我国药品微生物检验的特点与质控

1药品微生物检验特点概述1.1药品微生物质控过程药品微生物检验主要有6个方面,包括药品因素、环境影响、培养观察、抽样检查和破坏试验,其中药品因素属于方法验证,而环境     

金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）多克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）多克隆抗体并用金黄色葡萄球菌野生株对其进行验证,为进一步研究SEA在金黄色葡萄球菌致病机制中的作用提供基础。方法：PCR方法扩增肠毒素A基因（sea）,构建原核表达载体p ET 30 a/sea,经PCR方法和测序鉴定后,阳性表达载体转化大肠杆菌表达宿主菌DH 5α,表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹法（Western Bloting,WB）分析鉴定。蛋白经纯化后作为免疫原免疫新西兰大白兔,得到抗血清并纯化,采用sea基因阳性的金黄色葡萄球菌野生株S8和S 23株的菌体蛋白进行鉴定。结果：pET 30 a/sea重组表达载体构建成功,目的蛋白在构建的原核表达系统中可实现高表达,纯化后得到高纯度的SEA蛋白,经临床分离金黄色葡萄球菌S 8和S 23株菌体蛋白验证,证实得到理想的兔抗SEA多克隆抗体。结论：通过基因重组技术,金黄色葡萄球菌SEA蛋白在构建的原核表达系统中得以成功表达,并获得了高纯度的目的蛋白及其多克隆抗体,为进一步研究金黄色葡萄球菌肠毒素A蛋白的生物学活性及抗体的保护作用奠定了基础。     

亚抑菌浓度亚胺培南对MRSA体外增殖及毒力相关基因mRNA表达水平的影响

目的：探讨亚抑菌浓度亚胺培南对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）生物学活性的影响,阐明碳青霉烯类抗生素对MRSA活性的抑制作用及其机制,为临床应用碳青霉烯类抗生素治疗MRSA感染提供依据。方法：选取5株ST239型MRSA临床分离株,采用1/10和1/2最小抑菌浓度（MIC）亚胺培南与其体外共培养1.5、6.0和12.0h,分为对照组（培养液中不加亚胺培南）、1/10MIC组（培养液中添加1/10MIC浓度亚胺培南）和1/2MIC组（培养液中添加1/2MIC浓度亚胺培南）。采用荧光定量PCR方法检测各组MRSA株毒力相关基因纤维黏连蛋白A（fnbA）、葡萄球菌蛋白A（spa）、α溶血素（hla）、白细胞毒素D（lek-D）和E（lek-E）、肠毒素A（sea）mRNA相对表达水平,分光光度法检测各组MRSA株体外增殖活性。结果：与对照组比较,体外共培养6.0和12.0h时,1/2MIC组MRSA株增殖活性明显降低（P<0.01）;培养1.5和6.0h时,6个MRSA毒力相关基因mRNA相对表达水平均明显低于对照组（P<0.01）;培养12h时,1/10MIC和1/2MIC浓度组MRSA株各毒力相关基因mRNA表达未能检测到。结论：亚抑菌浓度亚胺培南对ST239型MRSA多种毒力相关基因mRNA表达具有明显抑制效应,高浓度亚胺培南可抑制MRSA的体外增殖,提示亚胺培南对于重症MRSA感染患者具有潜在的应用价值。     

