胚胎脊髓移植兼用神经营养因子对大鼠损伤脊髓神经元的影响

目的 探讨胚胎脊髓移植并神经营养因子防止成年大鼠脊髓轴突损伤后引起神经元萎缩的作用。方法 采用大鼠腰脊髓半切洞损伤模型,将实验动物分为６组：Ａ组：单纯脊髓损伤组,Ｂ组;胚胎脊髓移植组;Ｃ组：损伤＋移植＋ＮＧＦ组;Ｄ组：损伤＋移植＋ＣＮＴＦ组;Ｅ组：损伤＋移植＋ＮＭＴ－３组;Ｆ组：损伤＋移植＋ＢＤＮＭＦ组。手术后应用行为学和电生理检查观察大鼠后肢功能恢复情况,应用Ｎｉｓｓｌ染色方法观察脊髓神经元的大     

脑缺血再灌流后大鼠海马脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子mRNA的表达

目的：观察大鼠脑缺血再灌流损伤后脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）和睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）ｍＲＮＡ在海马中的分布及其表达。方法：大鼠颈总动脉夹闭造成脑缺血３０ｍｉｎ，于６，１２，２４，７２ｈ进行点杂交和原位杂交，７２ｈ时进行神经元尼氏小体染色。结果：脑缺血后，海马ＣＡ１区神经元大量死亡，ＢＤＮＦｍＲＮＡ表达于６ｈ开始增加，７２ｈ恢复正常。２４ｈ时齿状回ＢＤＮＦｍＲＮＡ表达高于ＣＡ１区。ＣＮＴＦｍＲＮＡ表达于１２ｈ开始持续增加。结论：脑缺血再灌流损伤后，海马ＢＤＮＦｍＲ－ＮＡ和ＣＮＴＦｍＲＮＡ的表达均增加。ＢＤＮＦ可能有利于齿状回神经元耐受缺血，ＣＮＴＦ可能在局部发挥神经营养作用     

胚胎脊髓移植联合应用神经生长因子,尼莫地平对成鼠损伤脊

目的：研究胚胎脊髓移植联合应用神经生长因子（ＮＧＦ）及尼莫地平（ＮＤ）对脊髓损伤的修复作用。方法：７２只大鼠半切洞脊髓损伤后,随机分为单纯胚胎脊髓移植组,移植＋ＮＧＦ组,移植＋ＮＧＦ＋ＮＤ组,并观察了脊髓血流量（ＳＣＢＦ）,运动诱发电位（ＭＥＰ）及行为学变化。结果：ＮＧＦ与ＮＤ可明显增加损伤移植部位的血流量,缩短ＭＥＰ潜伏期,且显著提高后肢运动功能的Ｔａｒｌｏｖ评分。结论：胚胎脊髓移植与ＮＧＦ、Ｎ     

脑缺血再灌流后大鼠海马脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子 mRNA的表达

目的：观察大鼠脑缺血再灌流损伤后脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）和睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）ｍＲＮＡ在海马中的分布及其表达。方法：大鼠颈总动脉夹闭造成脑缺血３０ｍｉｎ，于６，１２，２４，７２ｈ进行点杂交和原位杂交，７２ｈ时进行神经元尼氏小体染色。结果：脑缺血后，海马ＣＡＩ区神经元大量死亡，ＢＤＮＦｍＲＮＡ表达于６ｈ开始增加，７２ｈ恢复正常。２４ｈ时齿状回ＢＤＮＦｍＲＮＡ和ＣＮＴＦｍＲＮＡ的表达均增     

基因修饰细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的电生理评价

目的：采用神经电生理检查方法,观察逆转录病毒载体介导脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）基因修饰成肌细胞对损伤脊髓的治疗作用。方法：３０只ＳＤ大鼠在Ｔ９水平制成脊髓横断损伤模型,并随机分为基因细胞组（Ａ组）、成肌细胞组（Ｂ组）及损伤对照组（Ｃ组）,每组１０只大鼠。术后３个月,采用皮质体感诱发电位（ＣＳＥＰ）和运动诱发电位（ＭＥＰ）等电生理检测技术,观察轴突是否有再生及其神经功能恢复程度。结果：（１）Ａ组     

脑源性神经营养因子mRNA在胚胎脊髓修复成鼠脊髓损伤过程中的…

观察脑源性神经营养因子在胎脊髓修复成鼠损伤脊髓过程中的变化。方法将妊娠１４天胚胎脊髓植入急性损伤的成体脊髓后１，３，５，７，１０，１５和３０天。用原位和斑点分子杂交技术对胚胎脊髓和正常脊髓内ＢＤＮＦｍＲＮＡ的表达变化作了定性和定量观察。结果在正常脊髓内，ＢＤＮＦｍＲＮＡ以前角运动神经元和少量胶质细胞分布为主：脊髓损伤后，杂交产物扩大到中小型神经元，同时更多的胶质细胞参与了反应；胚胎脊髓移植后，除移     

