聚乙二醇修饰胰高血糖素样肽1类似物反应条件的响应面法优化#br#

目的 用响应面法对马来酰亚胺活化相对分子质量40 000的聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）（MAL-PEG_40K）修饰胰高血糖素样肽1类似物（glucagon-like peptide-1 analog,GLP-1a）的反应条件进行优化。方法 对GLP-1a浓度、GLP-1a/MAL-PEG40K摩尔比、反应液pH值、反应温度、反应时长进行单因素试验。以前3个条件为自变量, PEG修饰率为响应值,根据中心组合试验设计原理,研究各自变量及其交互作用对PEG修饰率的影响。通过高效液相色谱法分析PEG修饰率,依据回归分析确定各反应条件的最优值。 结果 GLP-1a与MAL-PEG_40K的最佳反应条件为：GLP-1a浓度2.5 mg/ml,GLP-1a/MAL-PEG_40K摩尔比1∶1.25,反应液pH 8,反应温度4 ℃,反应时长60 min。该优化条件下,GLP-1a的PEG修饰率可达91.0%。结论 响应面法获得了GLP-1a与MAL-PEG_40K的最佳反应条件。     

诱导性神经细胞研究进展

细胞的谱系转换是指一种成体细胞跨越细胞谱系,转化为另一种类型的体细胞或者前体细胞,包括直接转分化和间接谱系转换两种方式。通过谱系转换,可以将成纤维细胞、星形胶质细胞、肝细胞等多种成体细胞重编程为具有完整形态和功能的神经元、神经元前体细胞、少突胶质前体细胞或神经干细胞。诱导性神经细胞对于神经系统疾病的细胞移植治疗具有重要的应用价值,另外疾病和患者特异性神经细胞为人类神经疾病的发病机理研究和药物筛选提供了崭新的思路。本文就近几年由成体细胞经过谱系转换得到诱导性神经细胞的重要研究成果做一归纳、整理和比较,并对其前景进行展望。     

NgR特异性siRNA筛选及其表达载体构建

目的:将siRNA技术应用于NgR,筛选出高效的NgR(Nogo受体)特异性siRNA,并构建其表达载体。方法:2005-03/2006-03,在杭州新瑞佳生物制药有限公司、解放军第二军医大学神经生物教研室设计筛选NgR特异性siRNA,按照E1bashir等设计原则和siRNA的要求,设计、合成4对siRNA,转染体外培养大鼠原代皮层和海马细胞,筛选出基因高沉默效率的NgR特异性siRNA;2004-03/2005-03上海生工生物工程公司将获得的高沉默效率siRNA设计成带有BamHI、HindⅢ酶切粘性末端、终止识别序列和LOOP环的发卡式RNA,并将其克隆入载体pRNAT-U6.1/Neo,构建NgR特异性siRNA表达载体,然后进行酶切鉴定及基因测序。结果:①4对NgR特异siRNA中,siRNA199下调NgRmRNA的表达水平效率最高,转染72h效果最显著(96.04%)。NgR特异性siRNA199序列为:5’-CCGAAUCUCUUACGUGCCATT-3’。②将该序列的发卡式RNA成功克隆入载体pRNAT-U6.1/Neo,构建成NgR特异性siR-NA199表达载体,酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符,目的基因序列准确无误。结论:NgR特异性siRNA199及其表达载体构建成功,为进一步合成病毒载体及观察NgR特异性RNA干扰抑制大鼠NgRmRNA表达对脊髓损伤的修复作用奠定了基础。     

神经生物学课堂教学的几点体会

大脑是人类终极探索的目标之一,美英等西方国家在21世纪第一个十年纷纷投入巨资启动脑研究计划,我国也将很快启动国家级脑研究工程。作为生命科学领域中最重要和最为活跃的学科之一,神经生物学正是一门以神经系统为研究对象的内容复杂、研究层次多,且同多门学科交叉的综合学科。虽相比传统学科起步晚,但发展迅速,已成为国内多家大学医学和生物学专业本科生的必修课。我科室作为国内成立较早的神经生物学教研室,始终重视     

"课程思政"视域下医学寄生虫学教学改革初探

随着寄生虫病防控成效的凸显以及寄生虫病疾病谱的变化,致使医学寄生虫学的学科地位及其现实意义越来越被忽略.近年来,由于医学寄生虫学教学工作受重视程度的不断降低,医学寄生虫学课程也逐渐呈现出授课内容陈旧、教学模式单一和方法传统落后的特点.而"课程思政"是实现高校"立德树人"的根本举措,其能将思想政治教育寓于、融入专业课,从而达到丰富课堂教学内容,提升教学模式和完善教学方法的目的.文章深入剖析医学寄生虫学教学现状,并深入探讨在"课程思政"视域下,如何有效发掘"思政元素",并将其融入到医学寄生虫学的课程教学当中,从而有效应对医学寄生虫学教学现状,打造医学寄生虫学课程教学"金课",实现医学寄生虫学"专业知识传授""价值引领"和"能力培养"的有机融合.     