OmpW在鲍曼不动杆菌中的表达及致病机制

目的 分析外膜蛋白W (OmpW)在鲍曼不动杆菌临床株中的分布及其可能致病机制。方法：选取碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌31株(耐药组)及敏感株30株(敏感组)作为研究对象,Western Blot方法检测OmpW蛋白的表达特征差异;OmpW重组蛋白与Hep-2人喉癌上皮细胞株体外共孵育,检测其对Hep-2细胞增殖能力的影响;采用JC-1染色技术观察OmpW蛋白对Hep-2细胞的促凋亡作用,并采用western blot方法检测细胞凋亡相关通路蛋白表达情况。结果： OmpW蛋白在耐药株中的表达率(100%)明显高于敏感株(63.33%)(χ2^=12.359,P=0.000<0.01)。JC-1染料染色法检测中,OmpW蛋白与Hep-2细胞作用后,其凋亡细胞明显增多。40μg/mL和80μg/mL OmpW蛋白作用于细胞,其增殖能力明显减弱(均P＜0.05);孵育12小时及24小时后,80μg/mL ompW组细胞增殖能力明显减弱(均P＜0.05);在OmpW蛋白作用下, Hep-2细胞bcl-2蛋白相对表达量明显降低(P＜0.05),但无明显时间及浓度依赖特征;而DR4、Fas Ligand、Anti-IGF 1及Caspase 8蛋白表达量无明显变化。结论：耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌临床株高表达OmpW蛋白。OmpW重组蛋白可显著抑制Hep-2细胞增殖并呈浓度依赖性,并促进Hep-2细胞凋亡,促凋亡机制可能主要通过抑制Bcl-2家族蛋白相关信号通路来实现。     

滋肾育胎丸对抗心磷脂抗体阳性复发性流产患者可溶性人白细胞抗原G、抗子宫内膜抗体水平的影响

目的:探讨滋肾育胎丸对抗心磷脂抗体(ACA)阳性复发性流产患者可溶性人白细胞抗原G(sHLA-G)、抗子宫内膜抗体(EmAb)水平的影响.方法:选取2017年8月至2020年10月河北省人民医院收治的ACA阳性复发性流产患者102例,按照分层抽样法分为对照组和滋肾育胎丸组,每组51例.对照组患者采用常规治疗,滋肾育胎丸...     

我国药品微生物检验的发展与挑战

<正>1充分重视药品微生物检验的重要性安全性是使用药品的一个非常重要的指标,药品微生物检验最早要求无菌检查。早在20世纪初就必须要进行检查。据报道,1970年7月至1971年3月,美国25家医院由于输注了细菌污染的葡萄糖致使378个患者得败血症,40人死亡。我国也在1991至1993年因人血白蛋白污     

金黄色葡萄球菌fur基因缺失株构建及其生物学特性研究

目的构建金黄色葡萄球菌Newman株fur基因缺失株,对其体外增殖、细胞侵袭及溶血活性特征变化进行研究,为通过封闭Fur蛋白表达治疗金黄色葡萄球菌感染提供新的实验依据。方法采用Gateway同源重组技术构建金黄色葡萄球菌Newman株fur基因缺失株,采用分光光度法检测其体外增殖活性变化;采用万古霉素保护试验检测其对A 549肺腺癌细胞株侵袭力的变化;观察其在血琼脂培养基上的溶血活性变化;采用实时荧光定量PCR检测fur缺失株α溶血素(hla)基因mRNA表达水平变化。结果成功构建金黄色葡萄球菌Newman株fur基因缺失株并通过PCR方法和测序方法验证。与Newman野生株相比,同一时间点侵入A 549肺腺癌细胞株内fur缺失株菌量(2 950CFUs/ml)显著少于野生株(20 100CFUs/ml,P0.01),缺失株体外增殖活性及溶血活性显著减弱,且hla基因mRNA相对表达量(0.067)显著低于野生株(0.270)(P0.05)。结论金黄色葡萄球菌fur缺失株在富铁条件下的增殖活性、细胞侵袭力及溶血活性均显著降低,对环境铁浓度感应及利用能力明显降低,Fur蛋白可能作为抗金黄色葡萄球菌感染治疗的新靶点。     

