原发性肝癌肿瘤浸润性淋巴细胞的特性

１０例原发性肝癌手术切除的肿瘤标本用于分离培养肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）。分离制备ＴＩＬ采用机械剪切，酶消化和用Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅ分离结合的方法。分离制得的ＴＩＬ以一定浓度于含ｒＩＬ－２１０００Ｕ／ｍｌ，ＰＨＡ２０μｇ／ｍｌ的ＲＰＭＩ１６４０完全培养液中，在５％ＣＯ２，３７℃条件下培养３０～４０ｄ。实验观察了ＴＩＬ悬液中的细胞组成、ＴＩＬ的体外扩增及肿瘤细胞的消失情况；用透射电镜观察了培养前后ＴＩＬ的超微结构变化；实验采用免疫组化和单克隆抗体技术（ＡＢＣ法）检测了培养前后ＴＩＬ的主要淋巴细胞亚群变化；还采用３Ｈ－ＴｄＲ释放法测定了ＴＩＬ的体外抗肿瘤活性。实验结果表明，原发性肝癌（ＨＣＣ）的ＴＩＬ在体外培养可以得到较好扩增并显示其在体外对新鲜自体瘤靶细胞的抗肿瘤活性。     

人肝癌细胞系HCC－9204的建立及其特性研究

目的和方法：作者用组织块培养法，对１２例肝细胞肝癌手术标本进行培养，并对能存活的细胞进行形态学观察，ＬＤＨ同工酶谱和ＡＦＰ检查，核型分析，对数求解和放射自显影测定细胞增殖周期，异种移植及生物学特性研究，结果：１例获得长期体外生长的能力，将其命名为ＨＣＣ－９２０４，无论形态学观察，还是ＬＤＨ同工酶谱的变化，均符合肝癌细胞的一般特征，并具有体外分泌ＡＦＰ的能力，染色体众数为７８～８０条各群染色体均增加，而以Ｃ，Ｅ群增加最为明显，并恒定出现Ｍ＿２ｄｅｒ（４）ｔ（４；１９）和Ｍ＿８ｄｅｌ（１３）两种标记染色体，增殖周期约为２０ｈ，异种移植成瘤率１００％．结论：ＨＣＣ－９２０４是一株人体肝癌细胞系，可用于肝癌防治研究．     

肝癌发生中乙肝病毒感染与黄曲霉毒素暴露的作用

目的研究肝癌发生中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）与黄曲霉毒素（ＡＦ）的作用。方法在肝癌高发区,对７３７例乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阳性和６９９例ＨＢｓＡｇ阴性人群进行了１０年前瞻性研究,同时按１∶５的病例对照模式,随机对队列中３０例肝癌和相应的１５０例非肝癌人群进行血清中黄曲霉毒素Ｂ１白蛋白加成物（ＡＦＢ１Ａｌｂ）测定。结果（１）ＨＢｓＡｇ阳性组平均年肝癌发生率为８２４．１３／１０万,明显高于对照组的７０．９７／１０万,相对危险度（ＲＲ）为１１６１,其他肿瘤发病率两组间差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。（２）肝癌组人群血清中ＡＦＢ１Ａｌｂ阳性率为７６．７％,明显高于对照组的４８．７％,比值比（ＯＲ）为３４７,肝癌组人群血清中ＡＦＢ１Ａｌｂ的浓度也明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）。结论ＨＢＶ感染及ＡＦ暴露是肝癌发生的重要病因因素,两者可能具有协同致癌作用     

人肝癌细胞系HCC-9724的建立及其生物学特性

目的 建立一株肝癌细胞系ＨＣＣ－９７２４,为肝癌研究提供实验模型。方法 无菌切除肝癌手术标本,６只裸鼠右后肢皮下包埋,体内连续传３代后,取移植瘤体外培养,绘制细胞生长曲线,光镜、电镜观察细胞形态,并进行细胞周期和染铎体核形分析,用免疫荧光法测定荷瘤鼠中ＡＦＰ的表达,结果 移植模型原代获得率为３３．３％,潜伏期为５２ｄ,自第３代后肿瘤获得率为１００．０％,潜伏期为１６ｄ,该模型移植瘤具有生长,稳定,     

甲胎蛋白特异启动元件介导的肝癌靶向性基因治疗的体外实 …

目的 采用体外培养的肿瘤细胞系探讨甲胎蛋白特异启动元件介导的靶向性肝癌基因治疗。方法 将２．２ｋｂ的重组人甲胎蛋白（ＡＦＰ）基因顺式调控元件克隆于胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因的上游,构建逆转录病毒载体ＬＸ２．２ＣＤ。再以此载体和另一不含ＡＦＰ基因调控元件的逆转录病毒载体ｐＣＤ２分别转染３种肝癌细胞系和１种肺腺癌细胞系,筛选出整合ＣＤ基因的抗Ｇ４１８克隆,并进行细胞生长抑制实验。     