胶质细胞源性神经营养因子对脊髓前角运动神经元的保护作用

目的证实胶质源性神经营养因子(glial cellline-derived neurotrophic factor,GDNF)对脊髓前角运动神经元有保护作用.方法切断SD大鼠一侧坐骨神经建立脊髓前角运动神经元损伤模型,借助单盲端硅胶管系统在损伤神经局部给予GDNF,术后不同时间分别取L5脊髓切片,利用酶组织化学染色方法显示胆碱酯酶和酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)活性并进行图像分析.结果坐骨神经切断后第4,9,16及21 d,对照组和GDNF组胆碱酯酶活性分别为21.53±1.54和23.67±1.08(P＜0.05),19.82±1.35和22.87±1.04(P＜0.01),22.55±1.20和25.25±1.13(P＜0.01),25.52±1.43和28.92±1.37(P＜0.01);对照组和GDNF组ACP活性(平均灰度)分别为37.49±1.39和35.40±1.18(P＜0.05),40.94±1.38和38.43±1.31(P＜0.05),22.55±1.20和25.25±1.13(P＜0.05),37.15±1.52和34.68±1.43(P＜0.05)结论GDNF对损伤的脊髓前角运动神经元有保护作用.     

胶质细胞源性神经营养因子对脊髓前角运动神经元的保护作用

目的：证实胶质源性神经营养因子(glial cell line—derived neurotrophic factor，GDNF)对脊髓前角运动神经元有保护作用。方法：切断SD大鼠一侧坐骨神经建立脊髓前角运动神经元损伤模型，借助单盲端硅胶管系统在损伤神经局部给予GDNF，术后不同时间分别取L5脊髓切片，利用酶组织化学染色方法显示胆碱酯酶和酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)活性并进行图像分析。结果：坐骨神经切断后第4，9，16及21d，对照组和GDNF组胆碱酯酶活性分别为21．53&;#177;1．54和23．67&;#177;1．08(P&;lt;0．05)，19．82&;#177;1．35和22．87&;#177;1．04(P&;lt;0．01)．22．55&;#177;1．20和25．25&;#177;1．13(P&;lt;0．01)，25．52&;#177;1．43和28．92&;#177;1．37(P&;lt;0．01)：对照组和GDNF组ACP活性(平均灰度)分别为37．49&;#177;1．39和35．40&;#177;1．18(P&;lt;0．05)，40．94&;#177;1．38和38．43&;#177;1．31(P&;lt;0．05)，22．55&;#177;1．20和25．25&;#177;1．13(P&;lt;0．05)．37．15&;#177;1．52和34．68&;#177;1．43(P&;lt;0．05)结论：GDNF对损伤的脊髓前角运动神经元有保护作用。     

周围神经侧侧缝合后再生能力、质量及其机制

目的 探讨周围神经侧侧缝合后神经能否再生、再生的质量以及再生神经的来源. 方法 将 20只实验兔随机数字表法分为两组,每组 10只.左侧后肢胫神经、腓总神经为实验神经,切断腓总神经 A组腓总神经断端以远 1.5 cm处将胫神经、腓总神经相邻面的神经束、外膜切开,相对缝合束、外膜; B将腓总神经远断端与胫神经相邻面行端侧外膜缝合.术后 12周腓总神经远端注入辣根过氧化物酶逆行示踪,行形态学和组织学检测. 结果 术后 12周两组神经缝合后神经均再生,再生质量无显著差异. 结论 周围神经侧侧缝合后神经能够再生,再生侧支来源于胫神经,再生质量与神经端侧缝合相似.     

