轴索生长抑制因子DNA疫苗安全有效地防治大鼠缺血性脑中风

目的评估轴索生长抑制因子DNA疫苗(pcDNA3.1(+)-neurite growth inhibitors,pcDNA-NGIs)防治缺血性脑中风的安全性和有效性。方法肌肉注射pcDNA-NGIs后,采用改良实验性自身免疫性脑髓鞘炎记分系统、改良神经病严重程度记分和逃避作业评估神经系统炎症、感觉运动和认知缺陷;采用生物素右旋糖胺追踪皮质红核投射的新生轴索。结果pcDNA-NGIs免疫不会引起神经系统炎症和感觉运动缺陷;阻塞大脑中动脉之前或之后进行pcDNA-NGIs免疫可增加皮质红核投射的新生纤维数(P=0.018)并削弱缺血性脑中风的感觉运动缺陷(P=0.042)。结论pcDNA-NGIs免疫不会使健康大鼠产生神经炎症和神经病症状,但可促进中风大鼠的神经再生和感觉运动功能恢复。     

阿尔茨海默病模型大鼠感觉门控听觉诱发电位P50诱发电位的变化

背景听觉诱发电位P50为反映大脑正常抑制功能的一种直观的脑电生理学指标.目的观察阿尔茨海默病模型大鼠感觉门控听觉诱发电位P50成分的变化.设计随机对照动物实验.单位昆明医学院神经科学研究所.材料选用雌性健康SD大鼠24只,鼠龄4～6月,体质量200～300 g.按随机抽签法将大鼠分为3组实验组、对照组、正常组,每组8只.Morris水迷宫由圆形水池和有机玻璃站台构成,水池分平台、左、右及对侧4个象限.方法实验于2003-09/2005-03在昆明医学院神经科学研究所完成.①实验组切断双侧穹窿海马伞造成阿尔茨海默病模型;对照组切断皮质、胼胝体,但不切断穹窿海马伞;正常组未手术.②在建模后1周对所有大鼠进行包括检测定位航行能力和空间探索能力的水迷宫试验,以确定造模是否成功;每只大鼠每日训练4次,共训练5 d.入池到找到站台的时间(逃避潜伏期)反映定位航行能力;大鼠1 min内在池中搜索站台的游泳轨迹反映空间探索能力.③采用条件(C)-试验(T)双声刺激模式记录听觉P50诱发电位,比较各组大鼠听觉P50诱发电位的差异.计算C-P50波幅、T-P50波幅、T/C比、S2-S1波幅差的绝对值等.计量资料多组间比较用单因素方差分析,组间比较采用t检验.主要观察指标①各组大鼠水迷宫试验,即定位航行能力和空间探索能力检测结果比较.②各组大鼠感觉门控P50诱发电位比较.结果大鼠24只均进入结果分析.①水迷宫试验结果3组大鼠随着训练天数的增加平均潜伏期缩短,前3 d潜伏期均下降,之后趋平稳.实验组潜伏期明显长于正常组和对照组(P＜0.05).正常组和对照组大鼠的游泳轨迹集中在站台象限,站台象限游泳轨迹分别占总游泳轨迹的45.23%和39.7%,与其他象限间游泳轨迹比较,差异明显(P＜0.01).实验组大鼠在站台、右侧、对侧、左侧象限游泳轨迹占总游泳轨迹的28.31%,29.84%,20.47%和21.38%,差异不明显(P＞0.05),游泳轨迹在4个象限中基本呈随机分布.②大鼠感觉门控P50诱发电位检测结果对照组C-P50波幅和S2-S1波幅差的绝对值分别为(21.00±2.85),(15.26±4.07)μV,正常组分别为(17.04±5.32),(10.85±4.24)μV,明显高于实验组[(9.67±3.77),(2.89±2.61)μV,P＜0.01].对照组和正常组T-P50波幅与C-P50波幅比值分别为0.25±0.18和0.39±0.16,明显低于实验组(0.92±0.41,P＜0.01).结论①用双侧海马伞切断方法可成功制备阿尔茨海默病动物模型.②双侧海马伞切断阿尔茨海默病模型大鼠存在感觉门控能力的不足.     

pcDNA3-hNGFb真核表达载体的构建及其表达

目的构建人神经生长因子β（NGF-β）基因真核表达载体并观察其在L929细胞内的表达。方法以RT-PCR从人脑组织总RNA中扩增NGF-βcDNA,将其克隆到真核表达载体pcD-NA3中,经酶切鉴定和序列分析后,以Lipofectamine2000介导转染L929细胞,应用免疫细胞化学和western blot鉴定NGF-β在细胞内的表达。结果RT-PCR产物为750bp的特异片段,重组质粒pcDNA3-hNGFb酶切后产生750bp和5.2kb的片段,DNA测序证实750bp片段的碱基序列与人NGF-βcDNA完全一致。将其转染L929细胞后,免疫细胞化学、western blot结果表明NGF-β及其前体proNGF-β能在真核细胞中正确表达。结论成功构建了重组真核表达质粒pcDNA3-hNGFb,为后续的研究奠定基础。     

中风后抗轴突生长抑制因子DNA免疫促进局部脑缺血后神经再生

目的评价中风后给予轴突生长抑制因子DNA疫苗对局部脑缺血后神经再生的促进作用。方法采用阻断大脑中动脉血流成功诱导左侧局部脑缺血后，经腓肠肌注射轴突生长抑制因子DNA疫苗。立体定向注射生物素葡聚糖胺追踪皮质红核投射的新生轴突。结果中风后给予轴突生长抑制因子DNA疫苗可增加跨过中线终止于对侧红核相应区域的生物素葡聚糖胺标记阳性交叉纤维（P〈0．05）。结论中风后给予轴突生长抑制因子DNA疫苗可促进局部脑缺血后的轴突再生。     