表达HBV的SMMC-7721人肝癌细胞系模型的建立

目的：建立表达ＨＢＶ的体外培养的细胞克隆，为研究ＨＢＶ的生物学性状提供良好的细胞模型。方法：将３．２ｋｂＨＢＶ ＤＮＡ插入携带新霉素抗药基因的真核细胞表达载体ｐＣＮＣＸ，应用磷酸钙沉淀技术将其导入体外培养的ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞系。结果：成功地获得表达ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的细胞克隆。结论：应用磷酸钙沉淀技术将ＨＢＶ ＤＮＡ导入体外培养的细胞克隆，获得能表达ＨＢＶ的细胞克隆，为研究ＨＢＶ表达     

人肝癌细胞系HCC—9204的建立及其特性研究

作者用组织块培养法，对１２例肝细胞肝癌手术标本进行培养，并对能存活的细胞进行形态学观察，ＬＤＨ同工酶谱和ＡＦＰ检查，核型分析，对数求解和放射自显影测定细胞增殖周期，异种移植及生物学特性研究。结论：ＨＣＣ－９２０４是一株人体肝癌细胞系，可用于肝癌防治研究。     

肝细胞癌组织中丙肝病毒抗原及HBsAg的免疫组化检测

为了解丙肝病毒（ＨＣＶ）感染与我国肝细胞癌（ＨＣＣ）之间的关系,以及ＨＣＶ抗原成分（ＨＣＡｇ的）在ＨＣＣ组织中的分布状况,应用鼠抗ＨＣＶ单克隆抗体,采用免疫组化技术检测ＨＣＣ组织中ＨＣＡｇ的表达,同时检测了乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）。结果：４０例ＨＣＣ标本组织中ＨＣＡｇ、ＨＢｓＡｇ检出率分别为１７．５％（７／４０）和７０％（２８／４０）,其中单一ＨＣＡｇ阳性者仅１例,ＨＣＡｇ和ＨＢｓＡｇ同时存在的检出率为１５％（６／４０）。镜下见ＨＣＡｇ呈细颗粒状分布于细胞胞浆,ＨＣＡｇ阳性细胞以局灶型分布为主。提示我国部分肝癌患者的癌组织中确实存在ＨＣＶ,ＨＣＶ感染可能是除乙肝病毒以外,导致我国ＨＣＣ发生的另一相关因素。     

肝细胞肝癌雄激素受体的检测

本研究应用葡聚糖活性炭饱和分析法（ＤＣＣ法）检测了１０例正常肝组织，１２例原发性肝细胞肝癌（ＨＣＣ）组织及其中１０例相应癌旁肝组织的雄激素受体（ＡＲ）。结果１０例男性正常肝组织内均检出了低浓度、高亲合力的ＡＲ，１２例ＨＣＣ中检出ＡＲ１１例，１０例癌周肝组织检出ＡＲ４例，其中８例癌组织中ＡＲ明显高于其相应癌周肝组织，２例低于其癌周肝组织。ＨＣＣ中ＡＲ含量与年龄、ＡＦＰ、ＨＢｓＡｇ、肿瘤大小及是否有肝硬化无明显相关性。     

肝细胞肝癌雄激素受体的检测

本研究应用葡萄聚糖活性炭饱和分析法（ＤＣＣ法）检测了１０例正常肝组织，１２例原发性肝细胞肝癌（ＨＣＣ）组织及其中１０例相应癌旁肝组织的雄激素受体（ＡＲ）。结果１０例男性正常肝组织内均检出了低浓度、高新合力的ＡＲ，１２例ＨＣＣ中检出ＡＲ１１例，１０例癌周肝组织检出ＡＲ４例，其中８例癌组织中ＡＲ明显高于其相应癌周肝组织，２例低于其癌周肝组织。ＨＣＣ中ＡＲ含量与年龄、ＡＦＰ、ＨＢｓＡｇ、肿瘤大小及是否有     

建立大鼠C6脑胶质瘤模型与观察颅内肿瘤生长

建立大鼠Ｃ６脑胶质瘤模型,行一般观察和ＭＲＩ检查以确定颅内肿瘤生长情况,寻找简易判定颅内肿瘤大小的可靠指标。方法体外培养大鼠Ｃ６胶质瘤细胞,应用立体定向法将含１０ｇ．Ｌ＾－１琼脂糖和１＊１０＾６Ｃ６细胞悬液１０μＬ注入大鼠了尾状核。接种后行一般观察和ＭＲＬ检查,对５组接种大鼠分别在第１０,１５,２０,２５日和自然死亡前做主动脉多聚甲醛灌注固定,对脑组织和肿瘤标本进行切片观察和ＨＥ染色。结果５０只接     