脊髓损伤后运动功能恢复过程中酪氨酸硝基化蛋白表达的变化

目的：观察大鼠脊髓损伤后运动功能恢复过程中酪氨酸硝基化蛋白的表达变化情况。 方法：实验于2004—07／2005—09在解放军第二军医大学神经生物实验室完成。选择SD雄性大鼠44只，采用随机数字表法分成3组：正常对照组8只，假手术组12只，脊髓损伤组24只。改良Allen法致大鼠脊髓中等程度损伤。①进行改良Tarlov评分，分为0～6级，级别越高下肢运动功能越佳。②进行改良Rivlin斜板实验，将大鼠身体轴线与斜板纵轴垂直放置，斜板每次升高5&;#176;，以大鼠能够停留5s的最大角度为其功能值。③免疫荧光染色：术后分别于1，3，7，14d取假手术组（每次2只）和脊髓损伤组（每次5只）大鼠损伤区脊髓进行免疫荧光染色测定酪氨酸硝基化蛋白的表达。④Westernblot印迹：假手术组和脊髓损伤1d组分别取4只大鼠损伤区脊髓进行Western blot印迹进一步验证。 结果：纳入动物44只，均进入结果分析。①Tarlov评分比较：正常对照组为6级，假手术组伤后1，3，7，14d分别为5．2，5．4，5．8，6．0级，与正常对照组相比差异无显著性（P〉0．05）；脊髓损伤组伤后1，3d降至最低点（1．4，2．0级），第7天时明显上升（3．1级），至伤后14d开始缓慢上升（3．5级），但仍未达到正常水平。②Rivlin斜板实验比较：假手术组伤后1，3，7，14d爬坡角度分别为73．5&;#176;，73．8&;#176;，74．4&;#176;，75．8&;#176;，差异无显著性（P〉0．05），每一时相点与正常对照组比较差异无显著性（P〉0．05）；脊髓损伤组损伤后即刻出现明显障碍，爬坡角度减小（伤后1，3，7，14d分别为35．4&;#176;，36．2&;#176;，38A&;#176;，414&;#176;），与假手术组各时相点比较差异显著（P〈0．01），随时间延续均有不同程度恢复，14d功能恢复较损伤后1d有明显提高（P〈0．01）。③免疫荧光染色：显示硝基化酪氨酸蛋白位于脊髓前角运动神经元，胶质细胞以及脊髓中央管的室管膜细胞中。正常脊髓中无酪氨酸硝基化蛋白阳性细胞。脊髓损伤组中酪氨酸硝基化蛋白呈阳性反应的脊髓细胞随着脊髓损伤后时程的延长而逐渐减少。在脊髓损伤后1，3d时最高，脊髓损伤后7d时明显减少，14d后降至更低，但仍有少量表达。脊髓损伤各组与相应时相点的假手术组相比差异显著（P〈0．05）。④Western blot印迹：假手术组脊髓组织中酪氨酸硝基化蛋白的表达极低，而脊髓损伤1d组酪氨酸硝基化蛋白表达量很高，与免疫荧光染色的结果相一致。 结论：脊髓损伤导致运动功能障碍，可能与脊髓支配运动相关的神经细胞蛋白质的酪氨酸残基发生硝基化有关。     

NgR特异性siRNA筛选及其表达载体构建

目的：将siRNA技术应用于NgR，筛选出高效的NgR（Nogo受体）特异性siRNA，并构建其表达载体。 方法：2005-03／2006-03，在杭州新瑞佳生物制药有限公司、解放军第二军医大学神经生物教研室设计筛选NgR特异性siRNA，按照Elbashir等设计原则和siRNA的要求，设计、合成4对siRNA，转染体外培养大鼠原代皮层和海马细胞，筛选出基因高沉默效率的NgR特异性siRNA；2004—03／2005-03上海生工生物工程公司将获得的高沉默效率siRNA设计成带有BamHⅠ、HindⅢ酶切粘性末端、终止识别序列和LOOP环的发卡式RNA，并将其克隆入载体pRNAT—U6．1／Neo，构建NgR特异性siRNA表达载体，然后进行酶切鉴定及基因测序。 结果：①对NgR特异siRNA中，siRNA199下调NgRmRNA的表达水平效率最高，转染72h效果最显著（96．04％）。NgR特异性siRNA199序列为：5’-CCGAAUCUCUUACGUGCCATT-3’。②将该序列的发卡式RNA成功克隆入载体pRNAT—U6．1／Neo，构建成NgR特异性siRNA199表达载体，酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符，目的基因序列准确无误。 结论：NgR特异性siRNA199及其表达载体构建成功，为进一步合成病毒载体及观察NgR特异性RNA干扰抑制大鼠NgR mRNA表达对脊髓损伤的修复作用奠定了基础。