脑源性神经营养因子mRNA在胚胎脊髓修复成鼠脊髓损伤过程中的变化

观察脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）在胚胎脊髓修复成鼠损伤脊髓过程中的变化。方法将妊娠１４天胚胎脊髓植入急性损伤的成体脊髓后１、３、５、７、１０、１５和３０天，用原位和斑点分子杂交技术对胚胎脊髓和正常脊髓内ＢＤＮＦｍＲＮＡ的表达变化作了定性和定量观察。结果在正常脊髓内，ＢＤＮＦｍＲＮＡ以前角运动神经元和少量胶质细胞分布为主；脊髓损伤后，杂交产物扩大到中小型神经元，同时更多的胶质细胞参与了反应；胚胎脊髓移植后，除移植物本身继续维持表达外，正常脊髓阳性反应神经元和胶质细胞数量进一步增加。损伤组原位和斑点分子杂交的反应强度明显高于正常组，而移植组的分子杂交反应又在很多时相点上显著高于损伤组。结论移植的胚胎脊髓除为自身和宿主脊髓提供神经营养外，也诱发了正常脊髓在发生过程中曾经拥有的合成机制，以增强神经营养因子表达的方式为自身的再生提供营养，同时也为移植物的发育分化提供合适的营养环境。     

慢性砷中毒大鼠脊髓神经元蛋白免疫组织化学研究

目的：通过对慢性砷中毒大鼠脊髓神经丝蛋白（ＮＦ）的免疫组化观察，研究其脊髓神经元的病理学改变。方法：采用实验组和对照组，分别于大鼠中毒３５ｄ、３个月、６个月时取材，进行免疫组化研究。结果：中毒３５ｄ脊髓内ＮＦ免疫反应基本同对照组；中毒３个月脊髓内ＮＦ阳性反应强度明显低于对照组；中毒６个月ＮＦ阳性反应产物明显减少消失。结论：实验表明砷中毒可影响ＮＦ的合成，且其毒性具有蓄积性，证实砷可直接损伤脊髓神经     

胚胎脊髓移植对脊髓内源性NGF影响的实验观察

目的：观察胚胎脊髓移植后，脊髓内源性神经生长因子（ＮＧＦ）ｍＲＮＡ的表达及ＮＧＦ多肽的合成。方法：采用分子生物学和免疫组化方法。结果：胚胎脊髓移植可以促进和在一定时间内增加损伤脊髓内ＮＧＦ ｍＲＮＡ的表达和ＮＧＦ多肽的合成；胚胎脊髓植入后早期能在宿主脊髓内表达和合成ＮＧＦ；损伤和移植条件下，ＮＧＦｍＲＮＡ的表达与合成主要在脊髓前角神经元。结论：内源性ＮＧＦ在移植后的损伤脊髓中可能对再生轴突起重要地     

脊髓腹角神经元共存NGF,BDNF,NT3,NT4和GDNF

用ＮＧＦ，ＢＤＮＦ，ＮＴ３，ＮＴ４和ＧＤＮＦ抗血清，以免疫组织化学方法观察ＮＧＦ，ＢＤＮＦ，ＮＴ３，ＮＴ４及ＧＤＮＦ在成年猫Ｌ５脊髓腹角神经元是否共存。结果：Ｌ５脊髓腹角神经元均含有上述被检测的５种神经营养因子的免疫反应物，表明腹角神经元共存ＮＧＦ，ＢＤＮＦ，ＮＴ３，ＮＴ４及ＧＤＮＦ，提示这５种神经营养因子可能与脊髓腹角神经元的生理过程有关。     

Protective effect of adenovirus-mediated BDNF gene expression on spinal axon following in rats after spinal cord injury

The routine treatments of spinal cord injury are palliative in Practice at Present. Their goal is only to preventthe secondal injeq and the complications, and then thepatients to adapt new life style under palalysis condition.The sprouting and the Plasticity of the neims in foe centlal nervous system (CNS) Of malnlnals has been ProVedll]. It is wen known that the neurntrOPhins facilitatethe renovation and regenerahon of the ne~ns in CNS after injuries. HoweVer the c~ive effect Of the ne…     