我院1994～1998年HBsAg阳性率动态分析

在卫生部临检中心质控血清监测下进行ＨＢｓＡｇ测定及动态分析，了解目前ＨＢＶ的感染状况，以采取预防措施。１材料与方法１．１观察对象：１９９４～１９９８年我院门诊和住院病人，年龄１０～７０岁以上。１．２试剂仪器：上海科华试剂，卫生部临检中心质控血清，ＤＧ－３０２２Ａ酶标仪。１．３方法结果：按说明书操作，结果按Ｓ／ＣＯ比值判断。２结果２．１　８０５７份标本进行ＨＢｓＡｇ测定，以Ｓ／ＣＯ≥１为阳性（见表１）。从结果可见 ＨＢｓＡｇ阳性率逐年上升。２．２ １０～７０岁以上病人，按１０岁为一年龄段进行分组（见…     

重组乙型肝炎表面抗原插入突变体的真核表达及其抗原性的分析

目的研究与乙型肝炎病毒感染的临床进程相关的两种乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）插入变异体的免疫学性状,以阐明在ＨＢｓＡｇ阴性的慢性乙型肝炎病毒感染中所起的作用。方法利用体外ＰＣＲ诱变方法,构建重组ＨＢｓＡｇ的插入突变体;借助ＥＢ病毒载体ｐＣＥＰ４和逆转录病毒载体ＰＸＴ１将重组插入变异Ｓ基因转染哺乳动物细胞;利用ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法,探讨变异抗原与抗ＨＢｓ的结合力。结果（１）构建了ＨＢｓＡｇ的插入突变体（分别在ＨＢｓＡｇ的第１２２位与１２３位氨基酸间插入Ａｒｇ,Ａｌａ和第１２３位与１２４位氨基酸间插入Ａｒｇ,Ｇｌｙ,Ａｌａ）的真核表达载体;（２）将其转染哺乳动物细胞,最终建立了能表达野生型和变异型ＨＢｓＡｇ的ＨｅｐＧ２细胞系;（３）这些细胞系能在体外稳定地连续传代培养;（４）野生型ＨＢｓＡｇ可与抗ＨＢｓ结合,变异型ＨＢｓＡｇ不能与抗ＨＢｓ结合。结论研究表明这两种插入变异体影响了ＨＢｓＡｇ的空间结构,从而使其失去与乙型肝炎病毒表面抗体的结合力,因而可能逃避机体的免疫清除而持续存在于体内形成慢性感染。     

人肝癌组织中黄曲霉毒素和肝炎病毒基因检测分析

以肝细胞场（ＨＣＣ）患者手术切除标本为研究材料，采用高效液相色谱荧光法检测组织中的黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１），嵌套式多聚酶链反应技术检测组织中的ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ。在６９．２％（１８／２６例）的ＨＣＣ患者中检出了３．６５－８９．０６ｎｇ不等的ＡＦＢ１／ｇ肝组织；ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ检出率分别为９０．５％（５７／６３例）和１２．７％（８／６３例）。其中，ＡＦＢ１和ＨＢＶＤＮＡ重叠检出率为６１．５％（１６／２６例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ重叠检出率为７．９％（５／６３例），４例ＨＣＣ患者重叠检出了ＡＦＢ１、ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ；同步检测对照组５例，无１例出现这种情况。结果表明，上述３种因素均与人类肝癌密切相关，并且可能存在协同致癌效应。     

成人无症状HBsAg携带者65例三年随访观察

对６５例成人无症状ＨＢｓＡｇ携带者进行连续３年随访观察。结果：ＨＢｓＡｇ阴转率７７％（５／６５），ＨＢｅＡｇ阳性率３７％（２４／６５），ＨＢｅＡｇ阴转率３３３％（８／２４），抗ＨＢｅ阳性率２１５％（１４／６５），临床转归ＡＬＴ异常１５４％（１０／６５），ＴＴＴ或ＣＣＦＴ（＋＋）以上１２３％（８／／６５），肝大（０５～１５ｃｍ）４例，其中有急性肝炎经过３例，慢性迁延性肝炎８例，慢性活动性肝炎８例，发现肝硬化２例，肝癌１例。     

肝细胞癌组织中丙肝病毒抗原及HBsAg的免疫组化检测

为了解丙肝病毒（ＨＣＶ）感染与我国肝细胞癌（ＨＣＣ）之间的关系，以及ＨＣＶ抗原成分（ＨＣＡｇ的）在ＨＣＣ组织中的分布状况，应用鼠抗ＨＣＶ单克隆抗体，采用免疫组化技术检测ＨＣＣ组织中ＨＣＡｇ的表达，同时检测了乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）。结果：４０只ＨＣＣ标本组织中ＨＣＡｇ，ＨＢｓＡｇ检出率分别为１７．５％（７／４０）和７０％（２８／４０），其中单一ＨＣＡｇ阳性者仅１例，ＨＣＡｇ和ＨＢｓＡｇ同时存     

