖性。BCL-2和BAX参与了辐射诱导的Hep-2细胞凋亡，BCL-2抑制细胞凋亡可能是Hep-2细胞恶性增殖的主要原因之一。