不同基因型金黄色葡萄球菌临床分离株体外侵袭力差异性研究

目的：分析不同基因型金黄色葡萄球菌临床分离株体外侵袭能力的差异,为进一步阐明金黄色葡萄球菌致病机制及防控医院感染提供新的实验依据。方法采用脉冲场凝胶电泳（ PFGE ）和多位点序列分型法（ MLST）对43株金黄色葡萄球菌临床分离株进行分子分型,采用抗菌药物保护试验和流式细胞内化试验检测不同基因型金黄色葡萄球菌体外侵袭能力。结果按照80％相似度为计算依据,43株金黄色葡萄球菌共分12个PFGE基因型,2个优势型（Ⅰ和Ⅱ型）分别占25．6％（11／43）和34．9％（15／43）,其它型别为少见型,占39．5％（17／43）。体外药物敏感性试验结果显示,Ⅰ型和少见型主要为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（ MSSA ）（85．7％,24／28）,而Ⅱ型均为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ MRSA）（100．0％,15／15）。 MLST结果显示,Ⅱ型菌株为ST-239型,Ⅰ型及其它型菌株ST型不定。抗菌药物保护试验结果显示,侵袭能力最强的3株菌的侵入率分别为3．27％、3．15％和3．09％,侵袭力最弱的3株菌的侵入率分别为0．22％、0．24％和1．16％。Ⅰ型菌株和Ⅱ型菌株比较差异不明显（P＞0．05）;Ⅰ型和Ⅱ型菌株体外侵袭力均显著高于少见型（P均＜0．01）。结论不同基因型金黄色葡萄球菌体外侵袭力差异显著,优势克隆株特别是ST-239型MRSA菌株显示出较强的体外侵袭能力。金黄色葡萄球菌分离率较高的科室应对该克隆株给予更多关注,加强感染防控措施,降低其医院内传播及感染率。     

金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA) 多克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备金黄色葡萄球菌肠毒素A( SEA) 多克隆抗体并用金黄色葡萄球菌野生株对其进行验证,
为进一步研究SEA 在金黄色葡萄球菌致病机制中的作用提供基础。方法: PCＲ 方法扩增肠毒素A 基因( sea) ,
构建原核表达载体pET 30 a /sea,经PCＲ 方法和测序鉴定后,阳性表达载体转化大肠杆菌表达宿主菌DH 5α,表
达产物用十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS－PAGE) 和蛋白质印迹法( Western Bloting,WB) 分析鉴定。
蛋白经纯化后作为免疫原免疫新西兰大白兔,得到抗血清并纯化,采用sea 基因阳性的金黄色葡萄球菌野生株S
8 和S 23 株的菌体蛋白进行鉴定。结果: pET 30 a /sea 重组表达载体构建成功,目的蛋白在构建的原核表达系统
中可实现高表达,纯化后得到高纯度的SEA 蛋白,经临床分离金黄色葡萄球菌S 8 和S 23 株菌体蛋白验证,证实
得到理想的兔抗SEA 多克隆抗体。结论:通过基因重组技术,金黄色葡萄球菌SEA 蛋白在构建的原核表达系统
中得以成功表达,并获得了高纯度的目的蛋白及其多克隆抗体,为进一步研究金黄色葡萄球菌肠毒素A 蛋白的
生物学活性及抗体的保护作用奠定了基础。     

血清HE4和IL-6对非小细胞肺癌的诊断价值研究

目的 探讨人附睾蛋白4(HE4)和白细胞介素-6(IL-6)对非小细胞肺癌(NSCLC)的诊断价值。方法 选取2020年1月—2022年12月在河北省人民医院住院治疗的50例NSCLC患者作为肺癌组,同期50例健康体检者作为对照组进行回顾性分析,采用电化学发光法检测血清HE4、IL-6水平,分析比较二组患者基本特征、HE4和IL-6水平差异,运用Logistic回归分析筛选出诊断NSCLC有效指标,构建诊断NSCLC的预测模型。并通过ROC曲线分析血清HE4、IL-6对NSCLC的诊断价值。结果 肺癌组血清HE4水平[(198.12±66.42)pmol/L]高于对照组[(79.56±15.77)pmol/L],肺癌组血清IL-6水平[(16.45±8.96)pg/ml]高于对照组[(4.96±1.91)pg/ml],差异有统计学意义(P<0.05),二组在年龄、性别分布上差异均无统计学意义(P>0.05);分别对不同临床特征的血清HE4和IL-6表达水平进行比较得出结论,NSCLC患者的血清HE4和IL-6表达水平与年龄、性别、病理类型比较差异均无统计学意义(P>0...