GDNF基因体内转染对大鼠脊髓损伤后轴突再生的影响

目的：研究脂质体介导的胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因在大 鼠损伤脊髓内的表达,观察外源性GDNF对损伤脊髓轴突再生的作用。方法：利用Nystrom法制备大鼠胸髓压迫损伤模型。以直接注射法将脂质体DC－Chol和重组质粒pEGFP－GDNF cDNA混合后注入大鼠损伤脊髓。采用RT－PCR技术和荧光显微镜检测GDNF基因转染后的体内表达,并通过辣根过氧化酶（HRP）顺行追踪技术和神经微丝（NF）、胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）免疫组化活性的变化来评价GDNF基因转染对轴突再生的影响。结果：经脂质体DC－Chol介导GDNF基因可有效地转染脊髓组织 中并得到表达。GDNF转基因4周后可明显增加NF阳性轴突数目,促进皮质脊髓束再生并通过损伤区。结论：外源性GDNF在损伤区局部高表达具有神经损伤保护作用,提示阳离子脂质体介导GDNF体内转基因治疗创伤性脊髓损伤的方法是可行的。     

脊髓挤压伤后BDNF mRNA表达的RT-PCR研究

目的探讨实验性脊髓挤压伤后内源性神经营养素BDNF mRNA在不同时段的表达变化.方法采用成年SD大鼠简易脊髓挤压伤模型.一步法抽提脊髓组织总RNA,分光光度计测OD260,OD280值.β-actin作内参照,RT-PCR技术检测内源性神经营养素BDNF mRNA在不同时段的表达.结果(1)用RT-PCR技术检测到BDNF mRNA在正常大鼠脊髓表达.(2)脊髓挤压伤后BDNF mRNA在不同时段表达变化趋势不一.术后24h组、5d组、21d组BDNF mRNA的表达水平较正常组显著增高(P<0.05),而术后14d组虽高于正常组水平,但与正常组及损伤后除24h组外各组相比均无显著性差异(P>0.05).此外,除伤后24h组与14d组,伤后各组间比较亦均无显著性差异,表明脊髓挤压伤后24h,5d BDNF-mRNA表达明显增加,而14d略有下降,21d又有回升.结论(1)在正常大鼠脊髓有BDNF mRNA表达,提示BDNF可能与脊髓的生理功能有关.(2)cSCI后24h,5d,21d BDNF mRNA表达增高,可能有利于BDNF的合成,进而BDNF可能参与神经损伤修复.(3)BDNF mRNA于术后24h,5d明显升高,14d又回复近正常水平,而21d又明显回升,表明BDNF的表达在挤压伤脊髓内经历了双向变化.     

丙戊酸对大鼠急性脊髓损伤后BDNF及NT-3表达的影响

目的探讨丙戊酸（VPA）对脊髓损伤后脑源性神经营养因子（BDNF）和神经营养素3（NT-3）表达的影响。方法将60只雄性SD大鼠随机分为三组：对照组（C组）、损伤组（SCI组）和丙戊酸保护组（VPA组）。采用改良Allen法制作脊髓损伤动物模型。VPA组术后即刻及其后每12 h皮下注射VPA 300 mg/kg;C组和SCI组在相应时间点注射等体积的生理盐水。于伤后24、48、72 h和1周取材。利用BBB评分标准进行不同时段的行为学评分。通过免疫组化法观察各组大鼠脊髓损伤后BDNF及NT-3表达的变化。结果 BBB评分显示,C组运动功能未受影响,VPA组的BBB评分均高于SCI组,在伤后48、72 h和1周两者比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。与C组比较,SCI组和VPA组的BDNF及NT-3表达在各时间点均明显增加（P〈0.05）,但VPA组各时间点的BDNF及NT-3表达均明显高于SCI组（P〈0.05）。结论 VPA可促进大鼠脊髓损伤后神经功能恢复,其机制可能与促进BDNF及NT-3表达有关。     

甲基强的松龙对大鼠损伤脊髓BDNF、NMDA受体表达及神经行为学的影响

目的研究甲基强的松龙(MP)对脊髓损伤大鼠神经行为学、脑源性神经营养因子(BDNF)和N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体表达的影响。方法建立脊髓损伤(SCI)大鼠模型,将大鼠随机分为假手术组、SCI组和MP治疗组,每组16只。MP治疗组在SCI术后8h内肌注50mg/kg MP,此后肌注量每天减少10mg/kg,1次/d,共5d。各组取8只大鼠在术后1d、7d、28d行后肢运动功能BBB评分,并于术后28d用免疫组织化学染色观察各组BDNF在脊髓的分布、阳性细胞定位及数量变化;术后13d用[3 H]MK-801放射性配基测定各组另8只大鼠脊髓中NMDA受体亲和力(Kd)和最大结合容量(Bmax)。结果 SCI后MP治疗组中BDNF阳性细胞数较SCI组增加(P<0.05),但亚细胞定位仍分布在细胞浆,且BBB评分亦较SCI组高;NMDA受体Kd高于SCI组,Bmax较SCI组低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MP能改善脊髓损伤大鼠后肢功能,增加BDNF含量和降低NMDA受体表达。     