嗅鞘细胞及其表达的NGF和BDNF对神经干细胞增殖的影响

目的 研究嗅鞘细胞及其表达的神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)对神经干细胞增殖的影响.方法 采用共培养液培养以及NGF或BDNF抗体封闭的方法,观察嗅鞘细胞对神经干细胞增殖的影响.免疫组化和RT.PCR半定量分析嗅鞘细胞表达的细胞因子及其受体的情况.结果 共培养液培养4d后,神经干细胞数量明显增多(P<0.05).免疫组化和RT-PCR半定量分析结果显示,嗅鞘细胞表达多种细胞因子及受体,共培养液培养2d后嗅鞘细胞表达NGF和BDNF mRNA的相对值明显高于对照组(P<0.05).抗体封闭培养液中的NGF或BDNF后,没有影响神经干细胞的增殖.结论 嗅鞘细胞表达大量细胞因子作用于神经干细胞,促进其增殖.在本研究条件下,神经干细胞的增殖可能与嗅鞘细胞表达的碱性成纤维生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)有关,而与NGF和BDNF无关.     

成年脑内神经干细胞的研究进展

以前 ,人们普遍认为中枢神经系统的神经元发生在出生前或出生后不久即停止。然而 ,近 30年来 ,许多研究报道成年后仍有新的神经元继续加入哺乳动物的脑部 ,这些生成神经元的前体细胞 ,一般位于脑室侧壁。它们从这些增殖性区域向离它们最近的靶组织迁移并进行分化 [1 ]。在体外 ,这些神经干细胞能被生长因子或细胞素诱导增殖 ,并在不同环境因子的作用下具有不同的分化。近年来 ,有关生长因子和细胞素对神经干细胞的诱导及多能神经干细胞的移植研究等已成为人们关注的焦点。本文对神经干细胞的研究进展作一简要综述并对相关问题进行初步探讨。…     

射频温控热凝术治疗三叉神经痛(附48例报告)

三叉神经痛是一种常见的顽固性疼痛,以往的治疗方法虽多,但都不够理想。我院自1984年开展射频热凝三叉神经半月神经节,治疗三叉神经痛48例,取得了良好的效果,并对操作方法有所改进,现报道如下: 临床资料本组48例,男16例,女32例,男女之比为1:2。年龄在32～81岁之间,以40～70岁     

中风前抗轴突生长抑制因子DNA免疫促进脑缺血功能康复

目的证实中风前抗轴突生长抑制因子DNA免疫对脑缺血神经功能康复的促进作用。方法经腓肠肌注射抗轴突生长抑制因子DNA疫苗免疫动物，每周一次、共6周；血清中检测出相关抗体后，采用永久性阻断大脑中动脉的方法制备左侧局部脑缺血模型；分别采用改良的神经病严重程度记分、被动逃避试验和悬臂迷宫试验评价运动功能、认知行为和焦虑样情感的。结果中风前接受抗轴突生长抑制因子DNA免疫，局部脑缺血后出现明显的运动恢复，但是认知行为和焦虑样情感障碍则没有明显改善。结论中风前抗轴突生长抑制因子DNA免疫可促进脑缺血后的运动功能恢复。     

胚胎大鼠神经干细胞体外黑质细胞定向诱导的实验研究(摘要)

目的探寻体外定向诱导胚胎大鼠神经干细胞向黑质细胞分化的新方法.方法用成年大鼠黑质匀浆液(HSN)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及HSN+bFGF对取自胎龄期12～16d(E12-16)胚胎大鼠脑室下区培养的神经干细胞(经Nestin抗体免疫组化及透射电镜证实)进行体外诱导培养48?h后,以酪氨酸羟化酶(TH)单抗免疫组化检测其是否向黑质细胞分化(设空白对照组);并用荧光分光光度法测定HSN+bFGF诱导后0,24,48h神经干细胞培养液中多巴胺含量,数据分析采用配对t检验分析(自身对照).结果(1)HSN+bFGF诱导组,TH单抗免疫组化出现阳性细胞;(2)HSN+bFGF诱导后,0,24,48h多巴胺含量对比分析;48h与24h(P<0.01),48h与0h(P<0.05)相比,多巴胺含量增加,而24h与0h(P>0.05)相比则无增加趋势.结论(1)用成年大鼠黑质匀浆液+bFGF能定向诱导神经干细胞向黑质细胞分化;诱导而成的黑质细胞已具有多巴胺分泌功能,诱导后24～48h为多巴胺分泌的一个峰值;(2)透射电镜显示神经干细胞超微结构是除免疫组化外鉴定神经干细胞的另一种方法.     

鸡胚脊髓背角神经营养物质的HPLC纯化分析

目的　纯化鸡胚脊髓背角内的神经营养物质。方法　采用 Sephadex G- 2 0 0凝胶过滤层析法分离鸡胚脊髓背角内的神经营养物质 ,以鸡胚背根神经节细胞培养结合 MTT法检测各洗脱峰液的神经营养活性。所得活性组分用高效液相色谱技术 (HPL C)进一步分离 ,同前用 MTT法检测各洗脱峰液的神经营养活性。结果　经层析获得三个洗脱峰 ,其中第 2洗脱峰液促进培养神经细胞生长的活性最强 (P<0 .0 1) ,提示 2峰洗脱液含有神经营养物质。 HPL C后获得 7个洗脱峰。经 MTT法测定各峰洗脱液对鸡胚 DRG神经细胞的生长活性发现 F峰有明显的神经营养活性 (P<0 .0 5 )。结论　通过分离纯化获得了有较强活性的神经营养物质。