乙型肝炎病毒X蛋白单克隆抗体的制备及肝癌组织中相应抗原的检测

应用基因工程技术制备的１７０００乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｘ蛋白（ＨＢｘＡｇ）免疫动物，成功地制备了抗－ＨＢｘ单克降抗体，以此抗体对原发性肝癌（ＨＣＣ）组织、慢性活动性肝炎（ＣＡＮ）肝组织行相应抗原检测，并同时进行乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）及乙型肝炎病毒核心抗原（ＨＢｃＡｇ）的检测。在ＨＣＣ标本中ＨＢｘＡｇ在癌内及癌周肝组织中的阳性率分别为５６％及４８％，ＨＢｓＡｇ为１６％及７４％。ＨＢｃＡｇ仅见于癌周，阳性率为１８％。在ＣＡＨ标本中，ＨＢｘＡｇ、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ阳性率分别为６．６％、７３．３％及０。血清ＨＢｓＡｇ阳性ＨＣＣ标本中，ＨＢｘＡｇ的检出率为８２．３％、明显高于血清ＨＢｓＡｇ阴性标本（５４．５％）。结果显示。ＨＢｘＡｇ在ＨＣＣ标本中的表达是ＨＢＶ标志物中最活跃的。ＨＢｘＡｇ的表达不依赖于ＨＢＶ的复制，可能是ＨＢＶＸ基因同宿主细胞基因整合后的产物，ＨＢｘＡｇ在ＨＣＣ标本中的活跃表达为抗－ＨＢｘ抗体作为ＨＣＣ导向治疗载体提供了依据。     

肝癌组织中丙型肝炎病毒RNA的研究

对３０例原发性肝癌患者手术切除的癌及癌旁组织（共３８份标本）用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５＇端非编码区（５＇－ＮＣ区）ＲＮＡ。结果，１０例（３３．３％）肝癌患者被ＨＣＶ感染，２３例（７６．７％）患者被乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染。用酶切分析可见，肝癌组织中的ＨＣＶ是ＩＩ、ＩＩＩ型。对部分标本用ＰＣＲ直接测定核苷酸序列，ＨＣＶ５＇－ＮＣ区相当保守，差异无显著意义。因１０例ＨＣＶ感染的肝癌患者中８例同时有ＨＢＶ感染，因此可能ＨＣＶ及ＨＢＶ构成的双重慢性感染是导致肝癌发生的因素之一。     

鼻咽癌和肝癌联合筛查的流行病学及卫生经济学研究

【目的】评估在鼻咽癌和肝癌高发区进行联合筛查方案的成效。【方法】采用酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）法检测血清ＥＢ病毒相关抗体（ＥＢＮＡ１／ＩｇＡ,ＶＣＡ／ＩｇＡ）和乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）,对评估为高危人群做进一步的临床检查。【结果】联合筛查１２８２９人,ＥＢＮＡ１／ＩｇＡ阳性率和ＶＣＡ／ＩｇＡ阳性率分别为５．６０％和８．１８％;ＨＢｓＡｇ阳性率为１５．９９％;总人群中,ＥＢ病毒与ＨＢｓＡｇ感染的双重感染率２．２５％,关联性分析显示两病毒感染有关联（ＯＲ＝ １．１５７,Ｐ ＝ ０．０３７）;确诊鼻咽癌１０例,肝癌１１例;发现１例早期癌症病例平均费用５６ ７９７元,联合筛查早期发现成本系数（ＥＤＣＩ）１．４８。【结论】ＥＢ病毒与乙肝病毒感染在普通人群中可能有相互协同作用;鼻咽癌高发区进行联合筛查,可以显著降低筛查成本,提高筛查效益。     

原发性肝细胞性肝癌中p16基因的失活与P16蛋白表达的研究

为探讨ｐ１６基因与原发性肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）的关系,作者分别采用多重ＰＣＲ、ＳＳＣＰ以及以ＰＣＲ为基础的甲基化分析法,对２５例原发性ＨＣＣ标本及其相应的非肿瘤肝组织标本中ｐ１６基因的缺失,点突变及甲基化情况进行了检测。另用免疫组化ＳＬＡＢ法对３５例（包括前述已作基因检测的２５例）原发性ＨＣＣ肿瘤标本及其相应的非肿瘤组织标本中Ｐ１６蛋白的表达情况进行了检测。结果：２５例原发性ＨＣＣ肿瘤标本中,３例