BMSCs并BDNF移植治疗大鼠陈旧性脊髓损伤效果

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)并脑源性神经营养因子(BDNF)移植治疗大鼠陈旧性脊髓损伤的效果。方法对48只Wistar大鼠采用改良的ALLEN撞击法建立脊髓损伤模型,将其随机分为4组,4周后4组分别注射BMSCs+BDNF、BMSCs、BDNF及DMEM干预。分别于移植后1、2、4周采用BBB评分评估大鼠后肢运动情况,并于移植后4周采用免疫组化法检测BMSCs在脊髓损伤部位的分布,及生长相关蛋白43(GAP-43)的表达。结果移植后4周,BMSCs+BDNF组及BMSCs组的BMSCs在脊髓损伤部位均得以存活。BMSCs+BDNF组与BMSCs组及BDNF组比较,脊髓空洞较少并且GAP-43阳性表达面积较高(F=35.57,q=4.97～25.84,P<0.05)。BMSCs+BDNF组BBB评分与其他组比较,差异有显著性(F=27.51,q=3.89～11.57,P<0.05)。结论 BMSCs+BDNF联合移植对于大鼠陈旧性脊髓损伤有较好的修复作用。     

雌激素对脊髓继发性损伤保护作用的研究

目的观察雌激素对脊髓继发性损伤的保护作用。方法采用Allen造模法建立脊髓损伤(SCI)模型。将成年雄性SD大鼠126只随机分为假手术组、SCI组和雌激素组,每组42只。采用免疫组织化学法和图像定量分析法观察SCI后凋亡调控因子Bax蛋白的表达,比色法检测各组丙二醛(MDA)的含量和超氧化物岐化酶(SOD)活性的变化,术后4周内经Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分观察脊髓功能恢复情况。结果假手术组有少量散在的Bax蛋白表达,SCI组Bax蛋白表达的阳性细胞较假手术组明显增多(P<0.01),雌激素组较SCI组阳性细胞数明显减少(P<0.05);与SCI组比较,雌激素组MDA含量明显降低而SOD活性明显增高(P<0.05);手术后1周雌激素组较SCI组BBB评分明显增高(P<0.05)。结论雌激素可通过下调促细胞凋亡因子Bax蛋白表达和减少活性氧产生,从而可能在脊髓继发性损伤中发挥保护作用。     

MCI-186对脊髓损伤大鼠炎症因子释放及神经营养因子表达的影响

目的：研究MCI-186对脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）大鼠炎症因子的释放及神经营养因子表达的影响。方法：建立大鼠脊髓半切SCI模型,随机分成两组,分别予MCI-186或磷酸盐缓冲液（PBS）治疗,在术后1、3、7 d和14 d动态测定受损伤脊髓组织丙二醛（MDA）超氧化物歧化酶（SOD）的含量以及脑原性神经生长因子（BDNF）mRNA的表达,ELISA法测定血清及受损伤脊髓局部组织白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）;神经营养因子-3（NT-3）、BDNF蛋白表达。并同时与假手术组对比。结果：与模型组比较,MCI-186能显著降低SCI大鼠血清炎性因子IL-6、IL-8的浓度,促进脊髓组织NT-3、BDNF表达。结论：MCI-186可抑制炎症因子释放,增加内源性神经营养因子表达。     

Expression of PirB in normal and injured spinal cord of rats

The expression of paired immunoglobulin-like receptor B (PirB) in normal and injured spinal cord of rats was investigated. The SD rat hemi-sectioned spinal cord injury (SCI) model was established. Before and 1, 3, 7, 10 days after SCI, the spinal cord tissues were harvested, and Western blot and immunohistochemistry were used to examine the expression and location of PirB. The results showed that the expression level of PirB in the normal spinal cord of SD rats was low. At the first day after SCI, the expre...     

CNTF对大鼠脊髓损伤后逆行性红核神经元损伤的保护作用

目的：研究睫状神经营养因子（CNTF）对脊髓损伤后逆行性红核神经元损伤的保护作用和促进肢体功能恢复的作用。方法：将大鼠分为假手术组，生理盐水（NS）组和CNTF组，用Allen改良法撞击致SD大鼠脊髓T10损伤，经蛛网膜下腔留置导管注射NS和CNTF；术后每周进行一次BBB评分和斜板试验的行为学评分；6周时采用辣根过氧化物酶（HRP）逆行示踪技术标记红核神经元，取红部位脑组织作冰冻切片，应用四甲基联苯胺（TMB）呈色反应显示脊髓损伤后红核神经元存活率，并进行图像数据的分析。结果：（1）CNTF组行为功能高于NS组；（2）CNTF组HRP标记红核神经元数目多于对照组。结论：CNTF可减轻脊髓损伤后的逆行性损伤，而对上行运行神经元发挥保护作用，从而对肢体功能的恢复起到促进作用。